專利名稱：微生物檢測(cè)裝置的校正方法、以及微生物檢測(cè)裝置的校正套件的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及環(huán)境評(píng)價(jià)技術(shù)，特別涉及一種微生物檢測(cè)裝置的校正方法、以及微生物檢測(cè)裝置的校正套件。
背景技術(shù)：
例如在醫(yī)藥品制造工廠的超凈間中,在室內(nèi)的空氣中飛散的微生物的量由微生物檢測(cè)裝置監(jiān)視。在評(píng)價(jià)微生物檢測(cè)裝置的性能、校正其精度時(shí)，在微生物檢測(cè)裝置裝入已知的微生物，評(píng)價(jià)微生物檢測(cè)裝置的輸出(例如，參照專利文獻(xiàn)I至3)?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)I日本特開2004-159508號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2日本特開2008-22764號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3日本特開2008-22765號(hào)公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的課題但是，在評(píng)價(jià)微生物檢測(cè)裝置時(shí)所使用的微生物有污染超凈間或腔室等的環(huán)境的可能性。在此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供微生物檢測(cè)裝置的不使用微生物的校正方法以及微生物檢測(cè)裝置的校正套件。解決課題的手段本發(fā)明提供的微生物檢測(cè)裝置的校正方法包含以下步驟:(a)將聚苯乙烯粒子裝入到微生物檢測(cè)裝置的步驟，該聚苯乙烯粒子發(fā)出強(qiáng)度與微生物被光照射時(shí)所發(fā)出的熒光的強(qiáng)度相同的熒光；(b)將光從微生物檢測(cè)裝置的光源照射到聚苯乙烯粒子，用微生物檢測(cè)裝置的熒光檢測(cè)器檢測(cè)由聚苯乙烯粒子發(fā)出的熒光的步驟；和(C)基于檢測(cè)出的熒光的強(qiáng)度，校正微生物檢測(cè)裝置的步驟。又，本發(fā)明提供的微生物檢測(cè)裝置的校正套件具有聚苯乙烯粒子，該聚苯乙烯粒子發(fā)出強(qiáng)度與微生物被照射光時(shí)發(fā)出的熒光的強(qiáng)度大致相同的熒光。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，能夠提供微生物檢測(cè)裝置的不使用微生物的校正方法以及微生物檢測(cè)裝置的校正套件。


圖1是本發(fā)明的實(shí)施形態(tài)所涉及的試驗(yàn)室的示意圖。圖2是本發(fā)明的實(shí)施形態(tài)所涉及的微生物檢測(cè)裝置的示意性的截面圖。圖3是表示本發(fā)明的實(shí)施例所涉及的，在干燥條件下，用熒光顯微鏡觀察到的聚苯乙烯粒子以及微生物的熒光強(qiáng)度的分布的圖表。圖4是表示本發(fā)明的實(shí)施例所涉及的，在干燥條件下，用熒光顯微鏡觀察到的聚苯乙烯粒子以及微生物的熒光強(qiáng)度的分布的圖表。圖5是表示本發(fā)明的實(shí)施例所涉及的，在干燥條件下，用熒光顯微鏡觀察到的聚苯乙烯粒子以及微生物的熒光強(qiáng)度的分布的圖表。圖6是表示本發(fā)明的實(shí)施例所涉及的，在干燥條件下，用熒光顯微鏡觀察到的聚苯乙烯粒子的熒光強(qiáng)度的95%可靠區(qū)間的圖表。圖7是表示本發(fā)明的實(shí)施例所涉及的，用熒光顯微鏡觀察到的聚苯乙烯粒子以及微生物的熒光強(qiáng)度的圖表。圖8是表示本發(fā)明的實(shí)施例所涉及的，在液體中的條件下，用熒光顯微鏡觀察到的聚苯乙烯粒子的熒光強(qiáng)度的分布的圖表。圖9是表示本發(fā)明的實(shí)施例所涉及的，在液體中的條件下，用熒光顯微鏡觀察到的聚苯乙烯粒子的熒光強(qiáng)度的95%可靠區(qū)間的圖表。圖10是表示本發(fā)明的實(shí)施例所涉及的，由空中浮游菌檢測(cè)器檢測(cè)到的聚苯乙烯粒子以及微生物的熒光強(qiáng)度的圖表。
具體實(shí)施例方式以下對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行說(shuō)明。在以下的附圖的記載中，對(duì)于相同或者類似的部分標(biāo)注相同或者類似的符號(hào)來(lái)表示。但是，附圖是示意性的圖。因此，具體的尺寸等需要參照以下的說(shuō)明來(lái)判斷。又，包含有在附圖互相之間互相的尺寸關(guān)系或比率不同的部分是當(dāng)然的。實(shí)施形態(tài)所涉及的微生物檢測(cè)裝置的校正方法包含以下步驟:將聚苯乙烯粒子裝入到微生物檢測(cè)裝置的步驟，該聚苯乙烯粒子發(fā)出強(qiáng)度與微生物被照射光時(shí)所發(fā)出的熒光的強(qiáng)度大致相同的熒光；從微生物檢測(cè)裝置的光源向聚苯乙烯粒子照射光，由微生物檢測(cè)裝置的熒光檢測(cè)器檢測(cè)從聚苯乙烯粒子發(fā)出的熒光的步驟；以及基于檢驗(yàn)出的熒光的強(qiáng)度，校正微生物檢測(cè)裝置的步驟。