標(biāo)記的hsp90抑制劑的用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及使用標(biāo)記的HSP90抑制劑改善使用HSP90抑制劑治療癌癥患者的各種方法，包括用于確定腫瘤是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的離體和體內(nèi)方法。本發(fā)明還提供了一種用于確定腫瘤是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟：（a）使所述腫瘤或含有來自所述腫瘤的細(xì)胞的樣品與優(yōu)先結(jié)合于HSP90的腫瘤特異性形式的可檢測地標(biāo)記的HSP90抑制劑接觸；（b）測量結(jié)合于所述腫瘤或所述樣品中所述腫瘤細(xì)胞的標(biāo)記的HSP90抑制劑的量；以及（c）將步驟（b）中測量的結(jié)合于所述腫瘤或所述樣品中所述腫瘤細(xì)胞的標(biāo)記的HSP90抑制劑的量與結(jié)合于參考的標(biāo)記的HSP90抑制劑的量比較。
【專利說明】標(biāo)記的HSP90抑制劑的用途
[0001]相關(guān)申請案的交叉引用
[0002]根據(jù)35U.S.C.§ 119(e)，本申請案要求于2011年7月8日提出的美國臨時申請案第61/506,010號的權(quán)益，所述臨時申請案的所有內(nèi)容以全文引用的方式并入本文中。

【背景技術(shù)】
[0003]為了維持穩(wěn)態(tài)，細(xì)胞采用復(fù)雜的分子機(jī)器，這些分子機(jī)器由數(shù)以千計的被程序化以執(zhí)行明確的功能的蛋白質(zhì)構(gòu)成。通過蛋白質(zhì)錯誤表達(dá)或突變的這些通路調(diào)節(jié)異常會產(chǎn)生賦予惡性表型的生物優(yōu)勢。雖然在細(xì)胞水平下，所述調(diào)節(jié)異?？赡苁怯幸娴?即有利于提高存活率)，但在分子水平下，此需要細(xì)胞投入能量來維持這些蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和功能。相信為了將這些蛋白質(zhì)維持在假穩(wěn)定狀態(tài)，癌細(xì)胞指派分子伴隨蛋白，包括HSP9032’33。
[0004]支持此假設(shè)，HSP90被公認(rèn)為在維持轉(zhuǎn)化的表型中起到重要的作用32’33。HSP90和其相關(guān)輔助伴隨蛋白幫助統(tǒng)稱為“客戶蛋白”的細(xì)胞蛋白質(zhì)進(jìn)行正確的構(gòu)象折疊，許多這些蛋白是控制細(xì)胞生長、分化、DNA破壞反應(yīng)和細(xì)胞存活的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的效應(yīng)物。因此，腫瘤細(xì)胞對失調(diào)蛋白質(zhì)的依賴(即通過突變、異常表達(dá)、不當(dāng)?shù)募?xì)胞移位等)可能變得決定性地依賴于HSP9033。
[0005]在各種形式的癌癥中HSP90療法的基本原理目前由包括在對標(biāo)準(zhǔn)療法具有抗性的疾病內(nèi)的臨床前和臨床研究很好地支持9卜97。舉例來說，研究已經(jīng)證明某些HER2+腫瘤對HSP90抑制劑的顯著敏感性98’99。在這些腫瘤中，17-AAG (又稱為坦螺旋霉素(Tanespimycin)) 和17-DMAG (阿螺旋霉素(Alvespimycin))甚至引起反應(yīng),并且特別是在曲妥珠單抗療法(trastuzumab therapy)后的進(jìn)行性疾病患者中98。例如PU-H71等其它HSP90抑制劑，在許多三陰性乳癌小鼠模型中進(jìn)行臨床前測試時，提供了至今在此難以治療的癌癥亞型中所報導(dǎo)的最有效的靶向單一藥劑抗腫瘤作用1Q°。
[0006]雖然這些數(shù)據(jù)強(qiáng)烈地支持HSP90抑制劑用于癌癥中，但此刻關(guān)于如何鑒別最可能受益于HSP90療法的那些患者沒有清晰的一致意見皿’1(12。此尤其成問題，眾所周知對于靶向藥劑的成功開發(fā)來說，最基本的是確定應(yīng)接收藥物的患者亞群(即，具有EGFR突變的腫瘤對它賽瓦(tarceva))。所述選擇可以減少接收低效治療的患者數(shù)目并且減少在晚期臨床試驗中無效的靶向腫瘤學(xué)藥劑的交錯數(shù)目。
[0007]此外，沒有臨床分析可以非侵入性地確定HSP90標(biāo)靶抑制。雖然外周血淋巴細(xì)胞的藥效監(jiān)測已經(jīng)在臨床試驗中提供了 HSP90抑制劑的體內(nèi)生物活性的易得且可再現(xiàn)指標(biāo)，但在正常組織中的藥效并不預(yù)測腫瘤比活性97’1(11’1(12。明智地使用活組織檢查來測量藥效變化仍然是一種分析標(biāo)靶調(diào)節(jié)的重要方式，但此種方法由于與侵入性分析有關(guān)的邏輯和倫理問題而仍然是受限制的。作為一種替代方案，目前使用鋯89標(biāo)記的抗體研究腫瘤HER2水平和VEGF水平的變化1(13’1(14，以及通過ELISA研究患者血清中可溶性HER2胞外域水平的變化1(15，但這些研究限于表達(dá)這些生物標(biāo)記物的乳房腫瘤的子集。
[0008]因此，在HSP90靶向療法中對生物標(biāo)記物有強(qiáng)烈的需要:大部分癌癥患者用新穎的實驗性療法治療，在很多情況下幾乎不了解特定藥劑的作用機(jī)制、不同疾病子集的具體治療的適合性并且?guī)缀醪恢啦煌瑦盒员尘跋轮委焺┑淖罴褎┝亢蜁r程安排。最終結(jié)果是根據(jù)經(jīng)驗的臨床研究，其中難治性惡性疾病患者在不知道哪一種治療方法對不同的臨床背景為最佳的情況下用一連串的新穎藥劑治療。
[0009]HSP90是一種在癌癥中備受追捧的標(biāo)靶，此是因為它在穩(wěn)定和折疊與致癌性轉(zhuǎn)化有關(guān)的蛋白質(zhì)中起到關(guān)鍵作用。鑒于其可能降解許多不同的癌蛋白和影響多條信號傳導(dǎo)通路，已經(jīng)假設(shè)HSP90抑制劑(HSP90i)在多種癌癥中是有效的。雖然早期臨床試驗已經(jīng)證實此方法在腫瘤子集中的治療可能性，但找到生物標(biāo)記物來預(yù)測哪些癌癥和患者群體將對所述治療最敏感已經(jīng)證明是挑戰(zhàn)性的。所述對充足的患者群體的了解缺乏和選擇已經(jīng)導(dǎo)致大量新興的HSP90癌癥治療劑進(jìn)展緩慢或無法繼續(xù)開發(fā)。因此迫切需要立即嘗試針對HSP90療法鑒別反應(yīng)群體和開發(fā)伴隨診斷性分析。
[0010]在HSP90療法中對實現(xiàn)抗腫瘤功效所需要的適當(dāng)劑量和時程的設(shè)計也缺乏了解。血漿藥物動力學(xué)一般提供有益于治療劑給藥設(shè)計的數(shù)據(jù)，其中血漿曲線下面積(AUC)通常作為全身性藥物暴露的量度。然而，對于HSP90抑制劑，腫瘤組織中而不是血液中藥物滯留的濃度和持續(xù)時間決定它們的抗腫瘤作用1(16-1(19。確切地說，大部分HSP90抑制劑特征是從血漿和正常組織迅速清除，但在腫瘤內(nèi)相對長時間藥物滯留(即投藥后12-48小時內(nèi))的非典型的藥物動力學(xué)型態(tài)。因而，如果反應(yīng)與注入劑量而不是腫瘤劑量相關(guān)，那么對HSP90療法的腫瘤反應(yīng)的臨床了解嚴(yán)重地受到限制。血漿藥物動力學(xué)有限的價值和腫瘤劑量對腫瘤反應(yīng)的重要性表明需要臨床開發(fā)一種對HSP90抑制劑的腫瘤藥物動力學(xué)的分析。腫瘤HSP90的驗證的臨床上實踐的非侵入性分析將能夠?qū)⒅委焺┙o藥集中于實現(xiàn)穩(wěn)態(tài)的腫瘤藥物濃度，而不是替代的穩(wěn)態(tài)血漿濃度。所述分析可以指示在等于或低于最高許可劑量下，是否可以實現(xiàn)治療有效腫瘤濃度。在相反情況下，患者可以實行一種替代治療，使他們在無臨床益處下無需暴露于可能的藥物毒性。
[0011]為了克服與HSP90療法有關(guān)的這些限制，這里設(shè)計和開發(fā)了一種所提出的非侵入性分析，它將推動HSP90抑制劑在癌癥中的最佳臨床實施、開發(fā)和使用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明提供了使用標(biāo)記的HSP90抑制劑改善使用HSP90抑制劑治療癌癥患者的方法。
[0013]本發(fā)明證明了不僅僅是由HSP90表達(dá)決定的此具體“致癌HSP90”物質(zhì)的豐度預(yù)測對HSP90抑制療法的敏感性并且因此是HSP90療法的生物標(biāo)記物。本發(fā)明還證明了鑒別和測量腫瘤內(nèi)此致癌HSP90物質(zhì)的豐度預(yù)測對HSP90療法的反應(yīng)?！爸掳〩SP90”在本文中定義為代表伴隨蛋白復(fù)合物的細(xì)胞應(yīng)激特定形式的HSP90部分，其在腫瘤細(xì)胞環(huán)境下擴(kuò)增并且組成性維持，并且可以執(zhí)行維持惡性表型所需的功能。所述作用不僅調(diào)節(jié)過度表達(dá)(即HER2)、突變(即mB-Raf)或嵌合蛋白(即Bcr-Abl)的折疊，而且還促進(jìn)與異常活化信號傳導(dǎo)復(fù)合物(即STAT5、BCL6)相關(guān)的分子的架構(gòu)和復(fù)合物形成。雖然腫瘤存活變得依賴于HSP90-癌蛋白的網(wǎng)絡(luò)，但這些蛋白質(zhì)在功能和穩(wěn)定性上變得依賴于“致癌HSP90”。此共生性互相依賴表明腫瘤對HSP90癌蛋白的依賴等同于對“致癌HSP90”的依賴。測量后者的豐度是第一讀數(shù)，因此，根據(jù)本發(fā)明，是HSP90療法富集的生物標(biāo)記物。
[0014]此外，展示HSP90在惡性細(xì)胞中形成生物化學(xué)不同的復(fù)合物。癌細(xì)胞HSP90的主要部分保留類似于正常細(xì)胞的“管家”伴侶功能，而癌細(xì)胞中富集或擴(kuò)增的功能上不同的HSP90池(B卩，“致癌HSP90”)特異性地與維持腫瘤細(xì)胞存活、異常增生特征以及侵入和轉(zhuǎn)移行為所需的癌蛋白相互作用。
[0015]為了以逐腫瘤的方式測量“致癌HSP90”的豐度，本發(fā)明還提供了化學(xué)工具。所述工具包括熒光標(biāo)記和ANCA標(biāo)記的HSP90抑制劑、生物素標(biāo)記的HSP90抑制劑和放射性標(biāo)記的抑制劑，它們特異性地鑒別此腫瘤“致癌HSP90”物質(zhì)并且與其相互作用，這使得可以測量不同類型的腫瘤、腫瘤細(xì)胞、腫瘤支持細(xì)胞和腫瘤相關(guān)生物形式中(例如血液科惡性疾病、實體腫瘤和液體腫瘤中)“致癌HSP90”物質(zhì)的豐度，并且因此測量和預(yù)測對HSP90抑制療法的敏感性。這些可以呈但不限于實體或液體腫瘤中的癌細(xì)胞、癌癥干細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、腫瘤支持免疫細(xì)胞、外來體和腫瘤支持祖細(xì)胞的形式。
[0016]在一個方面，本發(fā)明提供了一種用于確定腫瘤是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟:
[0017](a)使所述腫瘤或含有來自所述腫瘤的細(xì)胞的樣品與優(yōu)先結(jié)合于腫瘤或腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的可檢測地標(biāo)記的HSP90抑制劑接觸；
[0018](b)測量結(jié)合于所述腫瘤或所述樣品中所述腫瘤細(xì)胞的標(biāo)記的HSP90抑制劑的量；以及
[0019](c)將步驟(b)中測量的結(jié)合于所述腫瘤或所述樣品中所述腫瘤細(xì)胞的標(biāo)記的HSP90抑制劑的量與結(jié)合于參考的標(biāo)記的HSP90抑制劑的量比較；
[0020]其中步驟(b)中測量的結(jié)合于所述腫瘤或所述腫瘤細(xì)胞的標(biāo)記的HSP90抑制劑的量比參考量大表明所述腫瘤將可能對所述HSP90抑制劑起反應(yīng)。
[0021]在一個實施例中，參考細(xì)胞來自患有腫瘤的相同患者的細(xì)胞。參考細(xì)胞可以是來自癌癥患者的正常細(xì)胞。舉例來說，正常細(xì)胞可以是來自患有血液腫瘤的患者的淋巴細(xì)胞、來自具有循環(huán)腫瘤細(xì)胞的患者或?qū)嶓w腫瘤周圍的正常組織的白血球。在另一實施例中，參考細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞或來自癌癥患者的幾乎不表達(dá)致癌HSP90的另一細(xì)胞。在另一實施例中，參考細(xì)胞來自與患有腫瘤的患者不同的患者的細(xì)胞。舉例來說，參考細(xì)胞可以來自健康個體的細(xì)胞或來自除待測量的患有腫瘤的患者以外的癌癥患者的幾乎不表達(dá)致癌HSP90的細(xì)胞。
[0022]在一個方面，本發(fā)明提供了一種用于確定腫瘤是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟:
[0023](a)使所述腫瘤或含有來自所述腫瘤的細(xì)胞的樣品與優(yōu)先結(jié)合于腫瘤或腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的第一可檢測地標(biāo)記的HSP90抑制劑和最低程度或不結(jié)合于所述HSP90的腫瘤特異性形式的第二可檢測地標(biāo)記的抑制劑接觸；
[0024](b)測量結(jié)合于所述腫瘤或所述樣品中所述腫瘤細(xì)胞的第一標(biāo)記的抑制劑和第二標(biāo)記的抑制劑的量；以及
[0025](C)將結(jié)合于所述腫瘤或所述腫瘤細(xì)胞的第一標(biāo)記的抑制劑的量與結(jié)合于所述腫瘤或腫瘤細(xì)胞的第二標(biāo)記的抑制劑的量比較，
[0026]其中結(jié)合于所述腫瘤或腫瘤細(xì)胞的第一標(biāo)記的抑制劑的量比結(jié)合于所述腫瘤或腫瘤細(xì)胞的第二標(biāo)記的抑制劑大表明所述腫瘤將可能對所述HSP90抑制劑起反應(yīng)。
