專利名稱：一種化妝品中多種增塑劑殘留量的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分析化學(xué)、食品安全領(lǐng)域，具體地說，是一種化妝品中增塑劑殘留量的檢測方法。
背景技術(shù)：
增塑劑指鄰苯二甲酸酯類化合物，又稱酞酸酯，縮寫PAE，是鄰苯二甲酸形成的酯的統(tǒng)稱，當(dāng)被用作塑料增塑劑時(shí)，一般指的是鄰苯二甲酸與4 15個(gè)碳的醇形成的酯。鄰苯二甲酸酯類化合物是一類能增加塑料制品可塑性的化學(xué)品，它被普遍應(yīng)用于玩具、食品包裝、乙烯地板、壁紙、清潔劑、指甲油、噴霧劑、洗發(fā)水和沐浴液等數(shù)百種產(chǎn)品中。鄰苯二甲酸酯類化合物是一類內(nèi)分泌干擾物質(zhì)，具有雌激素活性，我國將這類物質(zhì)歸為“環(huán)境激素類污染物”。鄰苯二甲酸酯類化合物有生殖毒性、胚胎毒性和遺傳毒性，同時(shí)具有“三致”作用，高劑量的鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)已被確認(rèn)可引起肝癌[2]。研究表明，鄰苯二甲酸酯類化合物可干擾內(nèi)分泌，使男性精子數(shù)量減少、運(yùn)動(dòng)能力低下、形態(tài)異常，嚴(yán)重的還會(huì)導(dǎo)致死精癥和睪丸癌，是造成男性生殖問題的“罪魁禍?zhǔn)住保^多使用富含鄰苯二甲酸酯的化妝品，會(huì)增加女性患乳腺癌的概率、而且容易引起孕婦流產(chǎn)和胎兒畸形。美國國家環(huán)保署(EPA)已將6種鄰苯二甲酸酯類化合物:包括鄰苯二甲酸丁芐酯(BBP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸雙(2-乙基己基)酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)和鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)列為優(yōu)先控制污染物。在我國，DMP、DBP和DOP也已被列入“中國環(huán)境優(yōu)先污染物黑名單”。我國頒布的《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》2007版中，將正戊基異戊基鄰苯二甲酸酯、雙正戊基鄰苯二甲酸酯、雙異戊基鄰苯二甲酸酯、苯基丁基鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸雙(2-乙基己基)酯、鄰苯二甲酸雙(2-甲氧乙基)酯、鄰苯二甲酸二丁酯七種鄰苯二甲酸酯類化合物歸為化妝品中禁用物質(zhì)。目前，化妝品中增塑劑的檢測，主要有催化動(dòng)力學(xué)熒光法、氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、高效液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法等，目前化妝品中增塑劑的測定方法還遠(yuǎn)不能滿足國家衛(wèi)生監(jiān)督的要求。本課題擬利用氣相色譜-質(zhì)譜檢測技術(shù)，建立化妝品中多種增塑劑殘留量檢測和確證方法，在確?；瘖y品的使用安全，保障我國消費(fèi)者身體健康方面具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有不足問題，提供一種同時(shí)檢測化妝品中多種增塑劑殘留量的氣相色譜-質(zhì)譜法檢測方法，可同時(shí)檢測化妝品中鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸(2-甲氧乙基)酯、雙異戊基鄰苯二甲酸酯、正戊基異戊基鄰苯二甲酸酯、雙正戊基鄰苯二甲酸酯、苯基丁基鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸(2-乙基己基)酯等7種增塑劑殘留量。本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案是:一種化妝品中多種增塑劑殘留量的檢測方法，包括以下步驟:
(I)樣品的提取
①含水量較高的化妝品(如香水、爽膚水、護(hù)手霜等)
稱取2 g均勻試樣(精確到0.01 g)置于50 mL具塞離心管中，加入15mL超純水，超聲提取IOmin,加入20mL正己燒,潤旋混勻5min,于10000 r/min離心10 min,將上層正己烷提取液轉(zhuǎn)移至凝膠凈化色譜儀(GPC)樣品瓶中，重復(fù)一次提取過程，合并上清液待凈化。②含水量較低的化妝品(如粉餅、爽身粉、指甲油等)
稱取2 g均勻試樣(精確到0.01 g)置于50 mL具塞離心管中，加入15mL甲醇，超聲提取IOmin,加入IOg無水硫酸鈉，潤旋混勻5min,于10000 r/min離心10 min,將上層清液提取液轉(zhuǎn)移至GPC樣品瓶中，重復(fù)一次提取過程，合并上清液待凈化。(2) GPC 凈化
