專利名稱：用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板及試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種體外診斷的試劑盒，特別是涉及一種通過酶聯(lián)免疫法檢測血清中細(xì)胞因子含量的聯(lián)合變化用以預(yù)測慢性阻塞性肺病的診斷試劑盒。
背景技術(shù)：
慢性阻塞性肺病是一種慢性氣道炎癥，以氣道氣流受限不完全可逆為特征。其主要臨床表現(xiàn)為咳嗽，咳痰以及呼吸困難。隨著病程進(jìn)展，可發(fā)展到輕體力活動或靜息時亦感到氣急。此外尚有乏力、納差和體重減輕等肺外全身癥狀。慢性阻塞性肺病目前居全球死亡原因的第4位，據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，至2020年慢性阻塞性肺病將位居世界疾病經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)第5位。在我國，慢性阻塞性肺病同樣是嚴(yán)重危害人民身體健康的重要慢性呼吸系統(tǒng)疾病。目前依據(jù)國際慢性阻塞性肺病診斷治療和預(yù)防指南(Global strategy for thediagnosis，management，and prevention of chronic obstructive pulmonary disease，GOLD)診斷指南，慢性阻塞性肺病的診斷和病情分級主要依據(jù)肺功能檢查。肺功能檢查雖然對確定氣流受限有重要意義，但是難以及時反映慢性阻塞性肺病的狀態(tài)和病程，故發(fā)展一種能夠及時快速檢測慢性阻塞性肺病的方法已成為臨床實(shí)踐中的迫切需求。生物標(biāo)志物作為疾病早期的預(yù)測與診斷因子，已開始應(yīng)用于冠心病、糖尿病、高血壓等疾病。隨著醫(yī)療從傳統(tǒng)的被動治療逐漸向主動預(yù)防和診治的醫(yī)學(xué)觀念質(zhì)變，特別是個體化醫(yī)學(xué)的出現(xiàn)和漸入主流，生物標(biāo)志物的研究開發(fā)也成為近年來臨床和制藥領(lǐng)域的熱點(diǎn)課題。尋找生物標(biāo)志物主要通過高通量的組學(xué)研究，迄今已發(fā)現(xiàn)多種基因表達(dá)可以作為慢性氣道疾病預(yù)測指標(biāo)。然而，目前臨床尚沒有預(yù)測慢性阻塞性肺病的試劑盒來預(yù)測該病的進(jìn)展及生存情況。血清中蛋白質(zhì)測定用于慢性阻塞性肺病的輔助診斷，已有近十年歷史。近年來大量研究表明系統(tǒng)性炎癥改變在慢性阻塞性肺病發(fā)生及進(jìn)展中的發(fā)揮重要作用。對于類似慢性阻塞性肺病這樣具有復(fù)雜炎癥背景的疾病而言，單個基因或蛋白難以反映疾病的整體變化。以往研究發(fā)現(xiàn)，多個血清蛋白構(gòu)成的生物標(biāo)志物組群與慢性阻塞性肺病患者的臨床預(yù)后密切相關(guān)，這提示同步聯(lián)合測定多個因子則有助于更全面的了解疾病的進(jìn)展。近年來研究發(fā)現(xiàn)的與慢性阻塞性肺病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)的蛋白標(biāo)志物包括Wnt抑制因子 I (Wnt inhibitory factor-1, WIF-1)、腫瘤壞死因子 β (tumor necrosisfactor-β , TNF-β )、巨卩遼細(xì)胞炎性蛋白 3a (macrophage inflammatory protein 3α，MIP-3 α )、腫瘤壞死因子超家族成員 10 (tumor necrosis factor super family 10,TNFSF10)、血管內(nèi)皮生長因子 D(vascular endothelial growth factor D, VEGF D)、嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3/趨化因子配體26(Eotaxin 3/CCL26)、糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家方矣相關(guān)蛋白 18 (glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptorfamily-related protein 18, GITR-18)。利用蛋白芯片檢測發(fā)現(xiàn),并以正常人血清中這7種因子的水平作為衡量標(biāo)準(zhǔn)，在慢性阻塞性肺病患者血清中這7種細(xì)胞因子含量會急劇變化，與正常人相比存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P < 0. 05)。因此選用這7種細(xì)胞因子作為慢性阻塞性肺病早期診斷具有重要臨床意義。而對這7種COPD相關(guān)的生物標(biāo)志物進(jìn)行并行檢測，利用其聯(lián)合變化對CCffD進(jìn)行預(yù)測，可靈敏、特異、方便的用于CCffD的早期診斷，將為醫(yī)護(hù)人員和病人帶來極大便利，也將擁有更為廣闊的應(yīng)用市場。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是提供一種結(jié)構(gòu)簡單、操作方便的用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板及試劑盒。