[0027]在一個實施例中，標(biāo)記的HSP90抑制劑是可滲透細(xì)胞并且選擇性地結(jié)合于“致癌HSP90”的熒光標(biāo)記或ANCA標(biāo)記的抑制劑。舉例來說，提供HSP90抑制劑PU-H71的不同的熒光標(biāo)記和ANCA標(biāo)記型式，其已經(jīng)針對用于流式細(xì)胞術(shù)，以及用于分析在實體或液體腫瘤中發(fā)現(xiàn)或從中分離的癌細(xì)胞、癌癥干細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、腫瘤支持免疫細(xì)胞、外來體和腫瘤支持祖細(xì)胞，以及用于通過例如活組織檢查、手術(shù)和細(xì)針吸取等若干介入方法獲得的樣品的組織染色而最佳化。
[0028]在一種所述實施例中，展示例如TO-H71-FITC2 (部分5.2.1.1.)等熒光標(biāo)記的抑制劑可以用于測量從例如活組織檢查和手術(shù)樣品等來源中獲得的組織中“致癌HSP90”的豐度。在另一實施例中，展示例如TO-H71-FITC2等熒光標(biāo)記的抑制劑可以用于測量建立的癌細(xì)胞系或原代癌細(xì)胞中“致癌HSP90”的豐度。在另一實施例中，展示熒光標(biāo)記的抑制劑可以用于測量從例如來自腫瘤等癌癥樣品中分離的細(xì)胞中、癌癥干細(xì)胞中、循環(huán)腫瘤細(xì)胞中和從細(xì)針吸取中獲得的癌細(xì)胞中“致癌HSP90”的豐度。在其它實施例中，展示也適用于進(jìn)行以上提及的測量的其它熒光標(biāo)記、ANCA標(biāo)記和生物素標(biāo)記的HSP90抑制劑。
[0029]在另一實施例中，標(biāo)記的HSP90抑制劑是選擇性地結(jié)合于“致癌HSP90”的放射性標(biāo)記的抑制劑。舉例來說，放射性標(biāo)記的PU-H71的不同型式已經(jīng)針對PET成像而最佳化。在一特定實施例中，PU-H71的碘124放射性標(biāo)記的型式用于實體和液體腫瘤的PET成像。放射性標(biāo)記的抑制劑可用于使許多類型的原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性癌癥成像，包括(但不限于)結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、基底細(xì)胞癌、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、膀胱癌、前列腺癌、包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌在內(nèi)的肺癌、乳癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、包括胃腸道基質(zhì)腫瘤在內(nèi)的胃腸道癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽囊癌、肛門癌、包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤在內(nèi)的腦腫瘤、包括濾泡性淋巴瘤和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤在內(nèi)的淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、骨髓增生性贅生物以及包括卵巢癌、宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌在內(nèi)的婦科癌癥。
[0030]本發(fā)明進(jìn)一步提供了以逐腫瘤的方式測量例如(但不限于)上列的那些腫瘤等實體腫瘤中和例如(但不限于)與淋巴瘤、白血病、骨髓瘤和骨髓增生性贅生物有關(guān)的液體腫瘤等液體腫瘤中“致癌HSP90”的豐度的方式。在一個實施例中，本發(fā)明展示通過使用特異性地與“致癌HSP90”相互作用的碘124標(biāo)記的HSP90抑制劑，可使用非侵入性PET成像并且定量患者中、實體腫瘤和液體腫瘤中的“致癌HSP90”。
[0031]在一個方面，本發(fā)明提供了一種用于確定患有例如血液癌癥(例如白血病)等血液科惡性疾病的患者是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含:使含有來自所述患者的癌細(xì)胞的樣品和參考非癌細(xì)胞與優(yōu)先結(jié)合于患者癌細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的可滲透細(xì)胞的熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑接觸，測量結(jié)合于所述樣品中所述癌細(xì)胞和非癌癥的熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑的量，并且將結(jié)合于所述癌細(xì)胞的所述熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑的量與結(jié)合于所述非癌細(xì)胞的所述熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑的量比較，其中結(jié)合于所述癌細(xì)胞的熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑的量大于所述非癌細(xì)胞表明所述腫瘤將可能對所述HSP90抑制劑起反應(yīng)。
[0032]在一種所述實施例中，參考正常細(xì)胞是來自與癌細(xì)胞相同的患者的正常細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞)。在另一實施例中，參考非癌細(xì)胞是從與癌癥患者不同的患者中獲得。
[0033]在一個方面，本發(fā)明提供了一種用于確定患有實體腫瘤的患者是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含:使含有來自患者的癌細(xì)胞和非癌細(xì)胞(例如周圍基質(zhì)、良性細(xì)胞或樣品中的其它類型正常細(xì)胞)的樣品(例如從活組織檢查、手術(shù)、細(xì)針吸取或其它介入程序中獲得)與優(yōu)先結(jié)合于所述患者的癌細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的可滲透細(xì)胞的熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑接觸，測量結(jié)合于所述樣品中所述癌細(xì)胞和非癌細(xì)胞的熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑的量，并且將結(jié)合于所述癌細(xì)胞的所述熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑的量與結(jié)合于所述非癌細(xì)胞的所述熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑的量比較，其中結(jié)合于所述癌細(xì)胞的熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑的量大于所述非癌細(xì)胞表明所述腫瘤將可能對所述HSP90抑制劑起反應(yīng)。
[0034]本發(fā)明還提供了一種用于確定患有實體腫瘤的患者是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含:使含有來自所述患者的循環(huán)癌細(xì)胞和非癌細(xì)胞(例如白血球)的樣品與優(yōu)先結(jié)合于所述患者的癌細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的可滲透細(xì)胞的突光標(biāo)記的HSP90抑制劑接觸,測量結(jié)合于所述樣品中所述癌細(xì)胞和非癌細(xì)胞的突光標(biāo)記的HSP90抑制劑的量，并且將結(jié)合于所述癌細(xì)胞的所述熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑的量與結(jié)合于所述非癌細(xì)胞的所述熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑的量比較，其中結(jié)合于所述癌細(xì)胞的熒光標(biāo)記的HSP90抑制劑的量大于所述非癌細(xì)胞表明所述腫瘤將可能對所述HSP90抑制劑起反應(yīng)。
[0035]在一替代性實施例中，參考非癌細(xì)胞是從除患有腫瘤的患者以外的患者中獲得。
[0036]在另一方面，本發(fā)明提供了使用放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑確定將對HSP90抑制療法敏感的患者的方法。
[0037]在一個所述實施例中，本發(fā)明提供了用于確定患有可成像腫瘤的癌癥患者是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟:
[0038](a)向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于所述腫瘤中或所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑；
[0039](b)在步驟(a)中所述投予后一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤對所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的吸收；
[0040](c)在步驟(a)中所述投予后所述一個或一個以上時間點測量所述患者的預(yù)定健康組織或血液對所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的吸收；
[0041](d)計算步驟(b)中在一個或多個時間點測量的吸收與步驟(C)中相同時間點測量的吸收的比率；以及
[0042](e)確定所述癌癥患者將對使用所述HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的可能性，其中在一個或多個時間點步驟(d)中計算的比率超過2表明所述患者將可能起反應(yīng)。
[0043]在另一實施例中，本發(fā)明提供了一種用于確定患有可成像腫瘤的癌癥患者是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟:
[0044](a)向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于所述腫瘤中或所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑；
[0045](b)在步驟(a)中所述投予后4小時以上的一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤對所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的吸收，
[0046]其中相對于所述腫瘤周圍的健康組織中的吸收，在所述一個或一個以上時間點所述抑制劑的吸收表明所述患者將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)。
[0047]在又一個實施例中，本發(fā)明提供了一種用于確定可成像腫瘤是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟:
[0048](a)向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于所述腫瘤中或所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑；
[0049](b)在步驟(a)中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑投予后2個小時或2個小時以上的一個或一個以上時間點通過PET目視檢查所述放射性標(biāo)記的抑制劑在所述腫瘤中或在所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中的吸收，
[0050](c)將步驟(b)中獲得的PET影像與在所述一個或一個以上時間點在所述腫瘤周圍的健康組織中獲得的PET影像比較；
[0051]其中在所述一個或一個以上時間點所述腫瘤中或所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中PET影像中的明亮區(qū)域的存在表明所述患者將可能對HSP90抑制療法起反應(yīng)。
[0052]在另一實施例中，本發(fā)明提供了一種用于確定患有表達(dá)致癌HSP90的腫瘤的特定癌癥患者是否將可能對使用界定劑量的HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟:
[0053](a)向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于所述腫瘤中或所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式；
[0054](b)在步驟(a)中所述投予后一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤對所述HSP90抑制劑的所述放射性標(biāo)記形式的吸收；
[0055](C)基于步驟(b)中在所述一個或一個以上時間點測量的吸收,針對所述HSP90抑制劑的界定劑量，計算在所述一個或一個以上時間點中的每一個在所述患者的腫瘤中存在的所述HSP90抑制劑的濃度；以及
[0056](d)將步驟(C)中計算的所述HSP90抑制劑的濃度與在所述一個或一個以上時間點在腫瘤中存在的使所述HSP90抑制劑有效治療所述腫瘤所需的所述HSP90抑制劑的參考濃度比較，
[0057]其中如果步驟(C)中計算的所述HSP90抑制劑的濃度將等于或超過有效治療所述腫瘤所需的所述HSP90抑制劑的濃度，那么所述患者將可能對使用所述界定劑量的HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)。
[0058]在另一方面，展示放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑可以用于確定HSP90抑制劑的有效劑量和給藥時程。
[0059]在一個所述實施例中，本發(fā)明提供了一種用于確定患有表達(dá)致癌HSP90的腫瘤的特定癌癥患者是否將可能對使用界定劑量的HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟:
