專利名稱：鐵蛋白體外診斷試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
鐵蛋白體外診斷試紙條技術(shù)領(lǐng)域[0001]本實(shí)用新型屬于醫(yī)學(xué)免疫體外診斷領(lǐng)域，具體涉及一種鐵蛋白體外診斷試紙條。
技術(shù)背景[0002]鐵蛋白是一種水溶性鐵貯存蛋白，由蛋白質(zhì)外殼即去鐵蛋白和鐵核心形成的復(fù)合物。正常人血清中含有少量鐵蛋白，一般正常均值男性約80 — 130 μ g/L (80 -130ng/ml) 女性約35 - 55 μ g/L (35-55ng/ml)。當(dāng)人機(jī)體出現(xiàn)疾病時(shí)，血清中的鐵蛋白將會(huì)異常改變。研究表明血清鐵蛋白升高的原因是鐵蛋白的來源增加或存在清除障礙。它可以作為肝癌、肺癌、胰癌、白血病等疾病診斷的標(biāo)志物。[0003]20世紀(jì)70年代已經(jīng)開始對(duì)鐵蛋白進(jìn)行檢測(cè)。目前，鐵蛋白作為標(biāo)志物已經(jīng)用于疾病診斷，主要的診斷方法有膠體金法、酶聯(lián)免疫ELISA、化學(xué)發(fā)光法。中國(guó)專利 CN201348633Y采用免疫層析膠體金技術(shù)，通過肉眼觀察檢測(cè)線的有無來對(duì)鐵蛋白濃度進(jìn)行半定量檢測(cè)，達(dá)不到定量檢測(cè)要求。中國(guó)專利CN201302571Y結(jié)合了 ELISA進(jìn)行檢測(cè)，利用磁力檢測(cè)儀15_25min測(cè)定數(shù)據(jù)，然后根據(jù)預(yù)先測(cè)定并設(shè)定的公式計(jì)算出樣品中鐵蛋白的含量，可實(shí)現(xiàn)鐵蛋白的定量檢測(cè)，但是該試劑盒檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，不利于臨床推廣。發(fā)明內(nèi)容[0004]本實(shí)用新型的目的是提供一種操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、檢測(cè)時(shí)間短且能定量檢測(cè)鐵蛋白體外診斷試紙條。[0005]本實(shí)用新型的技術(shù)方案為一種鐵蛋白體外診斷試紙條由底襯上的包被相互平行的檢測(cè)線和質(zhì)控線的硝酸纖維膜、包被熒光標(biāo)記的鐵蛋白抗體偶聯(lián)物的結(jié)合墊、樣品墊、吸水紙組成，檢測(cè)線上包被鐵蛋白抗體，質(zhì)控線上包被兔抗鼠IgG抗體。[0006]所述的熒光標(biāo)記的鐵蛋白抗體偶聯(lián)物由鐵蛋白、生物素、熒光、鏈霉親和素、膠乳微球組成。[0007]所述的膠乳微球粒徑為100nm-200nm,優(yōu)選192nm。[0008]所述的熒光為異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明、四甲基異硫氰酸羅丹明、熒光素 Cy5、藻紅蛋白中的一種。[0009]所述的鐵蛋白體外診斷試紙條標(biāo)記和包被用的抗體均為抗人血清鐵蛋白抗體，為配對(duì)的單克隆抗體或單抗-多抗。[0010]一種鐵蛋白體外診斷試紙條的制備方法包括如下步驟[0011]I)包被熒光膠乳微球標(biāo)記鐵蛋白抗體結(jié)合墊的制備[0012]a.將熒光素與鏈霉親和素混合得到熒光素標(biāo)記鏈霉親和素，再與膠乳微球結(jié)合得到鏈霉親和素?zé)晒饽z乳微球；[0013]b.將生物素與鐵蛋白抗體結(jié)合，制備得到生物素化鐵蛋白抗體；[0014]c.