為了達(dá)到上述目的，本實(shí)用新型提供了一種用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板，其特征在于，包括固相載體，所述的固相載體上設(shè)有fct抑制因子I的單克隆抗體孔、腫瘤壞死因子β的單克隆抗體孔、巨噬細(xì)胞炎性蛋白3 α的單克隆抗體孔、腫瘤壞死因子超家族成員10的單克隆抗體孔、血管內(nèi)皮生長因子D受體的單克隆抗體孔、嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3的單克隆抗體孔、糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18的單克隆抗體 孔和空白對照孔。優(yōu)選地,所述的固相載體為聚苯乙烯酶標(biāo)板。本實(shí)用新型還提供了一種用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的試劑盒，其特征在于，包括外盒,外盒內(nèi)設(shè)有盒內(nèi)支架,盒內(nèi)支架上具有主凹槽,主凹槽內(nèi)設(shè)有上述的用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板。優(yōu)選地，所述的盒內(nèi)支架上位于主凹槽周圍的位置處還設(shè)有副凹槽，所述的副凹槽內(nèi)設(shè)有13個固定孔，生物素標(biāo)記的抗Wnt抑制因子I的多克隆抗體管、生物素標(biāo)記的抗腫瘤壞死因子β的多克隆抗體管、生物素標(biāo)記的抗巨噬細(xì)胞炎性蛋白的多克隆抗體管、生物素標(biāo)記的抗腫瘤壞死因子超家族成員10的多克隆抗體管、生物素標(biāo)記的抗血管內(nèi)皮生長因子D的多克隆抗體管、生物素標(biāo)記的抗嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3/趨化因子配體26的多克隆抗體管、生物素標(biāo)記的抗糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18的多克隆抗體管、HRP標(biāo)記的鏈霉素親和素管、陽性血清管、顯色劑管、終止液管、濃縮洗滌液管和樣品稀釋液管各設(shè)于一個固定孔中。更優(yōu)選地，所述的生物素標(biāo)記的抗Wnt抑制因子I的多克隆抗體管、生物素標(biāo)記的抗腫瘤壞死因子β的多克隆抗體管、生物素標(biāo)記的抗巨噬細(xì)胞炎性蛋白的多克隆抗體管、生物素標(biāo)記的抗腫瘤壞死因子超家族成員10的多克隆抗體管、生物素標(biāo)記的抗血管內(nèi)皮生長因子D的多克隆抗體管、生物素標(biāo)記的抗嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3/趨化因子配體26的多克隆抗體管和生物素標(biāo)記的抗糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18的多克隆抗體管位于用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板的后側(cè)，終止液管、濃縮洗滌液管和樣品稀釋液管位于用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板的左側(cè)，HRP標(biāo)記的鏈霉素親和素管、陽性血清管和顯色劑管位于用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板的右側(cè)。本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是I、本實(shí)用新型將7種抗體整合到一個酶聯(lián)免疫檢測板上，放置在一個試劑盒內(nèi)，利用酶聯(lián)免疫反應(yīng)對這7種COPD相關(guān)的生物標(biāo)志物進(jìn)行并行檢測，利用其聯(lián)合變化對COPD進(jìn)行預(yù)測，操作簡單，節(jié)省人力和時間，提高了工作效率；本實(shí)用新型既適用于酶聯(lián)接免疫吸附劑測定，也可改為蛋白質(zhì)芯片技術(shù)。[0014]2、酶聯(lián)免疫檢測板放置在主凹槽中，便于運(yùn)輸和保存，并且防止酶聯(lián)免疫檢測板上的單克隆抗體被污染。3、酶聯(lián)免疫反應(yīng)所用到的其它試劑管放置在副凹槽中，使用起來更便利，進(jìn)一步完善了本實(shí)用新型試劑盒在慢性阻塞性肺病的快速預(yù)測功能。4、副凹槽中設(shè)有固定孔,各試劑管設(shè)于固定孔中,可使其固定牢固；5、副凹槽的試劑管放置合理，使用方便。