[0060](a)向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于所述腫瘤中或所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式；
[0061](b)在步驟(a)中所述投予后一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤對所述HSP90抑制劑的所述放射性標(biāo)記形式的吸收；
[0062](C)基于步驟(b)中在所述一個或一個以上時間點測量的吸收,針對所述HSP90抑制劑的界定劑量，計算在所述一個或一個以上時間點中的每一個在所述患者的腫瘤中存在的所述HSP90抑制劑的濃度；以及
[0063]Cd)將步驟(C)中計算的所述腫瘤對所述HSP90抑制劑的暴露與在所述一個或一個以上時間點在所述腫瘤中存在的使所述HSP90抑制劑有效治療所述腫瘤所需的對所述HSP90抑制劑的參考暴露比較，
[0064]其中如果步驟(C)中計算的所述腫瘤對所述HSP90抑制劑的暴露將等于或超過有效治療所述腫瘤所需的所述腫瘤對所述HSP90抑制劑的暴露，那么所述患者將可能對使用所述界定劑量的HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)。
[0065]額外的實施例包括一種用于確定使用HSP90抑制劑的療法對于患有可成像腫瘤的特定癌癥患者投予的有效劑量和頻率的方法；一種用于確定癌癥患者中可成像腫瘤中存在的HSP90抑制劑的濃度的方法；以及一種用于確定或監(jiān)測癌癥患者中腫瘤對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法。
[0066]在又一個實施例中，本發(fā)明提供了一種用于確定使用HSP90抑制劑的療法對于患有表達(dá)致癌HSP90的腫瘤的特定癌癥患者投予的有效劑量和頻率的方法，其包含以下步驟:
[0067](a)向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于腫瘤或腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式；
[0068](b)在步驟(a)中所述投予后一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤對所述HSP90抑制劑的所述放射性標(biāo)記形式的吸收；以及
[0069](C)基于步驟(b)中在所述一個或一個以上時間點測量的吸收，計算在所述一個或一個以上時間點中的每一個維持所述腫瘤中有效治療所述腫瘤的所述HSP90抑制劑的濃度所需的投予劑量和頻率，由此確定使用所述HSP90抑制劑的療法對于所述癌癥患者投予的有效劑量和頻率。
[0070]在又一個實施例中，本發(fā)明提供了一種用于確定使用HSP90抑制劑的療法對于患有表達(dá)致癌HSP90的腫瘤的特定癌癥患者投予的有效劑量和頻率的方法，其包含以下步驟:
[0071](a)向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于腫瘤或腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式；
[0072](b)在步驟(a)中所述投予后一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤對所述HSP90抑制劑的所述放射性標(biāo)記形式的吸收；以及
[0073](C)基于步驟(b)中在所述一個或一個以上時間點測量的吸收，計算在治療時期內(nèi)維持所述腫瘤中有效治療所述腫瘤的所述HSP90抑制劑的平均腫瘤濃度所需的投予劑量和頻率，由此確定使用所述HSP90抑制劑的療法對于所述癌癥患者投予的有效劑量和頻率。
[0074]在又一方面，本發(fā)明提供了一種用于確定癌癥患者中表達(dá)致癌HSP90的腫瘤中存在的HSP90抑制劑的濃度的方法，其包含以下步驟:
[0075](a)向所述患者共投予預(yù)定量的所述HSP90抑制劑和一定量的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式，所述HSP90抑制劑優(yōu)先結(jié)合于腫瘤或腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式；
[0076](b)在步驟(a)中所述共投予后一個或一個以上時間點周期性地測量所述患者的腫瘤對所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的吸收；以及
[0077](C)基于步驟(b)中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的吸收的測量，確定在任何所述時間點所述腫瘤中存在的所述HSP90抑制劑的濃度。
[0078]在另一方面，本發(fā)明提供了一種用于確定癌癥患者中表達(dá)致癌HSP90的腫瘤對使用HSP90抑制劑的療法的反應(yīng)的方法，其包含以下步驟:
[0079](a)在所述患者接收所述HSP90抑制劑作為療法的時期內(nèi)一個或一個以上時間點向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于腫瘤或腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式；
[0080](b)在步驟(a)中所述投予后所述一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的濃度；以及
[0081](c)將步驟(b)中測量的所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的濃度與有效治療所述腫瘤所需的所述HSP90抑制劑的最小濃度比較，其中測量的濃度超過治療所述腫瘤所需的最小值表明所述患者可能對使用所述HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)。
[0082]在另一方面，本發(fā)明提供了一種用于確定罹患神經(jīng)變性疾病的患者是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟:
[0083](a)使腦與優(yōu)先結(jié)合于所述患者的腦細(xì)胞中存在的HSP90的病原性形式的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑接觸；
[0084](b)測量結(jié)合于樣品中腦細(xì)胞的標(biāo)記的HSP90抑制劑的量；以及
[0085](c)將步驟(b)中測量的結(jié)合于樣品中腦細(xì)胞的標(biāo)記的HSP90抑制劑的量與參考量比較；
[0086]其中步驟(b)中測量的結(jié)合于腦細(xì)胞的標(biāo)記的HSP90抑制劑的量比參考量大表明所述患者將可能對所述HSP90抑制劑起反應(yīng)。
[0087]在另一方面，本發(fā)明提供了用HSP90抑制劑PU-H71治療HSP90依賴性癌癥的方法。在特定實施例中，提供治療HSP90依賴性癌癥的方法以實現(xiàn)PU-H71的特定腫瘤暴露。在其它實施例中，提供TO-H71的新穎給藥方案。
[0088]在另一方面，本發(fā)明提供了一種用于確定患者中存在的人類癌癥是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含:
[0089](a)獲得含有來自患者癌癥的細(xì)胞的樣品，所述細(xì)胞僅僅表達(dá)HSP90蛋白質(zhì)或除HSP70蛋白質(zhì)外還表達(dá)HSP90蛋白質(zhì)；
[0090](b)針對步驟(a)中獲得的所述樣品中存在的所述細(xì)胞，評估至少一個以下參數(shù)的存在:活化AKT通路、PTEN腫瘤抑制因子功能或表達(dá)的缺陷、活化STAT5通路或Bcl_xL蛋白質(zhì)表達(dá)；以及
[0091](C)將步驟(b)中獲得的所述評估與步驟(b)中評估的相同參數(shù)對于來自對使用所述HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的一個或一個以上癌癥患者的人類癌細(xì)胞的預(yù)定參考評估比較，以便由此確定所述患者的癌癥是否將可能對使用所述HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)。
[0092]在一個實施例中，相當(dāng)關(guān)注此特定方法的使用的人類癌癥是乳癌、胰腺癌和急性骨髓白血病。
[0093]用于評估每一參數(shù)的方法在所屬領(lǐng)域中眾所周知并且容易獲得。然而，先前尚未展示一個或一個以上這些特定參數(shù)與預(yù)測HSP90抑制劑功效的相關(guān)性。雖然理論上單個參數(shù)可足以能夠使技術(shù)熟練的行業(yè)者預(yù)測任何既定HSP90抑制劑的功效，但更可能需要考慮至少2個、或許至少3個或3個以上或甚至所有這些參數(shù)來對功效作一個可靠的預(yù)測。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0094]圖1.PU-H71優(yōu)先與在癌細(xì)胞中更豐富的HSP90的限定部分相互作用。(a)使用H9010 (一種抗-HSP90抗體)的連續(xù)免疫純化步驟耗盡MDA-MB-468細(xì)胞提取物中的HSP90。溶解產(chǎn)物=對照細(xì)胞提取物。(b)來自MDA-MB-468提取物的HSP90通過連續(xù)的化學(xué)和免疫純化步驟分離。每一池中HSP90的量都通過密度測定法定量并且值相對于內(nèi)標(biāo)歸一化。
(c)在指示的細(xì)胞中用1311-PU-H71進(jìn)行飽和度研究。對所有分離的細(xì)胞樣品計數(shù)并且確定m1-PU-H71的特定吸收。這些數(shù)據(jù)相對于1311-PU-H71的濃度繪圖以得到飽和結(jié)合曲線。呈現(xiàn)四個分開的重復(fù)研究的代表性數(shù)據(jù)(下圖)。指示的細(xì)胞中HSP90的表達(dá)通過蛋白質(zhì)印跡法分析(上圖)。(d)原代AML和CML⑶34+臍帶血細(xì)胞(CB)或K562細(xì)胞用指示劑量的PU-H71預(yù)處理24小時。處理后的細(xì)胞用I μ MPU-FITC處理。PU-FITC與細(xì)胞的結(jié)合通過流式細(xì)胞術(shù)評估并且表示為平均熒光強(qiáng)度(MFI)。TEG-FITC作為非特異性結(jié)合對照展示。使用⑶45對比SSC的門控將結(jié)合于胚細(xì)胞或淋巴細(xì)胞與原代樣品區(qū)分。(e)在指示劑量的PU-H71下原代AML和CMIXD34+CB或K562細(xì)胞在處理后相對于未處理的對照的活力％。細(xì)胞活力通過在處理后96小時膜聯(lián)蛋白V/7-AAD染色來評估。數(shù)據(jù)呈現(xiàn)為平均值+ SE (n=3)。
[0095]圖2.PU-H71對與癌蛋白和輔助伴隨蛋白呈復(fù)合物的HSP90具有選擇性且分離其。(a)K562提取物中的HSP90復(fù)合物通過用H9010(—種非特異性IgG)沉淀或通過PU-H71-珠?；?qū)φ罩榱７蛛x。對照珠粒含有乙醇胺，一種HSP90惰性分子。下拉物(pull-down)中的蛋白質(zhì)通過蛋白質(zhì)印跡法分析。(b、c)如所指示的單一或連續(xù)的免疫和化學(xué)沉淀在K562提取物中使用H9010和PU-珠粒以指示的頻率和所示順序進(jìn)行。下拉物中和剩余上清液中的蛋白質(zhì)通過WB分析。NS=非特異性。(d)K562細(xì)胞用媒劑(-)或PU-H71 ( + )處理24小時，并且通過蛋白質(zhì)印跡法分析蛋白質(zhì)。(e)Hsp70敲減的細(xì)胞中蛋白質(zhì)的表達(dá)通過蛋白質(zhì)印跡法(左圖)分析并且蛋白質(zhì)水平的變化以相對發(fā)光單位(RLU)呈現(xiàn)(右圖)。對照=零亂siRNA。(f )如所指示的單一或連續(xù)的化學(xué)沉淀在K562提取物中使用GM-珠粒、SNX-珠粒和NVP-珠粒以指示的頻率和所示順序進(jìn)行。下拉物中和剩余上清液中的蛋白質(zhì)通過蛋白質(zhì)印跡法分析。(g)K562細(xì)胞中的HSP90以與異常Bcr-Abl和正常c-Abl蛋白質(zhì)的復(fù)合物存在。ro-H71，而不是H9010，選擇Bcr-Abl癌蛋白結(jié)合的HSP90群體。
[0096]圖3.(a、b)來自乳癌和CML細(xì)胞提取物(120 μ g)的HSP90通過如所指示的連續(xù)的化學(xué)和免疫純化步驟分離。分離上清液以分析留下的HSP90。每一部分中的HSP90通過蛋白質(zhì)印跡法分析。溶解產(chǎn)物=內(nèi)源蛋白內(nèi)含物；PU-珠粒、GM-珠粒和對照珠粒指示在特定珠粒上分離的蛋白質(zhì)。H9010和IgG指示通過特定Ab分離的蛋白質(zhì)。對照珠粒含有一種HSP90惰性分子。數(shù)據(jù)與從多個重復(fù)實驗(n ^ 2)中獲得的數(shù)據(jù)一致。(c) PE結(jié)合抗體對比PU-H71-FITC的HSP90結(jié)合。在數(shù)據(jù)條上方指示每一細(xì)胞系通過ro_H71分離的總細(xì)胞HSP90百分比。(d)在外周血白血球(PBL)提取物(250 μ g)中進(jìn)行連續(xù)的化學(xué)和免疫純化步驟以分離TO-H71和H9010特異性HSP90物質(zhì)。所有樣品都通過蛋白質(zhì)印跡法分析(上圖)。PBL中HSP90的結(jié)合是通過流式細(xì)胞術(shù)使用HSP90-PE抗體和PU-H71-FITC評估。FITC-TEG=非特異性結(jié)合的對照(下圖)。(e)—組14種白血病細(xì)胞系中PU-H71-FITC (ΙμΜ)與HSP90的結(jié)合對比用TO-H71處理后活力百分比的相關(guān)性:香住(Kasumi )_1、香住_4、KCL-22、REH、TF-1、KG-1、HL-60、0C1-AML3、K562、MOLM-13, TUR、THP-1、U937 和 MV4-11。這些細(xì)胞中總HSP90水平類似,如通過蛋白質(zhì)印跡法顯示(未圖示)。
