山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙及其制備方法
【專利摘要】一種山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙，包括樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和背襯，所述樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜及吸水墊粘結(jié)在背襯上，所述結(jié)合墊的兩端分別與所述樣品墊及所述硝酸纖維素膜搭接，所述硝酸纖維素膜遠(yuǎn)離所述結(jié)合墊的一端與所述吸水墊搭接，所述硝酸纖維素膜上設(shè)有相互間隔的檢測(cè)線及質(zhì)控線，所述結(jié)合墊上設(shè)有葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物，所述檢測(cè)線由重組弓形蟲(chóng)速殖子膜表面蛋白SAG2構(gòu)成，所述質(zhì)控線由羊抗鼠IgG構(gòu)成。上述山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙。本發(fā)明還提供一種山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙的制備方法。
【專利說(shuō)明】山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]弓形蟲(chóng)病(Toxoplasmosis)是由剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasmosisgondii)引起的一種重要人畜共患寄生蟲(chóng)病。該病在世界范圍內(nèi)分布，感染范圍廣，對(duì)人畜安全構(gòu)成了很大的威脅。目前該疫苗的研究尚處動(dòng)物試驗(yàn)階段，其安全性和有效性還有待驗(yàn)證，所以對(duì)弓形蟲(chóng)感染的準(zhǔn)確、快速和特異性診斷的研究十分必要。目前弓形蟲(chóng)病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要為病原學(xué)診斷、免疫學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷，免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)作為免疫學(xué)診斷方法，以其操作簡(jiǎn)單、敏感特異、穩(wěn)定性強(qiáng)、不需要特殊設(shè)備和結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于病原微生物、毒素、藥物殘留等方面的檢測(cè)。
[0003]目前試紙條檢測(cè)弓形蟲(chóng)病的檢測(cè)方法較為麻煩。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]基于此，有必要提供一種檢測(cè)較為簡(jiǎn)便的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙及其制備方法。
[0005]一種山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙，包括樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和背襯，所述樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜及吸水墊粘結(jié)在背襯上，所述結(jié)合墊的兩端分別與所述樣品墊及所述硝酸纖維素膜搭接，所述硝酸纖維素膜遠(yuǎn)離所述結(jié)合墊的一端與所述吸水墊搭接，所述硝酸纖維素膜上設(shè)有相互間隔的檢測(cè)線及質(zhì)控線，所述結(jié)合墊上設(shè)有葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物，所述檢測(cè)線由重組弓形蟲(chóng)速殖子膜表面蛋白SAG2構(gòu)成，所述質(zhì)控線由羊抗鼠IgG構(gòu)成。
[0006]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述結(jié)合墊與所述樣品墊搭接的長(zhǎng)度為1.5mm?2.5_。
[0007]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述結(jié)合墊與所述硝酸纖維素膜搭接的長(zhǎng)度為1.5mm?
2.5mmο
[0008]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述硝酸纖維素膜與所述吸水墊搭接的長(zhǎng)度為1.5mm?
