用于以原本狀態(tài)觀察生物試樣的利用電子顯微鏡的觀察方法、以及用于該方法的真空下 ...的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種利用電子顯微鏡進(jìn)行觀察的方法、和用于該方法的真空下的蒸發(fā)抑制用組合物、掃描電子顯微鏡及透射電子顯微鏡，使用所述電子顯微鏡能夠在存活的狀態(tài)下觀察生物試樣，并且可以觀察活動(dòng)情況。本發(fā)明的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法包括以下工序：在試樣表面應(yīng)用含有選自兩親性化合物、油脂類及離子液體中的至少1種的蒸發(fā)抑制用組合物形成薄膜，從而利用薄膜覆蓋該試樣的工序；和在顯示裝置上顯示收容于真空下的試樣室的用該薄膜覆蓋的試樣的電子顯微鏡圖像的工序。
【專利說明】用于以原本狀態(tài)觀察生物試樣的利用電子顯微鏡的觀察方法、以及用于該方法的真空下的蒸發(fā)抑制用組合物、掃描電子顯微鏡及透射電子顯微鏡
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及對于掃描電子顯微鏡、透射電子顯微鏡等，用于以原本狀態(tài)觀察生物試樣的利用電子顯微鏡的觀察方法及用于其的在真空下的蒸發(fā)抑制用組合物、掃描電子顯微鏡和透射電子顯微鏡。
【背景技術(shù)】
[0002]為了使用掃描電子顯微鏡和透射電子顯微鏡進(jìn)行試樣觀察，要預(yù)先將試樣置于真空下，因此，有必要賦予試樣以耐真空性和為了獲得圖像而必要的導(dǎo)電性。
[0003]掃描電子顯微鏡的試樣的制備可如下地進(jìn)行:通過預(yù)先對試樣進(jìn)行真空干燥而除去水分后，為了賦予導(dǎo)電性并提高二次電子的產(chǎn)生效率，利用蒸鍍、濺射等方法對導(dǎo)電材料(鉬、碳、金、鈀、鋨等)的試樣表面進(jìn)行包覆。
[0004]對于像金屬、半導(dǎo)體等這樣具有導(dǎo)電性、有耐真空性的材料而言這樣的前處理不是必要，但對于沒有導(dǎo)電性的材料而言通過導(dǎo)電性材料的導(dǎo)電膜覆蓋是必要的。另外，耐真空性等差的材料，即為真空干燥、電子顯微鏡觀察時(shí)在真空中由于電子束照射而變形的材料的情況下，通過導(dǎo)電性材料的導(dǎo)電膜覆蓋也是必要的。
[0005]由于生物/活體試樣含有大量的水分，需要預(yù)先真空干燥的情況較多。因此，有表面的形狀顯著變形的情況，不容易以本身的狀態(tài)用電子顯微鏡觀察存活狀態(tài)。
[0006]凝膠狀物質(zhì)、食品等濕潤試樣的含水狀態(tài)可以使用低真空SEM、冷凍SEM、環(huán)境控制型SEM(ESEM)等在常溫下觀察。根據(jù)這些方法，不限于濕潤試樣，可以在未處理的狀態(tài)下觀察試樣。但是，為了實(shí)施以高倍率的觀察，有必要抽成高真空，試樣的耐真空性或?qū)щ娦砸彩潜匾摹Ｒ虼?，在進(jìn)行生物/活體試樣的觀察時(shí)，不容易得到存活狀態(tài)下的高倍率的成像。
[0007]近年來，提出了使用離子液體的電子顯微鏡觀察方法。專利文獻(xiàn)I和非專利文獻(xiàn)2記載有使用離子液體SEM觀察了濕潤的試樣。關(guān)于細(xì)胞中的應(yīng)用也在非專利文獻(xiàn)2有記載。另外，專利文獻(xiàn)2公開了將離子液體的技術(shù)用于透射電子顯微鏡觀察的方法。
[0008]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0009]專利文獻(xiàn)
[0010]專利文獻(xiàn)1:國際公開W02007 / 083756號(hào)小冊子
[0011]專利文獻(xiàn)2:日本特開2009-266741號(hào)公報(bào)
[0012]非專利文獻(xiàn)
[0013]非專利文獻(xiàn)1:Langmuir, 2011，27，9671-9675
[0014]非專利文獻(xiàn)2:Microsc.Res.Tech.2011,74,415-420

【發(fā)明內(nèi)容】
[0015]發(fā)明要解決的問題
[0016]但是，即便使用環(huán)境321的觀察、利用上述各文獻(xiàn)的方法，也不能得到試樣的本身的狀態(tài)直接在高倍率下的電子顯微鏡圖像。而且對于生物/活體試樣而言，沒有達(dá)到在存活狀態(tài)下電子顯微鏡觀察存活的狀態(tài)。
[0017]即，對于生物試樣而言，沒有達(dá)到進(jìn)行存活狀態(tài)下的生物試樣的活動(dòng)情況的電子顯微鏡觀察。
[0018]另外，使用電子顯微鏡觀察后，回收的試樣不能繼續(xù)成長、繼續(xù)生存。即實(shí)現(xiàn)生還的電子顯微鏡觀察是不可能的。
[0019]由于電子顯微鏡的測定環(huán)境為真空狀態(tài)，因此試樣被置于極度的干燥狀態(tài)。因而試樣發(fā)生變形、變質(zhì)，不能觀察接近存活狀態(tài)的狀態(tài)。
[0020]此外，含水試樣置于真空下時(shí)瞬間凍結(jié)，試樣由于冰晶而發(fā)生變形、變質(zhì)，不能觀察接近原本狀態(tài)的狀態(tài)。
[0021]對于生物試樣而言，由于置于真空下，隔絕來自外界的氧氣供給，陷入缺氧狀態(tài)。另外，由于置于干燥狀態(tài)，變成像干物一樣(墨魚變成墨魚干一樣。)，不容易將生物試樣在存活的狀態(tài)下放入電子顯微鏡的鏡體內(nèi)。
[0022]即使是能夠耐干燥狀態(tài)的生物，由于生物內(nèi)所含的水凍結(jié)，其在觀察活動(dòng)狀態(tài)之前或在觀察中死亡。
[0023]雖然為了進(jìn)行利用電子顯微鏡的觀察而照射電子束，但有必要在不引起由于該電子束的照射造成的電氣方面的重要原因、熱方面的重要原因等而變形、變性的情況下，得到生物試樣在存活的狀態(tài)下的電子顯微鏡圖像。
[0024]對于阻隔性能而言，雖然目前提出了使用有機(jī)物、無機(jī)物、有機(jī)/無機(jī)混合材料，使試樣通過旋涂、蒸鍍、涂布等方式在試樣表面制作膜從而賦予阻隔性能的技術(shù)，但目前還沒有在電子顯微鏡的試樣制作中應(yīng)用這樣的阻隔性能的實(shí)例。
[0025]本發(fā)明鑒于上述問題而完成，課題在于提供即使在真空下也能夠在不使試樣變形的情況下抑制損害試樣本身的狀態(tài)，利用電子顯微鏡的觀察方法和用于其的在真空下的蒸發(fā)抑制用組合物、掃描電子顯微鏡及透射電子顯微鏡。
[0026]此外，本發(fā)明的課題還在于提供能夠使用電子顯微鏡在存活的狀態(tài)下觀察生物試樣、能夠觀察活動(dòng)情況、利用電子顯微鏡的觀察方法和用于其的在真空下的蒸發(fā)抑制用組合物、掃描電子顯微鏡及透射電子顯微鏡。
[0027]為了解決上述問題，利用本發(fā)明的電子顯微鏡的試樣的觀察方法的特征在于包括以下工序:將含有選自兩親性化合物、油脂類及離子液體中的至少1種的蒸發(fā)抑制用組合物適用于試樣的表面形成薄膜，用薄膜覆蓋該試樣的工序；以及，將收容在真空下的試樣室內(nèi)的用該薄膜覆蓋的試樣的電子顯微鏡圖像顯示于顯示裝置的工序。
[0028]此外，使用本發(fā)明的電子顯微鏡的試樣的觀察方法的特征還在于包括以下工序:在試樣的表面上應(yīng)用含有選自兩親性化合物、油脂類及離子液體中的至少1種的蒸發(fā)抑制用組合物的工序；向應(yīng)用了蒸發(fā)抑制用組合物的試樣照射電子束或等離子體體從而在試樣的表面上形成作為薄膜的聚合膜，用該聚合膜覆蓋試樣的工序；以及，將收容于真空下的試樣室的用該聚合膜覆蓋的試樣的電子顯微鏡圖像顯示于顯示裝置的工序。
[0029]利用該電子顯微鏡的試樣的觀察方法中的一個(gè)優(yōu)選方案中，通過在電子顯微鏡的試樣室內(nèi)照射試樣觀察用電子束從而使聚合反應(yīng)進(jìn)行，在試樣表面形成作為薄膜的聚合膜。利用該電子顯微鏡的試樣的觀察方法中的其它優(yōu)選方案中，在利用電子顯微鏡的試樣觀察前，預(yù)先通過向試樣照射與電子顯微鏡的試樣觀察用電子束不同的電子束或等離子體從而使聚合反應(yīng)進(jìn)行，在試樣的表面形成作為薄膜的聚合膜。
[0030]利用該電子顯微鏡的試樣的觀察方法中的其它優(yōu)選方案中，蒸發(fā)抑制用組合物含有兩親性化合物以及選自金屬化合物和糖中的至少I種。
[0031]利用該電子顯微鏡的試樣的觀察方法中的其它優(yōu)選方案中，在不伴隨含水試樣的破壞的情況下，將含水試樣的濕潤的狀態(tài)的電子顯微鏡圖像顯示于上述顯示裝置。
[0032]利用該電子顯微鏡的試樣的觀察方法中的其它優(yōu)選方案中，包括以下工序:在生存著的生物試樣的體表應(yīng)用蒸發(fā)抑制用組合物形成薄膜，用薄膜覆蓋該試樣的工序；以及，將置于真空下的試樣室的用該薄膜覆蓋的生物試樣的存活狀態(tài)下的活動(dòng)的電子顯微鏡圖像顯示于顯示裝置。這種情況下，優(yōu)選方案中，通過上述薄膜，抑制與從生物試樣體內(nèi)的蒸發(fā)相伴隨的溫度降低從而賦予生物試樣以活動(dòng)能力，且保持生物試樣本身的形態(tài)。優(yōu)選的其它方案中，通過上述薄膜，在真空下也能保持為使生物試樣能夠活動(dòng)的體內(nèi)溫度。
