專利名稱：臭茉莉hplc標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜及其建立方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，更為具體地，涉及臭茉莉HPLC指紋圖譜的建立方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
背景技術(shù)：
臭茉莉(別名:臭矢茉莉，臭茉莉，大髻婆，單茉莉，過墻風(fēng))，為馬鞭草科植物臭茉莉的干燥莖或根，為常用中草藥，現(xiàn)收載于《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，具有祛風(fēng)除濕，利水消腫的功效，常用于治療風(fēng)濕骨痛，腳氣水腫，支氣管炎、高血壓癥及濕疹疥瘡，皮膚瘙癢等皮膚疾病。廣東省各地有產(chǎn)，以陽山，寶安，三水等地產(chǎn)出較多。其根莖均可入藥微苦，平。歸肝、脾、腎經(jīng)，有祛風(fēng)除濕，利水消腫的功效。用于風(fēng)濕骨痛，腳氣水腫；可治療支氣管炎、高血壓病。外用治濕疹疥瘡，皮膚瘙癢。臭茉莉原定名為Clerodendron fragrans auct.non.Vent., Clerodendronphilippinum Schauer var.simplex Moldenke,變種臭茉莉Clerodendron lindleyi Decne.ex Planch.和原變種重瓣臭茉莉 C.phi lippinum Schauer Var.philippinum?，F(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)對(duì)臭茉莉質(zhì)量控制只有性狀鑒別及顯微鑒別，國(guó)內(nèi)外關(guān)于臭茉莉的研究報(bào)道極少見，尚沒有對(duì)臭茉莉的指紋圖譜的質(zhì)量控制方法的相關(guān)報(bào)道。本發(fā)明是在對(duì)臭茉莉根和莖進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究上，采用HPLC方法，建立能較全面反映臭茉莉藥材質(zhì)量的指紋圖譜，對(duì)控制臭茉莉原料和產(chǎn)品的質(zhì)量有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)對(duì)臭茉莉質(zhì)量控制只有性狀鑒別及顯微鑒別，質(zhì)量控制方法水平不高，本發(fā)明所要解決的是對(duì)現(xiàn)有的臭茉莉的質(zhì)量控制方法水平不高，提供了一種臭茉莉的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，利用該標(biāo)準(zhǔn)圖譜更好的控制臭茉莉的質(zhì)量，保證藥品使用的安全有效，同時(shí)本發(fā)明還提供了一種臭茉莉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立方法和應(yīng)用。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)上述目的:
一種臭茉莉HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其特征在于，包括13個(gè)共有特征峰，保留時(shí)間分別為:0.183,0.204,0.243,0.493,0.514,0.669,0.718,0.892,1.151,1.179,1.245,1.482、
18.541min?！N臭茉莉HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其特征在于，包括21個(gè)共有特征峰:以9號(hào)峰為對(duì)照峰(9號(hào)峰為毛蕊花糖苷峰，保留時(shí)間為18.54Imin )，其他的20個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間為:0.183,0.204,0.243,0.493,0.514,0.669,0.718,0.892,1.151,1.179,1.245,1.482、1.493,1.517,1.605,1.635,1.743,1.795,2.044,2.203。一種臭茉莉HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立方法，包括如下步驟:
51.供試品溶液的制備:稱取樣品，加入提取溶劑，浸潤(rùn)1(Γ60分鐘，超聲提取3(Γ60分鐘，過濾蒸干后溶解即得供試品溶液；
52.指紋圖譜的制作:將SI所得溶液過色譜分離柱，加入乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脫，流速0.8 1.2mL/min,乙腈在洗脫過程中體積分?jǐn)?shù)變化規(guī)律:(Tl2min, 14 17%; 12 18miη, 17 20%18 20min, 20 20%2(T35min，20 40%; 35 40min, 40 78%; 40 50min，78 88% ;檢測(cè)波長(zhǎng)327nm，柱溫25 35°C ;在此條件下分析供試品溶液，得到臭茉莉的指紋圖譜；