[0097]圖4.Ca)流式細(xì)胞術(shù)點圖說明用于原代慢性骨髓白血病(CML)樣品的門控策略以區(qū)分胚細(xì)胞(⑶45dim，紅色圓圈)與非惡性淋巴細(xì)胞(藍(lán)色圓圈)。(b)來自(a)中所示的原代CML患者樣品的CML胚細(xì)胞相對于正常淋巴細(xì)胞中PU-H71-FITC與HSP90結(jié)合的比率。(c) Ca)中所示的原代CML樣品在指示時間點和指示劑量的PU-H71處理后CML胚細(xì)胞(紅色)或正常淋巴細(xì)胞(藍(lán)色)相對于未經(jīng)處理對照的活力百分比。(d)流式細(xì)胞術(shù)點圖顯示用于原代慢性期CML (cpCML)樣品的門控策略以區(qū)分胚細(xì)胞(⑶45dim，紅色圓圈)與非惡性淋巴細(xì)胞(藍(lán)色圓圈)，并且分析胚細(xì)胞門(⑶45dim，紅色圓圈)內(nèi)⑶34+細(xì)胞(紅色方塊)的結(jié)合?；?-AAD區(qū)分，⑶45對比SSC點圖對活細(xì)胞進(jìn)行預(yù)先門控。(e)慢性期CML (cpCML)CD34+細(xì)胞和正常淋巴細(xì)胞中PU-H71-FITC與HSP90結(jié)合的比率。(f)用ΙμΜ PU-H71-FITC或TEG-FITC處理48小時后cpCML CD34+細(xì)胞(紅色)和正常淋巴細(xì)胞(藍(lán)色)相對于未經(jīng)處理對照的活力百分比。(g)來自正常臍帶血、慢性期CML (cpCML)和胚細(xì)胞期(bpCML)細(xì)胞(n=5)的CD34+細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中ro-H71_FITC與Hsp90結(jié)合的比率。(h)用PU-H71 (ΙμΜ)處理胚細(xì)胞和慢性CML⑶34+細(xì)胞以及正常⑶34+細(xì)胞(來自臍帶血；CB)48小時后相對于未經(jīng)處理對照的活力百分比。圖c、f和h中的細(xì)胞活力通過膜聯(lián)蛋白V/7-AAD染色評估。數(shù)據(jù)呈現(xiàn)為平均值土SE (n=3)。
[0098]圖5.(a)在正常細(xì)胞內(nèi)，HSP90使細(xì)胞蛋白折疊和移位到其適當(dāng)細(xì)胞區(qū)室(“管家復(fù)合物”)中的進(jìn)化守恒的管家功能需要HSP90的組成型表達(dá)。惡性轉(zhuǎn)化時，細(xì)胞蛋白質(zhì)通過突變、機(jī)能亢進(jìn)、滯留不正確的細(xì)胞區(qū)室中或其它方式被擾亂。這些功能上改變的蛋白質(zhì)的存在是起始和維持惡性表型所需的，并且正是這些癌蛋白被應(yīng)激改變的HSP90的子集(“致癌復(fù)合物”)特異性地維持。PU-H71特異性地結(jié)合于伴隨癌蛋白的HSP90部分(“致癌復(fù)合物”)。(b)使用PU-珠粒和對照珠粒以及H9010和IgG固定的抗體，在K562細(xì)胞提取物中分離HSP90和其相互作用的輔助伴隨蛋白。對照珠粒含有一種HSP90惰性分子。(c)來自K562細(xì)胞提取物的HSP90通過三個連續(xù)的免疫純化步驟利用H9010HSP90特異性抗體分離。分離剩余上清液以分析留下的蛋白質(zhì)。每一部分中的蛋白質(zhì)通過蛋白質(zhì)印跡法分析。溶解產(chǎn)物=內(nèi)源蛋白內(nèi)含物。數(shù)據(jù)與從多個重復(fù)實驗(n ^ 2)中獲得的數(shù)據(jù)一致。
[0099]圖6.GM和PU-H71對異常的蛋白質(zhì)/HSP90物質(zhì)具有選擇性。(a)在實驗中監(jiān)測Bcr-Abl和Abl結(jié)合的HSP90物質(zhì)，其中用指示量的K562細(xì)胞溶解產(chǎn)物探測恒定體積的PU-H71珠粒(80 μ L)(左圖)，或者其中用指示體積的ro-H71珠粒探測恒定量的溶解產(chǎn)物(Img)(右圖)。(b)(左圖)PU-珠粒和GM-珠粒(80yL)識別SKMel28黑色素瘤細(xì)胞提取物(300 μ g)中的HSP90-突變體B-Raf復(fù)合物，但無法與在正常結(jié)腸成纖維細(xì)胞CCD18Co提取物(300 μ g)中發(fā)現(xiàn)的HSP90-WT B-Raf復(fù)合物相互作用。H9010HSP90Ab識別兩種HSP90物質(zhì)。(c )在MDA-MB-468細(xì)胞提取物(300 μ g )中，PU-珠粒和GM-珠粒(80 μ I)與HER3和Raf-1激酶相互作用，但不與非致癌性酪氨酸-蛋白激酶CSK(—種c-Src相關(guān)酪氨酸激酶)和P38相互作用。Cd)(右圖)PU-珠粒(80yL)與v-Src/HSP90相互作用，但不與c-Src/HSP90物質(zhì)相互作用。為了促進(jìn)c-Src (豐度低于v-Src的一種蛋白質(zhì))檢測，與v-Src轉(zhuǎn)化的3T3細(xì)胞(250 μ g)相比，使用較高量的表達(dá)c-Src的3T3細(xì)胞溶解產(chǎn)物(I1OOOyg),此解釋了在這些3T3細(xì)胞(溶解產(chǎn)物，3T3成纖維細(xì)胞對比v-Src3T3成纖維細(xì)胞)中檢測到的較高HSP90水平。溶解產(chǎn)物=內(nèi)源蛋白內(nèi)含物；PU-珠粒、GM-珠粒和對照珠粒指示在特定珠粒上分離的蛋白質(zhì)。HSP90Ab和IgG指示通過特定抗體分離的蛋白質(zhì)。對照珠粒含有一種HSP90惰性分子。數(shù)據(jù)與從多個重復(fù)實驗(n ^ 2)中獲得的數(shù)據(jù)一致。
[0100]圖7.單一化學(xué)沉淀是在表達(dá)Bcr-Abl的CML細(xì)胞系(a)中和原代CML細(xì)胞提取物(b)中用PU-珠粒和對照珠粒進(jìn)行。下拉物中的蛋白質(zhì)通過蛋白質(zhì)印跡法分析。若干Bcr-Abl裂解產(chǎn)物在原代CML樣品中如所報導(dǎo)注釋9°。N/A=不可得。
[0101]圖8.若干HSP90抑制劑的結(jié)構(gòu)。
[0102]圖9.合成的熱休克蛋白90(HSP90)的熒光配體含有異硫氰酸熒光素(FITC)、4_硝基苯并[1，2，5]噁二唑(NBD)或紅移染料磺酰羅丹明101 (得克薩斯紅(Texas Red))結(jié)合于 PU-H71。
[0103]圖10.所示反應(yīng)方案的試劑和條件:(a) FITC、Et3N, DMF、室溫、12小時、40% ； (b)得克薩斯紅磺酰氯、DMF、0-10°C、12小時、61% ；(c) DMF、室溫、20小時、47%。
[0104]圖11.所示反應(yīng)方案的試劑和條件:(a)FITC、Et3N' DMF、室溫、5小時、72%; (b)NBD-CUEt3N, DMF、室溫、12 小時、40%。
[0105]圖12.所示反應(yīng)方案的試劑和條件:(a)N-(3_溴丙基)_鄰苯二甲酰亞胺、Cs2C03、DMF、室溫、34% ； (b)水合肼、MeOHXH2Cl2、室溫、64% ; (c)FITC、Et3N、DMF、室溫、12 小時、74% ；
(d)NBD-Cl、Et3N、DMF、室溫、12 小時、42%。
[0106]圖13.(A)在37°C下將M0LM-13細(xì)胞用指示的ro_H71-熒光衍生物(I μ Μ)處理4小時，并且通過流式細(xì)胞術(shù)來測量與活細(xì)胞的結(jié)合(DAPI陰性)。結(jié)合程度顯示為平均熒光強(qiáng)度(MFI)。(B)在37°C下將M0LM-13細(xì)胞用指示的ro_H71-熒光衍生物(I μ M)處理24小時。通過DAPI排除測定其活力。(C)將M0LM-13細(xì)胞用指示的PU-H71-熒光衍生物(I μ Μ)處理24小時。通過蛋白質(zhì)印跡法分析HSP90客戶蛋白mFLT3和Raf-1的穩(wěn)態(tài)水平。β-肌動蛋白用以針對相等的蛋白負(fù)荷歸一化。
[0107]圖14.(A)用PU-H71-FITC2染色的白血病細(xì)胞的共焦熒光顯微鏡術(shù)展示顯著的細(xì)胞內(nèi)定位。(B)將原代急性骨髓白血病樣品用指示劑量的TO-H71或媒劑(未經(jīng)處理)預(yù)先處理24小時。將處理后細(xì)胞用ΙμΜ PU-H71-FITC2或TEG-FITC處理。PU-H71-FITC2和TEG-FITC與細(xì)胞的結(jié)合通過流式細(xì)胞術(shù)評估并且表示為平均熒光強(qiáng)度(MFI )。TEG-FITC作為非特異性結(jié)合對照展示。CD45對比SSC的門控用以區(qū)分結(jié)合于胚細(xì)胞(惡性細(xì)胞)或淋巴細(xì)胞(正常細(xì)胞)與原代樣品。
[0108]圖15.正常細(xì)胞(左圖)和乳癌細(xì)胞(右圖)中的I3U-ANCA的熒光發(fā)射光譜。乳癌細(xì)胞的光譜發(fā)射型態(tài)在約530nm波長下產(chǎn)生熒光發(fā)射峰，這是結(jié)合的PU-H71-ANCA的代表性熒光發(fā)射。
[0109] 圖16.(a)來自健康供體(臍帶血)和慢性和胚細(xì)胞期CML患者(分別是cpCML和bpCML)的臍帶血和CML胚細(xì)胞相對于正常淋巴細(xì)胞中的PU-H71-FITC與Hsp90結(jié)合的比率。注意，對比與疾病進(jìn)展有關(guān)的CML中的結(jié)合增加，未顯著結(jié)合于來自健康患者的臍帶血。(b)用PU-H71 (ΙμΜ)處理胚細(xì)胞和慢性CML⑶34+細(xì)胞以及正常⑶34+細(xì)胞(來自臍帶血；CB) 48小時后相對于未經(jīng)處理對照的活力百分比。細(xì)胞活力通過膜聯(lián)蛋白V/7-AAD染色來評估。數(shù)據(jù)呈現(xiàn)為平均土SE (n=3)。(c)在一組19個原代AML患者樣品中用500nMPU-H71處理48小時后PU-H71-FITC (I μ Μ)結(jié)合于HSP90與活力百分比的相關(guān)性。每一點表示原代AML樣品。每一實驗至少進(jìn)行一式兩份。這些細(xì)胞表達(dá)類似的總HSP90水平。
[0110]圖17.異種移植分析表明體內(nèi)高I3U-FITC結(jié)合的AML樣品對PU-H71處理的敏感性。(a)體外PU-H71處理顯示低和高PU-FITC吸收(b)的兩個原代AML樣品48小時的活力百分比?；盍νㄟ^膜聯(lián)蛋白/7AAD分析測定。(b)來自異種移植動物的骨髓細(xì)胞(對于圖a中所示的AML樣品)用人類特異性抗體染色以測定I3U-FITC結(jié)合。PU-FITC結(jié)合表示為人類(白血病)/鼠類(正常)的比率。(c) 一周用75mg/kg ro-H71處理3次，持續(xù)3周的動物中⑶34+腫瘤細(xì)胞百分比。
[0111]圖18.使用標(biāo)記的ro-H71檢測和定量“致癌HSP90”并且預(yù)測腫瘤細(xì)胞對HSP90抑制劑的敏感性。(A)在一組胰腺癌和乳癌細(xì)胞系中用ΙμΜ PU-H71、SNX-2112或NVP-AUY922處理48小時后PU-H71-FITC (I μ Μ)結(jié)合于HSP90與活力百分比的相關(guān)性。結(jié)合測量為各別癌細(xì)胞中PU-FITC吸收與參考細(xì)胞HSP90抗性白血病細(xì)胞HL60中吸收(參見圖D)的比率。(B)總腫瘤HSP90的表達(dá)通過蛋白質(zhì)印跡法來測量并且相對于PU-FITC結(jié)合繪圖。(C)在一組胰腺癌和乳癌細(xì)胞系中用I μ M PU-H71、SNX-2112或NVP-AUY922處理48小時后的活力百分比相對于總腫瘤HSP90的表達(dá)繪圖。(D)在低結(jié)合和敏感性(HL-60)以及高結(jié)合和敏感性(MV4-11) AML細(xì)胞系中PE結(jié)合的抗體對比ro-H71_FITC的HSP90結(jié)合。數(shù)據(jù)呈現(xiàn)為平均值土 SE (n=3)。
[0112]圖19.PU-H71-FITC2結(jié)合于腫瘤細(xì)胞和參考HL-60白血病細(xì)胞的比率?？梢酝ㄟ^與非反應(yīng)性細(xì)胞的結(jié)合于ro-H71-FITC2的比率為約1.23到約2.07或低于2.07相比，反應(yīng)細(xì)胞的結(jié)合于ro-H71-FITC2的比率為約2.7到約5.87或超過5.87，來區(qū)分反應(yīng)細(xì)胞050%活力減少)與非反應(yīng)性細(xì)胞(〈50%活力減少)。
[0113]圖20.EpCAM+循環(huán)腫瘤細(xì)胞中ro-H71_FITC2的累積:從全血分離的PBMC預(yù)先用I3U-FITC或?qū)φ?PU-FITC9、DMS0、1 μ M/2X 16個細(xì)胞/毫升、4小時)處理。接著細(xì)胞用⑶45、⑶14和EpCAM抗體染色。(A)對細(xì)胞門控以排除死細(xì)胞。接著對活細(xì)胞門控以對比⑶45+細(xì)胞測定EpCAM+。通過進(jìn)一步以FSC，針對⑶14，對⑶45+細(xì)胞門控，將單核細(xì)胞從分析排除。(B)展示⑶45+⑶14-細(xì)胞(藍(lán)色)和EpCAM+細(xì)胞(紅色)的PU-FITC中值熒光強(qiáng)度(MFI)的直方圖。EpCAM+細(xì)胞中藥物的累積計算為減去DMSO和PU-FITC9對照(用作非特異性和背景結(jié)合對照)的值后MFIEpCAM+/MFI⑶45+⑶14-(循環(huán)腫瘤細(xì)胞/白血球)的比率。
[0114]圖21.展示不同Lyl克隆對PU-H71-FITC2的吸收并且表示為中值熒光強(qiáng)度。這些細(xì)胞對HSP90抑制劑的敏感性與其對標(biāo)記的ro-H71的吸收有關(guān)。這些腫瘤細(xì)胞中總腫瘤HSP90的表達(dá)通過蛋白質(zhì)印跡法來測量(插圖)。
[0115]圖22 (a-c).胰腺癌細(xì)胞中TO-H71結(jié)合和毒性的相關(guān)性。(A)活細(xì)胞中的結(jié)合；將胰腺癌細(xì)胞(I X 16個細(xì)胞)用PUFITC2 (I μ Μ)或?qū)φ誟TEG-FITC (I μ Μ)或DMS0]處理6小時。將細(xì)胞用FACS緩沖液(PBS、0.05%FBS)洗滌兩次，并且在分析前在室溫下在FACS緩沖液中用1μ g/ml DAPI(英杰公司(Invitrogen))染色。通過流式細(xì)胞術(shù)(LSR-1I，碧迪生物科學(xué)公司(BD B1sciences))獲得表示PU-H71-熒光衍生物結(jié)合的來自活細(xì)胞(DAPI陰性)的熒光強(qiáng)度，并且通過FlowJo軟件(俄勒R州亞什蘭的樹星公司(Tree Star, Ashland, OR))分析。值表示減去DMSO和TEG-FITC對照的平均熒光強(qiáng)度。(B)毒性:將胰腺癌細(xì)胞(I X 16個細(xì)胞)用PU-FITC2 (ΙμΜ)處理48小時。將細(xì)胞用FACS緩沖液(PBS、0.05%FBS)洗滌兩次，并且在室溫下在FACS緩沖液中用I μ g/ml DAPI (英杰公司)染色并通過流式細(xì)胞術(shù)(LSR-1I，碧迪生物科學(xué)公司)獲得。值表示相對于來自DMSO對照的值歸一化的活細(xì)胞(DAPI陰性)％。(C)相關(guān)分析；從A和B中獲得的MFI和毒性分別在x和y軸上繪圖并且進(jìn)行相關(guān)線性回歸分析。