圖I為用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板的剖面示意圖。圖2為用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的試劑盒的俯面示意圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例來具體說明本實(shí)用新型。實(shí)施例I如圖I所示，為用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板的剖面示意圖，所述的用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板包括固相載體1，所述的固相載體I上設(shè)有空白對照孔26，Wnt抑制因子I的單克隆抗體孔2、腫瘤壞死因子β的單克隆抗體孔3、巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α的單克隆抗體孔4、腫瘤壞死因子超家族成員10的單克隆抗體孔5、血管內(nèi)皮生長因子D受體的單克隆抗體孔6、嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3的單克隆抗體孔7和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18的單克隆抗體孔8。所述的固相載體I為96孔聚苯乙烯酶標(biāo)板。如圖2所示，為用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的試劑盒的俯面示意圖，所述的用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的試劑盒，包括外盒9，外盒9內(nèi)設(shè)有盒內(nèi)支架10，盒內(nèi)支架10上具有主凹槽11，主凹槽11內(nèi)設(shè)有上述的用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板。所述的盒內(nèi)支架10上位于主凹槽11周圍的位置處還設(shè)有副凹槽12，所述的副凹槽12內(nèi)設(shè)有13個固定孔，生物素標(biāo)記的抗fct抑制因子I的多克隆抗體管13、生物素標(biāo)記的抗腫瘤壞死因子β的多克隆抗體管14、生物素標(biāo)記的抗巨噬細(xì)胞炎性蛋白的多克隆抗體管15、生物素標(biāo)記的抗腫瘤壞死因子超家族成員10的多克隆抗體管16、生物素標(biāo)記的抗血管內(nèi)皮生長因子D的多克隆抗體管17、生物素標(biāo)記的抗嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3的多克隆抗體管18、生物素標(biāo)記的抗糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18的多克隆抗體管19、HRP標(biāo)記的鏈霉素親和素管20、陽性血清管21、顯色劑管22、終止液管23、濃縮洗滌液管24和樣品稀釋液管25各設(shè)于一個固定孔中。所述的生物素標(biāo)記的抗Wnt抑制因子I的多克隆抗體管13、生物素標(biāo)記的抗腫瘤壞死因子β的多克隆抗體管14、生物素標(biāo)記的抗巨噬細(xì)胞炎性蛋白的多克隆抗體管15、生物素標(biāo)記的抗腫瘤壞死因子超家族成員10的多克隆抗體管16、生物素標(biāo)記的抗血管內(nèi)皮生長因子D的多克隆抗體管17、生物素標(biāo)記的抗嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3的多克隆抗體管18和生物素標(biāo)記的抗糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18的多克隆抗體管19位于用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板的后側(cè)，終止液管23、濃縮洗滌液管24和樣品稀釋液管25位于用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板的左側(cè)，HRP標(biāo)記的鏈霉素親和素管20、陽性血清管21和顯色劑管22位于用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板的右側(cè)。本實(shí)用新型試劑盒所用的酶聯(lián)免疫檢測板以及7種細(xì)胞因子的多克隆抗體可采用常規(guī)方法制備，具體如下(I)制備抗原分別將克隆的fct抑制因子I基因、克隆的腫瘤壞死因子β基因、克隆的巨噬細(xì)胞炎性蛋白3 α基因、克隆的腫瘤壞死因子超家族成員10基因、克隆的血管內(nèi)皮生長因子D受體基因、克隆的嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3基因、克隆的糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18基因在大腸桿菌中表達(dá)， 得到蛋白后經(jīng)純化作為抗原；(2)制備抗體分別將步驟(I)中所得的7種抗原免疫兔，即抗原于家兔皮下多點(diǎn)注射，3周后，再次進(jìn)行多點(diǎn)皮下注射，以后間隔7天用抗原加強(qiáng)一次，2次后采取頸動脈放血收集家兔血液，離心分離得到血清，即得到7種特異性的多克隆抗體；復(fù)蘇分泌上述7種細(xì)胞因子單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞并注入小鼠腹腔，收集腹水，離心，留取上清液，，即得到7種細(xì)胞因子的單克隆抗體；(3)純化抗體步驟(2)中所得的7種細(xì)胞因子的單克隆抗體和7種細(xì)胞因子的多克隆抗體分別經(jīng)過離心、沉淀、親和層析，得到純化抗體；(4)標(biāo)記抗體用生物素分別標(biāo)記步驟⑶中所得到的純化多克隆抗體；(5)試劑盒制備用步驟(3)中所得的純化單克隆抗體包被固相載體，得到用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板。