專利名稱：一種測量糖化血紅蛋白的試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及血液檢測試劑盒，更具體地講，涉及離體血液中糖化血紅蛋白的檢測試劑盒。
背景技術：
目前臨床上常用的糖化血紅蛋白檢測方法有:高效液相色譜、免疫法、酶法、離子交換層析、化學發(fā)光法等。高效液相色譜、離子交換層析需要使用大型儀器，且儀器價格昂貴；免疫法需要使用大量抗體，且需要使用大型儀器才能進行檢測，如生化分析儀等；酶法需要使用多種酶配合進行反應才能得到最終結果，最終結果也需要大型儀器檢測。以上各種方法均需要分別檢測總血紅蛋白和糖化血紅蛋白兩個指標后，通過計算糖化血紅蛋白占總血紅蛋白的百分比才能得到最終結果，兩次檢測帶來的直接后果就是檢測結果準確性不高，且現有技術操作復雜，必須有專業(yè)人士操作才能進行。另外，現有技術使用的儀器價格昂貴且體積龐大。磁微粒分離酶聯免疫檢測技術是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技術與酶聯免疫檢測技術 相結合而建立的一種新型免疫檢測方法。傳統(tǒng)ELISA方法，抗原、抗體的結合反應是在固相(ELISA板反應孔)表面進行的，而磁微粒分離酶聯免疫檢測方法，抗原、抗體的結合反應也是在近似液相的條件下進行，因而反應快速、徹底，與傳統(tǒng)ELISA相比具有靈敏度高、檢測用時少的優(yōu)點。中國專利申請:糖化血紅蛋白定量測定試劑盒及其檢測方法(申請?zhí)?201110257757.5)即是利用了傳統(tǒng)的磁微粒分離酶聯免疫檢測技術，磁性粒子標記抗糖化血紅蛋白抗體，測量糖化血紅蛋白總量，而糖化血紅蛋白總量在臨床上并沒有意義，臨床上需要的是糖化血紅蛋白與總血紅蛋白的比值。

實用新型內容本實用新型所要解決的技術問題是，提供一種操作簡單、只需一個動作即可檢測出糖化血紅蛋白百分含量的試劑盒。為了解決上述技術問題，本實用新型提供了測量糖化血紅蛋白的試劑盒，其特征在于，包括盒體、試劑瓶、瓶墊、合頁和盒蓋，盒體通過合頁與盒蓋連接，所述試劑瓶為至少四個。作為一個優(yōu)選方案，所述試劑瓶為四個，分別放置磁性粒子懸液，紅細胞裂解液，沖洗液和信號，所述磁性粒子懸液吸附血紅蛋白，所述紅細胞裂解液為純水或者表面活性劑溶液，所述沖洗液是磷酸鹽緩沖液，所述信號為經過熒光標記的可特異性識別糖化血紅蛋白的物質，所述熒光標記的標記物是羅丹明B、硒化鎘量子點、鑭配合物中的一種，所述可特異性識別糖化血紅蛋白的物質是指抗糖化血紅蛋白抗體或者間氨基苯硼酸中的一種或兩種。作為又一個優(yōu)選方案，所述試劑瓶為六個或七個，分別放置磁性粒子懸液，紅細胞裂解液，沖洗液、信號、底物和終止液，所述磁性粒子懸液吸附血紅蛋白，所述紅細胞裂解液為純水或者表面活性劑溶液，所述信號為經過酶標記的可特異性識別糖化血紅蛋白的物質，所述底物為特異的針對信號的放大系統(tǒng)，根據酶標的不同可以有不止一樣底物，所述酶標記的標記物是辣根過氧化物酶或者堿性磷酸酶中的一種，當標記物是辣根過氧化物酶時，底物為過氧化氫溶液和四甲基聯苯胺溶液，終止液為硫酸溶液，當標記物是堿性磷酸酶時，底物為對硝基苯磷酸鹽溶液，終止液為碳酸鈉溶液，所述可特異性識別糖化血紅蛋白的物質是指抗糖化血紅蛋白抗體或者間氨基苯硼酸中的一種或兩種。所述磁性粒子表面為高分子聚合物，通過靜電吸附血紅蛋白，所述高分子聚合物指聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚乙烯基甲苯、纖維素、瓊脂糖中的一種；或者磁性粒子表面為官能團，磁性粒子預先包被抗血紅蛋白抗體之后再加入樣本中，通過抗血紅蛋白抗體捕獲血紅蛋白，所述官能團指羧基、巰基、環(huán)氧基、氨基或者醛基中的一種。