[0116]圖23.(A) PUH71-FITC2 與白血病干細(xì)胞(LSC，CD34+CD38_CD45dim)的結(jié)合。將原代AML樣品與I μ M PU-H71-FITC2在37°C下一起培育4小時。細(xì)胞用CD34、CD38、CD45和7-AAD染色，接著進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。PU-H71與LSC的結(jié)合顯示為活細(xì)胞(7-AAD陰性)中的平均熒光強(qiáng)度(MFI)。(B)在用ΙμΜ PUH71處理48小時后LSC相對于來自三個原代AML樣品的未經(jīng)處理對照的活力百分比。細(xì)胞在膜聯(lián)蛋白V和7-AAD染色前用⑶45、⑶34和⑶38染色。LSC活力通過流式細(xì)胞術(shù)來測量并且確定為⑶45dim⑶34+⑶38-門的膜聯(lián)蛋白V-/7AAD-百分比。
[0117]圖24.腫瘤的不同的[124I]-PU_H71吸收指示其“致癌HSP90”含量有差異，因此其對HSP90療法的反應(yīng)有差異。若干乳癌患者中[124I]-PU-H71注射后24小時的[124I]-PU-H7IPET影像測量為最大標(biāo)準(zhǔn)化吸收值(SUVmax)。BC=乳癌。TNBC-三陰性BC。
[0118]圖25.如通過PET測定，在投予[124I]-PU_H71后，對HSP90抑制療法起反應(yīng)的選定數(shù)目的患者的腫瘤:肌肉SUV比率。這些患者中，腫瘤:肌肉SUV隨時間推移而增加。呈現(xiàn)針對若干陽性和陰性腫瘤平均的值。
[0119]圖26.患有套細(xì)胞淋巴瘤的患者的FDG/CT和[124I]-PU_H71PET/CT?；颊哒故驹谧⑸鋄124I]-PU-H71后30分鐘清晰可見病變。在后期(3.5-24小時和24小時以上)在此腫瘤中未看見[124I]-PU-H71吸收。
[0120]圖27.兩個指示的淋巴結(jié)(LN)中復(fù)發(fā)性乳癌患者的[124I]-PU_H71PET/CT。對[124I]-PU-H71注射后若干時間(0.1,0.4,0.6,3.5和21.4小時)的PET定量，并且對于10mg/m2的PU-H71的投予劑量，將針對[124I]-PU-H71獲得的SUVmax數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)變?yōu)镠SP90i濃度。還計算在O到24小時的時間內(nèi)兩個腫瘤對ro-H71的暴露并且表示為曲線下面積(AUC)。CT (左)、PU-PET/CT (中間)和FDG-PET/CT聯(lián)合(右)經(jīng)軸影像顯示在一個患病淋巴結(jié)而不是在另一個中的[124I]-PU-H71-親合力，表明氣管支氣管左前角淋巴結(jié)(TAALN)中的病變對HSP90療法起反應(yīng)的可能性低于氣管支氣管左角LN (TALN)0
[0121]圖28.用1241-PU_H71PET對三陰性乳癌患者成像。在注射后20分鐘，吸收在肺腫塊(左箭頭)和骨頭病變(右箭頭)中顯著(A)，但在24小時，僅在肺病變中看見吸收(B)。肺和骨頭腫瘤都通過CT和FDG-掃描確認(rèn)(C)?；颊唛_始用HSP90抑制劑STA-9090處理。HSP90抑制劑處理后二十天，如通過CT和FDG-PET兩者證明，肺而不是骨頭病變的尺寸明顯下降(D)。
[0122]圖29.氣管旁淋巴結(jié)中轉(zhuǎn)移性HER2乳癌患者的[124I]-PU-H71PET/CT。[124I]-PU-H71后或[124I]-PU-H71與10mg/m2PU_H71共注射后的指示時間的PET影像測量為最大標(biāo)準(zhǔn)化吸收值(SUVmax)。對于10mg/m2的PU-H71的投予劑量，將針對[124I]-PU-H71獲得的SUV數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)變?yōu)镠SP90i濃度。還計算在O到48小時的時間內(nèi)兩個腫瘤對PU-H71的暴露并且表示為曲線下面積(AUC)。在共注射[124I]-PU-H71/PU-H71后如從[124I]-PU-H7IPET估計或如從[124I]-PU-H71PET測定的PU-H71的腫瘤濃度(以微摩爾值為單位)是相當(dāng)?shù)摹?br> [0123]圖30.[124I]-PU-H71PET是一種用于HSP90抑制劑的非侵入性分析。(a)PU_H71和[124I]-PU-H71的化學(xué)結(jié)構(gòu)。(b) MDA-MB-468腫瘤負(fù)載小鼠中[124I]-PU-H71的代表性PET掃描。腫瘤的位置由紅色箭頭指示。(c)投予后指示時間的[124I]-PU-H71腫瘤對器官活性濃度比率。(d) MDA-MB-468腫瘤和血漿(n=5)中[mI]_PU_H71的生物學(xué)分布。腫瘤-S和腫瘤-L分別是小的和大的腫瘤。(插圖)使用如在GraphPad Prism中實施的線性回歸曲線擬合，分析PU-H71從腫瘤的24到140小時緩慢終末清除期。
[0124]圖31.[124I]-PU_H71PET準(zhǔn)確地預(yù)測腫瘤中治療有效PU-H71濃度的遞送。(a)預(yù)測的PU-H71腫瘤分布基于由[124I]-PU-H71PET產(chǎn)生的平均％ID/g (下圖)。投予指示ro_H71劑量后指示時間的預(yù)測腫瘤濃度(上圖)。(b)在投予75mg/kg藥劑后的腫瘤TO-H71濃度(n=5)如通過[124I]-PU-H7IPET 預(yù)測，并且在共注射[124I]-PU-H71 和 PU-H71 后由 LC-MS/MS測定并由[124I]-PU-H71PET測定。(c、d)以指示劑量投予TO-H71并在投予后24小時分析的MDA-MB-468腫瘤(c )以及用指示濃度的ro-H71處理24小時的MDA-MB-468細(xì)胞(d)的代表性蛋白質(zhì)印跡分析。印跡(n=3)由密度測定法定量并且蛋白質(zhì)水平的變化相對于TO-H71的濃度繪圖(右圖)。(e、f)在示蹤量的[124I]-PU-H71與指示劑量的PU-H71混合進(jìn)行共投予后如通過[124I]-PU-H71PET預(yù)測的投予后24小時標(biāo)靶占有率。
[0125]圖32.[124I]-PU-H71PET預(yù)測HSP90療法的有效劑量方案的設(shè)計。(a)當(dāng)以一周3次(星期一-星期三-星期五，星期六/星期天中斷)的時程以指示劑量投予2周時基于由[124I]-PU-H7IPET獲得的平均腫瘤活性濃度(％ID/g)預(yù)測的PU-H71腫瘤分布。(插圖)腫瘤中PU-H71的AUC使用GraphPad Prism計算。(b)用指示劑量的PU-H71處理48小時的MDA-MB-468細(xì)胞的活力通過溴化乙錠/吖啶橙染色分析(上圖)。通過[124I]-PU-H71PET估計的誘發(fā)的腫瘤細(xì)胞凋亡預(yù)測指示的平均和最小PU-H71腫瘤濃度。(c)以一周3次的時程向MDA-MB-468腫瘤負(fù)載小鼠(n=5)腹膜內(nèi)投予指示劑量的TO-H71。腫瘤體積和小鼠重量在指示的處理時間內(nèi)監(jiān)測。(d)以一周3次的時程向MDA-MB-468腫瘤負(fù)載小鼠(n=5)腹膜內(nèi)投予指示劑量的PU-H71。腫瘤體積和小鼠重量在指示的處理時間內(nèi)監(jiān)測。(e)當(dāng)以一周3次(星期一-星期三-星期五，星期六/星期天中斷)的時程以指示劑量投予時，基于由[124I]-PU-H7IPET獲得的平均腫瘤活性濃度(％ID/g)預(yù)測的PU-H71腫瘤分布。(f)在星期四，即上次劑量投予后24小時處死的經(jīng)媒劑(對照)和TO-H71 (5mg/kg)處理的腫瘤的蛋白質(zhì)印跡分析。針對每一腫瘤指示如由LC-MS/MS測定的PU-H71腫瘤濃度。(f)來自圖(d)的數(shù)據(jù)分析(n=5)。
[0126]圖33.[124I]-PU-H7IPET預(yù)測HSP90療法的有效時程方案的設(shè)計。(a)當(dāng)以指示的時程以75mg/kg投予時，基于由[124I] -PU-H7IPET獲得的平均腫瘤活性濃度(％ID/g)的預(yù)測的PU-H71腫瘤分布。(b)如從體外分析預(yù)測，通過指示的平均和最小PU-H71腫瘤濃度估計的誘發(fā)的腫瘤細(xì)胞凋亡。(c)以指示的時程向MDA-MB-468腫瘤負(fù)載小鼠(n=5)腹膜內(nèi)投予PU-H71 (75mg/kg)。腫瘤體積和小鼠重量在指示的處理時間內(nèi)監(jiān)測。以一周I次的時程，在星期四給藥，在上次劑量投予后24小時處死，以及在星期四給藥，在上次劑量投予后96小時處死得到的經(jīng)PU-H71 (75mg/kg)處理的腫瘤的蛋白質(zhì)印跡(d)和LC-MS/MS分析(e)。對照；僅媒劑處理的小鼠。
[0127]圖34.針對患有轉(zhuǎn)移到肺的疾病的胰腺患者和指示的淋巴結(jié)，如通過I3U-PET預(yù)測的腫瘤對PU-H71的暴露。腫瘤濃度是基于20mg/m2的投予劑量計算。血漿暴露也以紅色展示。時間O到192小時的計算的AUC ( μ M-h)列表在右側(cè)。
[0128]圖35.肺中患有復(fù)發(fā)性疾病的胰腺癌患者的[124I]-PU_H71PET/CT。對[124I]-PU-H71注射后指示時間(48和196小時，左圖)的PET影像定量，并且對于ro_H71的指示投予劑量，將針對[124I]-PU-H71獲得的SUV數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤中的PU-H71濃度。還計算以一周兩次(星期二和星期五)的時程和20、60和80mg/m2的投予劑量(右上圖和下圖)處理兩周的兩個腫瘤(一個在左肺并且另一個在右肺門LN)在O到336小時的時間內(nèi)對PU-H71的暴露，并且表示為曲線下面積(AUC)并且為平均腫瘤濃度。
[0129]圖36.圖A展示如從PU-PET中獲得的在乳癌患者的腫瘤中O到72小時內(nèi)的1241-PU-H71的生物學(xué)分布。數(shù)據(jù)用以模擬當(dāng)在周末中斷下一周兩次持續(xù)兩周，在周末中斷下一周三次持續(xù)兩周，在周末中斷下一周一次持續(xù)兩周，以及在周末中斷下一周五次持續(xù)兩周給予時腫瘤對10mg/m2的投予劑量的暴露。
[0130]圖37.[124I]-PU-H7IPET預(yù)測對HSP90療法的反應(yīng)程度。(a)當(dāng)以指示劑量和指示時程投予時ro-H71對腫瘤HSP90位點的預(yù)期平均占有率。(b、c)在GraphPad Prism中分析腫瘤HSP90位點占有率與觀測到的抗腫瘤作用的相關(guān)性。
[0131]圖38.1241-PU-H71PET分析在HSP90抑制劑的臨床開發(fā)中的用途:(a)測定實現(xiàn)有效腫瘤濃度所需的HSP90抑制劑的劑量、選擇適于HSP90療法的患者和設(shè)計有效的劑量和時程方案；(b)分析遞送到腫瘤的藥物的實際濃度并且預(yù)測HSP90療法的臨床結(jié)果；以及
(c)測定“最大腫瘤劑量”。CR=完全反應(yīng)，PR=部分反應(yīng)，NR=無反應(yīng)。
[0132]圖39.MDA-MB-468 異種移植 TNBC 小鼠中[124I]-PU-DZ13 和[124I]-PU-H71 的體內(nèi)PET成像。在R4或FOCuS120專用小動物PET掃描器(田納西州諾克斯維爾的康科德微系統(tǒng)公司(Concord Microsystems, Inc., Knoxville, TN))上進(jìn)行 PET 成像；在專用小動物 CT 掃描器(田納西州橡樹嶺的愛姆替科公司(ImTek, Inc.，Oak Ridge, TN))上,使用專用立體定向約束裝置進(jìn)行分開的解剖成像。CT和PET影像數(shù)據(jù)集的最大強(qiáng)度投影(MIP)在解剖學(xué)上記錄，并且使用PET和CT數(shù)據(jù)的阿爾法透明摻合產(chǎn)生重疊影像。
[0133]圖40.BC的情況展示對TO-H71的劑量依賴性反應(yīng)。當(dāng)腫瘤對TO-H71高度敏感時H&E染色的載片顯示含有核濃縮細(xì)胞(指示早期細(xì)胞凋亡)與核破裂細(xì)胞(表示晚期細(xì)胞凋亡)的細(xì)胞凋亡顯著區(qū)域。(A)對用指示濃度的PU-H71處理48小時的TNBC樣品中細(xì)胞凋亡/細(xì)胞死亡定量并且相對于PU-H71的濃度繪圖。細(xì)胞凋亡與壞死性/晚期細(xì)胞凋亡細(xì)胞都進(jìn)行計數(shù)并且添加到如y軸上描繪的細(xì)胞凋亡％。注意，在三個敏感性群組中的一連串情況(最陡峭的上部曲線，最敏感，LNl5和LN16 ；中間曲線，敏感，PT12、PT17、PT25、PT28和LNlO ;以及下部曲線，不太敏感、PT10、PT15、PT16和PT30)。有趣地，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移展示在同等劑量下比原發(fā)性腫瘤敏感性高。PT=原發(fā)性腫瘤，LN=淋巴結(jié)。對TO-H71最敏感的腫瘤也針對P-Akt高度染色。(B)與(A)相同，使用來自用PU-H71處理24或48小時的HER2+、TNBC和ER+BC患者的樣品。
[0134]圖41.對HSP90抑制的細(xì)胞凋亡敏感性與細(xì)胞存活對AKT-和STAT-通路而不是MEK-通路的依賴性有關(guān)。(A)、(B)代表性AML細(xì)胞與指示濃度的HSP90、AKT、JAK和MEK抑制劑一起培育指示的時間，并且使用吖啶橙/溴化乙錠方法評估細(xì)胞凋亡。數(shù)據(jù)與從多個重復(fù)實驗(η >3)中獲得的數(shù)據(jù)一致。點，平均值；棒，標(biāo)準(zhǔn)偏差。(C)來自僅僅用AKT1、MEKi和JAKi處理72小時的細(xì)胞的細(xì)胞凋亡％值相對于在HSP90抑制劑處理后獲得的值繪圖，并且如Prism4.0中實施，進(jìn)行線性回歸分析。