提取液轉(zhuǎn)移至GPC樣品瓶中，儀器自動(dòng)完成提取液預(yù)濃縮過程，再用乙酸乙酯-環(huán)己烷溶液(體積比1:1)定容至5mL后進(jìn)樣，開始凈化過程，GPC凈化條件如下:
凝膠色譜柱:填料高度240mm，柱直徑25mm ；
流動(dòng)相:乙酸乙酯:環(huán)己烷(體積比1:1)的混合溶液；
流速:5mL/min ；
進(jìn)樣量:5mL。 收集10 20min時(shí)間段內(nèi)的全部流出液，流出液自動(dòng)收集至儀器濃縮腔內(nèi)，40°C下減壓濃縮并使用流動(dòng)相定容至5mL，凈化液轉(zhuǎn)移至收集瓶中，40°C下氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)?mL甲醇定容，待固相萃取凈化。(3)固相萃取柱凈化
將經(jīng)GPC凈化的提取液過固相萃取柱，收集流出液，用15mL甲醇繼續(xù)洗脫，整個(gè)固相萃取過程流速不超過lmL/min，收集洗脫液，將全部收集液在40°C以下水浴減壓濃縮至近干，加2 mL正己烷溶解殘?jiān)⒒靹?，過0.22 Mm針筒濾膜，上機(jī)待測定。(4)氣相色譜-質(zhì)譜儀測定
①定性測定:按照氣相色譜/質(zhì)譜條件分別測定樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，如果樣品的GC-MS數(shù)據(jù)符合下列限定，則可定性判定為某種激素殘留:
A、樣品中待測物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)品具有相同的保留時(shí)間，偏差在±2.5%以內(nèi)；
B、監(jiān)測離子的信噪比應(yīng)彡3；
C、扣除本底后該峰的質(zhì)譜圖存在所有選定的監(jiān)測離子；
D、樣品中待測物的全部監(jiān)測離子的相對(duì)強(qiáng)度應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)化合物的的離子相對(duì)強(qiáng)度比值一致，偏差在土 20%以內(nèi)。②定量測定:以各激素的監(jiān)測離子中信號(hào)響應(yīng)最高且無干擾的單離子對(duì)為定量離子，進(jìn)行外標(biāo)法定量分析。以峰面積和工作標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。為減少基質(zhì)對(duì)定量測定的影響，需用空白樣提取液來配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，并保證所測樣品中各激素類物質(zhì)的響應(yīng)值均在線性范圍內(nèi)。作為優(yōu)選，在步驟(2)中所述凝膠色譜柱為:Bio-Beads SX3填料(200 400目)； 作為優(yōu)選，在步驟(3)中所述固相萃取柱為:C18固相萃取柱，500mg/6mL，使用前用5
mL甲醇活化。
作為優(yōu)選，在步驟(4)中所述氣相色譜/質(zhì)譜分析條件為:
a)色譜柱:HP-5MS石英毛細(xì)管柱，30mX0.25mmX0.25Mm ;
b)進(jìn)樣口溫度:250°C;
c)升溫程序:初始柱溫60°C,保持Imin,以20°C/min升溫至220°C,保持Imin,以5°C /min 升溫至 280°C,保持 4min ；
d)載氣:氦氣(純度≥99.999%)，流速lmL/min ；
e)進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣；
f)進(jìn)樣量:WL;
g)離子源:電子轟擊源(EI);
h)監(jiān)測方式:選擇離子掃描(SM)；
i)電離能量:70eV; j)溶劑延遲:5min;
k)色譜與質(zhì)譜接口溫度:280°C.作為優(yōu)選，在步驟(4)中所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置方法為:
標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:分別稱取適量標(biāo)準(zhǔn)品，分別用正己烷溶解并定容至一定體積，I 4°C冰箱保存?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:各取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用正己烷稀釋到一定體積，I 4°C冰箱保存?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液:取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，根據(jù)需要用空白樣品溶液稀釋成適當(dāng)濃度。進(jìn)一步地,所述化妝品為面霜、護(hù)手霜、爽膚水。進(jìn)一步地，所述增塑劑包括鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸(2-甲氧乙基)酯、雙異戊基鄰苯二甲酸酯、正戊基異戊基鄰苯二甲酸酯、雙正戊基鄰苯二甲酸酯、苯基丁基鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸(2-乙基己基)酯等7種中的至少一種。由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果在于:
