專利名稱：三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥質(zhì)量檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法。
背景技術(shù)：
三臣散來源于我國藏醫(yī)古驗(yàn)方，始載于藏醫(yī)巨著《藍(lán)塔布》中。本方性涼，為小兒各種熱病，尤其是小兒肺熱、肝熱之主方。方中以清肺止咳良藥天竺黃為主，以清熱、解毒、鎮(zhèn)靜藥牛黃和涼血清肝良藥紅花為輔佐，故具備了清熱、解毒、鎮(zhèn)靜功效，對(duì)肺熱、肝熱等各種瘟熱病均有良效。用于小兒肺熱及一切熱癥。臨床上用于小兒肺熱而見的肺熱喘咳，吐痰黃稠，高熱煩渴；小兒肝熱而見的小兒急驚風(fēng)；小兒支氣管炎及支氣管哮喘中的熱痰壅肺癥狀；流感和感冒引起的小兒肺炎，支氣管炎，發(fā)熱咳嗽，心慌氣短，精神不振等癥。處方中的主要藥材天竺黃為禾本科植物青皮竹Bambusa textiles McClure或華思勞竹Schizostachyum chinense Rendle等桿內(nèi)的分泌物干燥后的塊狀物。味甘、性涼。具有清熱豁痰、涼心定驚的功能，用于熱病神昏，中風(fēng)痰迷，小兒痰若驚癇、抽搐、夜啼。紅花為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干燥花。具有活血通經(jīng)、散瘀止痛的功能，用于經(jīng)閉，痛經(jīng)，惡露不行，跌撲損傷等。《札拉嘎》中說“梵天的藥方有一千二十二方，紅花、石榴二品為本”，治一切寒癥藥石榴為本，治一切熱癥病之藥紅花為本。西紅花味甘、性涼。清肝熱，斂血，補(bǔ)血。治肝病、血病培元健身。有興奮呼吸的作用；對(duì)離體蟾蜍心臟有較強(qiáng)的抑制作用；藏紅花能加強(qiáng)冠狀動(dòng)脈血流量，改善微循環(huán)，提高耐缺氧能力；紅花黃素有較強(qiáng)持久的鎮(zhèn)痛作用，又有抗炎癥與中樞抑制作用；對(duì)垂體后葉素誘發(fā)的大鼠心肌缺血有保護(hù)作用，說明對(duì)血管收縮有解痙作用；又能興奮小腸、支氣管等平滑肌。牛黃為?？苿?dòng)物牛Bos Taurus domesticus Gmelin的干燥膽結(jié)石。具有清心,豁痰，開竅，涼肝，息風(fēng)，解毒的功能。用于熱病神昏，中風(fēng)痰迷，驚厥抽搐，癲癇發(fā)狂，咽喉腫痛，口舌生瘡，癰腫丁瘡等。牛黃含18種人體所需氨基酸及多種礦物質(zhì)，其中甘氨酸含量最高.治療流感、肝病、清腑熱，熱病神昏、譫語，癲癇發(fā)狂，小兒驚風(fēng)抽搐，牙疳，喉腫，口舌生瘡，炭疽，疔毒。內(nèi)服可用治熱毒風(fēng)痰，蒙蔽清竅之高熱神昏，驚悸抽搐等癥。牛黃中含牛黃酸N 二硫代氨基甲酸鈉，有改善肝功能，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成的作用，有利膽保肝作用。牛黃能幫助脂肪消化，使胰酶素活化，并可與多種有機(jī)物結(jié)合成穩(wěn)定的化合物，而起到解毒作用。關(guān)于三臣散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于1995年版的《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》藏藥分冊(cè)第一冊(cè)，由于傳統(tǒng)藏藥基礎(chǔ)研究比較薄弱，標(biāo)準(zhǔn)中只有制劑性狀鑒別，沒有制劑定性及定量指標(biāo)的檢測(cè)，不能完全有效的控制三臣散制劑的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，有必要提供一種三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法，以通過該三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法來有效的控制三臣散制劑的質(zhì)量。一種三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法，其特征在于包括以下步驟
三臣散的羥基紅花黃色素A檢測(cè)
取預(yù)定量羥基紅花黃色素A并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑作為羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液；
取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后進(jìn)行萃取以獲得羥基紅花黃色素A供試品溶液；
采用高效液相色譜法將羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液與羥基紅花黃色素A供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中羥基紅花黃色素A的含量，其中色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-0. 7%磷酸溶液為流動(dòng)相，甲醇、乙腈、0. 7%磷酸溶液的體積比為26 2 72 ;檢測(cè)波長為403nm ;理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；三臣散中的紅花藥材、人工牛黃藥材的藥效鑒別
取預(yù)定量紅花對(duì)照藥材并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后獲得紅花對(duì)照藥材溶液；
取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后獲得紅花藥材供試品溶液；
采用薄層色譜法將紅花對(duì)照藥材溶液與紅花藥材供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中紅花藥材藥效成份的存在；
取預(yù)定量膽酸、去氧膽酸并加入預(yù)定量的有機(jī)溶劑制得人工牛黃藥材對(duì)照溶液；
取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后進(jìn)行萃取以獲得人工牛黃藥材供試品溶