將步驟a所得的鏈霉親和素?zé)晒饽z乳微球和步驟b所得的生物素化鐵蛋白抗體混合，即得熒光標(biāo)記的鐵蛋白抗體偶聯(lián)物；[0015]d.將步驟c所得的熒光標(biāo)記的鐵蛋白抗體偶聯(lián)物噴涂在結(jié)合墊上。[0016]2)硝酸纖維素膜的制備[0017]用包被緩沖液分別稀釋鐵蛋白抗體和兔抗鼠IgG抗體，并將稀釋后的兩種抗體分別噴于硝酸纖維素膜上，兩種抗體滲入硝酸纖維素膜后分別形成包被鐵蛋白抗體的檢測(cè)線和包被兔抗鼠IgG抗體的質(zhì)控線。[0018]3)在底襯上順次相互搭接地粘貼樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙得到試紙板，按照要求切割成適當(dāng)寬度的試紙條。[0019]本實(shí)用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)[0020]I)本實(shí)用新型通過對(duì)試紙條上熒光信號(hào)的強(qiáng)弱分析，并結(jié)合熒光免疫分析儀的處理分析，可以實(shí)現(xiàn)樣品中鐵蛋白的定量檢測(cè)；[0021]2)本實(shí)用新型可批量生產(chǎn)，適用于臨床快速診斷和現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)間只需 5-8min,易于保存和在基層醫(yī)院的推廣使用。


[0022]圖I為本實(shí)用新型所述的鐵蛋白體外診斷試紙條結(jié)構(gòu)示意圖；[0023]其中，圖I :1、底襯；2、硝酸纖維素膜；3、結(jié)合墊；4、樣品墊；5、吸水紙；6、檢測(cè)線； 7、質(zhì)控線。
具體實(shí)施方式
[0024]
以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例來詳細(xì)說明本實(shí)用新型。[0025]一種鐵蛋白體外診斷試紙條由底襯I上的包被相互平行的檢測(cè)線6和質(zhì)控線7的硝酸纖維膜2、包被熒光標(biāo)記的鐵蛋白抗體偶聯(lián)物的結(jié)合墊3、樣品墊4、吸水紙5組成，檢測(cè)線6上包被鐵蛋白抗體，質(zhì)控線7上包被兔抗鼠IgG抗體。[0026]所述的熒光標(biāo)記的鐵蛋白抗體偶聯(lián)物由鐵蛋白、生物素、熒光、鏈霉親和素、膠乳微球組成。[0027]所述的膠乳微球粒徑為100nm-200nm,優(yōu)選192nm。[0028]所述的熒光標(biāo)記為異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明、四甲基異硫氰酸羅丹明、熒光素Cy5、藻紅蛋白中的一種。[0029]所述的鐵蛋白體外診斷試紙條標(biāo)記和包被用的抗體均為抗人血清鐵蛋白抗體，為配對(duì)的單克隆抗體或單抗-多抗。[0030]一種鐵蛋白體外診斷試紙條的制備方法包括如下步驟[0031]包被熒光標(biāo)記的鐵蛋白抗體偶聯(lián)物的結(jié)合墊3的制備方法如下[0032]I)將熒光素與鏈霉親和素按照4:1 3:1的比例混合得到熒光素標(biāo)記鏈霉親和素，再將其與20 mg/ml的膠乳微球按照4:1 3:1的比例混合得到特殊的熒光膠乳微球；[0033]2)將鐵蛋白抗體用O. I mol/L、pH6. 4磷酸鈉緩沖液稀釋至I mg/ml,交互用O. I mol/L、pH6. 4磷酸鈉緩沖液對(duì)鐵蛋白抗體充分透析；用Iml DMSO溶解Img的NHSB，得到 NHSB溶液；向上述Iml鐵蛋白抗體溶液加入20 μ L NHSB溶液，室溫?cái)嚢?_4 h，繼續(xù)室溫?cái)嚢?0 min，然后用20 mmol/L、pH7. 