專利名稱：一種中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白全血檢測(cè)裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型屬于免疫檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白全血檢測(cè)裝置。
背景技術(shù)：
中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(neutrophil gelatinase associatedlipocalin，NGAL),又稱人脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2 (Iipocalin 2，LCN2)或噬鐵蛋白(siderocalin),是人脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族中的一個(gè)新成員。NGAL是Kjeldsen等在1993年研究中性粒細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)的一種特殊顆粒組份，與明膠酶B即基質(zhì)金屬蛋白酶9 (matrixmetalloproteinase-9,MMP_9)密切相關(guān)。NGAL是一種小分子蛋白，其可表達(dá)于中性粒細(xì)胞和某些上皮細(xì)胞，如腎小管上皮細(xì)胞中。在多種原因引起的腎損傷中，NGAL可顯著升高，釋放于尿液和血液中。NGAL在損傷2小時(shí)內(nèi)即可迅速升高，因而，NGAL可作為一種高靈敏度的急性腎損傷早期診斷標(biāo)志物。在正常生理情況下，NGAL含量較低，能刺激腎祖細(xì)胞向腎小管上皮細(xì)胞分化，以保障腎臟正常的生長(zhǎng)發(fā)育。當(dāng)腎缺血或毒素急性腎小管損傷時(shí)，在開始的兩個(gè)小時(shí)內(nèi)，受損的腎小管上皮細(xì)胞能高表達(dá)NGAL，從而誘導(dǎo)腎小管間質(zhì)中浸潤(rùn)的中性粒細(xì)胞發(fā)生凋亡，以保護(hù)腎組織免受攻擊；另一方面高水平的NGAL能促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞再生修復(fù)，使腎臟功能得以恢復(fù)。據(jù)丹麥Bioporto公司研究，健康志愿者EDTA血漿中NGAL濃度分布在37 - 106ng/ml,平均值為63ng/ml,尿液中濃度分布在O. 7-9. 8ng/ml,平均值為5. 3ng/ml。而IQJ病房中急性腎損傷(acute kidney injury, AKI)患者NGAL濃度在血清中為66_922ng/ml,尿液中為 110-40，000ng/ml。2005年，丹麥BioPorto公司首先推出ELISA商品檢測(cè)試劑盒，可用于血清(漿)、尿液中NGAL檢測(cè)。此外，美國(guó)R&D Systems公司也研發(fā)出ELSIA檢測(cè)試劑盒，美國(guó)博適公司Triage分析儀也可對(duì)EDTA抗凝血漿或全血(雙抗體夾心免疫熒光層析法)中的NGAL進(jìn)行檢測(cè)。目前已有適用于全自動(dòng)免疫分析儀的分析系統(tǒng)面世，如美國(guó)雅培公司的Architecti2000SR/i 1000SR全自動(dòng)免疫分析儀可測(cè)定尿液NGAL (化學(xué)發(fā)光免疫法)。但其中的ELISA存在著操作繁瑣，檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)等缺點(diǎn)；全自動(dòng)分析儀價(jià)格昂貴，不適合檢測(cè)少量標(biāo)本使用。相比之下，床旁檢測(cè)(point care of testing,P0CT)可方便快速地提供可靠檢驗(yàn)結(jié)果，有助于臨床醫(yī)師更早制訂治療策略，并節(jié)省治療費(fèi)用。POCT中的膠體金免疫層析檢測(cè)法具有檢測(cè)迅速、操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和成本低等特點(diǎn)，且不需要低溫保存，適合于檢測(cè)NGAL。在使用金標(biāo)免疫層析法快速檢測(cè)NGAL時(shí)，通常需要采用全血作為檢測(cè)樣本，血清或血漿樣本因制備需要靜置一段時(shí)間或者需離心而使獲得檢測(cè)結(jié)果的時(shí)間延長(zhǎng)，故往往不適于作為快速檢測(cè)的標(biāo)本。然而，由于全血樣本用于免疫層析檢測(cè)時(shí)容易出現(xiàn)紅細(xì)胞過濾不完全或者溶血現(xiàn)象，導(dǎo)致紅細(xì)胞以及紅細(xì)胞釋放的血紅蛋白與分析物一起層析至檢測(cè)區(qū)，使檢測(cè)窗口的背景顏色增加，故而會(huì)對(duì)檢測(cè)線的定性、半定量及定量檢測(cè)產(chǎn)生干擾。因此，提供一種可充分過濾紅細(xì)胞并解決溶血干擾問題的NGAL全血免疫層析裝置對(duì)NGAL臨床快速檢測(cè)有著重要意義。