[0033]利用該電子顯微鏡的試樣的觀察方法中的其它優(yōu)選方案中，使用掃描電子顯微鏡，在不引起試樣的電荷積累的情況下在顯示裝置上顯示試樣的電子顯微鏡圖像。
[0034]本發(fā)明的真空下的蒸發(fā)抑制用組合物中，在含有在真空下具有蒸發(fā)性的物質(zhì)的試樣表面形成薄膜覆蓋該試樣，其是為了賦予上述具有蒸發(fā)性的物質(zhì)以抑制在真空下其蒸發(fā)的阻隔能力而使用的在真空下的蒸發(fā)抑制用組合物，含有選自兩親性化合物、油脂類及離子液體中的至少I種。
[0035]該蒸發(fā)抑制用組合物的優(yōu)選方案中，在生存著的生物試樣的體表上形成薄膜覆蓋該生物試樣，為了賦予生物試樣體內(nèi)的具有蒸發(fā)性的物質(zhì)以抑制在真空下其蒸發(fā)的阻隔能力而使用。
[0036]該蒸發(fā)抑制用組合物中的其它優(yōu)選方案中，通過向應(yīng)用了蒸發(fā)抑制用組合物的試樣照射電子束或等離子體，在試樣表面形成作為薄膜的聚合膜，用該聚合膜覆蓋試樣。
[0037]該蒸發(fā)抑制用組合物中的其它優(yōu)選方案中，含有兩親性化合物以及選自金屬化合物和糖中的至少I種。
[0038]本發(fā)明的掃描電子顯微鏡是上述利用電子顯微鏡的試樣的觀察方法中所使用的掃描電子顯微鏡，其設(shè)置有能夠?qū)肱渲糜阽R體內(nèi)的試樣室的試樣的預(yù)排氣室、和對試樣室及預(yù)排氣室進(jìn)行脫氣的排氣裝置。
[0039]該掃描電子顯微鏡的優(yōu)選方案中，預(yù)排氣室設(shè)置有手套箱。
[0040]該掃描電子顯微鏡中的其它優(yōu)選方案中，試樣室或預(yù)排氣室設(shè)置有等離子體照射裝置或電子束照射裝置。
[0041]該掃描電子顯微鏡中的其它優(yōu)選方案中，試樣室或預(yù)排氣室設(shè)置有能夠作用于試樣的三維操縱裝置。
[0042]本發(fā)明的掃描電子顯微鏡為上述利用電子顯微鏡的試樣的觀察方法中所使用的掃描電子顯微鏡，其中，在試樣室內(nèi)設(shè)置有能夠三維地調(diào)節(jié)二次電子的檢測器與試樣的相對位置的檢測位置調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)。
[0043]本發(fā)明的掃描電子顯微鏡為上述利用電子顯微鏡的試樣的觀察方法中使用的掃描電子顯微鏡，其中，在試樣室內(nèi)設(shè)置有能夠獲得試樣的顏色信息的高速彩色照相機(jī)。
[0044]本發(fā)明的掃描電子顯微鏡為上述利用電子顯微鏡的試樣的觀察方法中使用的掃描電子顯微鏡，其中，設(shè)置有能夠調(diào)節(jié)試樣室內(nèi)的試樣臺(tái)的溫度的溫度調(diào)節(jié)裝置。
[0045]本發(fā)明的掃描電子顯微鏡為上述利用電子顯微鏡的試樣的觀察方法中使用的掃描電子顯微鏡，其中，在試樣室內(nèi)設(shè)置有從電傳感器(表面電阻測定、活體電氣響應(yīng)等)、光傳感器(活體用光刺激光測定、分光傳感器、光量子數(shù)測定等〉、氣體傳感器(信息素等來源于活體的高分子測定、氧氣濃度 ? 氮?dú)鉂舛葴y定等〉、水傳感器(水蒸氣、表面水分量測定等)和溫度傳感器中選出的至少1種傳感器。
[0046]本發(fā)明的透射電子顯微鏡為上述利用電子顯微鏡的試樣的觀察方法中使用的透射電子顯微鏡，其中，設(shè)置有能夠?qū)肱渲糜阽R體內(nèi)的試樣室的試樣的預(yù)排氣室、和對試樣室及預(yù)排氣室進(jìn)行脫氣的排氣裝置。
[0047]該掃描電子顯微鏡的優(yōu)選方案中，預(yù)排氣室設(shè)置有手套箱。
[0048]本發(fā)明的透射電子顯微鏡為上述利用電子顯微鏡的試樣的觀察方法中使用的透射電子顯微鏡，配置試樣的柵網(wǎng)的兩面分別具有向上述蒸發(fā)抑制用組合物照射電子束或等離子體而形成的聚合膜。
[0049]發(fā)明的效果
[0050]根據(jù)本發(fā)明，能夠在不使試樣變形的情況下進(jìn)行高倍率觀察且不會(huì)破壞試樣本身的狀態(tài)。
[0051]此外，能夠使用電子顯微鏡在存活的狀態(tài)下觀察活生物試樣，能夠觀察活動(dòng)狀態(tài)的超細(xì)微構(gòu)造。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0052]〔圖1]表示實(shí)施例1的321影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0053]〔圖2]表示實(shí)施例2的321影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0054]〔圖3]表示實(shí)施例3的321影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0055]〔圖4]表示實(shí)施例4的321影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0056]〔圖5]表示實(shí)施例5的I'剛影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0057]〔圖6]表示實(shí)施例6的321影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0058]〔圖7]表示實(shí)施例7的I'剛影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0059]〔圖8]表示實(shí)施例8的321影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0060]〔圖9]表示實(shí)施例9的I'剛影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0061]〔圖10]表示實(shí)施例10的321影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0062][圖11]實(shí)施例11的聚合膜的照片。
[0063]〔圖12]表示實(shí)施例11的試樣表面的聚合膜和321影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0064]〔圖13]表示實(shí)施例12的試樣表面的聚合膜和321影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0065]〔圖14]表示實(shí)施例13的試樣表面的聚合膜和321影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0066]〔圖15]表示實(shí)施例14的試樣表面的聚合膜和321影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0067]〔圖16]表示實(shí)施例15的試樣表面的聚合膜和321影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0068]〔圖17]表示實(shí)施例16的試樣表面的聚合膜和321影像拍攝的狀態(tài)的照片。[0069][圖18]表示實(shí)施例17的試樣表面的聚合膜和SEM影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0070][圖19]表示實(shí)施例18的試樣表面的聚合膜和SEM影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0071][圖20]表示實(shí)施例19的試樣表面的聚合膜和SEM影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0072][圖21]表示實(shí)施例20的試樣表面的聚合膜和SEM影像拍攝的狀態(tài)的照片。
[0073][圖22]表不本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的一個(gè)實(shí)施方式的主要部分的不意圖。
[0074][圖23]表示本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的其它實(shí)施方式的主要部分的示意圖。
[0075][圖24]表示本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的其它實(shí)施方式的主要部分的示意圖。