2 PBS緩沖液透析，即得生物素化鐵蛋白抗體；[0034]3)將熒光膠乳微球和生物素化鐵蛋白抗體混合反應(yīng)30 min后離心，沉淀用pH7. 2體積，得到所述的熒光標(biāo)記的鐵蛋白抗體偶聯(lián)物；[0035]4)將所述的熒光標(biāo)記的鐵蛋白抗體偶聯(lián)物按2. O μ L/cm3的用量噴在玻璃纖維素膜上得到結(jié)合墊3。[0036]硝酸纖維素膜2的制備[0037]I)鐵蛋白抗體檢測(cè)線6的制備將鐵蛋白抗體按2 mg/ml的濃度，蠕動(dòng)泵授液量O.4 ml/min,劃線速度50 m/20min,在干燥箱內(nèi)20。(!'鼓風(fēng)干燥12 h ；[0038]2)質(zhì)控線7的制備將兔抗鼠IgG抗體按8 mg/ml的濃度，蠕動(dòng)泵授液量O. 4 ml/ min,劃線速度50 m/20min,在硝酸纖維素膜2上劃線，該線與檢測(cè)線平行，放入干燥箱內(nèi)20 °〇鼓風(fēng)干燥12 h ；[0039]3)用將含1%BSA、1%蔗糖、O. 025 mol/L、pH7. 5的PBS封閉液將含有檢測(cè)線6和質(zhì)控線7的硝酸纖維素膜2于37 °C封閉60 min，取出后置37 °C下烘干處理2 h，封袋備用。[0040]試紙條組裝在底襯I上順次相互搭接地粘貼樣品墊4、結(jié)合墊3、硝酸纖維素膜2、吸水紙5，按照要求切割成適當(dāng)寬度的試紙條。[0041]檢測(cè)方法為將被檢測(cè)血清、全血滴加80-100 μ L于樣品墊4上，進(jìn)行免疫反應(yīng)， 時(shí)間5-8 min ;反應(yīng)結(jié)束后，將試紙條放于專門的熒光信號(hào)讀取儀器(熒光免疫分析儀)中， 讀取熒光信號(hào)的大小，進(jìn)行定量測(cè)定，讀出血清鐵蛋白的含量。
權(quán)利要求1.一種鐵蛋白體外診斷試紙條，其特征在于由底襯(I)上包被相互平行的檢測(cè)線(6)和質(zhì)控線(7)的硝酸纖維膜(2)、包被熒光標(biāo)記的鐵蛋白抗體偶聯(lián)物的結(jié)合墊(3)、樣品墊(4 )、吸水紙(5 )組成，檢測(cè)線(6 )上包被鐵蛋白抗體，質(zhì)控線(7 )上包被兔抗鼠I gG抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述鐵蛋白體外診斷試紙條，其特征在于所述的包被熒光標(biāo)記的鐵蛋白抗體偶聯(lián)物的結(jié)合墊(3)的熒光為異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明、四甲基異硫氰酸羅丹明、熒光素Cy5、藻紅蛋白中的一種。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種鐵蛋白體外診斷試紙條，屬于醫(yī)學(xué)免疫體外診斷領(lǐng)域。該診斷試紙條由底襯上包被相互平行的檢測(cè)線和質(zhì)控線的硝酸纖維膜、包被熒光標(biāo)記的鐵蛋白抗體偶聯(lián)物的結(jié)合墊、樣品墊、吸水紙組成，檢測(cè)線上包被鐵蛋白抗體，質(zhì)控線上包被兔抗鼠IgG抗體。本實(shí)用新型實(shí)現(xiàn)了定量檢測(cè)，同時(shí)操作方便、檢測(cè)速度快。
文檔編號(hào)G01N33/68GK202814987SQ20122042032
公開日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月23日
發(fā)明者蘇恩本, 顏彬, 黃力, 陳偉, 沈小娟 申請(qǐng)人:南京基蛋生物科技有限公司