川崎病的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了用于診斷和治療川崎病的組合物和方法。更具體地，KD患者的蛋白質(zhì)組富集安眠蛋白A、細(xì)絲蛋白B和細(xì)絲蛋白C，所述蛋白用作KD的生物標(biāo)志物(和潛在的治療靶點(diǎn))。因此，使用本發(fā)明中提供的組合物和方法檢測這些生物標(biāo)志物可為遞送至受試者的療法提供信息。
【專利說明】111崎病的診斷標(biāo)志物和治療朝點(diǎn)
[0001]聯(lián)邦政府資助
[0002]本發(fā)明是部分地在由國衛(wèi)衛(wèi)生研究院授予的項(xiàng)目號U01HL068285、RR02172、U01HL068270、U01HL068269、U01HL068292、U01HL068290、U01HL068288、U01HL068281 和U01HL068279下利用聯(lián)邦政府資助進(jìn)行的。美國聯(lián)邦政府具有本發(fā)明的某些權(quán)利。
[0003]相關(guān)申請的交叉參考[0004]本申請在35U.S.C.§ 119(e)下要求2011年4月15日提交的美國臨時申請?zhí)?1/475，936和2011年12月22日提交的美國臨時申請?zhí)?1/579，007的利益，將所述美國臨時申請的每一個的內(nèi)容通過引用整體并入本文。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0005]本發(fā)明提供了與川崎病(KD)相關(guān)的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。更具體地，KD患者的蛋白質(zhì)組富集安眠蛋白A(meprin A)、細(xì)絲蛋白B和細(xì)絲蛋白C,所述蛋白用作KD的生物標(biāo)志。因此，使用本文中提供的組合物和方法檢測這些生物標(biāo)志物可為遞送至受試者的療法提供fe息。
【背景技術(shù)】
[0006]川崎病(KD)是病因?qū)W未知的系統(tǒng)性脈管炎。雖然川崎病是發(fā)達(dá)國家獲得性小兒心臟病的最常見病因，并且仍然是主要醫(yī)學(xué)問題，因?yàn)槠潴w征和癥狀模擬許多其它兒童熱性疾病。決定性診斷標(biāo)志物的不存在限制了懷疑的KD的臨床評價的準(zhǔn)確性，從而發(fā)病率顯著增加。反過來，其分子發(fā)病機(jī)制的不完全理解阻礙了需要用來改善療法的合理靶點(diǎn)的鑒定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本實(shí)施方案提供了用于診斷和治療KD的標(biāo)志物。KD患者但非具有模擬病況的患者的尿蛋白質(zhì)組富集細(xì)胞損傷蛋白，例如細(xì)絲蛋白和踝蛋白、免疫調(diào)節(jié)劑例如補(bǔ)體調(diào)節(jié)劑CSMD3、免疫模式識別受體muclin和免疫細(xì)胞因子蛋白酶安眠蛋白A。在KD患者的血清和尿中均檢測到細(xì)絲蛋白C、細(xì)絲蛋白B和安眠蛋白A的顯著升高。安眠蛋白A、細(xì)絲蛋白B和細(xì)絲蛋白C相較于目前在盲法病例-對照研究(blinded case-control study)中使用的疾病標(biāo)志物顯示優(yōu)良的診斷性能。值得注意地，安眠蛋白A富集在KD的小鼠模型的冠狀動脈損傷中。總而言之，尿蛋白組特征譜顯示KD的新型分子標(biāo)志物，包括細(xì)絲蛋白C、細(xì)絲蛋白B和安眠蛋白A。
[0008]因此，本發(fā)明的一個方面提供了至少一種對于有此需要的受試者的KD的診斷和監(jiān)控是特異性的生物標(biāo)志物。
[0009]該方面的一個實(shí)施方案，提供了尿和血清生物標(biāo)志物細(xì)絲蛋白C，其在KD患者中
顯著升高。
[0010]該方面的另一個實(shí)施方案提供了尿和血清生物標(biāo)志物安眠蛋白A，其在KD患者中顯著升高。
[0011]該方面的另一個實(shí)施方案提供了尿和血清生物標(biāo)志物細(xì)絲蛋白B，其在KD患者中
顯著升高。