[0076][圖25]表示本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的其它實(shí)施方式的主要部分的示意圖。
[0077][圖26]表示本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的其它實(shí)施方式的主要部分的示意圖。
[0078][圖27]表示本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的其它實(shí)施方式的主要部分的示意圖。
[0079][圖28]表示本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的其它實(shí)施方式的主要部分的示意圖。
[0080][圖29]表示本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的其它實(shí)施方式的主要部分的示意圖。
[0081][圖30]表示本發(fā)明的透射電子顯微鏡的一實(shí)施方式的主要部分的示意圖。
[0082][圖31]表示圖30的主要部分的立體圖。
【具體實(shí)施方式】
[0083]以下詳細(xì)說明本發(fā)明。
[0084]需要說明的是，本發(fā)明中的“真空”是指例如KT1Pa以下，更是指10_2?10_4Pa，尤其是指10_4?IO-8Pa的范圍。
[0085]為了將生物試樣在存活的狀態(tài)下放入電子顯微鏡的鏡體內(nèi)，在存活的狀態(tài)下進(jìn)行電子顯微鏡觀察，而使用本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物在生物試樣表面形成屏蔽。
[0086]該屏蔽具有即使在真空下也能保持生物體內(nèi)的水不干燥的液體狀態(tài)的功能(水屏蔽性)、抑制活體內(nèi)的氧等氣體物質(zhì)的脫氣的功能(氣體屏蔽性)，在這些水/氣體阻隔性能的基礎(chǔ)上，為了得到電子顯微鏡圖像，還兼具抑制電子束照射造成的電氣方面以及熱方面的變形變質(zhì)的功能(導(dǎo)電性/耐熱性)。
[0087]想要用現(xiàn)在的光學(xué)裝置、電子射線裝置觀察生物試樣或非生物試樣時(shí)，通常在高真空下進(jìn)行，在該條件下與在大氣壓下的試樣的狀態(tài)大不相同。試樣中的水、氣體分子不能保持在大氣壓下的狀態(tài)，有時(shí)會(huì)對試樣帶來嚴(yán)重?fù)p害。要求原樣保持在本身的形態(tài)，更高精密地觀察。即，若為生物試樣，則能夠不損害存活的狀態(tài)的條件下實(shí)況地動(dòng)態(tài)觀察，即使是非生物試樣，也能夠在沒有含水試樣的干燥等損傷的條件下觀察。
[0088]本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)兩親性化合物、油脂類和離子液體在真空下保持水和空氣(氣體)(具有水/氣體屏蔽功能)。通過對生物試樣施加該溶液，可以形成均勻的保護(hù)膜，體現(xiàn)在大氣壓和真空下的水/氣體阻隔能力。
[0089]尤其是將該溶液用于利用電子顯微鏡的生物試樣的觀察時(shí)，生物試樣在電子顯微鏡的鏡體內(nèi)不會(huì)干燥，不會(huì)伴隨變形、變質(zhì)，能夠保持存活的狀態(tài)，能夠得到活動(dòng)情況的SEM圖像。即使調(diào)整為高倍率，也不會(huì)發(fā)生基于電子束的變形、變性，能夠觀察活動(dòng)情況，可以進(jìn)行不帶電的良好的SEM觀察。
[0090]不管是否在真空下，只要生物試樣能夠保持存活狀態(tài)，活體內(nèi)的水就沒有凍結(jié)。即，由觀測結(jié)果可知伴隨減壓的溫度降低得到抑制，該結(jié)果通過兩親性化合物單獨(dú)、兩親性化合物與金屬化合物或糖的并用、油脂類單獨(dú)、或離子液體單獨(dú)的真空下的溫度測定的實(shí)驗(yàn)得到確認(rèn)。
[0091]由該結(jié)果明確得知，兩親性化合物、兩親性化合物與金屬化合物或糖的并用、油脂類、或離子液體或油脂類形成賦予了水/氣體阻隔性能的保護(hù)膜。本
【發(fā)明者】將該水/氣體阻隔性能稱為表面屏蔽效果（Surface Shielding Effect, SS效果）。
[0092]兩親性化合物、兩親性化合物和金屬化合物或糖的并用、油脂類、或離子液體賦予表面屏蔽效果，發(fā)現(xiàn)了通過在這些阻隔性能同時(shí)，賦予導(dǎo)電性，抑制基于電子射線的熱損傷，從而作為多功能的阻隔性能膜發(fā)揮作用。
[0093]根據(jù)本發(fā)明，能夠在存活的狀態(tài)下電子顯微鏡觀察生物/活體試樣。不僅限于提供用于生物/活體試樣的電子顯微鏡觀察的溶液，還提供關(guān)于廣泛賦予表面屏蔽效果（SS效果）的SS溶液的組成。
[0094]根據(jù)本發(fā)明，賦予表面屏蔽效果（SS效果）的SS溶液含有兩親性化合物，或含有主要成分的兩親性化合物和金屬化合物或糖，或含有油脂類，或含有離子液體，但可以將以下項(xiàng)目舉出的氨基酸及其衍生物、維生素類及其衍生物、無機(jī)鹽類、金屬氧化物、脂肪酸及其衍生物、導(dǎo)電性高分子、納米粘土等按任意的比例添加用于各種用途。
[0095]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方案，SS溶液以兩親性化合物為主要成分（基材）。兩親性化合物例如可以使用表面活性劑。表面活性劑以陰離子性表面活性劑、陽離子性表面活性劑、非離子性表面活性劑、兩性離子表面活性劑、天然來源的表面活性劑等的方式按分子結(jié)構(gòu)大體區(qū)分。在工業(yè)、食品、醫(yī)療品等廣泛領(lǐng)域中使用，但基本上無論使用任一表面活性劑都能體現(xiàn)一定的阻隔性能。
[0096]上述表面活性劑中，作為陰離子性表面活性劑分為例如羧酸型、硫酸酯型、磺酸型、磷酸酯型。其中，具體可以舉出例如十二烷基硫酸鈉、月桂酸鈉、α-磺基脂肪酸甲酯鈉、十二烷基苯磺酸鈉、十二烷基乙氧基化物硫酸鈉等，其中，優(yōu)選使用十二烷基苯磺酸鈉。
[0097]上述表面活性劑中，作為陽離子性表面活性劑，分為例如季銨鹽型、烷胺型、雜環(huán)胺型。具體可以舉出例如硬脂酰三甲基氯化銨、二硬脂酰二甲基氯化銨、二癸基二甲基氯化銨、十六烷基三吡啶氯化物、十二烷基二甲基苯甲基銨氯化物等。
[0098]上述表面活性劑中，作為非離子表面活性劑可以舉出例如聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯硬化蓖麻油、聚氧乙烯單脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚丙三醇脂肪酸酯、烷基聚苷、N-甲基烷基葡糖酰胺等。其中，優(yōu)選十二烷基醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、月桂?；掖减０?，以及以TritonTMX(TritonTMX-100等）、pluronic? (pluronic(E)F-123> F-68 等）、吐溫（Tween20、40、60、65、80、85 等）、Brij(E)(Brij(K)35、58、98 等）、Span (Span20、40、60、80、83、85)的名稱市售的化合物。
[0099]上述表面活性劑中，作為兩性表面活性劑，有例如十二烷基二甲基氨基乙酸甜菜堿、十二烷基氨基甲基二甲基磺基丙基甜菜堿、3_(四癸基二甲基銨）丙烷-I-磺酸酯等，但優(yōu)選使用3-[ (3-膽酰胺丙基）二甲基銨]-I-丙燒磺酸酯（(3- ( (3-Cholamidopropyl)dimethylammonio)-l-propanesulfonate), CHAPS)、3_[ (3-膽酸胺丙基)二 甲基銨]-2-輕基-I-丙燒橫酸酯（（3-〔 (3-Cholamidopropyl) dimethylammonio)-2-hydroxy-l-propanesulfonate), CHAPS0)等。
[0100]上述表面活性劑中，作為天然來源的表面活性劑，優(yōu)選例如卵磷脂、皂甙，被稱為卵磷脂的化合物中，具體優(yōu)選磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油等。另外，作為皂甙優(yōu)選皂樹皂甙。
[0101]上述表面活性劑中，作為來源于微生物的兩親性化合物(生物表面活性劑)，優(yōu)選使用鼠李糖脂(rhamnolipid)、槐糖脂(sophorolipid)、甘露糖赤蘚糖醇脂(mannosy lerythri to I lipid)等。