發(fā)明內(nèi)容針對(duì)現(xiàn)有膠體金全血檢測(cè)技術(shù)的不足，本實(shí)用新型提供一種中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)全血膠體金免疫層析檢測(cè)裝置，其具有抗干擾能力強(qiáng)、簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)。本實(shí)用新型可通過以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)一種中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白全血檢測(cè)裝置，由上下扣合的殼體和置于其間的試紙條組成，其特征在于所述上殼體設(shè)有加樣孔和觀察窗；所述下殼體設(shè)有固定試紙條的卡槽；所述試紙條包括在底板上相互搭接的樣品墊、包含血紅蛋白抗體包被微球的血紅蛋白吸附墊、金標(biāo)墊、檢測(cè)墊和吸水墊；所述血紅蛋白吸附墊被樣品墊完全覆蓋；所述血紅蛋白抗體包被微球填充于所述血紅蛋白吸附墊內(nèi)。所述樣品墊右端與血紅蛋白吸附墊右端上下對(duì)齊，保證樣本沿垂直方向順利快速通過血紅蛋白吸附墊。所述樣品墊主要由選自聚酯膜、玻璃纖維素膜、纖維素濾紙和無(wú)紡布中的一種或多種材料制成。在一些實(shí)施例中，所述樣品塾還可吸附有血液抗凝劑。所述血紅蛋白抗體包被的微球選自膠體金、膠體碳、膠體硒、磁微粒及聚苯乙烯微球中的一種或多種，優(yōu)選聚苯乙烯微球。所述血紅蛋白抗體與微球之間的連接可通過物理吸附或化學(xué)偶聯(lián)方式進(jìn)行，優(yōu)選化學(xué)偶聯(lián)方式。所述血紅蛋白吸附墊還包括f 3層位于血紅蛋白吸附墊底部的保護(hù)膜，所述保護(hù)膜的孔徑小于所述微球的直徑，保護(hù)膜的作用主要是固定微球，防止微球進(jìn)入血紅蛋白吸附墊以外的區(qū)域。所述保護(hù)膜主要由選自聚酯膜、玻璃纖維素膜、纖維素濾紙和無(wú)紡布中的一種或多種材料制成。所述金標(biāo)墊可由玻璃纖維素膜或聚酯膜組成，其上涂覆有膠體金標(biāo)記的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白單克隆抗體。所述檢測(cè)墊可由硝酸纖維素膜、聚偏氟乙烯膜或醋酸纖維素膜構(gòu)成，所述檢測(cè)墊的近金標(biāo)墊一側(cè)和近吸水墊一側(cè)分別設(shè)置有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述檢測(cè)線包被有中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白捕獲單克隆抗體或多克隆抗體，所述質(zhì)控線包被有羊抗鼠IgG多克隆抗體。所述吸水墊可用纖維素、玻璃纖維、多孔聚乙烯或多孔聚丙烯等材料制成。所述上殼體上還可包含一個(gè)信息槽，所述信息槽可用于存放信息卡，信息卡上可記載患者編號(hào)、檢測(cè)結(jié)果和日期等信息，檢測(cè)后可將其單獨(dú)取出作為患者資料保存。所述上下殼體材料由不吸水的塑料制成，包括人工合成或自然界有機(jī)材料，如聚苯乙烯、聚乙烯、聚氯乙烯、聚酯或纖維素及其衍生物等，或使用一種塑料材料或使用幾種塑料材料在物理上的疊加或相加后的復(fù)合。本實(shí)用新型的檢測(cè)原理具體為將全血樣本滴加于加樣孔中，樣品墊可起過濾血液中紅細(xì)胞的作用，過濾后的血液流入血紅蛋白吸附墊,血紅蛋白吸附墊可進(jìn)一步過濾血液并吸附血液中可能因紅細(xì)胞破裂而產(chǎn)生的血紅蛋白，血液繼續(xù)層析至金標(biāo)墊與膠體金標(biāo)記的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白單克隆抗體特異性結(jié)合，最后到達(dá)檢測(cè)墊與相應(yīng)的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白捕獲單克隆抗體或多克隆抗體結(jié)合。