2.5mmο
[0009]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述背襯的材料為聚氯乙烯。
[0010]一種山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙的制備方法，包括以下步驟:
[0011 ] 將葡萄球菌A蛋白與熒光納米顆?；旌现瞥善咸亚蚓鶤蛋白-熒光標(biāo)記物；
[0012]將葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物包被在結(jié)合墊上；
[0013]將重組弓形蟲(chóng)速殖子膜表面蛋白SAG2包被在硝酸纖維素膜上形成檢測(cè)線；
[0014]將羊抗鼠IgG包被在硝酸纖維素膜上形成與所述檢測(cè)線相間隔的質(zhì)控線；
[0015]將樣品墊、結(jié)合墊、包有葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物的結(jié)合墊以及具有檢測(cè)線和質(zhì)控線的硝酸纖維素膜依次粘貼在背襯上得到所述山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙，所述結(jié)合墊的兩端分別與所述樣品墊及所述硝酸纖維素膜搭接，所述硝酸纖維素膜遠(yuǎn)離所述結(jié)合墊的一端與所述吸水墊搭接。
[0016]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述熒光納米顆粒的粒徑為50nm。
[0017]在其中一個(gè)實(shí)施例中，將得到的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙放置于兩個(gè)平板之間壓制10分鐘。
[0018]在其中一個(gè)實(shí)施例中，將得到的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙裁切成條狀。
[0019]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述背襯的材料為聚氯乙烯。
[0020]上述山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙使用時(shí)，將樣品滴加在樣品墊上，陽(yáng)性結(jié)果呈現(xiàn)兩條線，即質(zhì)控線和檢測(cè)線，陰性結(jié)果只出現(xiàn)一條質(zhì)控線，檢測(cè)快速簡(jiǎn)便；山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙的制備方法較為簡(jiǎn)單。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021]圖1為一實(shí)施方式的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0022]圖2為一實(shí)施方式的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙的制備方法的流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023]為了便于理解本發(fā)明，下面將參照相關(guān)附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更全面的描述。附圖中給出了本發(fā)明的首選實(shí)施例。但是，本發(fā)明可以以許多不同的形式來(lái)實(shí)現(xiàn)，并不限于本文所描述的實(shí)施例。相反地，提供這些實(shí)施例的目的是使對(duì)本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容更加透徹全面。
[0024]除非另有定義，本文所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與屬于本發(fā)明的【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)中所使用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體的實(shí)施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“及/或”包括一個(gè)或多個(gè)相關(guān)的所列項(xiàng)目的任意的和所有的組合。
[0025]請(qǐng)同時(shí)參閱圖1，一實(shí)施方式的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙10包括樣品墊1、結(jié)合墊2、硝酸纖維素膜3、背襯6和吸水墊7。樣品墊1、結(jié)合墊2、硝酸纖維素膜3及吸水墊7依次粘結(jié)在背襯6上。結(jié)合墊2的兩端分別與樣品墊I及硝酸纖維素膜3搭接，硝酸纖維素膜3遠(yuǎn)離結(jié)合墊2的一端與吸水墊7搭接。
[0026]樣品墊I是山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙10檢測(cè)時(shí)直接與樣品溶液互相接觸的部分，起到了過(guò)濾樣品溶液中的非可溶性雜質(zhì)成分的作用。
[0027]結(jié)合墊2上設(shè)有葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物。結(jié)合墊2上的葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物可與目標(biāo)蛋白發(fā)生抗原-抗體特異性結(jié)合。
[0028]硝酸纖維素膜3上設(shè)有相互間隔的檢測(cè)線4及質(zhì)控線5。檢測(cè)線4由重組弓形蟲(chóng)速殖子膜表面蛋白SAG2構(gòu)成。質(zhì)控線5由羊抗鼠IgG構(gòu)成。本實(shí)施方式中，羊抗鼠IgG購(gòu)買(mǎi)于Jackson公司。需要說(shuō)明的是，羊抗鼠IgG不限于從上述公司購(gòu)買(mǎi)，也可從其他公司購(gòu)買(mǎi)。