[0135]圖42.具有最高水平P-STAT5的AML原代細(xì)胞也對ro_H71最敏感。(A)胚細(xì)胞中磷酸化STAT5水平(⑶45dim門控)表示為三個不同原代AML樣品的平均熒光強(qiáng)度(MFI )。Stat5的磷酸化水平通過流式細(xì)胞術(shù)評估。(B)在用I μ M PUH71處理48小時后AML胚細(xì)胞相對于來自三種原代AML樣品的未經(jīng)處理對照的活力百分比。細(xì)胞在膜聯(lián)蛋白V和7-AAD染色前用CD45染色。AML胚細(xì)胞的活力通過流式細(xì)胞術(shù)來測量并且確定為針對AML胚細(xì)胞的⑶45dim對比SSC門的膜聯(lián)蛋白V-/7AAD-百分比。
[0136]圖43.向8-10月齡的3xTg小鼠投予(A)75mg/kg或(B)指示劑量的HSP90抑制劑PU-HZ151并且在投予后24小時，在海馬區(qū)(在此AD模型中受折磨的腦部區(qū))中測量H)標(biāo)記物HSP70。當(dāng)HSP90被抑制時誘發(fā)HSP70，并且其誘發(fā)指示治療水平的HSP90抑制劑遞送到相關(guān)的腦部區(qū)域。(C)在投予50mg/kg PU-HZ151后通過LC-MS/MS測定指示的腦部區(qū)域和血漿中HSP90抑制劑的水平。在單次腹膜內(nèi)注射后不同時間的Hsp90抑制劑水平以微摩爾單位展示。腦暴露也測量為曲線下面積(AUC)。
[0137]圖44.PU-H71對HSP90具有選擇性。(A)若干HSP90抑制劑珠粒下拉物的考馬斯染色凝膠(Coomassie stained gel)。將K562溶解產(chǎn)物(60 μ g)與25 μ L指示珠粒一起培育。用指示的緩沖液洗滌后，下拉物中的蛋白質(zhì)施加于SDS-PAGE凝膠。(B)PU-H71( 10 μ Μ)在scanMAX篩(阿姆比特公司(Ambit))中針對359種激酶測試。呈現(xiàn)ro_H71的TREEspot?相互作用圖。僅SNARK (NUAK家族SNFl-樣激酶2)(激酶樹上的紅點)表現(xiàn)為靶向小分子的潛在低親和力激酶。

【具體實施方式】
[0138]5.1.作為腫瘤特異性生物標(biāo)記物的致癌HSP90
[0139]本發(fā)明證明了不僅僅是由HSP90表達(dá)決定的此具體“致癌HSP90”物質(zhì)的豐度預(yù)測對HSP90抑制療法的敏感性并且因此是HSP90療法的生物標(biāo)記物。本發(fā)明還證明了鑒別和測量腫瘤內(nèi)此致癌HSP90物質(zhì)的豐度預(yù)測對HSP90療法的反應(yīng)。
[0140]在以下部分中，展示HSP90抑制劑PU-H71靶向腫瘤富集的HSP90復(fù)合物和以親和力捕獲HSP90依賴性致癌客戶蛋白?；衔颰O-H71在以引用的方式并入本文中的美國專利第7，834，181號中公開。TO-H71具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu):
[0141]

【權(quán)利要求】
1.一種用于確定腫瘤是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟: (a)使所述腫瘤或含有來自所述腫瘤的細(xì)胞的樣品與優(yōu)先結(jié)合于腫瘤或腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑接觸； (b)測量結(jié)合于所述腫瘤或所述樣品中所述腫瘤細(xì)胞的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的量；以及 (C)將步驟(b)中測量的結(jié)合于所述腫瘤或所述樣品中所述腫瘤細(xì)胞的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的量與結(jié)合于參考的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的量比較； 其中步驟(b)中測量的結(jié)合于所述腫瘤或所述腫瘤細(xì)胞的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的量比所述參考量大表明所述腫瘤將可能對所述HSP90抑制劑起反應(yīng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(b)中測量的結(jié)合于所述腫瘤或所述腫瘤細(xì)胞的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的量與所述參考量相比的比率越大，對所述HSP90抑制劑療法的所述可能反應(yīng)的程度越大。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(a)中測量的結(jié)合于所述腫瘤或所述腫瘤細(xì)胞的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的量越大，對所述HSP90抑制劑療法的所述可能反應(yīng)的程度越大。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中結(jié)合于正常細(xì)胞的所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的所述參考量是結(jié)合于含有來自所述腫瘤的細(xì)胞的所述樣品中的正常細(xì)胞的所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中結(jié)合于正常細(xì)胞的所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的所述參考量是結(jié)合于參考樣品中的正常細(xì)胞的所述標(biāo)記的HSP90抑制劑的預(yù)定量。
6.根據(jù)權(quán)利要求1到5中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑經(jīng)124I或131I標(biāo)記。
7.根據(jù)權(quán)利要求1到6中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述腫瘤與選自由以下組成的群組的癌癥有關(guān):結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、基底細(xì)胞癌、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、膀胱癌、前列腺癌、包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌在內(nèi)的肺癌、乳癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、脊髓增生性病癥、包括胃腸道基質(zhì)腫瘤在內(nèi)的胃腸道癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽囊癌、肛門癌、包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤在內(nèi)的腦腫瘤、包括濾泡性淋巴瘤和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤在內(nèi)的淋巴瘤以及包括卵巢癌、宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌在內(nèi)的婦科癌癥。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述癌癥是乳癌。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述癌癥是肺癌。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述癌癥是淋巴瘤。
11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述癌癥是胃癌。
12.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述癌癥是胰腺癌。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述腫瘤細(xì)胞是腫瘤干細(xì)胞。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(a)中所述腫瘤進(jìn)行接觸并且存在于個體中。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(a)中所述含有腫瘤細(xì)胞的樣品進(jìn)行接觸并且是組織樣品。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是待作為療法投予的所述HSP90抑制劑的標(biāo)記形式。
17.根據(jù)權(quán)利要求1到16中任一權(quán)利要求所述的方法，其中待作為療法投予的所述HSP90抑制劑是ro-H71或PU-H71的類似物、同系物或衍生物。
18.根據(jù)權(quán)利要求1到17中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是TO-H71或PU-H71的類似物、同系物或衍生物的形式。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是PU-H71的形式。
20.根據(jù)權(quán)利要求1到19中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是[124I]-PU-H71。
21.一種用于確定實體或液體腫瘤是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟: (a)向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于所述腫瘤中或所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑； (b)在步驟(a)中所述投予后一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤對所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的吸收； (c)在步驟(a)中所述投 予后所述一個或一個以上時間點測量所述患者的預(yù)定健康組織對所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的吸收； (d)計算步驟(b)中在多個時間點測量的所述吸收與步驟(C)中在相同時間點測量的所述吸收的比率；以及 (e)確定所述腫瘤將對使用所述HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的所述可能性， 其中在一個或多個時間點步驟(d)中計算的比率超過2指示所述腫瘤將可能起反應(yīng)。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中在一個或多個時間點步驟(d)中計算的比率超過2.5指示所述腫瘤將可能起反應(yīng)。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中在一個或多個時間點步驟(d)中計算的比率超過3指示所述腫瘤將可能起反應(yīng)。
24.根據(jù)權(quán)利要求21到23中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述腫瘤與選自由以下組成的群組的癌癥有關(guān):結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、基底細(xì)胞癌、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、膀胱癌、前列腺癌、包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌在內(nèi)的肺癌、乳癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、包括胃腸道基質(zhì)腫瘤在內(nèi)的胃腸道癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽囊癌、肛門癌、包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤在內(nèi)的腦腫瘤、包括濾泡性淋巴瘤和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤在內(nèi)的淋巴瘤以及包括卵巢癌、宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌在內(nèi)的婦科癌癥。
25.根據(jù)權(quán)利要求21到24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述癌癥是乳癌、淋巴瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、胃癌或胰腺癌。
26.根據(jù)權(quán)利要求21到25中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是待作為療法投予的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式。
27.根據(jù)權(quán)利要求21到26中任一權(quán)利要求所述的方法，其中待作為療法投予的所述HSP90抑制劑是PU-H71或PU-H71的類似物、同系物或衍生物。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是ro_H71的放射性標(biāo)記形式。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述PU-H71的放射性標(biāo)記形式是[124I]-PU-H71。