[0102]除上述表面活性劑中例示的以外，作為一般公知的物質(zhì)使用的表面活性劑中，尤其作為用于化狀品類的表面活性劑，可以舉出例如杏仁油PEG-6、酰基(C12，14)天冬氨酸Na、?；?C12、14)天冬氨酸TEA、ARACHIDETH-20、硬脂酰醇、烷基(Cll、13、15)硫酸鈉、烷基(Cll，13，15)硫酸 TEA、烷基(Cll，13，15)磷酸鉀、烷基(C12，13)硫酸 DEA、烷基(C12，13)硫酸鈉、烷基(C12，13)硫酸TEA、烷基(C12，14，16)硫酸銨、烷基(C12-14)氧羥基丙基精氨酸鹽酸鹽、烷基(C12-14) 二氨基乙基甘氨酸鹽酸鹽、烷基(C12-14)硫酸TEA、烷基(C12-15)硫酸TEA、烷基(C14-18)磺酸鈉、烷基(C16，18)三甲基氯化銨、烷基(C28)三甲基氯化銨、異硬脂酰胺DEA、異硬脂酰醇、異硬脂酰甘油酯、異硬脂酰十二烷基二甲基氯化銨、異硬脂酸PEG-2、異硬脂酸PEG-3、異硬脂酸PEG-4、異硬脂酸PEG-6、異硬脂酸PEG-8、異硬脂酸PEG-10、異硬脂酸PEG-12、異硬脂酸PEG-15甘油酯、異硬脂酸PEG-20、異硬脂酸PEG-20甘油酯、異硬脂酸 PEG-20氫化蓖麻油、異硬脂酸PEG-20山梨糖醇酐酯、異硬脂酸PEG-30、異硬脂酸PEG-30甘油酯、異硬脂酸PEG-40、異硬脂酸PEG-50氫化蓖麻油、異硬脂酸PEG-58氫化蓖麻油、異硬脂酸PEG-60甘油酯、異硬脂酸PG、異硬脂酸山梨糖醇酐酯、異硬脂酸山梨醇聚醚-3、異硬脂酸聚甘油酯_2、異硬脂酸聚甘油酯-3、異硬脂酸聚甘油酯-4、異硬脂酸聚甘油酯_5、異硬脂酸聚甘油酯_6、異硬脂酸聚甘油酯-10、異硬脂醇聚醚-2、異硬脂醇聚醚-10、異硬脂醇聚醚-15、異硬脂醇聚醚-22、異硬脂酰水解膠原、異硬脂酰水解膠原AMPD、異硬脂酰乳酸鈉、異鯨蠟醇聚醚-10、異鯨蠟醇聚醚-20、異棕櫚酸辛酯、異棕櫚酸聚甘油酯_2、異丁酸乙酸蔗糖、十一碳烯?；饽z原鉀、亞乙基二胺四羥基異丙基二油酸、環(huán)氧酯-1、環(huán)氧酯_2、環(huán)氧酯_3、環(huán)氧酯-4、環(huán)氧酯_5、芥酸甘油酯、辛烷酸PEG-4、壬基酚聚醚-14、辛基十二醇聚醚_2、辛基十二醇聚醚_5、辛基十二醇聚醚-10、辛基十二醇聚醚_30、羊烯基玻拍酸糊精TEA、羊基酌.聚醚_1、羊基酌 聚醚-2乙燒橫酸鈉、羊基酌 聚醚-10、辛基酚聚醚-25、辛基酚聚醚-70、橄欖油PEG-6、低聚琥珀酸PEG-3-PPG-20、油酰胺DEA、油胺氧化物、油醇甜菜堿、油醇硫酸鈉、油醇硫酸TEA、油酸PEG-2、油酸PEG-10、油酸PEG-10甘油酯、油酸PEG-15甘油酯、油酸PEG-20甘油酯、油酸PEG-30甘油酯、油酸PEG-36、油酸PEG-40山梨醇酯、油酸PEG-75、油酸PEG-150、油酸PG、油酸蔗糖酯、油酸羥基{ 二(羥乙基)氨基}丙酯、油酰胺DEA、油酸聚甘油酯-2、油酸聚甘油酯_5、油酸聚甘油酯-10、油酰基水解膠原、油?；“彼?、油?；谆；撬徕c、油醇聚醚-2、油醇聚醚-3磷酸DEA、油醇聚醚-7磷酸鈉、油醇聚醚-8磷酸鈉、油醇聚醚-10、油醇聚醚-10磷酸、油醇聚醚-10磷酸DEA、油醇聚醚-20、油醇聚醚-20磷酸、油醇聚醚-30、油醇聚醚-50、烯烴(C14-16)磺酸鈉、陽離子化水解小麥蛋白-1、陽離子化水解小麥蛋白-3、陽離子化水解貝殼硬蛋白-2、陽離子化水解大豆蛋白-1、陽離子化水解大豆蛋白-2、陽離子化水解大豆蛋白-3、陽離子化右旋糖酐_2、癸酰胺DEA、牛脂脂肪酸甘油酯、杏仁油PEG-6、枸櫞酸二硬脂酯、枸櫞酸脂肪酸甘油酯、季銨鹽-14、季銨鹽-18、季銨鹽-18水輝石、季銨鹽18膨潤土、季銨鹽-22、季銨鹽-33、粟米油PEG-6、粟米油PEG-8、椰油酰胺、椰油酰胺DEA、椰油酰胺MEA、椰油酰胺丙基甜菜堿、椰油胺氧化物、椰油酰兩性基乙酸鈉、椰油酰兩性基二乙酸二鈉、聚氧乙烯三癸基硫酸鈉、椰油酰兩性基二丙酸二鈉、椰油酰兩性基丙酸鈉、椰油酰丙氨酸TEA、椰油酰精氨酸乙基PCA、椰油酰羥乙磺酸鈉、椰油酰水解酪蛋白鉀、椰油酰水解角蛋白鉀、椰油酰水解酵母鉀、椰油酰水解酵母蛋白鉀、椰油酰水解小麥蛋白鉀、椰油酰水解膠原、椰油酰水解膠原鉀、椰油酰水解膠原鈉、椰油酰水解膠原TEA、椰油酰水解土豆蛋白鉀、椰油酰水解大豆蛋白鉀、椰油酰水解玉米蛋白鉀、椰油酰水解馬鈴薯蛋白鉀、椰油酰甘氨酸鉀、椰油酰甘氨酸TEA、椰油酰谷氨酸、椰油酰谷氨酸鉀、椰油酰谷氨酸鈉、椰油酰谷氨酸TEA、椰油酰肌氨酸、椰油酰肌氨酸鈉、椰油酰肌氨酸TEA、椰油酰?；撬徕c、椰油酰甲基丙氨酸、椰油酰甲基丙氨酸鈉、椰油酰甲基?；撬徕?、椰油酰甲基?；撬徭V、椰油酰甲基牛磺酸鈉、椰油基甘油酯硫酸鈉、椰油基二甲基銨羥丙基水解角蛋白、椰油基二甲基銨羥丙基水解膠原蛋白、椰油基二甲基銨羥丙基水解絲、椰油基甜菜堿、琥珀酸PEG-50氫化蓖麻油、琥珀酸脂肪酸甘油酯、膽甾醇聚醚-10、膽留醇聚醚-15、異鯨蠟醇聚醚-3-乙酸酯、鯨蠟醇聚醚-3-乙酸酯、乙酸異丁酯、乙酸乙酯、乙酸甘油酯、乙酸脂肪酸甘油酯、乙酸硬脂酸蔗糖酯、十三烷醇聚醚-3-乙酸酯、十三烷醇聚醚-15-乙酸酯、乙酸丁酯、乙酸單硬脂酸甘油酯、羊毛脂醇聚醚-9乙酸酯、二乙酰酒石酸脂肪酸甘油酯、二烷基（C12-15) 二甲基氯化銨、二烷基（C12-18) 二甲基氯化銨、二異硬脂酸PEG-8、二異硬脂酸PG、二異硬脂酸聚甘油酯-2、二油酸PEG-4、二油酸PEG-10、二油酸PEG-32、二油酸PEG-75、二油酸PEG-120甲基葡萄糖、二油酸PEG-150、二油酸PG、二油酸甘醇酯、二油酸聚甘油酯_6、二牛脂烷基二甲基銨硫酸纖維素、二椰油基二甲基氯化銨、二乙酸硬脂酸甘油酯、二硬脂酰二甲基氯化銨、二硬脂酸PEG-2、二硬脂酸PEG-12、二硬脂酸PEG-20甲基葡萄糖、二硬脂酸PEG-120、二硬脂酸PEG-250、二硬脂酸PEG-三羥甲基丙烷、二硬脂酸PG、二硬脂酸PPG-20甲基葡萄糖、二硬脂酸甘醇、二硬脂酸甘油酯、二硬脂酸蔗糖、二硬脂酸山梨糖醇酐酯、二硬脂酸聚甘油酯_6、二硬脂酸聚甘油酯-10、二鯨蠟二甲基氯化銨、二鯨蠟硬脂醇磷酸雙酯MEA鹽、二羥乙基硬脂酰甜菜堿、二棕櫚酸PEG-3、二羥乙基月桂胺氧化物、（二羥基甲基甲硅烷基丙氧基）羥丙基水解酪蛋白、（二羥基甲基甲硅烷基丙氧基）羥丙基水解膠原、（二羥基甲基甲硅烷基丙氧基）羥丙基水解絲、二氫膽甾醇聚醚-15、脂肪酸（C8-22)聚甘油酯-10、二甲基硅氧烷共聚醇、二甲基硅氧烷共聚醇乙基、二甲基硅氧烷共聚醇丁酯、二甲基硬脂胺、二月桂酸PEG-4、二月桂酸PEG-12、二月桂酸PEG-32、二月桂酸蔗糖酯、二月桂醇聚醚-4磷酸、二月桂醇聚醚-10磷酸、二月桂?；劝彼徭V、水酸化卵磷脂、氫化椰油基甘油酯、氫化大豆脂肪酸甘油酯、氫化牛脂酰胺DEA、氫化牛脂谷氨酸二鈉、氫化牛脂谷氨酸TEA、氫化羊毛脂、氫化羊毛脂醇、氫化溶血卵磷脂、氫化卵磷脂、硬脂酰胺、硬脂酰胺DEA、硬脂酰胺MEA、硬脂酰胺乙基二乙胺、硬脂酰胺丙基二甲胺、硬脂胺氧化物、司拉氯銨、司拉氯銨水輝石、硬脂酰二甲基甜菜堿鈉、硬脂酰三甲基銨糖精、硬脂酰三甲基溴化銨、硬脂酰甜菜堿、硬脂酰硫酸鈉、硬脂酸PEG-2、硬脂酸PEG-6山梨醇酯、硬脂酸PEG-10、硬脂酸PEG-10甘油酯、硬脂酸PEG-14、硬脂酸PEG-20甘油酯、硬脂酸PEG-23、硬脂酸PEG-25、硬脂酸PEG-40、硬脂酸PEG-100、硬脂酸PEG-120甘油酯、硬脂酸PEG-150、硬脂酸PEG-200甘油酯、硬脂酸PG、硬脂酸TEA、硬脂酸甘醇酯、硬脂酸甘油酯、硬脂酸蔗糖酯、硬脂酸硬脂醇聚醚-4、硬脂酸硬脂酰二羥基異丁酰胺、硬脂酸山梨糖醇酐酯、硬脂酸聚氧乙烯鯨蠟醚、硬脂酸聚甘油酯_2、硬脂酸聚甘油酯-10、硬脂酸/蘋果酸甘油酯、月桂基二甲基銨羥基二丙基水解角蛋白、月桂基二甲基銨羥基二丙基水解膠原、月桂基二甲基銨羥基二丙基水解絲、月桂基三甲基氯化銨、硬脂醇聚醚-2磷酸、硬脂醇聚醚-3、硬脂醇聚醚-10、硬脂醇聚醚-16、硬脂醇聚醚-50、硬脂醇聚醚-80、硬脂醇聚醚-100、硬脂酰水解膠原鉀、硬脂酰水解膠原鈉、硬脂酰谷氨酸、硬脂酰谷氨酸二鈉、硬脂酰谷氨酸鉀、硬脂酰谷氨酸鈉、硬脂酰谷氨酸二辛基十二烷基、司吡氯銨、硬脂酰乳酸鈣、硬脂酰乳酸鈉、硬脂酰甲基?；撬徕c、磺基琥珀酸(C12-14)鏈烷醇聚醚二鈉、磺基琥珀酸PEG-2油酰胺二鈉、磺基琥珀酸PEG-4椰油酰異丙醇酰胺二鈉、磺基琥珀酸PEG-5月桂酰胺二鈉、磺基琥珀酸二辛基鈉、磺基琥珀酸谷留醇聚醚-14-二鈉、磺基琥珀酸十二烷基二鈉、磺基琥珀酸月桂醇聚醚二鈉、倍半異硬脂酸山梨糖醇酐酯、倍半油酸甘油酯、倍半油酸山梨糖醇酐酯、倍半油酸二甘油酯、倍半硬脂酸PEG-20甲基葡萄糖、倍半硬脂酸山梨糖醇酐酯、倍半硬脂酸甲基葡萄糖、鯨蠟二甲基硅氧烷共聚醇、鯨蠟氯化吡啶、鯨蠟硫酸鈉、鯨蠟磷酸DEA、鯨蠟磷酸鉀、鯨蠟硬脂醇、鯨蠟硬脂基葡糖苷.