[0012]該方面的另一個實(shí)施方案提供了一小組生物標(biāo)志物，其每一個在KD患者中升高，并且在KD的診斷和預(yù)后中提供了比較值。在該方面的一個實(shí)施方案中，KD生物標(biāo)志物小組包括細(xì)絲蛋白B、細(xì)絲蛋白C或安眠蛋白A。此類實(shí)施方案還可包括對于總蛋白質(zhì)或標(biāo)準(zhǔn)化蛋白(normalizing protein)是特異性的試劑；或可進(jìn)行測量總蛋白質(zhì)或標(biāo)準(zhǔn)化蛋白的量或濃度的測定法以提供可針對其對一小組生物標(biāo)志物進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的量或濃度，以允許各種比較，例如在受試者樣品之間，或在一系列在不同時間點(diǎn)分離一個受試者的樣品之間的比較。
[0013]在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，存在于生物樣品例如尿或血清中的KD生物標(biāo)志物水平(例如，細(xì)絲蛋白C或安眠蛋白A的量或濃度)通過將測試樣品或其制劑與試劑例如基于抗體的試劑接觸來測量，所述試劑特異性結(jié)合至少一種KD生物標(biāo)志物或其部分，其中試劑與可在測定法中用于測定生物標(biāo)志物水平(例如，量或濃度)的生物標(biāo)志物形成復(fù)合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法可用于評估生物標(biāo)志物水平。例如，KD生物標(biāo)志物水平可利用ELISA、多重珠粒測定法(multiplex bead assay)或質(zhì)譜來評估。
[0014]一個實(shí)施方案提供了用于診斷受試者的KD的測定，包括分析獲自受試者的生物樣品的至少一種選自安眠蛋白A、細(xì)絲蛋白B和細(xì)絲蛋白C的生物標(biāo)志物的水平，其中生物標(biāo)志物的水平相較于標(biāo)準(zhǔn)化蛋白的參照水平的大于2倍的升高表示受試者患有KD。
[0015]在另一個方面，本發(fā)明提供了最優(yōu)化KD治療的治療效果的方法。因此，在該方面的一個實(shí)施方案中，方法包括(a)測量一小組生物標(biāo)志物(包括安眠蛋白A、細(xì)絲蛋白B或細(xì)絲蛋白C)中至少一種生物標(biāo)志物的水平(例如，量或濃度)；(b)將至少一種生物標(biāo)志物的水平與至少一種生物標(biāo)志物的參照水平相比較，其中樣品的一小組生物標(biāo)志物(包括安眠蛋白A、細(xì)絲蛋白B或細(xì)絲蛋白C)中至少一種生物標(biāo)志物的水平相較于所述至少一種生物標(biāo)志物的參照水平的升高表示需要給受試者施用KD的治療性治療。在一些實(shí)施方案中，生物樣品是尿樣品。在一些實(shí)施方案中，生物樣品是血清。
[0016]在該方面的另一個實(shí)施方案中，方法包括將生物樣品(獲自受試者)與至少一種對于一小組生物標(biāo)志物(包括至少細(xì)絲蛋白C、細(xì)絲蛋白B或安眠蛋白A)中的至少一種生物標(biāo)志物是特異性的試劑接觸；(b)使用對于至少一種試劑是特異性的測定測量至少一種生物標(biāo)志物的量或濃度；和(C)將至少一種生物標(biāo)志物的量或濃度與至少一種生物標(biāo)志物的參照水平相比較，其中樣品的一小組生物標(biāo)志物(包括細(xì)絲蛋白C、細(xì)絲蛋白B或安眠蛋白A)中的至少一種生物標(biāo)志物的量或濃度相較于所述至少一種生物標(biāo)志物的參照量或濃度的增加，表示需要給受試者施用KD的治療性治療。在一些實(shí)施方案中，生物樣品是尿樣品。在一些實(shí)施方案中，生物樣品是血清。
[0017]在另一個方面，本發(fā)明提供了試劑盒，所述試劑盒包括用于鑒定或測量生物樣品的至少一種KD生物標(biāo)志物例如細(xì)絲蛋白C、細(xì)絲蛋白B或安眠蛋白A的工具。試劑盒包括用于裝載生物樣品(例如，尿樣品或血清樣品)的容器和至少一種試劑，例如抗體或其部分，所述試劑特異性結(jié)合至少一種KD生物標(biāo)志物以用于測定生物樣品例如尿樣品或血清樣品的至少一種KD生物標(biāo)志物的量、濃度或存在。[0018]在該方面的一個實(shí)施方案中，試劑盒包括至少一種特異性結(jié)合至少一種KD生物標(biāo)志物的抗體或其部分，和用于固定的抗體或其部分。在一個這樣的實(shí)施方案中，一種抗體被固定在固相上，并且至少一種對于至少一種生物標(biāo)志物是特異性的抗體被可檢測地標(biāo)記。試劑盒可包括抗-安眠蛋白A、抗-細(xì)絲蛋白B或抗-細(xì)絲蛋白C抗體或其部分。