液；
采用薄層色譜法將人工牛黃藥材對(duì)照溶液與人工牛黃藥材供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中人工牛黃藥材供藥效成份的存在。上述方法通過薄層色譜法與高效液相色譜法相結(jié)合來測(cè)定三臣散制劑的藥效成分，實(shí)現(xiàn)了對(duì)三臣散制劑定性及定量的產(chǎn)品檢測(cè)，確保藥效成分的穩(wěn)定性，并有利于生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制。
具體實(shí)施例方式 發(fā)明人在大量試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，參考2002年14 (6) . 18 “紅花活性成分的研究”車慶明等、2010年4月《陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》“紅花中羥基紅花黃色素A含量測(cè)定方法的改進(jìn)”(王小平、劉峰等)文獻(xiàn)，結(jié)合試驗(yàn)研究，最終獲得采用薄層色譜法和高效液相色譜法測(cè)定三臣散制劑的藥效成分的三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法，通過該三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)三臣散制劑定性及定量的產(chǎn)品檢測(cè)，確保藥效成分的穩(wěn)定性，并有利于生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制，為少兒患者提供安全、有效的臨床用藥。上述三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法，包括以下步驟
1.三臣散的羥基紅花黃色素A檢測(cè)
取預(yù)定量羥基紅花黃色素A并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑作為羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶
液；
取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后進(jìn)行萃取以獲得羥基紅花黃色素A供試品溶液；
采用高效液相色譜法將羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液與羥基紅花黃色素A供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中羥基紅花黃色素A的含量，其中色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-0. 7%磷酸溶液為流動(dòng)相，甲醇、乙腈、0. 7%磷酸溶液的體積比為26 2 72 ;檢測(cè)波長為403nm ;理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；
2.三臣散中的紅花藥材、人工牛黃藥材的藥效鑒別
取預(yù)定量紅花對(duì)照藥材并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后獲得紅花對(duì)照藥材溶液； 取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后獲得紅花藥材供試品溶液；
采用薄層色譜法將紅花對(duì)照藥材溶液與紅花藥材供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中紅花藥材藥效成份的存在；
取預(yù)定量膽酸、去氧膽酸并加入預(yù)定量的有機(jī)溶劑制得人工牛黃藥材對(duì)照溶液；
取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后進(jìn)行萃取以獲得人工牛黃藥材供試品溶
液；
采用薄層色譜法將人工牛黃藥材對(duì)照溶液與人工牛黃藥材供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中人工牛黃藥材供藥效成份的存在。在本實(shí)施方式中，“取預(yù)定量羥基紅花黃色素A并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑作為羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液”的步驟具體為取預(yù)定量的羥基紅花黃色素A對(duì)照品，加25%甲醇制成每Iml含0. 13mg的溶液，即得羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液；“取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后進(jìn)行萃取以獲得羥基紅花黃色素A供試品溶液”的步驟具體為取重量差異項(xiàng)下的三臣散，研細(xì)，取約3. 0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率3000W，頻率50kHz)40分鐘，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得羥基紅花黃色素A供試品溶液；“采用高效液相色譜法將羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液與羥基紅花黃色素A供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中羥基紅花黃色素A的含量”具體步驟為分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 u 1，注入液相色譜儀，采用外標(biāo)法測(cè)定，即得。本品每片含紅花以羥基紅花黃色素A(C27H30015)計(jì)不得少于0. 50mg。預(yù)定量是指根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)中的實(shí)際需求來設(shè)定一個(gè)定量值。