30.一種用于確定可成像腫瘤是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟: (a)向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于所述腫瘤中或所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑； (b)在步驟(a)中所述投予后4小時以上的一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤對所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的吸收， 其中相對于所述腫瘤周圍的健康組織中的吸收，在所述一個或一個以上時間點所述抑制劑的吸收表明所述腫瘤將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中在步驟(a)中投予后8小時或8小時以上的一個或一個以上時間點測量放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的所述吸收。
32.根據(jù)權(quán)利要求30或權(quán)利要求31所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是待作為療法投予的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式。
33.根據(jù)權(quán)利要求30到32中任一權(quán)利要求所述的方法，其中待作為療法投予的所述HSP90抑制劑是ro-H71或PU-H71的類似物、同系物或衍生物。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是TO-H71的放射性標(biāo)記形式。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述PU-H71的放射性標(biāo)記形式是[124I]-PU-H71。
36.根據(jù)權(quán)利要求30到35中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述腫瘤與選自由以下組成的群組的癌癥有關(guān):結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、基底細(xì)胞癌、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、膀胱癌、前列腺癌、包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌在內(nèi)的肺癌、乳癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、包括胃腸道基質(zhì)腫瘤在內(nèi)的胃腸道癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽囊癌、肛門癌、包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤在內(nèi)的腦腫瘤、包括濾泡性淋巴瘤和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤在內(nèi)的淋巴瘤以及包括卵巢癌、宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌在內(nèi)的婦科癌癥。
37.根據(jù)權(quán)利要求30到36中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述癌癥是乳癌、淋巴瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、胃癌或胰腺癌。
38.一種用于確定可成像腫瘤是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟: (a)向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于所述腫瘤中或所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑； (b)在步驟(a)中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑投予后2個小時或2個小時以上的一個或一個以上時間點通過PET目視檢查所述放射性標(biāo)記的抑制劑在所述腫瘤中或在所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中的吸收， (c)在一個或一個以上時間點將步驟(b)中獲得的PET影像與在所述腫瘤周圍的健康組織中獲得的PET影像比較； 其中在所述一個或一個以上時間點所述腫瘤中或所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中所述PET影像中的明亮區(qū)域的存在表明所述患者將可能對HSP90抑制療法起反應(yīng)。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述PET影像在步驟(a)投予所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑后4小時或4小時以上的一個或一個以上時間點取得。
40.根據(jù)權(quán)利要求38或權(quán)利要求39所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是待作為療法投予的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式。
41.根據(jù)權(quán)利要求38到40中任一權(quán)利要求所述的方法，其中待作為療法投予的所述HSP90抑制劑是ro-H71或PU-H71的類似物、同系物或衍生物。
42.根據(jù)權(quán)利要 求41所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是TO-H71的放射性標(biāo)記形式。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述PU-H71的放射性標(biāo)記形式是[124I]-PU-H71。
44.根據(jù)權(quán)利要求38到43中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述腫瘤與選自由以下組成的群組的癌癥有關(guān):結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、基底細(xì)胞癌、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、膀胱癌、前列腺癌、包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌在內(nèi)的肺癌、乳癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、包括胃腸道基質(zhì)腫瘤在內(nèi)的胃腸道癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽囊癌、肛門癌、包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤在內(nèi)的腦腫瘤、包括濾泡性淋巴瘤和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤在內(nèi)的淋巴瘤以及包括卵巢癌、宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌在內(nèi)的婦科癌癥。
45.根據(jù)權(quán)利要求38到44中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述癌癥是乳癌、淋巴瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、胃癌或胰腺癌。
46.一種用于確定表達(dá)致癌HSP90的特定腫瘤是否將可能對使用界定劑量的HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟: (a)向患有所述腫瘤的患者投予優(yōu)先結(jié)合于所述腫瘤中或所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式； (b)在步驟(a)中所述投予后一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤對所述HSP90抑制劑的所述放射性標(biāo)記形式的吸收； (c)基于步驟(b)中在所述一個或一個以上時間點測量的所述吸收,針對所述HSP90抑制劑的所述界定劑量，計算在所述一個或一個以上時間點中的每一個在所述患者的腫瘤中存在的所述HSP90抑制劑的濃度；以及 (d)將步驟(c)中計算的所述腫瘤對所述HSP90抑制劑的暴露與在所述一個或一個以上時間點所述腫瘤中存在的使所述HSP90抑制劑有效治療所述腫瘤所需的對所述HSP90抑制劑的參考暴露比較， 其中如果步驟(c)中計算的所述腫瘤對所述HSP90抑制劑的暴露將等于或超過所述參考暴露，那么所述腫瘤將可能對使用所述界定劑量的所述HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)。
47.一種用于確定可成像腫瘤是否將可能對使用界定劑量的HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含以下步驟: (a)向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于所述腫瘤中或所述腫瘤的腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式； (b)在步驟(a)中所述投予后一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤對所述HSP90抑制劑的所述放射性標(biāo)記形式的吸收；(C)基于步驟(b)中在所述一個或一個以上時間點測量的所述吸收,針對所述HSP90抑制劑的所述界定劑量，計算在所述一個或一個以上時間點中的每一個在所述患者的腫瘤中存在的所述HSP90抑制劑的濃度；以及 (d)將步驟(c)中計算的所述HSP90抑制劑的濃度與在所述一個或一個以上時間點在所述腫瘤中存在的使所述HSP90抑制劑有效治療所述腫瘤所需的所述HSP90抑制劑的參考濃度比較， 其中如果步驟(c)中計算的所述HSP90抑制劑的濃度將等于或超過所述參考濃度，那么所述腫瘤將可能對使用所述界定劑量的所述HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)。
48.根據(jù)權(quán)利要求46或權(quán)利要求47所述的方法，其中所述PU-H71的放射性標(biāo)記形式是[124I]-PU-H71。
49.根據(jù)權(quán)利要求46到48中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述腫瘤與選自由以下組成的群組的癌癥有關(guān):結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、基底細(xì)胞癌、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、膀胱癌、前列腺癌、包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌在內(nèi)的肺癌、乳癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、包括胃腸道基質(zhì)腫瘤在內(nèi)的胃腸道癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽囊癌、肛門癌、包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤在內(nèi)的腦腫瘤、包括濾泡性淋巴瘤和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤在內(nèi)的淋巴瘤以及包括卵巢癌、宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌在內(nèi)的婦科癌癥。
50.一種用于確定使用HSP90抑制劑的療法對可成像腫瘤投予的有效劑量和頻率的方法，其包含以下步驟: (a)向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于腫瘤或腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的所述HSP90抑制劑的放射性 標(biāo)記形式； (b)在步驟(a)中所述投予后一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤對所述HSP90抑制劑的所述放射性標(biāo)記形式的吸收；以及 (c)基于步驟(b)中在所述一個或一個以上時間點測量的所述吸收，計算在所述一個或一個以上時間點中的每一個維持所述腫瘤中有效治療所述腫瘤的所述HSP90抑制劑的濃度所需的投予劑量和頻率，由此確定使用所述HSP90抑制劑的療 法對于癌癥患者投予的有效劑量和頻率。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中所述腫瘤與選自由以下組成的群組的癌癥有關(guān):結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、基底細(xì)胞癌、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、膀胱癌、前列腺癌、包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌在內(nèi)的肺癌、乳癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、包括胃腸道基質(zhì)腫瘤在內(nèi)的胃腸道癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽囊癌、肛門癌、包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤在內(nèi)的腦腫瘤、包括濾泡性淋巴瘤和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤在內(nèi)的淋巴瘤以及包括卵巢癌、宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌在內(nèi)的婦科癌癥。
