蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙及其制備方法
【專利摘要】一種蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙，包括樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和背襯，所述樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜及吸水墊粘結(jié)在背襯上，所述結(jié)合墊的兩端分別與所述樣品墊及所述硝酸纖維素膜搭接，所述硝酸纖維素膜遠(yuǎn)離所述結(jié)合墊的一端與所述吸水墊搭接，所述硝酸纖維素膜上設(shè)有相互間隔的檢測(cè)線及質(zhì)控線，所述結(jié)合墊上設(shè)有抗蘇丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物，所述檢測(cè)線由蘇丹紅I衍生物構(gòu)成，所述質(zhì)控線由羊抗鼠IgG構(gòu)成。上述蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙。本發(fā)明還提供一種蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙的制備方法。
【專利說(shuō)明】蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，蘇丹紅的主要檢測(cè)方法為儀器檢測(cè)(如高效液相色譜儀)，而儀器檢測(cè)費(fèi)用昂貴、樣品前處理復(fù)雜、操作繁冗、耗時(shí)長(zhǎng)、不能對(duì)多個(gè)樣品同時(shí)檢測(cè)、且需要專業(yè)人員操作，從而使得蘇丹紅的檢測(cè)較為麻煩。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]基于此，有必要提供一種檢測(cè)較為簡(jiǎn)便的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙及其制備方法。
[0004]一種蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙，包括樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和背襯，所述樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜及吸水墊粘結(jié)在背襯上，所述結(jié)合墊的兩端分別與所述樣品墊及所述硝酸纖維素膜搭接，所述硝酸纖維素膜遠(yuǎn)離所述結(jié)合墊的一端與所述吸水墊搭接，所述硝酸纖維素膜上設(shè)有相互間隔的檢測(cè)線及質(zhì)控線，所述結(jié)合墊上設(shè)有抗蘇丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物，所述檢測(cè)線由蘇丹紅I衍生物構(gòu)成，所述質(zhì)控線由羊抗鼠IgG構(gòu)成。
[0005]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述結(jié)合墊與所述樣品墊搭接的長(zhǎng)度為1.5mnT2.5_ _。
[0006]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述結(jié)合墊與所述硝酸纖維素膜搭接的長(zhǎng)度為
1.5mm?2.5mm mmD
[0007]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述硝酸纖維素膜與所述吸水墊搭接的長(zhǎng)度為
1.5mm?2.5mm mmD
[0008]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述背襯的材料為聚氯乙烯。
[0009]一種蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙的制備方法，包括以下步驟:
[0010]將抗蘇丹紅I抗體與熒光納米顆粒混合制成抗蘇丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物；
[0011 ] 將抗蘇丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物包被在結(jié)合墊上；
[0012]將蘇丹紅I衍生物包被在硝酸纖維素膜上形成檢測(cè)線；
[0013]將羊抗鼠IgG包被在硝酸纖維素膜上形成與所述檢測(cè)線相間隔的質(zhì)控線；
[0014]將樣品墊、結(jié)合墊、包有抗蘇丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物的結(jié)合墊以及具有檢測(cè)線和質(zhì)控線的硝酸纖維素膜依次粘貼在背襯上得到所述蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙，所述結(jié)合墊的兩端分別與所述樣品墊及所述硝酸纖維素膜搭接，所述硝酸纖維素膜遠(yuǎn)離所述結(jié)合墊的一端與所述吸水墊搭接。
[0015]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述熒光納米顆粒的粒徑為50nm。