如圖1所示，成為校正方法的對(duì)象的微生物檢測(cè)裝置20例如被設(shè)置于試驗(yàn)室I中。試驗(yàn)室I是具有形成結(jié)構(gòu)骨架的例如鋁制的框架和被嵌入框架中、形成側(cè)壁的聚碳酸酯制的透明面板的腔室。在試驗(yàn)室I中，例如設(shè)置有供氣裝置11A、11B。供氣裝置IlAUlB通過(guò) HEPA(高效空氣過(guò)濾器,High Efficiency Particulate AirFilter)以及 ULPA(超低滲透空氣過(guò)濾器，Ultra Low Penetration AirFilter)等的超高性能空氣過(guò)濾器,將潔凈的空氣送到試驗(yàn)室I內(nèi)部。在試驗(yàn)室I的側(cè)壁上，也可以設(shè)置有門。實(shí)施形態(tài)所涉及的聚苯乙烯粒子從被設(shè)置于試驗(yàn)室I中的噴霧裝置2噴出到試驗(yàn)室I內(nèi)部。噴霧裝置2例如是噴射式噴霧器，其保管以規(guī)定的濃度包含聚苯乙烯粒子的流體。噴霧裝置2以規(guī)定的流量被供給壓縮氣體等的氣流，通過(guò)將氣流噴射到包含聚苯乙烯粒子的流體中以使氣溶膠產(chǎn)生，在試驗(yàn)室I內(nèi)部使包含聚苯乙烯粒子的流體成為霧狀，以進(jìn)行噴霧。又，在圖1中，雖然噴霧裝置2被配置在試驗(yàn)室I內(nèi)部，但是也可以將噴霧裝置2配置到試驗(yàn)室I的外部，用配管等將噴霧裝置2所噴霧的氣溶膠引導(dǎo)到試驗(yàn)室I內(nèi)部。在試驗(yàn)室I內(nèi)，配置有作為攪拌裝置的攪拌風(fēng)扇10A、10B、10C、10D。攪拌風(fēng)扇10A-10D攪拌試驗(yàn)室I內(nèi)部的空氣，防止由于散布于試驗(yàn)室I內(nèi)部的聚苯乙烯粒子的自身重力的自然沉降。又，在試驗(yàn)室I內(nèi)，配置有作為潔凈化裝置的空氣過(guò)濾器6?？諝膺^(guò)濾器6去除在試驗(yàn)室I內(nèi)部的空氣等氣體中所包含的微粒、微生物，將氣體潔凈化。例如，在從噴霧裝置2在試驗(yàn)室I內(nèi)對(duì)包含聚苯乙烯粒子的流體進(jìn)行噴霧之前，通過(guò)運(yùn)轉(zhuǎn)空氣過(guò)濾器6，可以預(yù)先將噴霧裝置2所噴霧的聚苯乙烯粒子以外的微粒、微生物從試驗(yàn)室I內(nèi)部去除。又，在圖1中，雖然空氣過(guò)濾器6被配置在試驗(yàn)室I內(nèi)部底面，但是也可以將空氣過(guò)濾器6配置在試驗(yàn)室I的壁面或者天花板部。例如如圖2的示意性的截面圖所示，微生物檢測(cè)裝置20具有殼體21和將空氣從試驗(yàn)室I的內(nèi)部吸引到殼體21的內(nèi)部的第I吸引裝置22。由第I吸引裝置22所吸引的空氣從殼體21內(nèi)部的噴嘴23的頂端噴出。從噴嘴23的頂端所放出的空氣由與噴嘴23的頂端相對(duì)的、被配置到殼體21的內(nèi)部的第2吸引裝置24吸引。微生物檢測(cè)裝置20進(jìn)一步具有激光器等的光源25。光源25朝向從噴嘴23的頂端放出、由第2吸引裝置24吸引的空氣照射激光26。激光26可以是可見光，也可以是紫外光。激光26是可見光的情況下，激光26的波長(zhǎng)例如在400至410nm的范圍內(nèi)，例如是405nm。激光26是紫外光的情況下，激光26的波長(zhǎng)例如在310至380nm的范圍內(nèi)，例如是340nm。在空氣中包含細(xì)菌等的微生物的情況下，被照射激光26的細(xì)菌發(fā)出熒光。作為細(xì)菌的例子，舉例有革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、以及包含霉菌孢子的真菌。作為革蘭氏陰性菌的例子，舉例有大腸桿菌。作為革蘭氏陽(yáng)性菌的例子，舉例有表皮葡萄球菌、枯草桿菌芽孢、微球菌以及棒狀桿菌。作為包含霉菌孢子的真菌的例子，舉例有曲霉菌。微生物檢測(cè)裝置20進(jìn)一步具有熒光檢測(cè)器27。熒光檢測(cè)器27檢測(cè)微生物發(fā)出的熒光，計(jì)測(cè)熒光強(qiáng)度。微生物檢測(cè)裝置20能夠基于熒光強(qiáng)度的大小，測(cè)量在空氣中包含有的微生物的濃度。在校正微生物檢測(cè)裝置20時(shí)，理想的是，用空氣過(guò)濾器6將圖1所示的試驗(yàn)室I內(nèi)部的灰塵、粉塵、微粒以及微生物等完全地去除，從噴霧裝置2放出聚苯乙烯粒子。包含被放出的聚苯乙烯粒子的空氣被裝入微生物檢測(cè)裝置20中，照射圖2所示的激光26。一般地，聚苯乙烯粒子不被分類為熒光物質(zhì)，被激光26照射的聚苯乙烯粒子發(fā)出自身熒光。這里，發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)了 I個(gè)聚苯乙烯粒子發(fā)出的自身熒光的強(qiáng)度接近I個(gè)微生物發(fā)出的熒光的強(qiáng)度。因此，不使用微生物，使用聚苯乙烯粒子，能夠?qū)ξ⑸餀z測(cè)裝置20的熒光檢測(cè)器27的靈敏度等進(jìn)行校正。