鯨蠟硬脂醇、鯨蠟硬脂基硫酸鈉、鯨蠟硬脂醇聚醚-10、鯨蠟硬脂醇聚醚-15、鯨蠟硬脂醇聚醚-22、鯨蠟硬脂醇聚醚-34、鯨蠟硬脂醇聚醚-55、鯨蠟硬脂醇聚醚-60、鯨蠟硬脂醇聚醚-60肉豆蘧基甘醇、鯨蠟硬脂醇聚醚-100、鯨蠟醇聚醚-8磷酸、鯨蠟醇聚醚-10、鯨蠟醇聚醚-10磷酸、鯨蠟醇聚醚-12、鯨蠟醇聚醚-24、鯨蠟醇聚醚-45、西曲氯銨、西曲銨糖精鹽、西曲溴銨、鯨蠟油醇聚醚-10、鯨蠟油醇聚醚-20、鯨蠟油醇聚醚-25、牛脂酰胺MEA、十異硬脂酸聚甘油酯-10、十油酸聚甘油酯-10、十硬脂酸聚甘油酯-10、癸基葡糖苷、四辛烷酸二甘油山梨糖醇酐、四油酸山梨醇聚醚-30、四油酸山梨醇聚醚-40、四油酸山梨醇聚醚-60、四硬脂酸山梨醇聚醚-60、十二烷基苯磺酸TEA、三PEG-8烷基(C12-15)磷酸、三(異硬脂酸PEG-3)三羥甲基丙烷、三異硬脂酸PEG-10甘油酯、三異硬脂酸PEG-15氫化蓖麻油、三異硬脂酸PEG-20氫化蓖麻油、三異硬脂酸PEG-30甘油酯、三異硬脂酸PEG-30氫化蓖麻油、三異硬脂酸PEG-50甘油酯、三異硬脂酸PEG-50氫化蓖麻油、三異硬脂酸PEG-160山梨糖醇酐、三異硬脂酸聚甘油酯_2、三油酸山梨糖醇酐酯、三油酸聚甘油酯-10、三硬脂酸PEG-3山梨醇酯、三硬脂酸PEG-140甘油酯、三硬脂酸PEG-160山梨糖醇酐酯、三硬脂酸蔗糖酯、三硬脂酸山梨糖醇酐酯、三硬脂酸聚甘油酯-10十三烷醇聚醚-三乙酸鈉、十三烷醇聚醚-六乙酸鈉、十三烷醇聚醚_9、十三烷醇聚醚-10、十三烷醇聚醚-11、十三烷醇聚醚-20、十三烷醇聚醚-21、三羥基硬脂精、三廿二烷酸蔗糖酯、三(十二烷胺)、三月桂醇聚醚-四磷酸、三月桂醇聚醚-四磷酸鈉、乳酸脂肪酸甘油酯、壬基壬基酚聚醚-10、壬基壬基酚聚醚-100、壬基酚聚醚-3、壬基酚聚醚-4硫酸鈉、壬基酚聚醚-6磷酸、壬基酚聚醚-6磷酸鈉、壬基酚聚醚-10、壬基酚聚醚-10磷酸、壬基酚聚醚-23、壬基酚聚醚-50、壬基酚聚醚-120、全氟烷基PEG磷酸、全氟烷基磷酸DEA、棕櫚仁脂肪酸酰胺DEA、棕櫚仁脂肪酸酰胺乙基羥乙基氨基丙酸鈉、棕櫚仁脂肪酸酰胺丙基甜菜堿、棕櫚脂肪酸谷氨酸鈉、棕櫚酰胺MEA、棕櫚酸PEG-6、棕櫚酸PEG-18、棕櫚酸PEG-20、棕櫚酸蔗糖酯、棕櫚酸山梨糖醇酐酯、棕櫚酰天冬氨酸二 TEA、棕櫚酰甲基?；撬徕c、花生油PEG-6、羥基硬脂酸甘油酯、羥丙基三甲基銨水解酪蛋白、羥丙基三甲基銨水解角蛋白、羥丙基三甲基銨水解小麥蛋白、羥丙基三甲基銨水解膠原、羥丙基三甲基銨水解絲、羥基羊毛脂、丙酸PPG-2肉豆蘧酯、七硬脂酸聚甘油酯-10、十七烷基羥乙基羧酸甲酯甲基咪唑鎗鹽、山崳酰胺丙基PG 二甲基氯化銨、山崳胺氧化物、山崳醇聚醚-10、山崳醇聚醚-30、二十二烷酸甘油酯、二十二烷三甲基氯化銨、苯扎氯銨、五異硬脂酸聚甘油酯-10、五辛烷酸二甘油山梨糖醇酐、五油酸PEG-40山梨醇、五油酸聚甘油酯_6、五油酸聚甘油酯-10、五硬脂酸聚甘油酯-10、聚丙烯酸鉀、聚丙烯酸鈉、聚丙烯酸銨、聚氧乙烯烷基苯基醚磷酸TEA、聚氧乙烯醚磷酸鈉、聚氧乙烯辛基醚磷酸、聚氧乙烯鯨蠟硬脂酰二醚、聚氧乙烯植物留醇、聚氧乙烯丁基醚、聚氧乙烯椰油脂肪酸二乙醇酰胺、聚氧乙烯十二烷基醚磷酸TEA、聚氧丙烯羧基烷基(C14-18) 二葡糖苷、聚氧丙烯甘油酯醚磷酸、聚氧丙烯山梨醇、聚油酸蔗糖酯、聚甘油酯-2油醇、聚硬脂酸蔗糖酯、乙酸鯨蠟、乙酸羊毛脂醇酯、聚棕櫚脂肪酸蔗糖酯、聚月桂酸蔗糖酯、聚蓖麻醇酸聚甘油酯、聚亞油酸蔗糖泊洛沙姆181、泊洛沙姆(Poroxamer) 333、泊洛沙胺304、泊洛沙胺901、泊洛沙胺1104、泊洛沙胺1302、泊洛沙胺1508、麥芽糖醇羥基烷基(C12，14)、肉豆蘧酰胺DEA、肉豆蘧胺氧化物、肉豆蘧基芐基二甲基氯化銨、肉豆蘧基PG羥乙基癸酰胺、肉豆蘧基甜菜堿、肉豆蘧基硫酸鈉、肉豆蘧酸PEG-8、肉豆蘧酸PEG-20、肉豆蘧酸甘油酯、肉豆蘧酸蔗糖酯、肉豆蘧酸聚甘油酯-10、肉豆蘧酸肉豆蘧醇聚醚_3、肉豆蘧酰水解膠原、肉豆蘧酰水解膠原鉀、肉豆蘧酰谷氨酸、肉豆蘧酰谷氨酸鉀、肉豆蘧酰谷氨酸鈉、肉豆蘧酰肌氨酸鈉、肉豆蘧酰甲基丙氨酸鈉、肉豆蘧酰甲基?；撬徕c、肉豆蘧醇聚醚_3、肉豆蘧醇聚醚-3硫酸鈉、單乙酸單硬脂酸甘油酯、椰油脂肪酸TEA、椰油脂肪酸甘油酯、椰油脂肪酸蔗糖酯、椰油脂肪酸山梨糖醇酐酯、椰油脂肪酸賴氨酸、月桂酰胺DEA、月桂酰胺MEA、月桂酰胺丙基甜菜堿、月桂氨基二乙酸鈉、月桂氨基丙酸、月桂氨基丙酸鈉、月桂胺氧化物、月桂亞氨基二丙酸納、十二烷基DEA、十二烷基異喧琳鐵糖精、十二烷基異喧琳鐵漠化物、十二烷基匍糖昔、十二烷基二氨基乙基甘氨酸鈉、十二烷基二甲基銨羥丙基水解角蛋白、十二烷基二甲基銨羥丙基水解膠原、十二烷基二甲基銨羥丙基水解絲、十二烷基磺基乙酸鈉、十二烷基羥基乙酸酸胺硫酸納、十二烷基羥基橫基甜菜喊、十二烷基氣化吡啶鐵、十二烷基甜菜喊、十二燒基硫酸DEA、十二烷基硫酸鐘、十二烷基硫酸MEA、十二烷基硫酸續(xù)、十二烷基硫酸納、十二烷基硫酸TEA、十二烷基硫酸按、十二烷基憐酸、十二烷基憐酸二納、十二烷基憐酸納、月桂酸PEG-2、月桂酸PEG-4DEA、月桂酸PEG-6、月桂酸PEG-8、月桂酸PEG-8甘油酯、月桂酸PEG-9、月桂酸PEG-1O、月桂酸PEG-12甘油酯、月桂酸PEG-23甘油酯、月桂酸PEG-32、月桂酸PEG-75、月桂酸PEG-150、月桂酸PEG山梨醇、月桂酸PG、月桂酸TEA、月桂酸甘油酯、月桂酸蔗糖、月桂酸聚氧乙烯氫化蓖麻油、月桂酸聚甘油酯_6、月桂酸聚甘油酯-10、月桂酸麥芽糖醇、月桂基三甲基氯化銨、月桂基三甲基銨溴化物、月桂醇聚醚-2-硫酸銨、月桂醇聚醚-3乙酸、月桂醇聚醚-3硫酸TEA、月桂醇聚醚-3硫酸銨、月桂醇聚醚-3磷酸、月桂醇聚醚-4磷酸、月桂醇聚醚-4磷酸鈉、月桂醇聚醚-4.5乙酸鉀、月桂醇聚醚-5乙酸、月桂醇聚醚-5硫酸鈉、月桂醇聚醚-6乙酸、月桂醇聚醚-6乙酸鈉、月桂醇聚醚-7磷酸、月桂醇聚醚-9、月桂醇聚醚-10、月桂醇聚醚-10乙酸、月桂醇聚醚-10乙酸鉀、月桂醇聚醚-16乙酸鈉、月桂醇聚醚-17乙酸鈉、月桂醇聚醚-40、月桂醇聚醚硫酸TEA、月桂酰兩性基PG乙酸磷酸鈉、月桂酰兩性基乙酸鈉、月桂?；於彼?、月桂?；饽z原鉀、月桂?；饽z原鈉、月桂?；饨z鈉、月桂?；劝彼?、月桂酰基谷氨酸鉀、月桂?；劝彼徕c、月桂?；弱０稵EA、月桂酰基谷氨酸二辛基十二烷基、月桂酰基谷氨酸二辛基十二醇聚醚_2、月桂酰基谷氨酸二辛基十二烷基、月桂酰基谷氨酸二膽留酯、月桂?；劝彼岫仓季勖?2、月桂?；劝彼岫仓季勖裚5、月桂?；“彼?、月桂?；“彼徕c、月桂?；“彼酺EA、月桂?；K氨酸鉀、月桂?；樗徕c、月桂?；谆彼?、月桂?；谆彼徕c、月桂?；谆彼酺EA、月桂?；谆；撬徕c、羊毛脂醇聚醚-10、羊毛脂醇聚醚-25、羊毛脂醇聚醚-40、羊毛脂醇聚醚-75、羊毛脂脂肪酸PEG-4、羊毛脂脂肪酸PEG-12、羊毛脂脂肪酸酰胺DEA、羊毛脂脂肪酸異丙基、羊毛脂脂肪酸辛基十二烷基、羊毛脂脂肪酸甘油酯、膽甾醇羊毛脂脂肪酸酯、拉匹氯銨、蓖麻醇酸酰胺丙基甜菜堿、蓖麻醇酸甘油酯、蓖麻醇酸蔗糖酯、蓖麻醇酸聚氧丙烯山梨醇、蓖麻醇酸聚甘油酯_6、亞油酸羊毛脂酯、亞油酰胺DEA、硫酸化蓖麻油、蘋果酸月桂酰胺、松脂水解膠原、松脂水解膠原AMPD等。
[0103]上述表面活性劑之外，還可以使用氟系的表面活性劑。具體可以舉出例如十七氟_1_辛燒磺酸銨、十五氟辛燒酸銨、十七氟辛燒磺酸、十七氟-I-辛燒磺酸鋰、十五氟辛燒酸、十五氟辛烷酸水合物、十七氟-I-辛烷磺酸鉀等。
[0104]上述表面活性劑之外，可以使用例如N-長鏈?；劝彼猁}、N-長鏈酰基天冬氨酸鹽、N-長鏈?；拾彼猁}、N-長鏈?；彼猁}、N-長鏈?；K氨酸鹽、N-長鏈?；“彼猁}等N-長鏈?；行园被猁}等N-長鏈酰基氨基酸鹽，N-長鏈脂肪酸?；?N-甲基?；撬猁}、烷基硫酸鹽及其氧化烯烴加成物、脂肪酸酰胺醚硫酸鹽、脂肪酸的金屬鹽、磺基琥珀酸系表面活性劑、烷基磷酸鹽及其氧化烯烴加成物、高級烷基硫酸酯鹽、烷基醚硫酸酯鹽、烷基羥基醚羧酸鹽、烷基醚羧酸等陰離子表面活性劑，丙三醇醚及其氧化烯烴加成物等醚型表面活性劑，丙三醇酯及其氧化烯烴加成物等酯型表面活性劑，山梨糖醇酐酯及其氧化烯烴加成物等醚酯型表面活性劑，脂肪酸單乙醇酰胺、脂肪酸二乙醇酰胺等脂肪酸烷醇酰胺、聚氧化烯脂肪酸酯、聚氧化烯多元醇脂肪酸酯、聚氧化烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧化烯氫化蓖麻油、單硬脂酸丙三醇、丙三醇酯、脂肪酸聚丙三醇酯、酰基氨基酸聚丙三醇酯、山梨糖醇酐酯、蔗糖脂肪酸酯等酯型表面活性劑，烷基葡糖苷類、硬化蓖麻油焦谷氨酸二酯及其氧化乙烯加成物、脂肪酸烷醇酰胺等含氮?dú)庑偷姆请x子性表面活性劑等非離子性表面活性劑，烷基氯化銨、二烷基氯化銨、氯化烷基三甲基銨（C16-C22)、二烷基二甲基銨甲基硫酸鹽等脂肪族胺鹽、其季銨鹽、苯二甲烴鹽等芳香族季銨鹽、脂肪酸?；彼狨ァ-長鏈?；彼嵋一量┩橥人猁}、酰胺胺類、硬脂酰胺丙基二甲胺谷氨酸鹽、硬脂酰胺丙基二甲胺乳酸鹽、硬脂酰胺丙基二甲胺吡咯烷酮羧酸鹽、山崳酰胺丙基二甲胺谷氨酸鹽、山崳酰胺丙基二甲胺乳酸鹽、山崳酰胺丙基二甲胺吡咯烷酮羧酸鹽等陽離子兩親性化合物以及烷基甜菜堿、烷基酰胺甜菜堿、磺基甜菜堿、咪唑鎗鹽甜菜堿、氨基丙酸酯、羧基甜菜堿等甜菜堿型兩親性化合物、N-長鏈?；彼?、N-(3-烷基（12，14)氧代-2-羥丙基）精氨酸鹽酸鹽、氨基羧酸型表面活性劑，咪唑鎗鹽型表面活性劑等兩性表面活性劑等。
[0105]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方案，SS溶液含有兩親性化合物和金屬化合物。作為金屬化合物，只要是含有金屬離子的化合物則可以廣泛使用。
[0106]上述金屬化合物可以是由陽離子和陰離子構(gòu)成的鹽（單鹽），也可以是由二種以上構(gòu)成的鹽（復(fù)鹽）。