[0016]在其中一個(gè)實(shí)施例中，將得到的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙放置于兩個(gè)平板之間壓制10分鐘。
[0017]在其中一個(gè)實(shí)施例中，將得到的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙裁切成條狀。
[0018]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述背襯的材料為聚氯乙烯。
[0019]上述蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙使用時(shí)，將樣品滴加在樣品墊上，陽(yáng)性結(jié)果呈現(xiàn)兩條線，即質(zhì)控線和檢測(cè)線，陰性結(jié)果只出現(xiàn)一條質(zhì)控線，檢測(cè)快速簡(jiǎn)便；蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙的制備方法較為簡(jiǎn)單。
【專利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0020]圖1為一實(shí)施方式的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0021]圖2為一實(shí)施方式的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙的制備方法的流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022]為了便于理解本發(fā)明，下面將參照相關(guān)附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更全面的描述。附圖中給出了本發(fā)明的首選實(shí)施例。但是，本發(fā)明可以以許多不同的形式來(lái)實(shí)現(xiàn)，并不限于本文所描述的實(shí)施例。相反地，提供這些實(shí)施例的目的是使對(duì)本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容更加透徹全面。
[0023]除非另有定義，本文所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與屬于本發(fā)明的【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)中所使用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體的實(shí)施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“及/或”包括一個(gè)或多個(gè)相關(guān)的所列項(xiàng)目的任意的和所有的組合。
[0024]請(qǐng)同時(shí)參閱圖1，一實(shí)施方式的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙10包括樣品墊1、結(jié)合墊2、硝酸纖維素膜3、背襯6和吸水墊7。樣品墊1、結(jié)合墊2、硝酸纖維素膜3及吸水墊7依次粘結(jié)在背襯6上。結(jié)合墊2的兩端分別與樣品墊I及硝酸纖維素膜3搭接，硝酸纖維素膜3遠(yuǎn)離結(jié)合墊2的一端與吸水墊7搭接。
[0025]樣品墊I是試紙條檢測(cè)時(shí)直接與樣品溶液互相接觸的部分，起到了過(guò)濾樣品溶液中的非可溶性雜質(zhì)成分的作用。
[0026]結(jié)合墊2上設(shè)有抗蘇丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物?？固K丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物可與目標(biāo)蛋白發(fā)生抗原-抗體特異性結(jié)合。
[0027]硝酸纖維素膜3上設(shè)有相互間隔的檢測(cè)線4及質(zhì)控線5。檢測(cè)線4由蘇丹紅I衍生物構(gòu)成，質(zhì)控線5由羊抗鼠IgG構(gòu)成。本實(shí)施方式中，羊抗鼠IgG購(gòu)買于Jackson公司。需要說(shuō)明的是，羊抗鼠IgG不限于從上述公司購(gòu)買，也可從其他公司購(gòu)買。蘇丹紅I即苯基偶氮-2-酚，本實(shí)施例所用是含羧基的蘇丹紅I衍生物。
[0028]優(yōu)選的，抗蘇丹紅I抗體由以下步驟制備:利用重氮法合成蘇丹紅I衍生物；利用混合酸酐法將蘇丹紅I衍生物和明膠偶聯(lián)，形成的蘇丹紅I衍生物-明膠復(fù)合物作為免疫抗原；按照常規(guī)免疫程序免疫新西蘭白兔制備抗蘇丹紅I多克隆抗體；免疫程序結(jié)束后采用頸動(dòng)脈取血法獲得抗血清，抗血清經(jīng)辛酸硫酸銨法和親和層析法純化后，得到特異性的抗蘇丹紅I抗體。
[0029]優(yōu)選的，熒光納米顆粒的材料為異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的Fe304金屬氧化物，比如FITC標(biāo)記的Fe304。
[0030]優(yōu)選的，樣品墊I與結(jié)合墊2搭接的長(zhǎng)度為1.5mnT2.5mm mm。
[0031]優(yōu)選的，結(jié)合墊2與硝酸纖維素膜3搭接的長(zhǎng)度為1.5mnT2.5mm mm。
[0032]優(yōu)選的，硝酸纖維素膜3與吸水墊7搭接的長(zhǎng)度為1.5mnT2.5mm mm。
[0033]優(yōu)選的，背襯6的材料為聚氯乙烯(PVC)。