聚苯乙烯粒子發(fā)出的熒光的強(qiáng)度依存于聚苯乙烯粒子的材料以及粒徑而變化。因此，也可以將材料以及粒徑不同的多個(gè)聚苯乙烯粒子分別裝入微生物檢測(cè)裝置20中，評(píng)價(jià)微生物檢測(cè)裝置20的熒光檢測(cè)器27是否具有能夠分離材料以及粒徑不同的多個(gè)聚苯乙烯粒子各自的熒光強(qiáng)度的差異的靈敏度。聚苯乙烯粒子例如由聚苯乙烯構(gòu)成?；蚓郾揭蚁┝Ｗ佑删郾揭蚁┡c添加物構(gòu)成。又或者聚苯乙烯粒子由例如98質(zhì)量％ (質(zhì)量百分比)的聚苯乙烯與2質(zhì)量％的二乙烯基苯構(gòu)成。本質(zhì)上地由聚苯乙烯構(gòu)成的聚苯乙烯粒子的粒徑優(yōu)選為0.75 μ m以上且不到10 μ m,更優(yōu)選為0.75 μ m以上且不到5 μ m。本質(zhì)上地由聚苯乙烯構(gòu)成的聚苯乙烯粒子的粒徑小于0.75 μ m的話，I個(gè)聚苯乙烯粒子發(fā)出的熒光強(qiáng)度具有比I個(gè)微生物發(fā)出的熒光的強(qiáng)度弱的傾向。本質(zhì)上地由聚苯乙烯構(gòu)成的聚苯乙烯粒子的粒徑在5 μ m以上的話，I個(gè)聚苯乙烯粒子發(fā)出的熒光強(qiáng)度具有比I個(gè)微生物發(fā)出的熒光的強(qiáng)度強(qiáng)的傾向。又，本質(zhì)上地由聚苯乙烯構(gòu)成的聚苯乙烯粒子的粒徑在ΙΟμπι以上的話，I個(gè)聚苯乙烯粒子發(fā)出的熒光強(qiáng)度具有比I個(gè)微生物發(fā)出的熒光的強(qiáng)度更強(qiáng)的傾向。本質(zhì)上由聚苯乙烯構(gòu)成的聚苯乙烯粒子的粒徑被選擇為使得聚苯乙烯粒子被照射光時(shí)發(fā)出的熒光的強(qiáng)度和微生物發(fā)出的熒光的強(qiáng)度大致相同的話，聚苯乙烯粒子的粒徑不被限定于上述的范圍。本質(zhì)上由聚苯乙烯和二乙烯基苯構(gòu)成的聚苯乙烯粒子的粒徑優(yōu)選為0.75μηι以上7.5 μ m以下。本質(zhì)上由聚苯乙烯和二乙烯基苯構(gòu)成的聚苯乙烯粒子的粒徑小于0.75 μ m的話，I個(gè)聚苯乙烯粒子發(fā)出的熒光強(qiáng)度具有比I個(gè)微生物發(fā)出的熒光的強(qiáng)度弱的傾向。本質(zhì)上由聚苯乙烯和二乙烯基苯構(gòu)成的聚苯乙烯粒子的粒徑大于7.5 μ m的話，I個(gè)聚苯乙烯粒子發(fā)出的熒光強(qiáng)度具有比I個(gè)微生物發(fā)出的熒光的強(qiáng)度強(qiáng)的傾向。本質(zhì)上由聚苯乙烯與二乙烯基苯構(gòu)成的聚苯乙烯粒子的粒徑被選擇為使得聚苯乙烯粒子被照射光時(shí)發(fā)出的熒光的強(qiáng)度和微生物發(fā)出的熒光的強(qiáng)度大致相同的話，聚苯乙烯粒子的粒徑不被限定于上述的范圍。以往，在校正微生物檢測(cè)裝置時(shí)，將已知濃度的微生物裝入微生物檢測(cè)裝置中，對(duì)微生物檢測(cè)裝置所算出的微生物的濃度與實(shí)際的微生物的濃度進(jìn)行比較等。但是由于微生物需要培養(yǎng)設(shè)備或漏出防止用的安全設(shè)備，因此存在微生物檢測(cè)裝置的校正需要的成本高這樣的問(wèn)題。相對(duì)于此，在微生物檢測(cè)裝置的校正中使用聚苯乙烯粒子的話，由于不需要培養(yǎng)設(shè)備或安全設(shè)備，因此能夠使微生物檢測(cè)裝置的校正需要的成本大幅度地降低。又,《應(yīng)用微生物學(xué)與生物技術(shù)》(Applied Microbiology and Biotechnology),卷30, 59-66 以及《化學(xué)工程》(The Chemical Engineering Journal),卷 34, B7B12 中記載的那樣，微生物發(fā)出的熒光能夠根據(jù)微生物的生長(zhǎng)條件變化。因此，即使使用微生物進(jìn)行微生物檢測(cè)裝置的校正，也存在無(wú)法得到用于設(shè)定微生物檢測(cè)裝置的熒光檢測(cè)器的靈敏度的目標(biāo)值(閾值)的指針的情況。相對(duì)于此，在微生物檢測(cè)裝置的校正中使用聚苯乙烯粒子的話，聚苯乙烯粒子發(fā)出的熒光的強(qiáng)度是穩(wěn)定的，因此能夠可靠地進(jìn)行微生物檢測(cè)裝置的校正。實(shí)施例以下，通過(guò)實(shí)施例更具體地對(duì)實(shí)施形態(tài)進(jìn)行說(shuō)明，但是本發(fā)明完全不被以下的實(shí)施例所限定。(聚苯乙烯粒子的得到)聚苯乙烯粒子是從飛世爾科技公司得到賽默飛世爾納米球3000系列.標(biāo)準(zhǔn)尺寸的型號(hào)3500A、乳膠微球懸浮液5000系列的型號(hào)5100A、杜克標(biāo)準(zhǔn)4000系列單分散粒度的型號(hào)4203A以及4205A。型號(hào)3500A的粒子作為懸浮液被提供，粒徑是498nm±9nm (變差系數(shù)1.6%)，材料是聚苯乙烯，密度是1.05g/cm3，折射率是1.59。型號(hào)3500A的粒子具有能夠作為粒徑為0.5 μ m的標(biāo)準(zhǔn)樣本使用的粒徑均勻性。