[0029]優(yōu)選的，葡萄球菌A蛋白與熒光納米顆粒的質(zhì)量比為1:6?1:8。
[0030]優(yōu)選的，熒光納米顆粒為異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的金屬氧化物，比如異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的Fe304。
[0031]優(yōu)選的，樣品墊I與結(jié)合墊2搭接的長(zhǎng)度為1.5mm?2.5mm。
[0032]優(yōu)選的，結(jié)合墊2與硝酸纖維素膜3搭接的長(zhǎng)度為1.5mm?2.5mm。[0033]優(yōu)選的,硝酸纖維素膜3與吸水墊I搭接的長(zhǎng)度為1.5mm~2.5mm。
[0034]優(yōu)選的，背襯6的材料為聚氯乙烯(PVC)。
[0035]優(yōu)選的,檢測(cè)線4和質(zhì)控線5之間的間距為Icm~1.5cm。
[0036]上述山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙10使用時(shí)，將樣品滴加在樣品墊I上，若樣品中含有目標(biāo)蛋白，則目標(biāo)蛋白與結(jié)合墊中的含標(biāo)記有免疫熒光標(biāo)記的抗體結(jié)合，通過(guò)層析作用先與NC膜上的SAG2蛋白結(jié)合形成可見(jiàn)的檢測(cè)線，未結(jié)合完的熒光標(biāo)記抗體繼續(xù)層析與羊抗鼠IgG結(jié)合形成可見(jiàn)的質(zhì)控線，即陽(yáng)性結(jié)果呈現(xiàn)兩條線，即質(zhì)控線5和檢測(cè)線4，陰性結(jié)果只出現(xiàn)一條質(zhì)控線5，檢測(cè)快速簡(jiǎn)便；免疫熒光技術(shù)具有快速簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確直觀等優(yōu)點(diǎn)，結(jié)合單克隆抗體技術(shù)又具有良好的特異性和敏感性。
[0037]上述山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙10的檢測(cè)需要使用凝膠成像系統(tǒng)、專用的熒光檢測(cè)儀，或其他儀器進(jìn)行輔助觀察并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0038]請(qǐng)同時(shí)參閱圖1及圖2，上述山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙10的制備方法，包括以下步驟:
[0039]步驟SI 10、將葡萄球菌A蛋白(SPA)與熒光納米顆?；旌现瞥善咸亚蚓鶤蛋白-熒光標(biāo)記物。
[0040]本實(shí)施方式中，葡萄球菌A蛋白購(gòu)買(mǎi)于本元正陽(yáng)基因技術(shù)有限公司。需要說(shuō)明的是，葡萄球菌A蛋白不限于從上述公司購(gòu)買(mǎi)，也可從其他公司購(gòu)買(mǎi)。
[0041]優(yōu)選的，熒光納 米顆粒為異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的金屬氧化物。
[0042]優(yōu)選的，取純化的SPA 200 μ L (0.5mg/mL)，用pH 9.5的0.025mol/L的碳酸鹽緩沖液透析12h ;然后加入10(^1^懸浮于碳酸鹽緩沖液中的熒光納米顆粒(811^/1^)，41:過(guò)夜；加入NaBH3CN, NaBH3CN的終濃度為5mM，反應(yīng)1.5h ;再加等體積封閉液(IOmM Tris7.8含5%脫脂奶粉的PBS)，最后用IOmM Tris7.8洗滌標(biāo)記好的抗體3遍，每遍20min，后用IOmMTris7.8懸浮，4°C保存得到葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物溶液。當(dāng)然，葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物溶液也可以采用其他業(yè)內(nèi)常用的方法制備或直接購(gòu)買(mǎi)葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物溶液。
[0043]優(yōu)選的，葡萄球菌A蛋白與熒光納米顆粒的質(zhì)量比為1:6~1:8。
[0044]優(yōu)選的，熒光納米顆粒的粒徑為50nm。
[0045]步驟S120、將葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物包被在結(jié)合墊2上。
[0046]優(yōu)選的，將步驟SllO制備的葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物溶液稀釋100倍均勻滴在結(jié)合墊2上，每試紙條滴加4 μ L，37°C溫箱中烘烤lh。
[0047]步驟S130、將重組弓形蟲(chóng)速殖子膜表面蛋白SAG2包被在硝酸纖維素膜3上形成檢測(cè)線4。
[0048]優(yōu)選的,用三維點(diǎn)膜儀在將0.4mg/mL重組弓形蟲(chóng)速殖子膜表面蛋白SAG2噴在硝酸纖維素膜3上作為檢測(cè)線4
[0049]步驟S140、將羊抗鼠IgG包被在硝酸纖維素膜3上形成與檢測(cè)線4相間隔的質(zhì)控線5。
[0050]優(yōu)選的，用三維點(diǎn)膜儀在將0.5mg/mL羊抗鼠IgG噴在硝酸纖維素膜3上作為質(zhì)控線5。
[0051]優(yōu)選的，檢測(cè)線4和質(zhì)控線5之間的間距為I~1.5cm。[0052]步驟S150、將樣品墊1、結(jié)合墊2、包有葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物的結(jié)合墊2以及設(shè)有檢測(cè)線4和質(zhì)控線5的硝酸纖維素膜3依次粘貼在背襯6上得到山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙，且結(jié)合墊2的兩端分別與樣品墊I及硝酸纖維素膜3搭接，硝酸纖維素膜3遠(yuǎn)離結(jié)合墊2的一端與吸水墊7搭接。