[0019]另一個方面涉及計算機(jī)可讀存儲介質(zhì)，計算機(jī)可讀存儲介質(zhì)具有在其上記錄以定義用于在計算機(jī)上執(zhí)行用于診斷至少一個個體的KD的方法的軟件模塊的計算機(jī)可讀指令，計算機(jī)可讀存儲介質(zhì)包括:(a)用于存儲和訪問代表針對獲自至少一個個體的生物樣品測定的至少一種生物標(biāo)志物的水平和標(biāo)準(zhǔn)化蛋白的水平的數(shù)據(jù)的指令；(b)用于通過標(biāo)準(zhǔn)化模塊將至少一種生物標(biāo)志物的水平針對標(biāo)準(zhǔn)化蛋白的量標(biāo)準(zhǔn)化，從而產(chǎn)生至少一種生物標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)化水平的指令，(C)用于使用比較模塊將至少一種生物標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)化水平與存儲在存儲裝置上的參照數(shù)據(jù)相比較的指令，其中比較步驟產(chǎn)生被檢索的內(nèi)容，和(d)用于為用戶顯示一頁被檢索的內(nèi)容的指令，其中被檢索的內(nèi)容顯示至少一種生物標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)化水平是否存在變化，從而確定至少一個個體是否患有KD。標(biāo)準(zhǔn)化蛋白可以是總蛋白或特定蛋白質(zhì)。在一個實(shí)施方案中，生物樣品是尿樣品。在一個實(shí)施方案中，生物樣品是血清。
[0020]本文中還描述了用于獲得獲自至少一個個體的生物樣品的數(shù)據(jù)的計算機(jī)系統(tǒng)，系統(tǒng)包括:(a)裝載生物樣品的樣品容器；(b)被構(gòu)造來測定報道分子信息的測定模塊，其中報道分子信息包括(I)代表試劑與標(biāo)準(zhǔn)化蛋白的結(jié)合的信息，和(2)代表試劑與至少一種生物標(biāo)志物的結(jié)合的信息；(c)被構(gòu)造來存儲來自測定模塊的數(shù)據(jù)輸出的存儲裝置；(d)被構(gòu)造來將代表試劑與至少一種生物標(biāo)志物的結(jié)合的報道分子信息針對代表試劑與標(biāo)準(zhǔn)化蛋白的結(jié)合的報道分子信息標(biāo)準(zhǔn)化的標(biāo)準(zhǔn)化模塊；(e)適合于將獲自標(biāo)準(zhǔn)化模塊的數(shù)據(jù)與存儲裝置上的參照數(shù)據(jù)相比較的比較模塊，其中比較模塊產(chǎn)生被檢索的內(nèi)容；和(f)用于為用戶顯示一頁被檢索的內(nèi)容的顯示模塊，其中被檢索的內(nèi)容顯示至少一種生物標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)化水平是否存在變化，從而確定至少一個個體是否患有KD。在一個實(shí)施方案中，標(biāo)準(zhǔn)化蛋白是特定蛋白質(zhì)。在一個實(shí)施方案中，標(biāo)準(zhǔn)化蛋白是總蛋白。在一個實(shí)施方案中，生物樣品是尿樣品。在另一個實(shí)施方案中，生物樣品是血清。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1顯示KD患者展示與非KD患者或具有通常存在的尿蛋白的患者不同的獨(dú)特的尿蛋白組。15個個體的尿蛋白組(列)的熱圖顯示相較于非KD患者在KD患者中檢測到的前10種蛋白質(zhì)(行)的貝葉斯分析的結(jié)果。陰影梯度表示對應(yīng)于尿蛋白豐度的MS/MS譜的數(shù)目(質(zhì)譜計數(shù))。
[0022]圖2舉例說明川崎病患者，但非具有模擬病況的患者具有顯著升高的安眠蛋白A和細(xì)絲蛋白C的血清和尿水平，這顯示了懷疑患有KD的患者的盲法研究的優(yōu)良診斷性能。圖2A-2C:在懷疑患有KD的患者的盲法病例對照研究中使用安眠蛋白A、細(xì)絲蛋白B和細(xì)絲蛋白C的特異性ELISA測量的尿濃度的箱形圖(Box plot)，顯示了 KD患者(居中)相較于非KD病況患者(左)和接受靜脈內(nèi)Y球蛋白治療后的KD患者(IVIg，右)的顯著升高的安眠蛋白A和細(xì)絲蛋白C的濃度。P〈0.05。水平條表示每一個比較組的平均值。圖2D:與常用標(biāo)志物紅細(xì)胞沉降率(ESR，第三左線)和血清C反應(yīng)性蛋白(CRP，右線)相比較的尿安眠蛋白A(第一左線)、細(xì)絲蛋白B(第二左線)和細(xì)絲蛋白C(第四左線)的受者工作特征曲線。所測量的診斷標(biāo)志物的受者工作特征曲線下面積(AUC)的值和它們的95%的置信區(qū)間(Cl)。圖2E-2F:KD患者(右)相較于模擬病況的非KD患者(左)的使用安眠蛋白A(圖2E)和細(xì)絲蛋白C(圖2F)的特異性ELISA測量的血清濃度的箱形圖。p〈0.05。