型號(hào)5100A的粒子作為懸浮液被提供，粒徑是1.0 μ m (變差系數(shù)3%以下)，材料是聚苯乙烯，密度是1.05g/cm3，折射率是1.59。型號(hào)4203A的粒子作為懸浮液被提供，粒徑是3.002 μ m±0.019(變差系數(shù)1.1%)，材料是聚苯乙烯。型號(hào)4203A的粒子具有能夠作為粒徑為3 μ m的標(biāo)準(zhǔn)樣本使用的粒徑均勻性。型號(hào)4205A的粒子作為懸浮液被提供，粒徑是4.993μ m±0.040(變差系數(shù)1.0%)，材料是聚苯乙烯。型號(hào)4205A的粒子具有能夠作為粒徑為5 μ m的標(biāo)準(zhǔn)樣本使用的粒徑均勻性。又，從Bangs Laboratories公司得到聚合物微球系列的型號(hào)PS04N/5749、型號(hào)PS06N/5623 以及型號(hào) PS05N/7508。型號(hào)PS04N/5749的粒子作為懸浮液被提供，粒徑是1.01 μ m，材料是聚苯乙烯，密度是 1.05g/cm3。型號(hào)PS06N/5623作為懸浮液被提供，粒徑是5.09 μ m (標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.44 μ m),材料是交聯(lián)聚苯乙烯二乙烯基苯(cross linked poly (styrene/2%divinylbenzen),密度是1.062g/cm3。型號(hào)PS06N/5623的粒子具有能夠作為粒徑為5 μ m的標(biāo)準(zhǔn)樣本使用的粒徑的均勻性。 型號(hào)PS05N/7508的粒子作為懸浮液被提供，粒徑是4.61 μ m (標(biāo)準(zhǔn)偏差為
0.63 μ m)，材料是聚苯乙烯，密度是1.05g/cm3。型號(hào)PS05N/7508的粒子具有能夠作為粒徑為4.6 μ m的標(biāo)準(zhǔn)樣本使用的粒徑均勻性。進(jìn)一步，從JSR株式會(huì)社得到DYN0SPHERES (注冊(cè)商標(biāo))系列的型號(hào)SS-053-P以及 SS-104-P。型號(hào)SS-053-P的粒子作為懸浮液被提供，平均粒徑是5.124 μ m (變差系數(shù)為
1.22%)，材料是聚苯乙烯。型號(hào)SS-053-P的粒子作為標(biāo)準(zhǔn)粒子實(shí)際上多用于粒徑測(cè)量裝置的校正以及尺寸標(biāo)準(zhǔn)。型號(hào)SS-104-P的粒子作為懸浮液被提供，平均粒徑是10.14 μ m (變差系數(shù)為
1.20%)，材料是聚苯乙烯。型號(hào)SS-104-P的粒子作為標(biāo)準(zhǔn)粒子實(shí)際上多用于粒徑測(cè)量裝置的校正以及尺寸標(biāo)準(zhǔn)。又進(jìn)一步,從Polyscience Inc.公司得到微珠NIST可追蹤粒度標(biāo)準(zhǔn)(MicrobeadNIST Traceable ParticleSize Standard) 3.00 μ m(型號(hào) 64060-15)。型號(hào) 64060-15 的粒子作為懸浮液被提供，粒徑的分布是從2.85 μ m到3.15 μ m，材料是聚苯乙烯。型號(hào)64060-15的粒子作為標(biāo)準(zhǔn)粒子實(shí)際上多用于粒徑測(cè)量裝置的校正以及尺寸標(biāo)準(zhǔn)。(聚苯乙烯粒子的清洗)將得到了的聚苯乙烯粒子的懸浮液ImL移到微型離心管，使用離心機(jī)(日立工機(jī)株式會(huì)社，CT13R)以13，OOOg離心5分鐘，除掉上清液。接著，將聚苯乙烯粒子再懸浮于滅菌蒸餾水中。然后，進(jìn)一步反復(fù)2次聚苯乙烯粒子的懸浮液的離心以及再懸浮，洗凈聚苯乙烯粒子。作為最后得到的聚苯乙烯粒子的懸浮液的溶劑的滅菌蒸餾水的體積是0.5mL。(微生物的得到)得到的微生物是大腸桿菌(Escherichiacoli,簡(jiǎn)稱 Ε.col1、ATCC13706)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis、ATCC12228)、枯草桿菌芽抱(Bacillusatrophaeus、ATCC9372)、微球菌(Micrococcus Iylae> ATCC27566)、棒狀桿菌(Corynebacterium afermentans、ATCC51403)以及曲霉菌(Aspergillus niger 略稱A.niger、ATCC9142)。又，ATCC 是美國(guó)培養(yǎng)細(xì)胞系統(tǒng)存儲(chǔ)機(jī)關(guān)(American Type CultureCollection)的簡(jiǎn)稱。