S3.標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的確定:對(duì)11批臭茉莉建立HPLC指紋圖譜，通過分析比較，確定共有特征峰，這些共有特征峰作為臭茉莉的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。優(yōu)選地，SI中所述提取溶劑為石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、50%甲醇、70%甲醇或70%乙醇；更為優(yōu)選地，SI中所述提取溶劑為甲醇。優(yōu)選地，SI中所述樣品與提取溶劑的重量與體積比為1:25 50。優(yōu)選地，SI中所述浸潤(rùn)的時(shí)間為30分鐘，超聲提取的時(shí)間為45分鐘。優(yōu)選地，S2中所述色譜分離柱為安捷倫Z0RBAX-C18 (250 mmX4.6 mm，5ym)、賽默飛 Hypersil 0DS2 (4.6mmX 250mm, 5 μ m)或菲羅門 Phenomenex Synergi 4uFusion-RP 80A (250 mmX4.6 mm)。優(yōu)選地，S2中所述色譜分離柱為安捷倫Z0RBAX-C18 (250 mmX4.6 mm, 5 μ m)。優(yōu)選地，S2中所述流速為1.0mL/min。優(yōu)選地，S2中所述柱溫為35 °C。一種如上所述臭茉莉HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜在臭茉莉質(zhì)量控制中的應(yīng)用。利用臭茉莉HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜控制臭茉莉質(zhì)量的具體步驟如下:
Sll.待測(cè)樣品溶液的制備:稱取樣品，加入提取溶劑，浸潤(rùn)(Γ60分鐘，超聲提取3(Γ60分鐘，過濾蒸干后溶解即得供試品溶液；
S12.指紋圖譜的制作:將SI所得溶液過色譜分離柱，加入乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脫，流速0.8^1.2mL/min,乙腈在洗脫過程中體積分?jǐn)?shù)變化規(guī)律:(Tl2min， Γ 7%; 12 18min, 17 20%18 20min, 2(T20%2(T35min，20 40%; 35 40min, 40 78%; 4(T50min, 78 88% ;檢測(cè)波長(zhǎng)327nm，柱溫25 35°C ;在此條件下分析待測(cè)樣品溶液，得到待測(cè)臭茉莉的指紋圖譜；
S2.將待測(cè)樣品的HPLC圖譜如上所述標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)比，確定待測(cè)樣品質(zhì)量。本發(fā)明的有益效果是:
(O目前執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)中尚無建立臭茉莉指紋圖譜的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)對(duì)臭茉莉質(zhì)量控制只有性狀鑒別及顯微鑒別，質(zhì)量控制方法水平不高，發(fā)明是在對(duì)臭茉莉根和莖進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究上，采用HPLC方法，建立能較全面反映臭茉莉藥材質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。為藥品生產(chǎn)及檢測(cè)中提供了臭茉莉質(zhì)量控制的高標(biāo)準(zhǔn)，可以更好的控制臭茉莉的質(zhì)量，使質(zhì)量可控，保證藥品使用的安全有效。(2)本發(fā)明提供了一種建立臭茉莉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立方法，提供了臭茉莉高水平的檢測(cè)的操作標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，方法簡(jiǎn)單，易操作，重復(fù)性好，可以全面監(jiān)控臭茉莉的產(chǎn)品，以確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。(3)本發(fā)明提供的臭茉莉的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜和檢測(cè)方法，為行業(yè)內(nèi)臭茉莉的質(zhì)量控制提供了標(biāo)準(zhǔn)和操作規(guī)范，方法簡(jiǎn)單，易操作，重復(fù)性好，可以在原料采購(gòu)、產(chǎn)品生產(chǎn)工藝流程中的各個(gè)步驟的質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)控，廣泛推廣應(yīng)用。

(4)利用本發(fā)明的測(cè)定方法，可得到臭茉莉樣品的指紋圖譜色譜圖。再借助計(jì)算機(jī)相似度輔助評(píng)價(jià)軟件，將樣品圖與共有模式圖譜比較，通過相似度計(jì)算，即可評(píng)價(jià)原料品種、產(chǎn)地、真?zhèn)蝺?yōu)劣，以及判斷產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。