[0023]圖3顯示與KD患者的疾病活性相關(guān)的尿細(xì)絲蛋白C和安眠蛋白A。圖3A-3B:5個KD患者的尿安眠蛋白A(圖3A)和細(xì)絲蛋白C(圖3B)，如在診斷時、治療后24-48小時以及完全臨床反應(yīng)后I個月收集的匹配的樣品中測量的。圖3C:在初始呈現(xiàn)后5.5個月經(jīng)歷KD的復(fù)發(fā)的一個患者的尿安眠蛋白A水平。圖3D:顯示對應(yīng)于初始療法的患者(左，反應(yīng)者)對需要重復(fù)治療的患者(右，非反應(yīng)者)的尿細(xì)絲蛋白C水平的散布圖。
[0024]圖4顯示安眠蛋白A在川崎病小鼠模型的冠狀動脈損傷中富集。圖4A-4B:冠狀動脈的蘇木精和伊紅染色的切片的顯微照片顯示單核細(xì)胞(箭頭)在KD-垂死的動物(圖4B)但非對照動物(圖4A)中的浸潤。圖4C-4D:冠狀動脈的安眠蛋白A免疫組織化學(xué)染色的切片的顯微照片顯示安眠蛋白A在垂死的動物(圖4D)但非對照動物(圖4C)的冠狀動脈的單核浸潤物中的富集。圖4E:垂死(右)小鼠中安眠蛋白A的血清水平相較于對照(左)小鼠升聞。
[0025]圖5顯示了使用受者工作特征(ROC)分析獲得的反映組合的安眠蛋白A和細(xì)絲蛋白C的診斷性能的數(shù)據(jù)。這些雙重KD生物標(biāo)志物的使用在KD診斷中提供了高水平的靈敏性和特異性。
[0026]圖6A-C顯示比較KD小鼠模型的安眠蛋白A、細(xì)絲蛋白B和細(xì)絲蛋白C的血清水平的數(shù)據(jù)。
【具體實(shí)施方式】
[0027]應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明不限于本文中描述的特定的方法、方案和試劑等，這樣其可變化。本文中使用的技術(shù)僅僅是為了描述特定實(shí)施方案，并且無意限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍僅由權(quán)利要求定義。
[0028]如本文和權(quán)利要求中使用的，除非明確地另有所指，否則單數(shù)形式包括復(fù)制所指物，并且反之亦然。除非例如用“任一”修飾，否則術(shù)語“或”是包含性的。除在操作實(shí)施例中外，或其中另外地指出，否則所有表達(dá)本文中使用的成分或反應(yīng)條件的量的數(shù)字應(yīng)當(dāng)理解為在所有情況下由術(shù)語“約”修飾。
[0029]確定的所有專利和其它出版物為了描述和公開的目的通過引用明確地并入本文，例如，此類出版物中描述的可能結(jié)合本發(fā)明使用的方法。在本申請?zhí)峤蝗掌谥皟H提供了這些出版物的公開內(nèi)容。在這一點(diǎn)上不應(yīng)當(dāng)解釋為承認(rèn)發(fā)明人不享有先于由于在先發(fā)明或出于任何其它原因的此類公開。關(guān)于日期的所有聲明或關(guān)于這些文獻(xiàn)的內(nèi)容的陳述基于對于 申請人:是可獲得的信息，并且不構(gòu)成對這些文獻(xiàn)的日期或內(nèi)容的正確性的承認(rèn)。
[0030]除非另外定義，否則本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬的領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員通常理解的含義相同的含義。雖然任何已知的方法、裝置和材料可用于本發(fā)明的實(shí)踐或測試，但在這方面的方法、裝置和材料描述于本文中。本實(shí)施方案提供了用于KD的診斷和治療的新型生物標(biāo)志物。簡而言之，高精度質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)用于分析KD患者的臨床尿樣品的超過2，000種獨(dú)特蛋白質(zhì)。