大腸桿菌是革蘭氏陰性菌。表皮葡萄球菌、枯草桿菌芽孢、微球菌以及棒狀桿菌是革蘭氏陽(yáng)性菌。曲霉菌也被稱為曲霉，是霉菌孢子的I種。(微生物的調(diào)制方法)將大腸桿菌、表皮葡萄球菌以及微球菌在3mL的胰蛋白胨大豆液體培養(yǎng)基(卜'J7° 卜 y 液體培地)(Becton,Dickinson and Company, Ref:211825)中進(jìn)行培養(yǎng)，以 32°C有氧地培養(yǎng)一晚。將大腸桿菌、表皮葡萄球菌以及微球菌進(jìn)一步通過(guò)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)的情況下，將菌液在胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(卜U 卜〃 4寒天培地)(榮研化學(xué)株式會(huì)社、E-MP25)上進(jìn)行劃線接種，以32°C有氧地培養(yǎng)一晚。在培養(yǎng)棒狀桿菌時(shí)，使用R培養(yǎng)基(蛋白胨10g、酵母提取物5 g、麥芽提取物5 g、酪蛋白氨基酸5 g、牛肉提取物2 g、甘油2 g、吐溫8050mg、MgSO4.7H201g、蒸餾水1L、pH7.2)作為液體培養(yǎng)基，使用羊血瓊脂培養(yǎng)基(榮研化學(xué)株式會(huì)社M-58)作為瓊脂培養(yǎng)基。從液體培養(yǎng)基調(diào)制微生物的情況下，使用離心機(jī)(久保田商事株式會(huì)社、2410或日立工機(jī)株式會(huì)社、CT13R)，以2100 g將培養(yǎng)液離心3分鐘并集菌，除掉上清的培養(yǎng)基后，將微生物再懸浮于滅菌蒸餾水中。然后，進(jìn)一步反復(fù)2次微生物的懸浮液的離心以及再懸浮，洗凈微生物。作為最后得到的微生物的懸浮液的溶劑的滅菌蒸餾水的體積是3mL。在從瓊脂培養(yǎng)基調(diào)制微生物的情況下，刮下瓊脂培養(yǎng)基上的菌落，將其懸浮于5mL的滅菌蒸餾水中。接著，使懸浮液形成輕微的漩渦以使微生物分散后，以2100 g將懸浮液離心3分鐘并集菌，通過(guò)除掉上清液來(lái)洗凈微生物。然后，將微生物再懸浮于5mL的滅菌蒸餾水中。關(guān)于枯草桿菌芽孢，使用在市場(chǎng)出售的芽胞液(NORTH AMERICAN SCIENCEASSOCIATES, Inc.，SUN-07)D關(guān)于曲霉菌，將在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(ai sicence株式會(huì)社、PM0002-1)上被培育、以4°C保存的曲霉菌在相同培養(yǎng)基上進(jìn)行穿刺，以25°C培養(yǎng)一周，使之形成孢子。接著，在形成了孢子的培養(yǎng)板上倒大約IOmL的二辛基磺基琥拍酸鈉50mg/L的水溶液，以拋棄式接種環(huán)輕微地刮掉孢子，使其分散在水溶液體中。用吸量管回收孢子分散了的水溶液，用8片重疊的滅菌紗布過(guò)濾除掉菌絲后，將過(guò)濾液以1400g離心10分鐘，除掉上清液。在沉淀了的孢子中加入IOmL滅菌蒸餾水，洗凈后再次以相同條件進(jìn)行離心。如此反復(fù)3次后，在5mL的滅菌蒸餾水中進(jìn)行懸浮，作為孢子液。(利用熒光顯微鏡在干燥條件下進(jìn)行的熒光強(qiáng)度的測(cè)量)將聚苯乙烯粒子或微生物的懸浮液滴下到載玻片上，使其在暗處干燥后，用熒光顯微鏡(奧林巴斯株式會(huì)社BX51)進(jìn)行觀察。關(guān)于通過(guò)波長(zhǎng)340nm附近的光的激發(fā)，使用UMWU2,關(guān)于通過(guò)波長(zhǎng)405nm附近的光的激發(fā)，使用U-MNV2鏡單元。通過(guò)使用UMPlanFL xl00物鏡，在載玻片上不遮蓋蓋玻片地對(duì)聚苯乙烯粒子或微生物進(jìn)行觀察。使用DIC滑塊截?cái)鄟?lái)自暗視野光路的雜散光。用連接到顯微鏡的DP-70CCD攝像機(jī)(奧林巴斯株式會(huì)社)拍攝聚苯乙烯粒子或微生物的熒光圖像以及同一視野的明視野圖像。所拍攝的突光圖像是使用圖像分析軟件Image-Pro Plus6.3J (MediaCybernetics, Inc.)，變換為8位灰度圖像，檢測(cè)出熒光圖像內(nèi)的聚苯乙烯粒子或微生物。每I個(gè)聚苯乙烯粒子的熒光強(qiáng)度是通過(guò)合計(jì)圖像分析軟件確認(rèn)為粒子的范圍中的像素的灰度值來(lái)算出的。此時(shí)，求出圖像內(nèi)的、不包含粒子的任意的范圍的像素的平均灰度值，將其作為背景值，通過(guò)從被確認(rèn)為粒子的范圍內(nèi)的各個(gè)像素的灰度值減去背景值，對(duì)每I個(gè)聚苯乙烯粒子的熒光強(qiáng)度進(jìn)行修正。又，在多個(gè)聚苯乙烯粒子的凝集體被確認(rèn)為一個(gè)粒子的情況下，基于明視野圖像判別粒子數(shù)，用粒子數(shù)除粒子的凝集體的熒光強(qiáng)度，求出每I個(gè)聚苯乙烯粒子的平均熒光強(qiáng)度。每I個(gè)微生物的熒光強(qiáng)度也通過(guò)同樣的方法求出。圖3、圖4以及圖5示出使用波長(zhǎng)為405nm附近的激發(fā)光的情況下的、聚苯乙烯粒子以及微生物的熒光強(qiáng)度的分布。又，關(guān)于型號(hào)PS05N/7508、型號(hào)PS06N/5623、型號(hào)4203A以及型號(hào)4205A的聚苯乙烯粒子，圖6示出從熒光強(qiáng)度的分布算出的95%可靠區(qū)間的圖表。