[0034]優(yōu)選的，檢測(cè)線4和質(zhì)控線5之間的間距為f 1.5cm。[0035]上述蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙10使用時(shí)，將樣品滴加在樣品墊I上，若樣品中含有目標(biāo)蛋白，則目標(biāo)蛋白與結(jié)合墊中的含標(biāo)記有免疫熒光標(biāo)記的抗體結(jié)合，通過(guò)層析作用先與NC膜上的蘇丹紅I衍生物結(jié)合形成可見(jiàn)的檢測(cè)線，未結(jié)合完的熒光標(biāo)記抗體繼續(xù)層析與羊抗鼠IgG結(jié)合形成可見(jiàn)的質(zhì)控線，即陽(yáng)性結(jié)果呈現(xiàn)兩條線，即質(zhì)控線5和檢測(cè)線4，陰性結(jié)果只出現(xiàn)一條質(zhì)控線5，檢測(cè)快速簡(jiǎn)便；免疫熒光技術(shù)具有快速簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確直觀等優(yōu)點(diǎn)，結(jié)合單克隆抗體技術(shù)又具有良好的特異性和敏感性。
[0036]上述蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙10的檢測(cè)需要使用凝膠成像系統(tǒng)、專用的熒光檢測(cè)儀，或其他儀器進(jìn)行輔助觀察并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0037]請(qǐng)同時(shí)參閱圖1及圖2，上述蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙10的制備方法，包括以下步驟:
[0038]步驟SI 10、將抗蘇丹紅I抗體與熒光納米顆?；旌现瞥煽固K丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物。
[0039]優(yōu)選的，取純化的抗蘇丹紅I抗體200 μ L(0.5mg/mL)，用pH9.5的0.025M碳酸鹽緩沖液透析12h ;然后加入100 μ L懸浮于碳酸鹽緩沖液中的熒光納米顆粒(8mg/mL)，4°C過(guò)夜；加入，NaBH3CN的終濃度為5mM，反應(yīng)1.5h ;再加等體積封閉液(IOmM Tris7.8含5%脫脂奶粉的PBS),最后用IOmM Tris7.8洗漆標(biāo)記好的抗體3遍,每遍20min,后用IOmM Tris7.8
懸浮，4 °C保存。
[0040]優(yōu)選的，抗蘇丹紅I抗體由以下步驟制備:利用重氮法合成蘇丹紅I衍生物；利用混合酸酐法將蘇丹紅I衍生物和明膠偶聯(lián)，形成的蘇丹紅I衍生物-明膠復(fù)合物作為免疫抗原；按照常規(guī)免疫程序免疫新西蘭白兔制備抗蘇丹紅I多克隆抗體；免疫程序結(jié)束后采用頸動(dòng)脈取血法獲得抗血清，抗血清經(jīng)辛酸硫酸銨法和親和層析法純化后，得到特異性的抗蘇丹紅I抗體。
[0041]優(yōu)選的，抗蘇丹紅I抗體與熒光納米顆粒的質(zhì)量比為1:6~1:8。
[0042]優(yōu)選的，熒光納米顆粒的粒徑為50nm。
[0043]步驟S120、將抗蘇丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物包被在結(jié)合墊2上。
[0044]優(yōu)選的，將標(biāo)記好的抗蘇丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物稀釋100倍均勻滴在結(jié)合墊上，每試紙條滴加4 μ L，37°C溫箱中烘烤lh。
[0045]步驟S130、將蘇丹紅I衍生物包被在硝酸纖維素膜3上形成檢測(cè)線4。
[0046]優(yōu)選的，用三維點(diǎn)膜儀將0.4mg/mL蘇丹紅I衍生物噴在硝酸纖維素膜3上作為檢測(cè)線4。
[0047]步驟S140、將羊抗鼠IgG包被在硝酸纖維素膜3上形成與檢測(cè)線4相間隔的質(zhì)控線5。
[0048]優(yōu)選的，用三維點(diǎn)膜儀將0.5mg/mL羊抗鼠IgG噴在硝酸纖維素膜3上作為與檢測(cè)線4相間隔的質(zhì)控線5。
[0049]優(yōu)選的，檢測(cè)線4和質(zhì)控線5之間的間距為IcnTl.5cm。
[0050]步驟S150、將樣品墊1、結(jié)合墊2、包有抗蘇丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物的結(jié)合墊2以及設(shè)有檢測(cè)線4和質(zhì)控線5的硝酸纖維素膜3依次粘貼在背襯6上得到蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙，且結(jié)合墊2的兩端分別與樣品墊I及硝酸纖維素膜3搭接，硝酸纖維素膜3遠(yuǎn)離結(jié)合墊2的一端與吸水墊7搭接。
[0051] 優(yōu)選的，背襯6的材料為聚氯乙烯。[0052]優(yōu)選的，結(jié)合墊2與樣品墊I搭接的長(zhǎng)度為1.5mnT2.5mm。
[0053]優(yōu)選的,結(jié)合墊2與硝酸纖維素膜3搭接的長(zhǎng)度為1.5mnT2.5mm。
[0054]優(yōu)選的,硝酸纖維素膜3與吸水墊7搭接的長(zhǎng)度為1.5mnT2.5mm。
[0055]步驟S160、將得到的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙放置于兩個(gè)平板之間壓制10分鐘。