在本實(shí)施方式中，“取預(yù)定量紅花對(duì)照藥材并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后獲得紅花對(duì)照藥材溶液”的具體步驟為取紅花對(duì)照藥材0. 5g，研細(xì)，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振搖15分鐘，靜置，吸取上清液，作為紅花對(duì)照藥材溶液；“取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后獲得紅花藥材供試品溶液”的具體步驟為取三臣散1. 5g，研細(xì)，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振搖15分鐘，靜置，吸取上清液，作為紅花藥材供試品溶液；“采用薄層色譜法將紅花對(duì)照藥材溶液與紅花藥材供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中紅花藥材藥效成份的存在”的具體步驟為吸取上述兩種溶液各5iU，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以乙酸乙脂、甲酸、/K、甲醇為展開劑，乙酸乙脂、甲酸、/K、甲醇體積比為7 :2 :3 :0. 4，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，如顯相同顏色的斑點(diǎn)，則制劑中紅花藥材藥效成分存在取預(yù)定量膽酸、去氧膽酸并加入預(yù)定量的有機(jī)溶劑制得人工牛黃藥材對(duì)照溶液”的具體步驟為取膽酸、去氧膽酸對(duì)照品，加乙醇制成每Iml各含2mg的混合溶液，作為人工牛黃藥材對(duì)照溶液；“取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后進(jìn)行萃取以獲得人工牛黃藥材供試品溶液”的具體步驟為取三臣散3. Og,研細(xì)，加三氯甲烷20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為人工牛黃藥材供試品溶液；“采用薄層色譜法將人工牛黃藥材對(duì)照溶液與人工牛黃藥材供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中人工牛黃藥材供藥效成份的存在”的具體步驟為吸取上述兩種溶液各2 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷、乙酸乙脂、冰醋酸為展開劑，異辛烷、乙酸乙脂、冰醋酸體積比為15 7 :5，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置365nm的紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，如顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，則制劑中人工牛黃藥效成分存在。本發(fā)明的特點(diǎn)主要為通過對(duì)色譜條件的優(yōu)選、供試品制備方法的優(yōu)化，建立了制劑中主要藥效成分羥基紅花黃色素A含量的高效液相色譜分析方法，并通過方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)驗(yàn)證其檢測(cè)方法的可行性，研究結(jié)果表明檢測(cè)方法線性關(guān)系良好，專屬性試驗(yàn)考察無陰性干擾。制劑中藥材鑒別方法準(zhǔn)確、快捷，具有可操作性及適用性，采用上述檢驗(yàn)方法可以準(zhǔn)確檢測(cè)三臣散制劑質(zhì)量，確保三臣散制劑臨床用藥的有效性及安全性。
權(quán)利要求
1.一種三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法，其特征在于包括以下步驟三臣散的羥基紅花黃色素A檢測(cè)取預(yù)定量羥基紅花黃色素A并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑作為羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液；取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后進(jìn)行萃取以獲得羥基紅花黃色素A供試品溶液；采用高效液相色譜法將羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液與羥基紅花黃色素A供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中羥基紅花黃色素A的含量，其中色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-O. 7%磷酸溶液為流動(dòng)相，甲醇、乙腈、O. 7%磷酸溶液的體積比為26 2 72 ;檢測(cè)波長為403nm ;理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ； 三臣散中的紅花藥材、人工牛黃藥材的藥效鑒別取預(yù)定量紅花對(duì)照藥材并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后獲得紅花對(duì)照藥材溶液；取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后獲得紅花藥材供試品溶液；采用薄層色譜法將紅花對(duì)照藥材溶液與紅花藥材供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中紅花藥材藥效成份的存在；取預(yù)定量膽酸、去氧膽酸并加入預(yù)定量的有機(jī)溶劑制得人工牛黃藥材對(duì)照溶液；取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后進(jìn)行萃取以獲得人工牛黃藥材供試品溶液；采用薄層色譜法將人工牛黃藥材對(duì)照溶液與人工牛黃藥材供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中人工牛黃藥材供藥效成份的存在。