檢測時，按照常規(guī)的酶聯(lián)免疫檢測方法進(jìn)行檢測，將待檢測血清樣品、正常對照品(正常人血清)、陽性血清(慢性阻塞性肺病患者血清)用樣品稀釋液稀釋后，分別與固定在固相載體I的fct抑制因子I的單克隆抗體孔2、腫瘤壞死因子β的單克隆抗體孔3、巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α的單克隆抗體孔4、腫瘤壞死因子超家族成員10的單克隆抗體孔5、血管內(nèi)皮生長因子D受體的單克隆抗體孔6、嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3的單克隆抗體孔7和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18的單克隆抗體孔8中的Wnt抑制因子I的單克隆抗體、腫瘤壞死因子β的單克隆抗體、巨噬細(xì)胞炎性蛋白3 α的單克隆抗體、腫瘤壞死因子超家族成員10的單克隆抗體、血管內(nèi)皮生長因子D受體的單克隆抗體、嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3的單克隆抗體和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18的單克隆抗體接觸和保溫。將生物素標(biāo)記的多克隆抗體與結(jié)合于單克隆抗體上的檢測樣本接觸和保溫。最后用HRP標(biāo)記的鏈霉素親和素特異性的捕捉結(jié)合于檢測抗體上的生物素，并用顯色劑顯色，用終止液終止反應(yīng)，在ELISA檢測儀上，測定各孔的OD值，從而測定結(jié)合于捕捉抗體上的細(xì)胞因子水平。具體的檢測步驟如下I.加樣將待檢測血清樣品、正常對照品(正常人血清)、陽性血清(慢性阻塞性肺病患者血清)用樣品稀釋液稀釋3倍后，分別加入酶聯(lián)免疫檢測板的各反應(yīng)孔中，每個反應(yīng)孔加樣O. 1ml，每種樣品做3個平行實(shí)驗(yàn)，置37°C孵育I小時，棄去孔內(nèi)溶液。蒸餾水稀釋濃縮洗滌液10倍后，每孔加入O. 4ml，洗3次，每次I分鐘。(簡稱洗滌，下同)。樣品稀釋液為O. I克牛血清白蛋白加到100ml pH7. 4磷酸鹽緩沖液中得到，其中，pH7. 4磷酸鹽緩沖液為將O. 2克磷酸二氫鉀、2. 9克十二水合磷酸氫二鈉、8. O克氯化鈉、O. 2克氯化鉀和
O.5ml吐溫-20加到IOOOml蒸餾水中得到。濃縮洗滌液為將O. 2克磷酸二氫鉀、2. 9克十二水合磷酸氫二鈉、8. O克氯化鈉、O. 2克氯化鉀和O. 5ml吐溫-20加到IOOml蒸餾水中得到。[0033]2.加生物素標(biāo)記的多克隆抗體于各反應(yīng)孔中，相應(yīng)加入用樣品稀釋液新鮮稀釋的10μ g/ml濃度的各生物素標(biāo)記的多克隆抗體O. 1ml，于37°C孵育I小時，洗滌。3.加HRP標(biāo)記的鏈霉素親和素于各反應(yīng)孔中加入HRP標(biāo)記的鏈霉素親和素
O.1ml，室溫保持20分鐘。4.加顯色液于各反應(yīng)孔中加入顯色液O. lml，室溫保持20分鐘。所述顯色液為將0.5ml 10mg/5ml的四甲基聯(lián)苯胺的無水乙醇溶液、IOml ρΗ5·0底物緩沖液與32 μ 10. 75vol%過氧化氫水溶液混合得到，其中，ρΗ5. O底物緩沖液為含有O. 2Μ磷酸氫二鈉和O. IM檸檬酸的蒸餾水溶液。5.終止反應(yīng)于各反應(yīng)孔中加入終止液O. 05ml，在ELISA檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值。終止液為將56ml純硫酸緩慢加到IOOOml蒸餾水中得 至IJ。以正常對照品的蛋白表達(dá)水平作為衡量標(biāo)準(zhǔn)，陽性血清的蛋白表達(dá)量除以此標(biāo)準(zhǔn)，從而確定慢性阻塞性肺病病人細(xì)胞因子相對于正常人的表達(dá)比例。將待檢測血清樣品的蛋白表達(dá)量(0D值)除以正常對照品的蛋白表達(dá)量(0D值)，其中大于或等于2.4為增髙，小于2.4為降低。當(dāng)7種細(xì)胞因子均增高時，提示存在慢性阻塞性肺病。實(shí)施例2收集6例正常人血清和6例慢性阻塞性肺病患者血清作為正常組和慢性阻塞性肺病組，采用實(shí)施例I中的試劑盒，按照實(shí)施例I中的檢測步驟進(jìn)行檢測，7種細(xì)胞因子的聯(lián)合表達(dá)改變?nèi)绫鞩所示。表I :7種細(xì)胞因子在慢性阻塞性肺病患者及正常人血清中的表達(dá)變化表
權(quán)利要求1.一種用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板，其特征在于，包括固相載體(1)，所述的固相載體(I)上設(shè)有fct抑制因子I的單克隆抗體孔(2)、腫瘤壞死因子β的單克隆抗體孔(3)、巨噬細(xì)胞炎性蛋白3 α的單克隆抗體孔(4)、腫瘤壞死因子超家族成員10的單克隆抗體孔(5)、血管內(nèi)皮生長因子D受體的單克隆抗體孔(6)、嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3的單克隆抗體孔(7)、糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18的單克隆抗體孔(8)和空白對照孔(26)。