圖1.超聲提取和熱回流提取比較。圖2.浸潤(rùn)時(shí)間的比較。圖3.不同提取溶劑比較。圖4.不同料液比提取比較。圖5.不同洗脫系統(tǒng)的比較。圖6.不同洗脫系統(tǒng)的比較。圖7.不同流速的比較。圖8.不同柱溫的比較。圖9.不同色譜柱的比較。 圖10.臭末利指紋圖譜；1.臭末利20100617 ；2.臭末利20100930 ；3.臭末利
20101101；4.臭茉莉 20101102 ;5.臭茉莉 20110301 ;6.臭茉莉 220110302 ;7.臭茉莉20110303 ；8.臭茉莉 20110304 ;9.臭茉莉 20110501 ;10.臭茉莉 20120723 ;11.臭茉莉20120830。圖11.對(duì)照品色譜圖；S.為毛蕊花糖苷對(duì)照品。圖12.臭茉莉的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。圖13.專屬性考察。圖14.精密度考察。圖15.重復(fù)性考察。圖16.穩(wěn)定性考察。圖17.臭茉莉指紋圖譜共有模式圖譜；9號(hào)峰為毛蕊花糖苷；17號(hào)峰為3"，4〃 -0-acetyImartynoside ；18 號(hào)峰為 friedelin 。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。實(shí)施例1 S1.儀器與試劑
電熱重蒸餾水器(上海三申醫(yī)療器械有限公司)、電熱恒溫水浴鍋DK-S24 (上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)、FEJ-200電子稱(d=0.lg)、萬分之一電子天平AB204-S (METTLERTOLEOD)、十萬分之一電子天平AUW220D (島津公司)安捷倫1200RLC快速液相色譜儀(配有G1315C型號(hào)DAD檢測(cè)器、G4218A的ELSD蒸發(fā)光檢測(cè)器、G1312B 二元泵、G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器、G1322A 脫氣機(jī)G1316B 柱溫箱，Agilent Chemstation 色譜工作站、Agilent ZORBAX-C185 μ m(250 mmX4.6 mm)、Agilent ZORBAX-C181.8 μ m(50 mmX4.6 mm)、菲羅門PhenomenexSynergi 4u Fusion-RP 80A (250 mmX 4.6 mm)色譜柱、KQ-400K0E 型高功率數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。對(duì)照品:(1)樺木酸(betulinic acid) ； (2)單乙酰馬蒂羅苷(monoacety Imartinoside) ； (3) 4 " -O-乙酸馬蒂羅苷(4 " -O-acetylmartynoside)；(4)貞桐苷 A (clerodendronoside A) ； (5) 3 " , 4 " -O-乙酸馬蒂羅苷(3〃 ,4" -O-acetylmartynoside) ； (6)阿克替苷(acteoside) ； (7)木栓酮(friedelin) ； (8)粘霉烯醇(glutinol) ; (9)蒲公英職醇(taraxerol) ; (10)鉤大青酮(uncinatone) ； (11)mandarone E ; (12) (24S)-乙基膽留-5,22,25-三稀-3 β -醇[(24S) -24-ethylcholesta-5, 22, 25-trien-3 β -οI ] ； (13) hedyotol C 4" -0-β -D-glucopyranoside。對(duì)照品均是對(duì)臭茉莉根和莖進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究上所得到的。乙腈(色譜純，安徽時(shí)聯(lián)特種溶劑股份有限公司)、甲醇(色譜純，安徽時(shí)聯(lián)特種溶劑股份有限公司)、磷酸(天津市福晨化學(xué)試劑廠)，冰醋酸(天津市福晨化學(xué)試劑廠)、乙醇(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑有限公司)、石油醚(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑有限公司)、甲醇(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑有限公司)、重蒸水(自制)。S2.試驗(yàn)藥材
11批臭茉莉藥材均由不同產(chǎn)地采集，樣品均按照《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行檢測(cè)與鑒定，符合規(guī)定。樣品粉碎過50目篩，詳細(xì)信息見表1:
表1.11批臭茉莉樣品信息
權(quán)利要求
1.一種臭茉莉HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其特征在于，包括13個(gè)共有特征峰，保留時(shí)間分別為:0.183,0.204,0.243,0.493,0.514,0.669,0.718,0.892,1.151,1.179,1.245,1.482、18.541min。