通過檢測(cè)墊處形成的膠體金-抗體-NGAL-抗體復(fù)合物與樣本中NGAL濃度成正比實(shí)現(xiàn)對(duì)NGAL的定性、半定量或定量檢測(cè)。本實(shí)用新型的有益效果主要體現(xiàn)在:1、可消除全血檢測(cè)發(fā)生溶血現(xiàn)象時(shí)對(duì)NGAL檢測(cè)結(jié)果造成的影響，血紅蛋白吸附墊可吸附因紅細(xì)胞破裂產(chǎn)生的血紅蛋白，避免其展層至檢測(cè)墊，增加背景顏色，影響檢驗(yàn)人員對(duì)檢測(cè)條帶的顏色判斷以及儀器對(duì)檢測(cè)條帶的信號(hào)掃描。2、具有分離效果穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)單，樣本用量少和檢測(cè)迅速等優(yōu)點(diǎn)。

圖1為本實(shí)用新型的上殼體結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本實(shí)用新型的下殼體結(jié)構(gòu)示意圖；圖3為本實(shí)用新型的試紙條結(jié)構(gòu)示意圖；圖4為本實(shí)用新型的檢測(cè)顯色示意圖。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)描述:實(shí)施例1中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)全血檢測(cè)裝置的結(jié)構(gòu)參見圖1、圖2和圖3所不，中性粒細(xì)胞明I父酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)全血檢測(cè)裝置由上殼體(I)、下殼體(2)和試紙條(3)組成，上殼體(I)和下殼體(2)可緊密扣合，其中上殼體(I)設(shè)置有加樣孔(4)、觀察窗(5)和信息槽(6)，加樣孔(4)為橢圓形漏斗狀，對(duì)應(yīng)于試紙條(3)的樣品墊(7)，有向下傾斜的斜面，可防止血液的溢出；觀察窗(5)對(duì)應(yīng)于試紙條(3)的檢測(cè)墊(8);信息槽(6)鑲嵌有患者信息卡，上面有患者編號(hào)、結(jié)果及日期等信息，患者信息卡可單獨(dú)取出作為患者資料保存。下殼體(2)中設(shè)置有與試紙條(3)形狀大小匹配的卡槽(9)，便于固定試紙條(3)。上述上殼體(I)和下殼體(2)由防水PVC材料制成。試紙條(3)包括自左向右依次搭接粘貼在底板(10)上的樣品墊(7)、血紅蛋白吸附墊(11)、金標(biāo)墊(12)、檢測(cè)墊(8)和吸水墊(13)。其中，底板(10)由PVC板構(gòu)成；樣品墊(7)由玻璃纖維素膜組成，樣品墊上吸附有血液抗凝劑；血紅蛋白吸附墊(11)位于樣品墊
(7)下面，被樣品墊(7)完全覆蓋，且其右端與樣品墊(7)右端對(duì)齊，所述血紅蛋白吸附墊
(11)包含填充于吸附墊內(nèi)的血紅蛋白抗體包被的微球，在血紅蛋白吸附墊(11)的最下面有一層孔徑小于微球直徑的保護(hù)膜；金標(biāo)墊(12)由聚酯膜組成，上面涂覆有膠體金標(biāo)記的NGAL單克隆抗體，所述金標(biāo)墊(12)的左側(cè)與血紅蛋白吸附墊(11)的右側(cè)搭接粘貼，兩區(qū)域重疊長(zhǎng)度為Imm ;檢測(cè)墊(8)由硝酸纖維膜構(gòu)成，檢測(cè)墊近金標(biāo)墊(12)—側(cè)和近吸水墊(13)一側(cè)分別設(shè)有一條檢測(cè)線和一條質(zhì)控線，所述檢測(cè)線包被有NGAL多克隆抗體，所述質(zhì)控線包被有羊抗鼠IgG多克隆抗體；吸水墊(13)由纖維素濾紙組成，其左側(cè)與檢測(cè)墊(8)的右側(cè)相互搭接粘結(jié)。實(shí)施例2中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)全血檢測(cè)裝置的使用方法將待檢全血樣本120μ I直接加入加樣孔處，血液經(jīng)虹吸作用沿樣品墊、血紅蛋白吸附墊，金標(biāo)墊、檢測(cè)墊向吸水墊方向移動(dòng)，15分鐘內(nèi)讀取檢測(cè)結(jié)果(見圖4)。