分析顯示KD患者但非具有模擬病況的患者的尿蛋白質(zhì)組富集細(xì)胞損傷的標(biāo)志物例如細(xì)絲蛋白和踝蛋白、免疫調(diào)節(jié)劑例如補(bǔ)體調(diào)節(jié)劑CSMD3、免疫模式識別受體muclin和免疫細(xì)胞因子蛋白酶安眠蛋白A。在兩個KD患者的獨(dú)立組群(由總共192個患者組成)的血清和尿中檢測到細(xì)絲蛋白C和安眠蛋白A的顯著升高。在懷疑患有KD的69個患者的盲法病例對照研究中，安眠蛋白A和細(xì)絲蛋白C相較于目前使用的疾病的標(biāo)志物展示更優(yōu)良的診斷性能，受者工作特征曲線下面積分別為0.99(0.96-1的95%的置信區(qū)間)和0.94(0.89至0.99的95%CI)。值得注意地，安眠蛋白A在KD小鼠模型的冠狀動脈損傷中富集?？偠灾?，尿蛋白質(zhì)組特征譜顯示KD的新型分子標(biāo)志物，包括細(xì)絲蛋白C和安眠蛋白A。這些和其它蛋白質(zhì)可改善懷疑患有KD的兒童的臨床評價的診斷準(zhǔn)確度，導(dǎo)致新型治療靶點(diǎn)的鑒定，和允許KD的生物分類的發(fā)展。
[0031]KD是病因?qū)W未知的系統(tǒng)性脈管炎，其顯示延長的發(fā)熱和皮膚粘膜炎癥，包括口腔粘膜的炎癥、非滲出性結(jié)膜炎、疹、極端變化和通常單側(cè)的頸淋巴結(jié)病。Burns等人，118J.Pediatr.680 (1991)。雖然川崎病在美國和歐洲人群中具有約1/10,000的發(fā)病率，但其是發(fā)達(dá)國家的獲得性小兒心臟病的最常見病因，并且繼續(xù)為醫(yī)學(xué)問題，因?yàn)槠潴w征和癥狀模擬許多其它兒童熱性疾病。Baker等人，154J.Pediatr.592 (2009) ;Taubert等人，119J.Pediatr279 (1991)。此外，KD的流行在亞洲特別高；2/1，000的5歲以下的日本兒童發(fā)生川崎病。Nakamura 等人,20J.Epidemiol.302(2010)。
[0032]準(zhǔn)確性診斷的延遲導(dǎo)致增加的來自KD的并發(fā)癥的死亡率和發(fā)病率。Wilder等人，26Pediatr.1nfect.Dis.J.256 (2007) ；Suda 等人，123Circulationl836 (2011)。具體地，在沒有及時治療的情況下，多至25%的患者可產(chǎn)生冠狀動脈擴(kuò)張或微動脈瘤，具有死亡和長期病態(tài)的相關(guān)風(fēng)險。McCrindle等人，116Circulationl74(2007)。重要地，在本發(fā)明之前，不存在用于KD早期鑒定和診斷的特殊病癥測試。Gedalia, 9Curr.Rheumatol.Rep.336 (2007) ；Dedeoglu&Sundel, 33Rheum.Dis.Clin.N.Am.555 (2007)。臨床算法的使用已改善了 KD的診斷，但它們準(zhǔn)確性仍然有限。Yellen等人，125Pediatrics e234(2010)。改善KD的臨床評價的可靠性的嘗試集中在炎癥的臨床和一般實(shí)驗(yàn)室標(biāo)志物上。Lin等人，121 J.Pediatr.924(1992) ;Chow等人，34Zhonghua Min Guo Xiao Er Ke Yi Xue Hui ZaZhi77 (1993) ;Ebihara 等人，164Eur.J.Pediatr.427 (2005) ;Peng 等人，8Zhongguo DangDai Er Ke Za Zhi208(2006) ;Suganami 等人，50Pediatr.1nt.264(2008)。然而，可能由于KD的病理生理學(xué)中的非特異性關(guān)系(這被認(rèn)為是由感染性觸發(fā)者與夸大的炎癥反應(yīng)之間的相互作用引起的)，性能不足。Rowley等人,6Nat.Rev.Microbiol.394 (2008)。