[0107]上述金屬化合物可以為氧化物、氫氧化物、齒化物、硫酸鹽、硝酸鹽、碳酸鹽、乙酸鹽等化合物。具體可以舉出例如氯化鈉、氯化鎂、氯化鈣、碳酸氫鈉、氯化鉀、氯化鍶、氯化鋰、氯化鉿、氯化鐵、氯化鋁、氯化鋅、氯化銅、氯化鈷、氯化硫酸鎂、碳酸鎂等。
[0108]上述金屬化合物可以是金屬氧化物。金屬醇鹽為MOR表不的化合物，由金屬（M)和醇鹽（R0_)(R為烴）構(gòu)成。作為金屬（M)，具體可以舉出娃、鈦、招、硼、錯(cuò)、硼、銀、鶴、磷、鍺、銦、鉿、鑰等，通過各種醇得到金屬醇鹽。這些金屬醇鹽可以直接使用，也可以使用將這些金屬醇鹽在酸或堿存在下進(jìn)行溶膠凝膠反應(yīng)而得的反應(yīng)物。作為金屬醇鹽，不使用單一成分，可以將二種類以上的物質(zhì)混合。[0109]上述金屬化合物可以是金屬絡(luò)合物。
[0110]根據(jù)本發(fā)明的其它方案，SS溶液含有兩親性化合物和糖。對于糖.兩親性化合物的組合而言，賦予SS效果是本發(fā)明人等的新見解。作為糖，配合單糖類、二糖類、低聚糖、多糖類和其衍生物。作為單糖類，具體可以舉出葡萄糖、果糖等。作為二糖類，可以舉出蔗糖等，除此之外，作為多糖類，可以舉出肝素、硫酸軟骨素、支鏈淀粉、果膠、瓜爾豆膠、黃原膠、卡拉膠、丙烯甘醇、羧基甲基纖維素等，特別優(yōu)選支鏈淀粉這樣的多糖類。除此之外，還可以使用焦糖、蜂蜜、黃蠟。
[0111]另外，根據(jù)本發(fā)明的其它方案，SS溶液含有油脂類。
[0112]作為油脂類，可以舉出例如硅油等。硅油作為用以保持生物試樣的組織或細(xì)胞的水環(huán)境的水分保持劑發(fā)揮作用，由此達(dá)成存活的生物試樣的動(dòng)態(tài)觀察。即，即使在真空下組織、細(xì)胞的水不流失、可以作為具有阻隔性能的材料。
[0113]作為硅油，可以使用例如在25°C的粘度為I?IOOOOOmPa *s的硅油。例如可以使用和光純藥工業(yè)“636-04001 ”、信越硅酮“KF-54 ”、“KF-96 ”等。
[0114]使用硅油的本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物(SS溶液)中，相對于組合物總量優(yōu)選含有10重量％以上的硅油，作為除此以外的成分，可以配合以下例示的成分。
[0115]另外，根據(jù)本發(fā)明的其它方案，SS溶液含有離子液體。
[0116]作為離子液體，可以舉出例如咪唑鎗鹽類、吡啶鹽類、哌啶鎗鹽類、吡咯鎗鹽類、季銨鹽類、鱗鹽類、锍鹽類、吡唑鎗鹽類等。
[0117]作為咪唑鎗鹽類，可以舉出例如1-烷基-3-烷基咪唑鎗、1，3-二甲基咪唑鎗、1-乙基-3-甲基咪唑鎗、1-丁基-3-甲基咪唑鎗、1-己基-3-甲基咪唑鎗、3-甲基-1-辛基咪唑鎗、1-十二烷基-3-甲基咪唑鎗、1-十二烷基-3-甲基咪唑鎗、1-甲基-3-四癸基咪唑鎗、1-十六烷基-3-咪唑鎗、1-十八烷基-3-甲基咪唑鎗、1-烯丙基-3-甲基咪唑鎗、1-稀丙基_3_甲基味卩坐鐵、1-稀丙基_3_乙基味卩坐鐵、1-稀丙基_3- 丁基味卩坐鐵、1，3- _.烯丙基咪唑鎗、1-苯甲基-3-甲基咪唑鎗、1-(2-羥乙基)-3-甲基咪唑鎗等。
[0118]作為1-烷基-2，3-二烷基咪唑鎗鹽，可以舉出例如1-乙基-2，3-二甲基咪唑鎗、
1,2,3,-三乙基咪唑鎗、1，2- 二甲基-3-丙基咪唑鎗、1- 丁基_2，3- 二甲基咪唑鎗、1-己基-2，3- 二甲基咪唑鎗、I，3- 二癸基2-甲基咪唑鎗等。
[0119]作為吡啶鹽類，可以舉出例如1-甲基吡啶、1-乙基吡啶、1-丁基吡啶、1-己基吡啶、1-乙基-3-甲基吡啶、1-甲基-4-甲基吡啶、1-丙基-4-甲基吡啶、1-丙基-3-甲基吡啶、1-丁基-2-甲基吡啶、1-丁基-3-甲基吡啶、1-乙基-3-羥基甲基、1-(3-羥丙基)吡唆等。
[0120]作為哌啶鎗鹽類，可以舉出例如1-甲基-1-丙基哌啶鎗、1-丁基-1-甲基哌啶鎗、1-(甲氧基乙基)-1-甲基哌啶鎗等。
[0121]作為吡咯鎗鹽類，可以舉出例如1，1_ 二甲基吡咯、1-乙基-1-甲基吡咯、1-甲基-1-丙基吡咯、1-丁基-1-甲基吡咯、1-(甲氧基乙基)-1-甲基吡咯等。
[0122]作為季銨鹽類，可以舉出例如四甲基銨、四丁基銨、丁基三甲基銨、乙基-二甲基_丙基銨、二丁基甲基銨、甲基二羊基銨、2-輕乙基銨等，除此之外，例如膽喊、N, N- 二乙基-N-甲基-N-(2-甲氧基乙基)銨、三甲胺氧化物等。
[0123]作為鱗鹽類，可以舉出例如四丁基鱗、三丁基十六烷基鱗、三乙基戊基鱗、三乙基(2-)-0，0’]硼酸鹽、癸酸鹽、雙(2,4, 4-三
農(nóng)磺酸鹽、二乙基膦酸鹽、苯甲酸鹽、硫代琥
坐寸。
0116111.800.，2005，127，2398-2399 所不方:處所述氨基酸可以是單體，也可以是二肽、電以1: 1的比例形成離子對，但對于本發(fā)
0
七合物，或含有兩親性化合物和金屬化合物9成分的基礎(chǔ)上，可以以任意的比例添加以維生素類及其衍生物、脂肪酸及其衍生物、
卜，可以配合氨基酸及其衍生物。作為氨基變、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、蛋？氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、鍵合的物質(zhì)、其高分子等。這些可以是單獨(dú):些的衍生物。硫酸原黃素水合物、吡哆醛鹽酸鹽、5-磷酸吡哆醛一水合物、吡哆醇3，4-棕櫚酸鹽、異抗壞血酸鈉一水合物、二硫化硫胺水合物、二硫化硫胺硝酸鹽等。作為維生素相關(guān)物質(zhì)，可以舉出氯化膽堿、溴化膽堿、枸櫞酸二氫膽堿、重酒石酸膽堿輔酶Q10、輔酶Qo、蛋氨酸甲基磺酰氯、肌醇類等。
[0132]作為高分子材料，可以舉出例如聚乙烯醇、特氟隆(注冊商標(biāo))、聚偏氟乙烯、四乙氧基娃燒、四甲氧基娃燒、異丙醇?xì)J、丁醇錯(cuò)等。
[0133]作為賦予上述SS效果的溶液的組成成分，可以將上述的離子液體添加到其它必需成分中而配合。
[0134]作為賦予上述SS效果的溶液的組成分，除了兩親性化合物、金屬化合物、糖等上述例示的成分以外，還可以配合下述成分。
[0135]配位化合物:冠醚、環(huán)糊精、間苯二酚環(huán)狀四聚體、杯芳烴、樹狀高分子等。
[0136]脂肪酸和其衍生物:亞油酸、油酸、棕櫚酸、亞麻酸等。
[0137]糖和脂肪酸的衍生物:玻璃酸、神經(jīng)酰胺、兩親性化合物、膠原蛋白、氨基酸、精油、凡士林等。
[0138]凝膠化劑:聚(卩比唳-1，4-二亞氨基羰基-1,4-亞苯基亞甲基氯化物(Poly(pyridinium-1, 4-diyliminocarbonyl-l, 4-phenylene methylene chloride)等。
[0139]色素:除葉綠素、類胡蘿卜素(番茄紅素)、藻膽素、黑色素等之外，有紅辣椒色素、孔雀石綠等。
[0140]導(dǎo)電性聚合物:聚乙炔、聚苯胺、聚噻吩等，以及全氟樹脂(naphion)等。
[0141]納米粘土:以Nanoclay NanomerwLaponite的名稱而商品化的物質(zhì)和蒙脫石等。
[0142]在質(zhì)譜分析用試劑中主要用于MALDI法的基底材料:3_氨基_4_羥基苯甲酸、芥子酸、七葉亭、4-羥基偶氮苯-2’ -羧酸、3-羥基-2-11吡啶羧酸、煙酸、2’，4’，6’ -三羥基苯乙酮、α-氰基-4-羥基桂皮酸、2，5-二羥基苯甲酸等。
[0143]本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物可以是固體狀態(tài)、液狀，但為了在真空下保持試樣組織的水環(huán)境，優(yōu)選液狀且粘性高的狀態(tài)的組合物。另外，固體狀態(tài)的組合物在使用時(shí)可以變?yōu)橐籂顟B(tài)使用。
[0144]對于本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物而言，例如，如將上述各成分溶于水、有機(jī)溶劑等，在試樣上直接覆蓋等，則可以在試樣的表面形成極薄的膜。
[0145]本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物中，兩親性化合物與金屬化合物及糖的配合比例沒有特別限定，但作為優(yōu)選的情況，可列舉例如下述組成。
[0146](I)兩親性化合物(十二烷基苯磺酸鈉)/金屬化合物(亞乙基二胺鎳絡(luò)合物)=0.005 / 0.001 ?0.05 / 0.01
[0147](2)兩親性化合物(十二烷基硫酸鈉)/金屬化合物(亞乙基二胺鎳絡(luò)合物)=0.005 / 0.0001 ?0.05 / 0.001
[0148](3)兩親性化合物(十二烷基苯磺酸鈉)/金屬化合物(四胺鈷絡(luò)合物)=0.005 /0.001 ?0.05 / 0.01
[0149](4)兩親性化合物(吐溫20) /糖(海藻糖)=3 / I?20 / 2
[0150](5)兩親性化合物(吐溫20) /糖(支鏈淀粉)=3 / 0.2?20 / 2