1、建立了化妝品(膏狀、乳狀、水狀)中鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸(2-甲氧乙基)酯、雙異戊基鄰苯二甲酸酯、正戊基異戊基鄰苯二甲酸酯、雙正戊基鄰苯二甲酸酯、苯基丁基鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸(2-乙基己基)酯等7種等增塑劑殘留量的氣相色譜/質(zhì)譜檢測方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)7種增塑劑的同時(shí)檢測。2、建立了同時(shí)測定等7種鄰苯二甲酸酯類化合物的氣相色譜-質(zhì)譜分析條件。選用HP-5MS石英毛細(xì)管柱，程序升溫，在20 min內(nèi)完成7種鄰苯二甲酸酯類化合物的分離和檢測。3、建立了凝膠色譜一固相萃取(GPC — SPE)組合凈化方法，比較了不同SPE凈化柱的凈化效果，研究了 GPC和C18小柱(6 mL,500mg)凈化條件，凈化效果好。4、所建立的氣相色譜/質(zhì)譜檢測方法的檢測低限為:雙異戊基鄰苯二甲酸酯、正戊基異戊基鄰苯二甲酸酯、雙正戊基鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸雙(2-乙基己基)酯、鄰苯二甲酸二丁酯均為5(^g/kg，鄰苯二甲酸雙(2-甲氧乙基)酯、苯基丁基鄰苯二甲酸酯均為lOOPg/kg。對(duì)爽膚水樣品平均回收率73.0 % 95.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.8% 16.0% ;對(duì)粉餅樣品平均回收率70.6% 92.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.7% 17.4%。
5、所建立的化妝品中增塑劑的測定方法，具有簡便、快速、靈敏等特點(diǎn)，方法的檢測低限、回收率、精密度等技術(shù)指標(biāo)滿足國內(nèi)外對(duì)妝品中增塑劑檢測的有關(guān)要求，適合于化妝品中增塑劑的檢測、監(jiān)測和確證。


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圖1 7種增塑劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的選擇離子流圖
圖2空白爽膚水樣品添加7種PAEs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(500 μ g/kg)選擇離子譜圖 圖3空白粉餅樣品添加7種PAEs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(500 μ g/kg)選擇離子譜圖 圖中:按保留時(shí)間依次為:1.鄰苯二甲酸二丁酯；2.鄰苯二甲酸雙(2-甲氧乙基)酯；
3.雙異戊基鄰苯二甲酸酯；4.正戊基異戊基鄰苯二甲酸酯；5.雙正戊基鄰苯二甲酸酯；
6.苯基丁基鄰苯二甲酸酯；7.鄰苯二甲酸雙(2-乙基己基)酯。
具體實(shí)施方式
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下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明并不局限于具體實(shí)施例。實(shí)施例1 爽膚水化妝品中多種增塑劑殘留量的檢測方法
1、樣品提取和凈化:
稱取0.2 g樣品(精確到0.001 g)于50 mL錐形瓶中，加入10 mL四氫呋喃，超聲10min,經(jīng)0.45 μ m膜過濾后,進(jìn)樣。、氣相色譜-質(zhì)譜儀測定
①定性測定:按照氣相色譜/質(zhì)譜條件分別測定樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，如果樣品的GC-MS數(shù)據(jù)符合下列限定，則可定性判定為某種增塑劑殘留:
A、樣品中待測物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)品具有相同的保留時(shí)間，偏差在±2.5%以內(nèi)；
B、監(jiān)測離子的信噪比應(yīng)彡3；