[0053]優(yōu)選的，背襯6的材料為聚氯乙烯。
[0054]優(yōu)選的，結(jié)合墊2與樣品墊I搭接的長(zhǎng)度為1.5mm?2.5mm。
[0055]優(yōu)選的，結(jié)合墊2與硝酸纖維素膜3搭接的長(zhǎng)度為1.5mm?2.5mm。
[0056]優(yōu)選的，硝酸纖維素膜3與吸水墊7搭接的長(zhǎng)度為1.5mm?2.5mm。
[0057]步驟S160、將得到的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙放置于兩個(gè)平板之間壓制10分鐘。
[0058]步驟S170、將得到的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙裁切成條狀。
[0059]上述山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙的制備方法較為簡(jiǎn)單。
[0060]可以理解，步驟S160及步驟S170可以省略。
[0061]需要說(shuō)明的是，上述山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙的制備方法中的步驟無(wú)須按照列出的順序執(zhí)行，比如步驟SllO?步驟S140之間的順序可以根據(jù)實(shí)際操作調(diào)整，比如步驟S130、步驟S140與步驟SllO或S120同步執(zhí)行。
[0062]以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【權(quán)利要求】
1.一種山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙，其特征在于，包括樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和背襯，所述樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜及吸水墊粘結(jié)在背襯上，所述結(jié)合墊的兩端分別與所述樣品墊及所述硝酸纖維素膜搭接，所述硝酸纖維素膜遠(yuǎn)離所述結(jié)合墊的一端與所述吸水墊搭接，所述硝酸纖維素膜上設(shè)有相互間隔的檢測(cè)線及質(zhì)控線，所述結(jié)合墊上設(shè)有葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物，所述檢測(cè)線由重組弓形蟲(chóng)速殖子膜表面蛋白SAG2構(gòu)成，所述質(zhì)控線由羊抗鼠IgG構(gòu)成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙，其特征在于，所述結(jié)合墊與所述樣品墊搭接的長(zhǎng)度為1.5mm~2.5mm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙，其特征在于，所述結(jié)合墊與所述硝酸纖維素膜搭接的長(zhǎng)度為1.5mm~2.5mm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙，其特征在于，所述硝酸纖維素膜與所述吸水墊搭接的長(zhǎng)度為1.5mm~2.5mm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙，其特征在于，所述背襯的材料為聚氯乙烯。
6.一種山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 將葡萄球菌A蛋白與熒光納米顆?；旌现瞥善咸亚蚓鶤蛋白-熒光標(biāo)記物； 將葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物包被在結(jié)合墊上； 將重組弓形蟲(chóng)速殖子膜表面蛋白SAG2包被在硝酸纖維素膜上形成檢測(cè)線； 將羊抗鼠IgG包被在硝酸纖維素膜上形成與所述檢測(cè)線相間隔的質(zhì)控線； 將樣品墊、結(jié)合墊、包有葡萄球菌A蛋白-熒光標(biāo)記物的結(jié)合墊以及具有檢測(cè)線和質(zhì)控線的硝酸纖維素膜依次粘貼在背襯上得到所述山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙，所述結(jié)合墊的兩端分別與所述樣品墊及所述硝酸纖維素膜搭接，所述硝酸纖維素膜遠(yuǎn)離所述結(jié)合墊的一端與所述吸水墊搭接。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙的制備方法，其特征在于，所述熒光納米顆粒的粒徑為50nm。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙的制備方法，其特征在于，還包括步驟:將得到的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙放置于兩個(gè)平板之間壓制10分鐘。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙的制備方法，其特征在于，還包括步驟:將得到的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙裁切成條狀。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)免疫試紙的制備方法，其特征在于，所述背襯的材料為聚氯乙烯。
【文檔編號(hào)】G01N33/533GK103901194SQ201210575141
【公開(kāi)日】2014年7月2日 申請(qǐng)日期:2012年12月26日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月26日
【發(fā)明者】萬(wàn)曉春, 任廣慧, 金言 申請(qǐng)人:深圳先進(jìn)技術(shù)研究院