[0033]本實(shí)施方案使用基于發(fā)現(xiàn)的方法，所述方法在蛋白質(zhì)組學(xué)規(guī)模上鑒定KD病理生理學(xué)改變。之所以研究尿是由于尿相較于血清的豐度和相對分析簡單性。先前，高精度質(zhì)譜以充足的深度測量尿蛋白質(zhì)組，從而鑒定局部和全身性生物標(biāo)志物，和發(fā)現(xiàn)改善的疾病的診斷標(biāo)志物。Rai 等人,5Proteomics3467 (2005) ；Pisitkun 等人,5Mol.CellProteomicsl760 (2006) ；Adachi 等人,7Genome Biol.R80 (2006) ；fforoniecki 等人,26Am.J.Nephrol.258 (2006) ；0etting 等人,Al km.J.KidneyDis.898 (2006) ;Zimmerli 等人,7Mol.Cell Proteomics290 (2008) ；Kentsis 等人,55Ann.Emerg.Med.62 (2010)。
[0034]本實(shí)施方案提供了經(jīng)驗(yàn)證的KD的診斷標(biāo)志物(在前瞻性小兒組群中鑒定的)。從懷疑患有KD的兒童收集的尿樣品的高精確度質(zhì)譜蛋白質(zhì)組表征鑒定了個體尿蛋白質(zhì)組的差異。使用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)驗(yàn)證兩個獨(dú)立的患者組群的尿和血清中的候選診斷標(biāo)志物。隨后在懷疑患有KD的兒童的盲法前瞻性研究中評價它們的診斷性能。
[0035]初始受試者研究招募69個受試者，所述受試者顯示發(fā)熱并且擔(dān)心可能的KD。與KD的流行病學(xué)和表現(xiàn)的先前研究一致，研究群體主要是男性，平均年齡3歲，呈現(xiàn)表1中描述的體征和癥狀。
[0036]表1.顯示懷疑患有KD的患者的體征、癥狀、診斷
【權(quán)利要求】
1.一種用于診斷受試者的川崎病(KD)的測定法，其包括: 分析獲自受試者的生物樣品的至少一種選自安眠蛋白A、細(xì)絲蛋白B和細(xì)絲蛋白C的生物標(biāo)志物的水平； 其中所述生物標(biāo)志物的水平相較于標(biāo)準(zhǔn)化蛋白的參照水平的> 2倍的升高表示所述受試者患有KD。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定法，其中所述標(biāo)準(zhǔn)化蛋白的參照水平是(a)未患有KD的個體的生物標(biāo)志物的水平；(b)所述受試者樣品的持家基因蛋白的水平；或(C)生物樣品的總蛋白的水平。
3.一種用于監(jiān)控患有KD的受試者的治療功效的方法，所述方法包括:(a)從在第一時間點(diǎn)獲自受試者的生物樣品測定選自安眠蛋白A、細(xì)絲蛋白B和細(xì)絲蛋白C的至少一種生物標(biāo)志物的水平； (b)給所述受試者施用治療； (c)測定在第二時間點(diǎn)獲自所述受試者的樣品的所述生物標(biāo)志物的水平；和 (d)將第二時間點(diǎn)的所述生物標(biāo)志物的水平與第一時間點(diǎn)的所述生物標(biāo)志物的水平相比較，其中所述第二時間點(diǎn)的所述生物標(biāo)志物的水平的降低表明治療對于所述受試者是有效的，并且其中所述第二時間點(diǎn)的所述生物標(biāo)志物的水平的升高表示治療對于所述受試者是無效的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測定法，或根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述生物樣品是尿或血清。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測定法，或根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其中所述生物標(biāo)志物的水平使用特異性結(jié)合所述生`物標(biāo)志物的基于抗體的結(jié)合劑來檢測。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其還包括給所述KD生物標(biāo)志物的水平升高的受試者施用額外治療的步驟。
7.一種用于檢測KD的試劑盒，其包括用于檢測生物樣品中的KD生物標(biāo)志物的試劑，其中所述KD生物標(biāo)志物是細(xì)絲蛋白C、細(xì)絲蛋白B或安眠蛋白A。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其中所述生物樣品是尿或血清。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的試劑盒，其中所述試劑包括結(jié)合細(xì)絲蛋白C的試劑或結(jié)合安眠蛋白A的試劑，或結(jié)合細(xì)絲蛋白B的試劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其中所述試劑是抗體或其部分。