C、扣除本底后該峰的質(zhì)譜圖存在所有選定的監(jiān)測離子；
D、樣品中待測物的全部監(jiān)測離子的相對(duì)強(qiáng)度應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)化合物的的離子相對(duì)強(qiáng)度比值一致，偏差在土 20%以內(nèi)。②定量測定:以各增塑劑的監(jiān)測離子中信號(hào)響應(yīng)最高且無干擾的單離子對(duì)為定量離子，進(jìn)行外標(biāo)法定量分析。以峰面積和工作標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。為減少基質(zhì)對(duì)定量測定的影響，需用空白樣提取液來配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，并保證所測樣品中各增塑劑的響應(yīng)值均在線性范圍內(nèi)。氣相色譜/質(zhì)譜分析條件為:
a)色譜柱:HP-5MS石英毛細(xì)管柱，30mX0.25mmX0.25Mm ;
b)進(jìn)樣口溫度:250°C;
c)升溫程序:初始柱溫60°C,保持Imin,以20°C/min升溫至220°C,保持Imin,以5°C /min 升溫至 280°C,保持 4min ；
d)載氣:氦氣(純度≥99.999%)，流速lmL/min ；
e)進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣；
f)進(jìn)樣量:WL;
質(zhì)譜參數(shù):
g)離子源:電子轟擊源(EI) ;
h)監(jiān)測方式:選擇離子掃描(SM)；i)電離能量:70eV; j)溶劑延遲:5min; k)色譜與質(zhì)譜接口溫度:280°C 各種增塑劑的選擇離子見表1.表17種增塑劑定性定量離子表
權(quán)利要求
1.一種化妝品中多種增塑劑殘留量的檢測方法，其特征在于:該方法包括以下的步驟: (1)樣品的提取 ①含水量較高的化妝品 稱取2 g均勻試樣置于50 mL具塞離心管中，加入15mL超純水,超聲提取IOmin,加入20mL正己燒,潤旋混勻5min,于10000 r/min離心10 min,將上層正己燒提取液轉(zhuǎn)移至凝膠凈化色譜儀(GPC)樣品瓶中，重復(fù)一次提取過程，合并上清液待凈化； ②含水量較低的化妝品 稱取2 g均勻試樣置于50 mL具塞離心管中，加入15mL甲醇，超聲提取IOminJpAlOg無水硫酸鈉，潤旋混勻5min,于10000 r/min離心10 min,將上層清液提取液轉(zhuǎn)移至GPC樣品瓶中，重復(fù)一次提取過程，合并上清液待凈化； (2)GPC凈化 提取液轉(zhuǎn)移至GPC樣品瓶中，儀器自動(dòng)完成提取液預(yù)濃縮過程，再用乙酸乙酯-環(huán)己烷溶液(體積比1:1)定容至5mL后進(jìn)樣，開始凈化過程，GPC凈化條件如下: 凝膠色譜柱=Bio-Beads SX3填料(200 400目)，填料高度240mm，柱直徑25mm ； 流動(dòng)相:乙酸乙酯:環(huán)己烷(體積比1:1)的混合溶液；流速:5mL/min ； 進(jìn)樣量:5mL ； 收集10 20min時(shí)間段內(nèi)的全部流出液，流出液自動(dòng)收集至儀器濃縮腔內(nèi)，40°C下減壓濃縮并使用流動(dòng)相定容至5mL，凈化液轉(zhuǎn)移至收集瓶中，40°C下氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)? mL甲醇定容，待固相萃取凈化； (3)固相萃取柱凈化 將經(jīng)GPC凈化的提取液過固相萃取柱，收集流出液，用15mL甲醇繼續(xù)洗脫，整個(gè)固相萃取過程流速不超過lmL/min，收集洗脫液，將全部收集液在40°C以下水浴減壓濃縮至近干，加2 mL正己烷溶解殘?jiān)⒒靹颍^0.22 Mm針筒濾膜，上機(jī)待測定； (4)氣相色譜-質(zhì)譜儀測定 ①定性測定:按照氣相色譜/質(zhì)譜條件分別測定樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，如果樣品的GC-MS數(shù)據(jù)符合下列限定，則可定性判定為某種激素殘留: A、樣品中待測物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)品具有相同的保留時(shí)間，偏差在±2.5%以內(nèi)； B、監(jiān)測離子的信噪比應(yīng)≥3； C、扣除本底后該峰的質(zhì)譜圖存在所有選定的監(jiān)測離子； D、樣品中待測物的全部監(jiān)測離子的相對(duì)強(qiáng)度應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)化合物的的離子相對(duì)強(qiáng)度比值一致，偏差在±20%以內(nèi)； ②定量測定:以各激素的監(jiān)測離子中信號(hào)響應(yīng)最高且無干擾的單離子對(duì)為定量離子，進(jìn)行外標(biāo)法定量分析，以峰面積和工作標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，為減少基質(zhì)對(duì)定量測定的影響，需用空白樣提取液來配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，并保證所測樣品中各激素類物質(zhì)的響應(yīng)值均在線性范圍內(nèi)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化妝品中多種增塑劑殘留量的檢測方法，其特征在于:步驟(3)中所述固相萃取柱為:C18固相萃取柱，500mg/6mL，使用前用5 mL甲醇活化。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化妝品中多種增塑劑殘留量的檢測方法，其特征在于:步驟(4)中所述氣相色譜/質(zhì)譜分析條件為: a)色譜柱:HP-5MS石英毛細(xì)管柱，30mX0.25mmX0.25Mm ; b)進(jìn)樣口溫度:250°C； c)升溫程序:初始柱溫60°C,保持Imin,以20°C/min升溫至220°C,保持Imin,以5°C /min 升溫至 280°C,保持 4min ； d)載氣:氦氣(純度≥99.999%)，流速lmL/min ； e)進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣； f)進(jìn)樣量:WL; g)離子源:電子轟擊源(EI); h)監(jiān)測方式:選擇離子掃描(SM)； i)電離能量:70eV; j)溶劑延遲:5min; k)色譜與質(zhì)譜接口溫度:280°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化妝品中多種增塑劑殘留量的檢測方法，其特征在于:步驟(4)中所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置方法為: 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:分別稱取適量標(biāo)準(zhǔn)品，分別用正己烷溶解并定容至一定體積，I 4°C冰箱保存； 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:各取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用正己烷稀釋到一定體積，I 4°C冰箱保存； 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液:取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，根據(jù)需要用空白樣品溶液稀釋成適當(dāng)濃度。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的化妝品中多種增塑劑殘留量的檢測方法，其特征在于:所述化妝品選自面霜、護(hù)手霜或爽膚水。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的化妝品中多種增塑劑殘留量的檢測方法，其特征在于:所述增塑劑包括下述7種中的至少一種:鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸(2-甲氧乙基)酯、雙異戊基鄰苯二甲酸酯、正戊基異戊基鄰苯二甲酸酯、雙正戊基鄰苯二甲酸酯、苯基丁基鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸(2-乙基己基)酯。
全文摘要
本發(fā)明涉及分析化學(xué)、食品安全領(lǐng)域。一種化妝品中多種增塑劑殘留量的檢測方法，按化妝品性狀進(jìn)行樣品的提取，再進(jìn)行GPC凈化，第三再進(jìn)行固相萃取柱凈化，最后采用氣相色譜-質(zhì)譜儀進(jìn)行定量和定性測定。具有簡便、快速、靈敏等特點(diǎn)，方法的檢測低限、回收率、精密度等技術(shù)指標(biāo)滿足國內(nèi)外對(duì)妝品中增塑劑檢測的有關(guān)要求，適合于化妝品中增塑劑的檢測、監(jiān)測和確證。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103091413SQ20121056100
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2012年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月21日
發(fā)明者林維宣, 于杰, 李獻(xiàn)剛, 馬慧蕊 申請(qǐng)人:林維宣