52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述癌癥是乳癌、淋巴瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、胃癌或胰腺癌。
53.根據(jù)權(quán)利要求50到52中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是待作為療法投予的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式。
54.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中待作為療法投予的所述HSP90抑制劑是ro_H71或PU-H71的類似物、同系物或衍生物。
55.根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是TO-H71的放射性標(biāo)記形式。
56.根據(jù)權(quán)利要求50到55中任一權(quán)利要求所述的方法,其中所述PU-H71的放射性標(biāo)記形式是[124I]-PU-H71。
57.一種用于確定癌癥患者中可成像腫瘤中存在的HSP90抑制劑的濃度的方法，其包含以下步驟: (a)向所述患者共投予預(yù)定量的所述HSP90抑制劑和預(yù)定量的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式，所述HSP90抑制劑優(yōu)先結(jié)合于腫瘤或腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式； (b)在步驟(a)中所述共投予后一個或一個以上預(yù)定時間點周期性地測量所述患者的腫瘤對所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的吸收；以及 (c)基于步驟(b)中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的所述吸收的測量，確定在任何所述時間點所述腫瘤中存在的所述HSP90抑制劑的濃度。
58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述腫瘤與選自由以下組成的群組的癌癥有關(guān):結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、基底細(xì)胞癌、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、膀胱癌、前列腺癌、包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌在內(nèi)的肺癌、乳癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、包括胃腸道基質(zhì)腫瘤在內(nèi)的胃腸道癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽囊癌、肛門癌、包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤在內(nèi)的腦腫瘤、包括濾泡性淋巴瘤和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤在內(nèi)的淋巴瘤以及包括卵巢癌、宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌在內(nèi)的婦科癌癥。
59.根據(jù)權(quán)利要求58所述的方法，其中所述癌癥是乳癌、淋巴瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、胃癌或胰腺癌。
60.根據(jù)權(quán)利要求57到59中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是待作為療法投予的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式。
61.根據(jù)權(quán)利要求60所述的方法，其中待作為療法投予的所述HSP90抑制劑是ro-H71或PU-H71的類似物、同系物或衍生物。
62.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是ro_H71的放射性標(biāo)記形式。
63.根據(jù)權(quán)利要求57到62中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述TO-H71的放射性標(biāo)記形式是[124I]-PU-H71。
64.一種用于確定癌癥患者中可成像腫瘤對使用HSP90抑制劑的療法的反應(yīng)的方法，其包含以下步驟: (a)在所述患者接收所述HSP90抑制劑作為療法的時期內(nèi)一個或一個以上時間點向所述患者投予優(yōu)先結(jié)合于腫瘤或腫瘤細(xì)胞中存在的HSP90的腫瘤特異性形式的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式；以及 (b)在步驟(a)中所述投予后所述一個或一個以上時間點測量所述患者的腫瘤中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的濃度；以及 (c)將步驟(b)中測量的所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑的濃度與有效治療所述腫瘤所需的所述HSP90抑制劑的最小濃度比較，其中測量的濃度超過治療所述腫瘤所需的最小值表明所述患者可能對使用所述HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)。
65.根據(jù)權(quán)利要求64所述的方法，其中所述腫瘤與選自由以下組成的群組的癌癥有關(guān):結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、基底細(xì)胞癌、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、膀胱癌、前列腺癌、包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌在內(nèi)的肺癌、乳癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、包括胃腸道基質(zhì)腫瘤在內(nèi)的胃腸道癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽囊癌、肛門癌、包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤在內(nèi)的腦腫瘤、包括濾泡性淋巴瘤和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤在內(nèi)的淋巴瘤以及包括卵巢癌、宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌在內(nèi)的婦科癌癥。
66.根據(jù)權(quán)利要求65所述的方法，其中所述癌癥是乳癌、淋巴瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、胃癌或胰腺癌。
67.根據(jù)權(quán)利要求64到66中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是待作為療法投予的所述HSP90抑制劑的放射性標(biāo)記形式。
68.根據(jù)權(quán)利要求64到67中任一權(quán)利要求所述的方法，其中待作為療法投予的所述HSP90抑制劑是ro-H71或PU-H71的類似物、同系物或衍生物。
69.根據(jù)權(quán)利要求68所述的方法，其中所述放射性標(biāo)記的HSP90抑制劑是ro_H71的放射性標(biāo)記形式。
70.根據(jù)權(quán)利要求64到69中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述ro-H71的放射性標(biāo)記形式是[124I]-PU-H71。
71.一種用于確定患者中存在的人類癌癥是否將可能對使用HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的方法，其包含: (a)獲得含有來自所述患者的癌癥的細(xì)胞的樣品，所述細(xì)胞僅僅表達(dá)HSP90蛋白質(zhì)或除HSP70蛋白質(zhì)外還表達(dá)HSP 90蛋白質(zhì)； (b)針對步驟(a)中獲得的所述樣品中存在的所述細(xì)胞，評估至少一個以下參數(shù)的存在:活化AKT通路、PTEN腫瘤抑制因子功能或表達(dá)的缺陷、活化STAT5通路或Bcl_xL蛋白質(zhì)表達(dá)；以及 (c)將步驟(b)中獲得的所述評估與步驟(b)中評估的相同參數(shù)對于來自對使用所述HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)的一個或一個以上癌癥患者的人類癌細(xì)胞的預(yù)定參考評估比較，以便由此確定所述患者的癌癥是否將可能對使用所述HSP90抑制劑的療法起反應(yīng)。
72.根據(jù)權(quán)利要求71所述的方法，其中所述人類癌癥是乳癌。
73.根據(jù)權(quán)利要求71所述的方法，其中所述癌細(xì)胞與急性骨髓白血病有關(guān)。
74.一種具有以下化學(xué)式的化合物，
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
75.一種具有以下化學(xué)式的化合物，
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
76.一種具有以下化學(xué)式的化合物，
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
77.一種具有以下化學(xué)式的化合物，
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
78.—種具有以下化學(xué)式的化合物，
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
79.一種醫(yī)藥組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求74到78中任一權(quán)利要求所述的化合物。
80.一種治療患有HSP90依賴性腫瘤的人類患者的方法，其包含向所述患者投予足夠量的具有下式的化合物:
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽，以提供在所述化合物投予后約16小時到約24小時之間的至少一個時間點所述患者的腫瘤中所述致癌HSP90至少15%的占有率。
81.根據(jù)權(quán)利要求80所述的方法，其包含投予在10小時與24小時之間的整個范圍內(nèi)，足以提供所述患者的腫瘤中所述致癌HSP90至少15%的占有率的量到實現(xiàn)所述患者的腫瘤中所述致癌HSP90100%占有率的最小劑量的所述化合物。
82.—種治療患有HSP90依賴性腫瘤的患者的方法，其包含向所述患者投予足夠量的具有下式的化合物:
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽，以在投予后約24小時提供在約0.3 μ M到約7.5 μ M范圍內(nèi)的腫瘤濃度。
83.一種治療患有HSP90依賴性腫瘤的患者的方法，其包含向所述患者投予足夠量的具有下式的化合物:
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽，以在投予后約48小時提供在約0.05 μ M到約3.5 μ M范圍內(nèi)的腫瘤濃度。
84.—種治療患有HSP90依賴性腫瘤的患者的方法,其包含向所述患者投予足夠量的具有下式的化合物:
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽，以在新的治療周期開始后提供約150到約4，000 μ M-h的AUC0_33ai。
85.一種治療患有HSP90依賴性腫瘤的患者的方法，其包含向所述患者投予足夠量的具有下式的化合物:
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽，以在新的治療周期開始后提供約75到約2，000 μ M-h的AUC0_16ffil。
86.一種治療患有HSP90依賴性腫瘤的患者的方法，其包含向所述患者投予足夠量的具有下式的化合物:
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽，以在O與336小時之間提供約0.5μΜ到約7.5μΜ的[PU-H71]avg。
87.一種治療患有HSP90依賴性腫瘤的患者的方法，其包含根據(jù)選自一周一次、一周兩次以及一周兩次接著中斷一周的給藥時程，以約5mg/m2到約250mg/m2范圍內(nèi)的劑量向所述患者靜脈內(nèi)投予足夠量的具有下式的化合物:
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
【文檔編號】G01N33/50GK104081203SQ201280040632
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2012年7月6日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月8日
【發(fā)明者】加布里拉·奇奧斯, 那加瓦拉基肖爾·佩拉塞提, 詹森·S·路易斯, 史蒂文·M·拉爾森, 托尼·塔爾多內(nèi), 瑪麗·L·阿爾波, 艾瑞卡·M·戈梅斯-達(dá)伽馬 申請人:斯隆-凱特林癌癥研究所