定性檢測(cè)陽(yáng)性T線和C線處各出現(xiàn)一條紫紅色條帶；陰性僅在C線處出現(xiàn)一條紫紅色條帶；無(wú)效無(wú)論樣本中含或不含NGAL，金標(biāo)墊處的膠體金標(biāo)記的單克隆抗體都會(huì)上行至檢測(cè)墊與C線處的羊抗鼠IgG多克隆抗體結(jié)合，在C線處出現(xiàn)一條紫紅色條帶，如不出現(xiàn)，則結(jié)果無(wú)效，需重新檢測(cè)。定量檢測(cè)將檢測(cè)裝置置于膠體金定量檢測(cè)儀中，儀器通過對(duì)檢測(cè)區(qū)進(jìn)行掃描，收集T線、C線信號(hào)強(qiáng)度，最終轉(zhuǎn)換、計(jì)算出樣本中NGAL的濃度，實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。最后應(yīng)說明的是以上所述僅為本實(shí)用新型的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本實(shí)用新型，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本實(shí)用新型的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求1.一種中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白全血檢測(cè)裝置，由上下扣合的殼體和置于其間的試紙條組成，其特征在于:所述上殼體設(shè)有加樣孔和觀察窗；所述下殼體設(shè)有固定試紙條的卡槽；所述試紙條包括在底板上相互搭接的樣品墊、包含血紅蛋白抗體包被微球的血紅蛋白吸附墊、金標(biāo)墊、檢測(cè)墊和吸水墊；所述血紅蛋白吸附墊被樣品墊完全覆蓋；所述血紅蛋白抗體包被微球填充于所述血紅蛋白吸附墊內(nèi)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白全血檢測(cè)裝置，其特征在于，所述樣品墊右端與血紅蛋白吸附墊右端上下對(duì)齊。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白全血檢測(cè)裝置，其特征在于，所述血紅蛋白抗體包被的微球選自膠體金、膠體碳、膠體硒、磁微粒及聚苯乙烯微球中的一種或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白全血檢測(cè)裝置，其特征在于，所述血紅蛋白吸附墊還包括I 3層位于血紅蛋白吸附墊底部的保護(hù)膜。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白全血檢測(cè)裝置，其特征在于，所述保護(hù)膜的孔徑小于所述微球的直徑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白全血檢測(cè)裝置，其特征在于，所述金標(biāo)墊涂覆有膠體金標(biāo)記的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白單克隆抗體，所述檢測(cè)墊的近金標(biāo)墊一側(cè)和近吸水墊一側(cè)分別設(shè)置有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述檢測(cè)線包被有中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白捕獲單克隆抗體或多克隆抗體，所述質(zhì)控線包被有羊抗鼠IgG多克隆抗體 。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白全血檢測(cè)裝置，由上下扣合的殼體和置于其間的試紙條組成，所述上殼體設(shè)有加樣孔和觀察窗；所述下殼體設(shè)有固定試紙條的卡槽；所述試紙條包括在底板上相互搭接的樣品墊、包含血紅蛋白抗體包被微球的血紅蛋白吸附墊、金標(biāo)墊、檢測(cè)墊和吸水墊；所述血紅蛋白吸附墊被樣品墊完全覆蓋；所述血紅蛋白抗體包被微球填充于所述血紅蛋白吸附墊內(nèi)。本實(shí)用新型可消除全血檢測(cè)中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白發(fā)生溶血現(xiàn)象時(shí)對(duì)結(jié)果造成的干擾，有利于醫(yī)生對(duì)患者病情的準(zhǔn)確判斷。
文檔編號(hào)G01N33/68GK202916284SQ201220592290
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月12日
發(fā)明者何仕釗 申請(qǐng)人:南京諾爾曼生物技術(shù)有限公司