11.根據(jù)權(quán)利要求7-10所述的試劑盒，其中所述試劑包括標(biāo)準(zhǔn)量的細(xì)絲蛋白B、細(xì)絲蛋白C或安眠蛋白A。
12.根據(jù)權(quán)利要求7-11所述的試劑盒，其中所述試劑包括用于標(biāo)準(zhǔn)化的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。
13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其還包括結(jié)合根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑的第二試劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的試劑盒，其還包括結(jié)合根據(jù)權(quán)利要求9所述的抗體的第二試劑。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的試劑盒，其中可檢測地標(biāo)記所述第二試劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求7-15所述的試劑盒，其中所述檢測還包括測量檢測的生物標(biāo)志物的水平。
17.根據(jù)權(quán)利要求7-15所述的試劑盒，其中所述試劑盒是ELISA試劑盒。
18.一種固定的計算機(jī)可讀存儲介質(zhì)，其具有在其上記錄以定義用于在計算機(jī)上執(zhí)行用于診斷至少一個個體的KD的方法的軟件模塊的計算機(jī)可讀指令，所述計算機(jī)可讀存儲介質(zhì)包括:(a)用于存儲和訪問代表至少一種選自細(xì)絲蛋白B、細(xì)絲蛋白C和安眠蛋白A的生物標(biāo)志物的水平，和針對獲自至少一個個體的生物樣品測定的標(biāo)準(zhǔn)化蛋白的水平的數(shù)據(jù)的指令；(b)用于通過標(biāo)準(zhǔn)化模塊將所述至少一種生物標(biāo)志物的水平針對標(biāo)準(zhǔn)化蛋白的水平標(biāo)準(zhǔn)化，從而產(chǎn)生所述至少一種生物標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)化水平的指令，(c)用于使用比較模塊將所述至少一種生物標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)化水平與存儲在存儲裝置上的參照數(shù)據(jù)相比較的指令，其中所述比較步驟產(chǎn)生被檢索的內(nèi)容，和(d)用于為用戶顯示一頁被檢索的內(nèi)容的指令，其中被檢索的內(nèi)容顯示所述至少一種生物標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)化水平是否存在變化，從而確定至少一個個體是否患有KD。
19.一種治療川崎病(KD)的方法，其包括: 給在治療之前至少一種選自安眠蛋白A、細(xì)絲蛋白B和細(xì)絲蛋白C的生物標(biāo)志物的水平相較于標(biāo)準(zhǔn)化蛋白參照水平升高超過2倍的受試者施用有效量的Y球蛋白。
20.一種用于診斷川崎病(KD)的方法，其包括: 分析獲自受試者的生物樣品的至少一種選自安眠蛋白A、細(xì)絲蛋白B和細(xì)絲蛋白C的生物標(biāo)志物的水平； 其中所述生物標(biāo)志物的水平相較于標(biāo)準(zhǔn)化蛋白的參照水平的> 2倍的升高表示所述受試者患有KD。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的`方法，其中所述生物樣品是尿或血清。
【文檔編號】G01N33/68GK103562725SQ201280024575
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2012年4月13日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月15日
【發(fā)明者】亞歷克斯·肯特賽斯, 蘇姍·金, 漢諾·斯泰恩 申請人:兒童醫(yī)療中心有限公司