如圖3、圖4以及圖5所示，型號(hào)5100A的粒子、型號(hào)4203A的粒子、型號(hào)PS04N/5749、型號(hào)PS06N/5623的粒子、型號(hào)PS05N/7508、型號(hào)SS-053-P以及型號(hào)64060-15的粒子發(fā)出和微生物同樣強(qiáng)度的熒光。型號(hào)5100A的粒子發(fā)出的熒光的強(qiáng)度特別接近于棒狀桿菌、微球菌以及大腸桿菌發(fā)出的熒光的強(qiáng)度。型號(hào)PS04N/5749的粒子發(fā)出的熒光的強(qiáng)度特別接近于大腸桿菌發(fā)出的熒光的強(qiáng)度。型號(hào)PS05N/7508的粒子發(fā)出的熒光的強(qiáng)度特別接近于棒狀桿菌、微球菌、葡萄球菌、枯草桿菌以及曲霉菌各自發(fā)出的熒光的強(qiáng)度。型號(hào)PS06N/5623的粒子以及型號(hào)4203A的粒子各自發(fā)出的熒光的強(qiáng)度特別接近于枯草桿菌以及曲霉菌各自發(fā)出的熒光強(qiáng)度。型號(hào)SS-053-P的粒子發(fā)出的熒光的強(qiáng)度特別接近于棒狀桿菌、微球菌、葡萄球菌、枯草桿菌以及曲霉菌各自發(fā)出的熒光的強(qiáng)度。型號(hào)64060-15的粒子發(fā)出的熒光的強(qiáng)度特別接近于曲霉菌發(fā)出的熒光的強(qiáng)度。型號(hào)3500A的粒子發(fā)出的熒光的強(qiáng)度比微生物發(fā)出的熒光的強(qiáng)度弱。型號(hào)SS-104-P的粒子發(fā)出的熒光的強(qiáng)度比微生物發(fā)出的熒光的強(qiáng)度略微強(qiáng)。型號(hào)4205A的粒子發(fā)出的熒光的強(qiáng)度比微生物發(fā)出的熒光的強(qiáng)度強(qiáng)。又，圖7示出分別使用波長(zhǎng)為405nm附近的激發(fā)光以及波長(zhǎng)為340nm附近的激發(fā)光的情況下的、聚苯乙烯粒子以及微生物的熒光強(qiáng)度的分布。如圖7所示，即使改變激發(fā)光的波長(zhǎng)，聚苯乙烯粒子以及微生物各自發(fā)出的熒光的強(qiáng)度的變化也并不顯著。(通過(guò)熒光顯微鏡進(jìn)行的熒光強(qiáng)度的液體中測(cè)量)將聚苯乙烯粒子(型號(hào)PS05N/7508、型號(hào)PS06N/5623、型號(hào)4203A、型號(hào)4205A)的懸浮液滴下到載玻片上，在懸浮液上不覆蓋蓋玻片，不使懸浮液干燥，用熒光顯微鏡(奧林巴斯株式會(huì)社BX51)進(jìn)行觀察。關(guān)于通過(guò)波長(zhǎng)405nm附近的光的激發(fā)，使用UMNV2鏡單元。在物鏡使用UMPlanFL xlOO,以覆蓋蓋玻片的狀態(tài)觀察聚苯乙烯粒子。使用DIC滑塊截?cái)鄟?lái)自暗視野光路的雜散光。用連接到顯微鏡的DP-70CCD攝像機(jī)(奧林巴斯株式會(huì)社)拍攝聚苯乙烯粒子的熒光圖像以及同一視野的明視野圖像。所拍攝的突光圖像是使用圖像分析軟件Image-Pro Plus6.3J (MediaCybernetics, Inc.),變換為8位灰度圖像,檢測(cè)出突光圖像內(nèi)的聚苯乙烯粒子。每I個(gè)聚苯乙烯粒子的熒光強(qiáng)度是通過(guò)合計(jì)圖像分析軟件確認(rèn)為粒子的范圍中的像素的灰度值來(lái)算出的。此時(shí)，求出圖像內(nèi)的、不包含粒子的任意的范圍的像素的平均灰度值，將其作為背景值，通過(guò)從被確認(rèn)為粒子的范圍內(nèi)的各個(gè)的像素的灰度值減去背景值，對(duì)每I個(gè)聚苯乙烯粒子的熒光強(qiáng)度進(jìn)行修正。又，在多個(gè)聚苯乙烯粒子的凝集體被確認(rèn)為一個(gè)粒子的情況下，基于明視野圖像判別粒子數(shù)，用粒子數(shù)除粒子的凝集體的熒光強(qiáng)度，求出每I個(gè)聚苯乙烯粒子的平均熒光強(qiáng)度。圖8示出使用波長(zhǎng)為405nm附近的激發(fā)光的情況下的、聚苯乙烯粒子的熒光強(qiáng)度的分布。又，圖9示出從熒光強(qiáng)度的分布算出的95%可靠區(qū)間的圖表。在液體中進(jìn)行觀察時(shí)，聚苯乙烯粒子發(fā)出的熒光的強(qiáng)度和干燥條件下相比，整體地降低了。但是，根據(jù)粒子的種類的熒光強(qiáng)度的大小關(guān)系無(wú)論是在干燥條件下還是在液體中條件下都大致一致。例如，如圖6所示，在干燥條件下，按照型號(hào)PS05N/7508、型號(hào)PS06N/5623、型號(hào)4203A、型號(hào)4205A的順序，熒光強(qiáng)度有變強(qiáng)的傾向。例如，如圖9所示，在液體中也是按照型號(hào)PS05N/7508、型號(hào)PS06N/5623、型號(hào)4203A、型號(hào)4205A的順序，熒光強(qiáng)度有變強(qiáng)的傾向。微生物發(fā)出的熒光的強(qiáng)度和干燥條件下比較，在液體中也是整體地降低。因此，即使在液體中，聚苯乙烯粒子的熒光強(qiáng)度也接近于微生物的熒光強(qiáng)度。