2.如權(quán)利要求1所述的三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法，其特征在于“取預(yù)定量羥基紅花黃色素 A并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑作為羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液”的步驟具體為取預(yù)定量的羥基紅花黃色素A對(duì)照品，加25%甲醇制成每Iml含O. 13mg的溶液，即得羥基紅花黃色素A 對(duì)照品溶液。
3.如權(quán)利要求1所述的三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法，其特征在于“取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后進(jìn)行萃取以獲得羥基紅花黃色素A供試品溶液”的步驟具體為取重量差異項(xiàng)下的三臣散，研細(xì)，取約3. 0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理40分鐘，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得羥基紅花黃色素A供試品溶液。
4.如權(quán)利要求1所述的三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法，其特征在于“取預(yù)定量紅花對(duì)照藥材并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后獲得紅花對(duì)照藥材溶液”的具體步驟為取紅花對(duì)照藥材O. 5g，研細(xì)，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振搖15分鐘，靜置，吸取上清液，作為紅花對(duì)照藥材溶液；“取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后獲得紅花藥材供試品溶液”的具體步驟為 取三臣散1. 5g，研細(xì)，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振搖15分鐘，靜置，吸取上清液，作為紅花藥材供試品溶液；“采用薄層色譜法將紅花對(duì)照藥材溶液與紅花藥材供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中紅花藥材藥效成份的存在”的具體步驟為吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以乙酸乙脂、甲酸、水、甲醇為展開劑，乙酸乙脂、甲酸、水、甲醇體積比為7 2 3 :0. 4，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，如顯相同顏色的斑點(diǎn)，則制劑中紅花藥材藥效成分存在。
5.如權(quán)利要求1所述三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法，其特征在于“取預(yù)定量膽酸、去氧膽酸并加入預(yù)定量的有機(jī)溶劑制得人工牛黃藥材對(duì)照溶液”的具體步驟為取膽酸、去氧膽酸對(duì)照品，加乙醇制成每Iml各含2mg的混合溶液，作為人工牛黃藥材對(duì)照溶液；“取預(yù)定量三臣散并加入預(yù)定量有機(jī)溶劑后進(jìn)行萃取以獲得人工牛黃藥材供試品溶液”的具體步驟為取三臣散3. 0g，研細(xì)，加三氯甲烷20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為人工牛黃藥材供試品溶液；“采用薄層色譜法將人工牛黃藥材對(duì)照溶液與人工牛黃藥材供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中人工牛黃藥材供藥效成份的存在”的具體步驟為吸取上述兩種溶液各2 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷、乙酸乙脂、冰醋酸為展開劑，異辛烷、乙酸乙脂、冰醋酸體積比為15 :7 :5，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置365nm的紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，如顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，則制劑中人工牛黃藥效成分存在。
全文摘要
一種三臣散質(zhì)量檢驗(yàn)方法，采用高效液相色譜法將羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液與羥基紅花黃色素A供試品溶液進(jìn)行對(duì)比，以測(cè)定三臣散中羥基紅花黃色素A的含量，其中色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇、乙腈、0.7％磷酸溶液為流動(dòng)相，甲醇、乙腈、0.7％磷酸溶液的體積比為26272；檢測(cè)波長為403nm；理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；采用薄層色譜法測(cè)定三臣散中紅花藥材及人工牛黃藥材藥效成份的存在。上述方法通過薄層色譜法與高效液相色譜法相結(jié)合來測(cè)定三臣散制劑的藥效成分，實(shí)現(xiàn)了對(duì)三臣散制劑定性及定量的產(chǎn)品檢測(cè)，確保藥效成分的穩(wěn)定性，并有利于生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102998391SQ20121050898
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2012年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月4日
發(fā)明者王景, 王帆, 段江英, 馮艷, 王春紅, 董艷萍 申請(qǐng)人:寧夏多維藥業(yè)有限公司