2.一種臭茉莉HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其特征在于，包括21個(gè)共有特征峰，保留時(shí)間分別為:0.183,0.204,0.243,0.493,0.514,0.669,0.718,0.892,1.151,1.179,1.245,1.482、1.493,1.517,1.605,1.635,1.743,1.795,18.541、2.044,2.203 min。
3.一種臭茉莉HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立方法，其特征在于，包括如下步驟: 51.供試品溶液的制備:精密稱取樣品，加入提取溶劑，浸潤(rùn)(Γ60分鐘，超聲提取3(Γ60分鐘，過濾蒸干后溶解即得供試品溶液； 52.指紋圖譜的制作:將SI所得溶液過色譜分離柱，加入乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脫，流速0.8" .2mL/min,乙腈在洗脫過程中體積分?jǐn)?shù)變化規(guī)律:(Tl2min, 14 17%; 12 18miη, 17 20%18 20min, 20 20%2(T35min，20 40%; 35 40min, 40 78%; 40 50min，78 88% ;檢測(cè)波長(zhǎng)327nm，柱溫25 35°C ;在此條件下分析供試品溶液，得到臭茉莉的指紋圖譜； 53.標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的 確定:對(duì)11批臭茉莉建立HPLC指紋圖譜，通過分析比較，確定共有特征峰，這些共有特征峰作為臭茉莉的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，SI中所述提取溶劑可以為石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、50%甲醇、70%甲醇或70%乙醇；S1中所述提取溶劑為甲醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，SI中所述樣品與提取溶劑的重量與體積比為1:25 50。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，再優(yōu)選供試品的制作SI中所述浸潤(rùn)的時(shí)間為30分鐘，超聲提取的時(shí)間為45分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，S2中所述色譜分離柱為安捷倫ZORBAX-C18、賽默飛 Hypersil 0DS2 或菲羅門 Phenomenex Synergi 4u Fusion-RP 80A。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，S2中所述流速為1.0mL/min，S2中所述柱溫為 35。。。
9.一種如權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述臭茉莉HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜在臭茉莉質(zhì)量控制中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述應(yīng)用，其特征在于，利用臭茉莉HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜控制臭茉莉質(zhì)量的具體步驟如下:·51.按權(quán)利要求3中SI和S2所述方法分析待測(cè)樣品的HPLC圖譜；·52.將待測(cè)樣品的HPLC圖譜與權(quán)利要求1所述標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)比，確定待測(cè)樣品質(zhì)量。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種臭茉莉HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜及其建立方法與應(yīng)用，所述方法包括供試品溶液的制備，對(duì)照品溶液的制備，色譜條件的選擇，并用高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，得到臭茉莉藥材的指紋圖譜。通過對(duì)11批次臭茉莉藥材HPLC指紋圖譜的對(duì)比，確定其共有指紋特征，得到標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。本發(fā)明具有方法簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、特征峰多、準(zhǔn)確可靠等特點(diǎn)。所建立的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜能有效地表征臭茉莉藥材的質(zhì)量。
文檔編號(hào)G01N30/86GK103076408SQ20121058776
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月31日
發(fā)明者成金樂, 彭麗華, 王慧玲, 閔歡 申請(qǐng)人:中山市中智藥業(yè)集團(tuán)有限公司