包被有抗血紅蛋白抗體的磁珠只能捕獲血紅蛋白，包括糖化血紅蛋白與非糖化血紅蛋白總量；而不包被的磁珠能捕獲樣本中的所有蛋白包括血紅蛋白和樣本中其他蛋白，其他蛋白含量較少。所以，不管包被與否的磁性粒子，只要能捕獲血紅蛋白均能實現本實用新型目的，但是包被后的靈敏度與抗干擾性要比不包被的好，這樣準確度也會提高。磁珠在本實用新型中是以懸浮液的形式存在，只要加入固定體積固定濃度磁珠懸浮液就可以保證加入的磁珠量是固定的。試劑盒中所使用的磁性粒子懸液，紅細胞裂解液，沖洗液、信號、底物和終止液均是市售常規(guī)材料。本實用新型的優(yōu)點在于，本實用新型可以稱為“一步法”，基于這樣一個全新的思路，由于樣本中游離的糖化血紅蛋白和非糖化血紅蛋白的比例是固定的，這樣載體與樣本反應時就能夠將樣本中的糖化血紅蛋白和非糖化血紅蛋白按比例捕獲到載體表面。本實用新型使用能夠定量捕捉樣本中的糖化血紅蛋白和非糖化血紅蛋白的磁性顆粒，只需要檢測磁性顆粒上糖化血紅蛋白的含量，再與標準工作曲線做對照就能計算出樣本中糖化血紅蛋白占總血紅蛋白的百分比。操作簡單只需一個動作即可完成糖化血紅蛋白百分含量的定量檢測。本實用新型可以不需使用抗體等生物原料，價格低廉，容易實現檢測儀器小型化。


圖1為本實用新型試劑盒的連接圖。
具體實施方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本實用新型。下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。應理解，這些實施例僅用于說明本實用新型而不用于限制本實用新型的范圍。實施例1.[0015]試劑盒組成:如圖1所示,試劑盒包括盒體、試劑瓶、瓶墊、合頁和盒蓋,盒體通過合頁與盒蓋連接，試劑瓶的個數根據信號選擇的不同可以有4-7個，分別放置包被有抗血紅蛋白抗體的磁珠懸液、紅細胞裂解液、沖洗液、酶標抗體(抗糖化血紅蛋白抗體與辣根過氧化物酶的偶聯物溶液)、底物A (過氧化氫溶液)、底物B (四甲基聯苯胺溶液)、終止液(硫酸溶液)。試劑盒中所使用的磁性粒子懸液，紅細胞裂解液，沖洗液、信號、底物和終止液均是市售常規(guī)材料。試劑盒使用步驟:a、全血樣本的裂解:將IOOul壓積紅細胞加入IOml裂解液中裂解以釋放出紅細胞中的血紅蛋白。b、磁珠與樣本反應:將IOul裂解后的樣本加入到IOul包被有抗血紅蛋白抗體的磁珠懸液中，混合均勻后溫37攝氏度溫育2分鐘后，用配套沖洗液沖洗。C、加入酶標抗體:將IOul酶標抗體溶液加入到吸附有血紅蛋白的磁珠重懸液中。溫育2分鐘。用配套沖洗液沖洗后。d、加入50ul底物A、50ul底物B為溫育2分鐘后加入50ul終止液終止反應。e、完成反應后,放入酶標儀進行讀數。實施例2.[0019]試劑盒組成:試劑盒包括盒體、試劑瓶、瓶墊、合頁和盒蓋，盒體通過合頁與盒蓋連接，試劑盒為四個，分別放置包被有抗血紅蛋白抗體的磁珠懸液、紅細胞裂解液、沖洗液和信號溶液(羅丹明與抗糖化血紅蛋白抗體的偶聯物溶液)。試劑盒使用步驟:a、全血樣本的裂解:將IOOul壓積紅細胞加入IOml裂解液中裂解以釋放出紅細胞中的血紅蛋白。b、磁珠與樣本反應:將IOul裂解后的樣本加入到IOul包被有抗血紅蛋白抗體的磁珠懸液中，混合均勻后溫37攝氏度溫育2分鐘后，用配套沖洗液沖洗。C、加入信號溶液:將IOul信號溶液加入到吸附有血紅蛋白的磁珠重懸液中。溫育2分鐘。用配套沖洗液沖洗后重懸至原體積。e、完成反應后，放入熒光儀進行讀數。實施例3試劑盒組成:試劑盒包括盒體、試劑瓶、瓶墊、合頁和盒蓋，盒體通過合頁與盒蓋連接，試劑盒為四個，分別放置磁珠懸液(表面為聚苯乙烯的磁珠)、紅細胞裂解液、沖洗液、信號溶液(羅丹明與抗糖化血紅蛋白抗體的偶聯物溶液)。試劑盒使用步驟:a、全血樣本的裂解:將IOOul壓積紅細胞加入IOml裂解液中裂解以釋放出紅細胞中的血紅蛋白。