[0056]步驟S170、將得到的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙裁切成條狀。
[0057]優(yōu)選的，蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙制備之后密封、干燥、4°C保存。
[0058]上述蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙的制備方法較為簡(jiǎn)單。
[0059]可以理解，步驟S160及步驟S170可以省略。
[0060]需要說(shuō)明的是，上述蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙的制備方法中的步驟無(wú)須按照列出的順序執(zhí)行，比如步驟S11(T步驟S140之間的順序可以根據(jù)實(shí)際操作調(diào)整，比如步驟S130、步驟S140與步驟SllO或S120同步執(zhí)行。
[0061]以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【權(quán)利要求】
1.一種蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙，其特征在于，包括樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和背襯，所述樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜及吸水墊粘結(jié)在背襯上，所述結(jié)合墊的兩端分別與所述樣品墊及所述硝酸纖維素膜搭接，所述硝酸纖維素膜遠(yuǎn)離所述結(jié)合墊的一端與所述吸水墊搭接，所述硝酸纖維素膜上設(shè)有相互間隔的檢測(cè)線及質(zhì)控線，所述結(jié)合墊上設(shè)有抗蘇丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物，所述檢測(cè)線由蘇丹紅I衍生物構(gòu)成，所述質(zhì)控線由羊抗鼠IgG構(gòu)成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙，其特征在于，所述結(jié)合墊與所述樣品墊搭接的長(zhǎng)度為1.5mm~2.5mm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙，其特征在于，所述結(jié)合墊與所述硝酸纖維素膜搭接的長(zhǎng)度為1.5mm~2.5mm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙，其特征在于，所述硝酸纖維素膜與所述吸水墊搭接的長(zhǎng)度為1.5mm~2.5mm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙，其特征在于，所述背襯的材料為聚氯乙烯。
6.一種蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 將抗蘇丹紅I抗體與熒光納米顆?；旌现瞥煽固K丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物； 將抗蘇丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物包被在結(jié)合墊上； 將蘇丹紅I衍生物包被在硝酸纖維素膜上形成檢測(cè)線； 將羊抗鼠IgG包被在硝酸纖維素膜上形成與所述檢測(cè)線相間隔的質(zhì)控線； 將樣品墊、結(jié)合墊、包有抗蘇丹紅I抗體-熒光標(biāo)記物的結(jié)合墊以及具有檢測(cè)線和質(zhì)控線的硝酸纖維素膜依次粘貼在背襯上得到所述蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙，所述結(jié)合墊的兩端分別與所述樣品墊及所述硝酸纖維素膜搭接，所述硝酸纖維素膜遠(yuǎn)離所述結(jié)合墊的一端與所述吸水墊搭接。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙的制備方法，其特征在于，所述熒光納米顆粒的粒徑為50nm。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙的制備方法，其特征在于，還包括步驟:將得到的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙放置于兩個(gè)平板之間壓制10分鐘。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙的制備方法，其特征在于，還包括步驟:將得到的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙裁切成條狀。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的蘇丹紅檢測(cè)免疫試紙的制備方法，其特征在于，所述背襯的材料為聚氯乙烯。
【文檔編號(hào)】G01N33/558GK103901193SQ201210575152
【公開(kāi)日】2014年7月2日 申請(qǐng)日期:2012年12月26日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月26日
【發(fā)明者】萬(wàn)曉春, 任廣慧, 金言 申請(qǐng)人:深圳先進(jìn)技術(shù)研究院