(采用微生物檢測(cè)裝置的熒光強(qiáng)度的測(cè)量)采用微生物檢測(cè)裝置的熒光強(qiáng)度的測(cè)量按照文獻(xiàn)(氣溶膠科學(xué)雜志(Journal ofAerosol Science)，卷 42，397-407，2011)進(jìn)行。即，在設(shè)置了 HEPA 過(guò)濾單元的 3 m 3 容量的密閉了的腔室內(nèi)，運(yùn)轉(zhuǎn)HEPA過(guò)濾單元，將腔室內(nèi)部的空氣潔凈化。然后,使用噴霧器(Salter Labs制Ref8900)，以5L/min的流量對(duì)聚苯乙烯粒子或微生物的懸浮液進(jìn)行噴霧20秒，使其在浮游到腔室內(nèi)的空中。然后，攪拌內(nèi)部的空氣30秒，使水滴干燥且使聚苯乙烯粒子或微生物均勻地?cái)U(kuò)散。在之后的60秒，以空中浮游菌檢測(cè)器(Azbil BioVigilant公司制MD-A300)作為微生物檢測(cè)裝置測(cè)量腔室內(nèi)的空氣，檢測(cè)出空氣中所包含的聚苯乙烯粒子或微生物。檢測(cè)出的聚苯乙烯粒子或微生物的熒光強(qiáng)度作為空中浮游菌檢測(cè)器的熒光檢測(cè)器的檢測(cè)電壓值而得到。圖10示出用空中浮游菌檢測(cè)器測(cè)量到的、聚苯乙烯粒子以及微生物的熒光強(qiáng)度的分布。在用空中浮游菌檢測(cè)器測(cè)量的情況下，也示出了聚苯乙烯粒子的熒光強(qiáng)度接近于微生物的熒光強(qiáng)度。符號(hào)的說(shuō)明I試驗(yàn)室2噴霧裝置6空氣過(guò)濾器10A、10B、10CU0D 攪拌風(fēng)扇11A、IIB 供氣裝置20微生物檢測(cè)裝置21 殼體22吸引裝置23 噴嘴24吸引裝置25 光源26 激光27熒光檢測(cè)器。
權(quán)利要求
1.一種微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，包括: 將聚苯乙烯粒子裝入到微生物檢測(cè)裝置的步驟，該聚苯乙烯粒子發(fā)出強(qiáng)度與微生物被光照射時(shí)所發(fā)出的突光的強(qiáng)度相同的突光； 將光從所述微生物檢測(cè)裝置的光源照射到所述聚苯乙烯粒子，用所述微生物檢測(cè)裝置的熒光檢測(cè)器檢測(cè)由所述聚苯乙烯粒子發(fā)出的熒光的步驟；和 基于所述檢測(cè)出的熒光的強(qiáng)度，校正所述微生物檢測(cè)裝置的步驟。
2.如權(quán)利要求1所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子本質(zhì)上由聚苯乙烯構(gòu)成。
3.如權(quán)利要求1所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子本質(zhì)上由聚苯乙烯和二乙烯基苯構(gòu)成。
4.如權(quán)利要求1所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子是由98質(zhì)量％的聚苯乙烯和2質(zhì)量％的二乙烯基苯構(gòu)成。
5.如權(quán)利要求2所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子的直徑為0.75 μ m以上且不到10 μ m。
6.如權(quán)利要求2所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子的直徑為0.75 μ m以上且不到5 μ m。
7.如權(quán)利要求3或4所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子的直徑為0.75 μ m以上且在7.5 μ m以下。
8.如權(quán)利要求1至7中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，所述光為可見光。
9.如權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，所述光的波長(zhǎng)為400nm至410nm。
10.如權(quán)利要求1至7中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，所述光為紫外光。
11.如權(quán)利要求1至7以及10中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，所述光的波長(zhǎng)是在310nm至380nm的范圍內(nèi)。
12.如權(quán)利要求1至11中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，所述微生物包括細(xì)菌。
13.如權(quán)利要求12所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，所述細(xì)菌為選自由包括大腸桿菌的革蘭氏陰性菌，包括表皮葡萄球菌、枯草桿菌芽孢、微球菌以及棒狀桿菌的革蘭氏陽(yáng)性菌，和包括霉菌孢子的真菌構(gòu)成的組的至少一個(gè)。
14.如權(quán)利要求1至13中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，在將光從所述微生物檢測(cè)裝置的光源照射到所述聚苯乙烯粒子的步驟中，所述聚苯乙烯粒子為干燥的。