[0151](6)兩親性化合物(吐溫20 /糖(菊糖)=3 / 0.1?20 / 7[0152]本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物可通過涂布、附著、包覆、被覆等應(yīng)用于試樣表面。例如，對于涂布的情況而言，在涂布后，將多余的液體用無塵布之類柔軟的布狀的紙、濾紙等吸除。用于TEM觀察的試樣通過介質(zhì)的涂布、附著、包覆、被覆、包埋等進(jìn)行處理。
[0153]由此在試樣表面形成的薄膜的膜厚可以控制在例如5nm?IOOOnm的范圍內(nèi)。
[0154]需要說明的是，上述“生物試樣”包括原核生物和真核生物。
[0155]原核生物包括細(xì)菌、古菌。
[0156]細(xì)菌包括酸桿菌門、產(chǎn)水菌門、放線菌門、依魯司（Elusimicrobia)門、卡爾第(Caldiserica)門、衣原體門、綠菌門、綠屈撓菌門、產(chǎn)金菌門、熱脫硫桿菌門、熱微菌門、藍(lán)藻門、芽單胞菌門、互養(yǎng)菌門、螺旋菌門、網(wǎng)絡(luò)球桿菌門、異常球菌-棲熱菌門、軟壁菌門、脫鐵桿菌門、熱袍菌門、硝化螺旋菌門、擬桿菌門、厚壁菌門、纖維桿菌門、梭桿菌門、浮霉菌門、變形菌門、疣微菌門、黏膠球形菌門。
[0157]古菌包括泉古菌門（界）、廣古菌門（界）、初古菌門（界）、納古菌門、奇古菌門。
[0158]真核生物包括原生生物界、植物界、菌界、動(dòng)物界。
[0159]原生生物界包括藻類（綠藻、褐藻、紅藻、硅藻類、裸藻門、隱藻門、渦鞭毛藻門）、原生動(dòng)物（絨毛蟲門、根足亞類（變形蟲、有孔蟲、太陽蟲、放射蟲）、孢子蟲門（頂復(fù)門、微孢子蟲、粘液孢子蟲）、鞭毛蟲（錐體蟲類、襟鞭毛蟲、超鞭毛蟲、多鞭毛蟲））、以及變形菌門、細(xì)胞性粘菌、盤根足蟲綱、二毛菌門。
[0160]植物界包括綠藻門、苔蘚植物門、車軸藻門、維管束植物界（古生松葉蘭門、石松門、木賊門、瓶爾小草門、蕨類植物門、裸子植物（松柏門）、蘇鐵門、銀杏門、麻黃屬門、被子植物門（紫玉蘭門（雙子葉植物綱（紫玉蘭綱）、單子葉植物綱（百合綱）））。
[0161]菌界包括壺菌門（壺菌）、接合菌門（毛霉、根霉）、子囊菌門（酵母、粉色面包霉）、擔(dān)子菌門（蕈）、半知菌、地衣植物門。
[0162]動(dòng)物界包括多孔動(dòng)物門、扁盤動(dòng)物門（絲盤蟲）、刺胞動(dòng)物門（水母、?？?、珊瑚）、櫛水母動(dòng)物門（櫛水母）、中生動(dòng)物門（菱形蟲）、扁形動(dòng)物門（渦蟲綱、渦蟲）、紐形動(dòng)物門（紐蟲）、顎胃動(dòng)物門、腹毛動(dòng)物門、輪形動(dòng)物門（輪蟲）、動(dòng)吻動(dòng)物門、棘頭動(dòng)物門、內(nèi)肛動(dòng)物門、線蟲動(dòng)物門（蛔蟲、秀麗隱桿線蟲）、線形蟲動(dòng)物門（針金蟲）、外肛動(dòng)物門、帚蟲動(dòng)物門、腕足動(dòng)物門、軟體動(dòng)物門（貝、烏賊、章魚）、鰓曳動(dòng)物門、星蟲動(dòng)物門（星蟲）、縊蟲動(dòng)物門、環(huán)節(jié)動(dòng)物門（蚯蚓、沙蠶）、緩步動(dòng)物門（熊蟲）、五口動(dòng)物門、有爪動(dòng)物門（鉤蟲）、節(jié)肢動(dòng)動(dòng)物門（螫肢亞門（海蜘蛛綱、鱟科（鱟）、肢口綱（蜘蛛、蝎子））、甲殼亞門（蝦、蟹）、多足亞門（百足綱（唇足綱、蜈蚣）、綜合綱（結(jié)合綱、小蜈蚣、少足綱（少腳綱、少足蟲）、馬陸綱（倍足綱、馬陸））、六足亞門（內(nèi)顎綱、外顎綱（昆蟲綱）））、須腕動(dòng)物門、棘皮動(dòng)物門（海膽、海星、蛇尾、海參、海百合）、毛顎動(dòng)物門（肥胖箭蟲）、半索動(dòng)物門（擬寶珠蟲）、脊索動(dòng)物門（尾索動(dòng)物亞門（海鞘）、頭索動(dòng)物亞門（文昌魚）、脊椎動(dòng)物亞門（無頜上綱（盲鰻綱、頭甲魚綱（八目鰻））、有頜上綱（軟骨魚綱（鯊魚、鱘魚、黑線銀鮫）、肉鰭亞綱（腔棘魚、肺魚）、輻鰭魚綱、兩棲綱、爬行綱、哺乳綱、鳥綱）））。
[0163]根據(jù)本發(fā)明的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法，可以如下地觀察試樣：使用以上說明的蒸發(fā)抑制用組合物，在試樣的表面應(yīng)用蒸發(fā)抑制用組合物形成薄膜，用薄膜覆蓋該試樣，將收容在真空下的試樣室內(nèi)的用該薄膜覆蓋的試樣的電子顯微鏡圖像顯示于顯示裝置。[0164]特別是，可以通過如下方法來觀察試樣:在將該蒸發(fā)抑制用組合物應(yīng)用于試樣表面之后，向應(yīng)用了蒸發(fā)抑制用組合物的試樣照射電子射線或等離子體，在試樣的表面形成作為薄膜的聚合膜(聚合物的膜)，從而用該聚合膜覆蓋試樣，將收容在真空下的試樣室內(nèi)的用該聚合膜覆蓋的試樣的電子顯微鏡圖像顯示于顯示裝置。
[0165]可以通過在電子顯微鏡的試樣室內(nèi)向試樣照射試樣觀察用電子射線，使聚合反應(yīng)進(jìn)行，從而在試樣的表面形成該聚合膜。
[0166]或者，可以通過在利用電子顯微鏡觀察試樣之前，預(yù)先向試樣照射區(qū)別于電子顯微鏡的試樣觀察用電子射線的電子射線或等離子體，使聚合反應(yīng)進(jìn)行，從而在試樣的表面形成該聚合膜。
[0167]照射條件可根據(jù)所使用的蒸發(fā)抑制用組合物等適當(dāng)選擇，沒有特別限制，作為其一例，可通過不進(jìn)行傳統(tǒng)的前處理、而是在試樣室內(nèi)對用蒸發(fā)抑制用組合物覆蓋的生物試樣照射SEM的電子束(例如5.0kV左右)60分鐘，來實(shí)現(xiàn)高真空(例如10_4-10_7pa)下保持存活的生物試樣的SEM觀察、例如常規(guī)的利用FE-SEM的觀察。
[0168]另外，作為另一例，可通過不進(jìn)行傳統(tǒng)的前處理、而是預(yù)先對用蒸發(fā)抑制用組合物覆蓋的生物試樣進(jìn)行3分鐘等離子體照射，來實(shí)現(xiàn)高真空下保持存活的生物試樣的SEM觀察或TEM觀察。
[0169]通過這樣的電子射線、等離子體照射，試樣的表面被薄的聚合膜覆蓋。在形成于生物試樣表面的情況下，該聚合膜的厚度可以在例如5nm~1000nm的范圍。
[0170]利用等離子體照射而進(jìn)行的聚合可使用例如傳統(tǒng)的離子濺射裝置等，在壓力10-3~105Pa、-20~+80°C、1~IOkV DC的條件下進(jìn)行。或者，可以采用在以往的等離子體聚合中使用的那樣的諸如反應(yīng)管之類的裝置、方法進(jìn)行。
[0171]本發(fā)明中，為了利用電子顯微鏡進(jìn)行觀察，對于用于SEM觀察的試樣，可通過進(jìn)行蒸發(fā)抑制用組合物的涂布、附著、包覆、被覆等進(jìn)行處理。例如，就涂布的情況而言，在涂布后，將多余的液體用像無塵布那樣柔軟的布狀的紙、濾紙等吸除。對于用于TEM觀察的試樣，可通過進(jìn)行蒸發(fā)抑制用組合物的涂布、附著、包覆、被覆、包埋等進(jìn)行處理。
[0172]根據(jù)本發(fā)明，能夠在不使試樣變形的情況下進(jìn)行觀察且不會(huì)破壞試樣本身的狀態(tài)。另外，能夠利用電子顯微鏡對存活的生物試樣在保持其存活的狀態(tài)下進(jìn)行觀察，且可以觀察到活動(dòng)情況。根據(jù)本發(fā)明，用于賦予SS效果的組合物不僅可以抑制電子顯微鏡的試樣的損失,還能夠抑制真空中試樣的損失。
[0173]本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物作為用于利用電子顯微鏡觀察試樣的良好的可視化劑發(fā)揮作用。即，對于作為生物/活體試樣的物質(zhì)，無需實(shí)施傳統(tǒng)的脫水、化學(xué)固定、電子染色，可以在保持存活的狀態(tài)下將存活試樣放入電子顯微鏡的鏡體內(nèi)，且在進(jìn)行觀察時(shí)，也能夠抑制減壓下的干燥、冰晶、溫度變化引起的損傷，并且能夠獲得阻隔試樣中的水/氣體的表面屏蔽效果(SS效果)。
[0174]另外，可防止電子射線照射引起的帶電等，可以在真空下通過電子射線照射而獲得良好的二次電子像。能夠在保持存活試樣存活的狀態(tài)下實(shí)現(xiàn)高倍率的電子顯微鏡觀察。
[0175]即，本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物由于作為用于利用電子顯微鏡觀察試樣的良好的可視化劑發(fā)揮作用，因此，適宜用于利用掃描電子顯微鏡、透射電子顯微鏡進(jìn)行的試樣觀察。[0176]本發(fā)明提供在利用電子顯微鏡觀察試樣的方法中，用于在不使試樣變形的情況下觀察試樣本身的形狀的方法和組合物(試劑材料)，特別是，對于生物/活體試樣，提供用于對保持存活的狀態(tài)進(jìn)行觀察的方法和組合物(試劑材料)。
[0177]在生物試樣的表面，利用化學(xué)物質(zhì)形成保護(hù)膜。該膜可防止生物試樣中所含的水、空氣(氣態(tài)物質(zhì))在真空下發(fā)生脫離。膜的形成可以在大氣壓條件下進(jìn)行，也可以在真空下進(jìn)行，所形成的膜在真空下將變得更為強(qiáng)固。膜的形成可以是一片膜，也可以是多層。