2.如權(quán)利要求I所述的用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板，其特征在于，所述的固相載體(I)為聚苯乙烯酶標(biāo)板。
3.一種用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的試劑盒，其特征在于，包括外盒(9)，外盒(9)內(nèi)設(shè)有盒內(nèi)支架(10)，盒內(nèi)支架(10)上具有主凹槽(11)，主凹槽(11)內(nèi)設(shè)有權(quán)利要求I所述的用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板。
4.如權(quán)利要求3所述的用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的試劑盒，其特征在于，所述的盒內(nèi)支架(10)上位于主凹槽(11)周圍的位置處還設(shè)有副凹槽(12)，所述的副凹槽(12)內(nèi)設(shè)有13個固定孔，生物素標(biāo)記的抗Wnt抑制因子I的多克隆抗體管(13)、生物素標(biāo)記的抗腫瘤壞死因子β的多克隆抗體管(14)、生物素標(biāo)記的抗巨噬細(xì)胞炎性蛋白的多克隆抗體管(15)、生物素標(biāo)記的抗腫瘤壞死因子超家族成員10的多克隆抗體管(16)、生物素標(biāo)記的抗血管內(nèi)皮生長因子D的多克隆抗體管(17)、生物素標(biāo)記的抗嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3的多克隆抗體管(18)、生物素標(biāo)記的抗糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18的多克隆抗體管(19)、HRP標(biāo)記的鏈霉素親和素管(20)、陽性血清管(21)、顯色劑管(22)、終止液管(23)、濃縮洗滌液管(24)和樣品稀釋液管(25)各設(shè)于一個固定孔中。
5.如權(quán)利要求4所述的用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的試劑盒，其特征在于，所述的生物素標(biāo)記的抗Wnt抑制因子I的多克隆抗體管(13)、生物素標(biāo)記的抗腫瘤壞死因子β的多克隆抗體管(14)、生物素標(biāo)記的抗巨噬細(xì)胞炎性蛋白的多克隆抗體管(15)、生物素標(biāo)記的抗腫瘤壞死因子超家族成員10的多克隆抗體管(16)、生物素標(biāo)記的抗血管內(nèi)皮生長因子D的多克隆抗體管(17)、生物素標(biāo)記的抗嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3的多克隆抗體管(18)和生物素標(biāo)記的抗糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18的多克隆抗體管(19)位于用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板的后側(cè)，終止液管(23)、濃縮洗滌液管(24)和樣品稀釋液管(25)位于用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板的左側(cè)，HRP標(biāo)記的鏈霉素親和素管(20)、陽性血清管(21)和顯色劑管(22)位于用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板的右側(cè)。
專利摘要本實(shí)用新型提供了一種用于預(yù)測慢性阻塞性肺病的酶聯(lián)免疫檢測板及試劑盒。所述的酶聯(lián)免疫檢測板，包括固相載體，所述的固相載體上設(shè)有Wnt抑制因子1的單克隆抗體孔、腫瘤壞死因子β的單克隆抗體孔、巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α的單克隆抗體孔、腫瘤壞死因子超家族成員10的單克隆抗體孔、血管內(nèi)皮生長因子D受體的單克隆抗體孔、嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白3的單克隆抗體孔、糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體家族相關(guān)蛋白18的單克隆抗體孔和空白對照孔。本實(shí)用新型利用酶聯(lián)免疫反應(yīng)對這7種COPD相關(guān)的生物標(biāo)志物進(jìn)行并行檢測，利用其聯(lián)合變化對COPD進(jìn)行預(yù)測，操作簡單，節(jié)省人力和時間，提高了工作效率。
文檔編號G01N33/544GK202614768SQ201220251768
公開日2012年12月19日 申請日期2012年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月30日
發(fā)明者白春學(xué), 王向東, 王耀麗, 蔣進(jìn)軍, 宋振舉, 李卡 申請人:復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院