b、磁珠與樣本反應:將IOul裂解后的樣本加入到IOul磁珠懸液中，混合均勻后溫37攝氏度溫育2分鐘后，用配套沖洗液沖洗。C、加入信號溶液:將IOul信號溶液加入到吸附有血 紅蛋白的磁珠重懸液中。溫育2分鐘。用配套沖洗液沖洗后重懸至原體積。d、完成反應后，放入熒光儀進行讀數。實施例4試劑盒組成:試劑盒包括盒體、試劑瓶、瓶墊、合頁和盒蓋，盒體通過合頁與盒蓋連接，試劑盒為四個，分別放置磁珠懸液(表面為聚苯乙烯的磁珠)、紅細胞裂解液、沖洗液、信號溶液(羅丹明與氨基苯硼酸的偶聯物溶液)。試劑盒使用步驟:a、全血樣本的裂解:將IOOul壓積紅細胞加入IOml裂解液中裂解以釋放出紅細胞中的血紅蛋白。b、磁珠與樣本反應:將IOul裂解后的樣本加入到IOul磁珠懸液中，混合均勻后溫37攝氏度溫育2分鐘后，用配套沖洗液沖洗。C、加入信號溶液:將IOul信號溶液加入到吸附有血紅蛋白的磁珠重懸液中。溫育2分鐘。用配套沖洗液沖洗后重懸至原體積。d、完成反應后，放入熒光儀進行讀數。實施例5試劑盒組成:試劑盒包括盒體、試劑瓶、瓶墊、合頁和盒蓋，盒體通過合頁與盒蓋連接，試劑盒為七個，分別放置磁珠懸液(表面為聚苯乙烯的磁珠)、紅細胞裂解液、沖洗液、信號溶液(辣根過氧化物酶與氨基苯硼酸的偶聯物溶液)、底物A (過氧化氫溶液)、底物B (四甲基聯苯胺溶液)、終止液(硫酸溶液)。[0029]試劑盒使用步驟:a、全血樣本的裂解:將IOOul壓積紅細胞加入IOml裂解液中裂解以釋放出紅細胞中的血紅蛋白。b、磁珠與樣本反應:將IOul裂解后的樣本加入到IOul磁珠懸液中，混合均勻后溫37攝氏度溫育2分鐘后，用配套沖洗液沖洗。C、加入信號溶液:將IOul信號溶液加入到吸附有血紅蛋白的磁珠重懸液中。溫育2分鐘。用配套沖洗液沖洗后重懸至原體積。C、加入信號溶液:將IOul信號溶液加入到吸附有血紅蛋白的磁珠重懸液中。溫育2分鐘。用配套沖洗液沖洗后。d、加入50ul底物A、50ul底物B為溫育2分鐘后加入50ul終止液終止反應。e、完成反應后,放入酶標儀進行讀數。以上所述僅是本實用新型的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員，在不脫離本實用新型原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本實用 新型的保護范圍。
權利要求1.一種測量糖化血紅蛋白的試劑盒，其特征在于，包括盒體、試劑瓶、瓶墊、合頁和盒蓋，盒體通過合頁與盒蓋連接，所述試劑瓶分別放置磁性粒子懸液，紅細胞裂解液和沖洗液。
2.根據權利要求1所述的一種測量糖化血紅蛋白的試劑盒，其特征在于，所述紅細胞裂解液為純水或者表面·活性劑溶液，所述沖洗液是磷酸鹽緩沖液。
專利摘要本實用新型公開了一種測量糖化血紅蛋白的試劑盒，包括盒體、試劑瓶、瓶墊、合頁和盒蓋，盒體通過合頁與盒蓋連接，試劑瓶為至少四個，分別放置磁性粒子懸液，紅細胞裂解液，沖洗液和信號。本實用新型使用能夠定量捕捉樣本中的糖化血紅蛋白和非糖化血紅蛋白的磁性顆粒，只需要檢測磁性顆粒上糖化血紅蛋白的含量，再與標準工作曲線做對照就能計算出樣本中糖化血紅蛋白占總血紅蛋白的百分比。本實用新型操作簡單只需一個動作即可完成糖化血紅蛋白百分含量的定量檢測。本實用新型可以不需使用抗體等生物原料，價格低廉，容易實現檢測儀器小型化。
文檔編號G01N33/72GK203101404SQ20122064344
公開日2013年7月31日 申請日期2012年11月29日 優(yōu)先權日2012年11月29日
發(fā)明者江應玲, 肖江群, 王保丹, 鐘乾興, 曹大燁, 汪大明 申請人:英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司