15.如權(quán)利要求1至13中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正方法，其特征在于，在將光從所述微生物檢測(cè)裝置的光源照射到所述聚苯乙烯粒子的步驟中，所述聚苯乙烯粒子存在于液體中。
16.一種微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，具有聚苯乙烯粒子，該聚苯乙烯粒子發(fā)出強(qiáng)度與微生物被照射光時(shí)發(fā)出的熒光的強(qiáng)度相同的熒光。
17.如權(quán)利要求16所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子本質(zhì)上由聚苯乙烯構(gòu)成。
18.如權(quán)利要求16所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子本質(zhì)上由聚苯乙烯和二乙烯基苯構(gòu)成。
19.如權(quán)利要求16所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子由98質(zhì)量％的聚苯乙烯和2質(zhì)量％的二乙烯基苯構(gòu)成。
20.如權(quán)利要求17所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子的直徑為0.75 μ m以上且不到10 μ m。
21.如權(quán)利要求17所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子的直徑為0.75 μ m以上且不到5 μ m。
22.如權(quán)利要求18或19所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子的直徑為0.75 μ m以上且在7.5 μ m以下。
23.如權(quán)利要求16至22中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述光為可見光。
24.如權(quán)利要求16至23中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述光的波長(zhǎng)為405nm。
25.如權(quán)利要求16至22任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述光為紫外光。
26.如權(quán)利要求16至22以及25中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述光的波長(zhǎng)是在310nm至380nm的范圍內(nèi)。
27.如權(quán)利要求16至26中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述微生物包括細(xì)菌。
28.如權(quán)利要求27所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述細(xì)菌為選自由包括大腸桿菌的革蘭氏陰性菌，包括表皮葡萄球菌、枯草桿菌芽孢、微球菌以及棒狀桿菌的革蘭氏陽(yáng)性菌，和包括霉菌孢子的真菌構(gòu)成的組的至少一個(gè)。
29.如權(quán)利要求16至28中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子在干燥的狀態(tài)被光照射時(shí)，發(fā)出與干燥的狀態(tài)的微生物所發(fā)出的熒光的強(qiáng)度相同強(qiáng)度的熒光。
30.如權(quán)利要求16至28中任意一項(xiàng)所述的微生物檢測(cè)裝置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子在液體中被光照射時(shí)，發(fā)出與液體中的微生物所發(fā)出的熒光的強(qiáng)度相同強(qiáng)度的熒光。
全文摘要
本發(fā)明提供微生物檢測(cè)裝置的不使用微生物的校正方法。該微生物檢出裝置的校正方法包括將聚苯乙烯粒子裝入到微生物檢測(cè)裝置(20)的步驟，該聚苯乙烯粒子發(fā)出強(qiáng)度與微生物被照射光時(shí)發(fā)出的熒光的強(qiáng)度相同的熒光；將光從微生物檢測(cè)裝置(20)的光源照射到聚苯乙烯粒子，用微生物檢測(cè)裝置(20)的熒光檢測(cè)器檢測(cè)由聚苯乙烯粒子發(fā)出的熒光的步驟；基于檢測(cè)出的熒光的強(qiáng)度，校正微生物檢測(cè)裝置(20)的步驟。
文檔編號(hào)G01N21/64GK103175812SQ20121055686
公開日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2012年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月21日
發(fā)明者長(zhǎng)谷川倫男 申請(qǐng)人:阿自倍爾株式會(huì)社