[0178]為了將外界與內(nèi)界隔開，有利用無機(jī)物質(zhì)(陶瓷)進(jìn)行覆蓋等的方法。該方法中，表面硬，因而可能導(dǎo)致試樣活動(dòng)受到阻礙，或者，對于存活試樣的情況而言，還可能會(huì)因呼吸受阻而死亡。與此相對，在本發(fā)明中，通過利用袋子等均一地包覆整個(gè)試樣的方法，可使這些問題得以解決。
[0179]本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物提供在大氣壓下及真空下對于生物體內(nèi)的水、氣體等具有蒸發(fā)性的物質(zhì)的阻隔能力。利用該能力，可以防止在真空下生物內(nèi)物質(zhì)的蒸發(fā)。并且，不會(huì)引起伴隨蒸發(fā)的溫度降低，可賦予活動(dòng)能力，且可保持生物試樣本身的形態(tài)，在減壓下也能夠保持用以使生物能夠活動(dòng)的體內(nèi)溫度。
[0180]利用本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物覆蓋試樣的情況下，如果是生物試樣，則能夠?qū)崿F(xiàn)保持存活的包覆，在包覆之后生物也能夠生存。通過利用由本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物形成的薄膜覆蓋存活生物的體表，可以用掃描電子顯微鏡觀察生物試樣的存活狀態(tài)，并且能夠觀察到生物微細(xì)表面等的結(jié)構(gòu)。
[0181]另外，根據(jù)本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物，通過覆蓋存活生物的體表，能夠利用掃描電子顯微鏡直接觀察生物試樣的存活狀態(tài)，而不會(huì)發(fā)生帶電(電荷積累)。
[0182]另外，在利用電子顯微鏡進(jìn)行觀察時(shí)，無需進(jìn)行迄今為止必不可少的、在進(jìn)行生物/活體試樣的試樣制作時(shí)必要的化學(xué)固定一導(dǎo)電染色一脫水一干燥一包覆、或化學(xué)固定—脫水一包埋一超薄切片一電子染色一包覆等工序，即可實(shí)現(xiàn)高倍率的觀察。
[0183]不僅限定于生物試樣，本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物可以在不造成試樣破壞的情況下對含水試樣的濕潤狀態(tài)直接進(jìn)行真空下的電子顯微鏡觀察。
[0184]本發(fā)明的蒸發(fā)抑制用組合物在利用電子顯微鏡的測定中也可以抑制試樣的變形、變質(zhì)，因而不會(huì)在測定前后對試樣造成明顯的損傷。除了在真空下具有水/氣體阻隔性能、可抑制試樣內(nèi)溫度的顯著降低，并且即使在真空下照射電子射線也顯示出水/氣體阻隔性能、對試樣內(nèi)溫度的顯著降低的抑制以外，還能夠?qū)崿F(xiàn)對電子射線照射引起的帶電的防止、對熱損傷的抑制。試樣為生物試樣的情況下，能夠在保持存活的情況下對存活狀態(tài)的試樣進(jìn)行觀察，且即使從鏡體中取出也不會(huì)發(fā)現(xiàn)試樣有任何變化。
[0185]本發(fā)明中，利用掃描電子顯微鏡及透射電子顯微鏡進(jìn)行的試樣觀察可以通過迄今為止已知構(gòu)成的裝置進(jìn)行。
[0186]掃描電子顯微鏡通常由鏡筒部(鏡體)和操作部構(gòu)成。在鏡筒部，利用電子槍產(chǎn)生電子射線、利用電子透鏡匯聚電子射線、利用電子探測器進(jìn)行整形、利用偏轉(zhuǎn)線圈使電子探測器在試樣表面的觀察區(qū)域進(jìn)行掃描等。載置試樣的試樣室具備:試樣臺(tái)、和檢測由試樣放出的信號(hào)的檢測器。由于必須要將該鏡筒部保持于潔凈的真空中，因此可設(shè)置與目的相對應(yīng)的真空排氣機(jī)構(gòu)。
[0187]操作部進(jìn)行對電子射線的產(chǎn)生、電子透鏡的透鏡作用、非點(diǎn)補(bǔ)正、電子探測器在試樣面上的掃描范圍（倍率）及掃描速度等的控制，并將檢測到的信號(hào)以映像形式顯示在CRT上。
[0188]另外，對于靜止的掃描電子顯微鏡圖像，通常利用噪音低的低功率掃描圖像進(jìn)行觀察、拍攝，但在存活的生物試樣的掃描利用電子顯微鏡的觀察中，以TV模式下的觀察、SP動(dòng)畫的映像為主。因此，也可考慮在掃描電子顯微鏡中引入噪音低（S / N?。┑腡V模式圖像顯示/錄像電路，以高畫質(zhì)的TV模式進(jìn)行掃描電子顯微鏡圖像的顯示和錄像。
[0189]本發(fā)明中，利用掃描電子顯微鏡及透射電子顯微鏡的試樣觀察也可以利用迄今為止已知構(gòu)成的裝置進(jìn)行，但如下所述的新型構(gòu)成的裝置更適用于本發(fā)明的方法。
[0190]圖22是示意性地示出了本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的一實(shí)施方式的主要部分的圖。該掃描電子顯微鏡（SEM) I具備能夠?qū)⑴渲糜阽R體內(nèi)的試樣室的試樣4導(dǎo)入的預(yù)排氣室2、和對試樣室及預(yù)排氣室2進(jìn)行脫氣的排氣裝置7。
[0191]利用SEMl進(jìn)行試樣觀察時(shí)，將試樣設(shè)置于試樣室中進(jìn)行觀察，但為了保持高真空，可以在試樣室與外部之間設(shè)置預(yù)排氣室2作為試樣交換室，利用試樣交換棒3進(jìn)行試樣4的導(dǎo)入導(dǎo)出。
[0192]該預(yù)排氣室2與真空泵等排氣裝置7連通，它們之間的排氣通路中設(shè)置有針型閥等調(diào)節(jié)閥6，在相對于調(diào)節(jié)閥6的排氣上游側(cè)設(shè)置有皮拉尼真空計(jì)等真空計(jì)5。這樣，形成為安裝了能夠利用排氣裝置7對試樣室及預(yù)排氣室2進(jìn)行緩慢脫氣的機(jī)構(gòu)，從而能夠保持恒定的真空度，并能夠在各個(gè)真空度下完成其它操作的構(gòu)成。
[0193]利用SEMl觀察活體試樣的情況下，必須將活體試樣從大氣壓中導(dǎo)入真空中。但不僅是活體試樣、連微細(xì)結(jié)構(gòu)體也會(huì)因排氣時(shí)的壓力變化、風(fēng)壓而受到影響。因此，需要設(shè)置可以使從大氣壓開始進(jìn)行的真空排氣更為穩(wěn)定的機(jī)構(gòu)。
[0194]基于此，該實(shí)施方式中，為了能夠?qū)剞D(zhuǎn)泵區(qū)域的達(dá)到極限真空度為止的真空排氣速度進(jìn)行控制，在SEMl中設(shè)置了由真空計(jì)5和調(diào)節(jié)閥6組合而成的機(jī)構(gòu)。對于這樣的階段性地進(jìn)行排氣的裝置（能夠在不同真空度下使用）而言，優(yōu)選使預(yù)排氣室2和試樣室較大，并設(shè)置高功能的真空泵、以使其能夠?qū)Υ蠓块g有效地抽真空，且以能夠瞬時(shí)進(jìn)行真空度控制的方式設(shè)置。
[0195]圖23是示意性地示出了本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的其它實(shí)施方式的主要部分的圖。（a)為SEM主體和電源的主視圖、(b)是其側(cè)視圖、（C)為卸下手套箱的狀態(tài)的側(cè)視圖、(d)為安裝有手套箱的狀態(tài)的側(cè)視圖、（e)為示出了手套箱中安裝有不活潑氣體儲(chǔ)氣瓶的狀態(tài)的立體圖。
[0196]該實(shí)施方式中，預(yù)排氣室2中具備手套箱12。通過在預(yù)排氣室2中設(shè)置手套箱，可以進(jìn)行真空下的操作。
[0197]如（c)及（d)所示，在安裝有電源9的SEMl的鏡體8的下部的試樣室10中橫靠地設(shè)置有手套箱12，并使手套箱12內(nèi)的罩體14內(nèi)收容有試樣架11。
[0198]手套箱12具有安裝有橡膠手套等的操作用入口 15、和能夠看見內(nèi)部的窗部14，可以在真空下進(jìn)行處理試樣的操作。并且，其可以利用試樣架11將覆蓋試樣的薄膜從作為試樣導(dǎo)入部的手套箱12內(nèi)導(dǎo)入到SEMl內(nèi)的試樣室中，而不會(huì)暴露于大氣壓下。例如，可以在與SEMl連結(jié)的手套箱12內(nèi)進(jìn)行等離子體聚合膜的成膜。
[0199]另外，手套箱12不僅可以在真空下進(jìn)行樣品的處理，而且還可以如（e)所示地設(shè)置能夠向手套箱12內(nèi)導(dǎo)入氬氣、氮?dú)獾炔换顫姎怏w的不活潑氣體儲(chǔ)氣瓶16，利用不活潑氣體將手套箱12內(nèi)置換之后加以使用。這適用于等離子體處理等。例如，在預(yù)排氣室2內(nèi)利用聚合反應(yīng)在試樣表面形成聚合膜時(shí)，可以填充氮?dú)?、氬氣等特定的氣體來控制反應(yīng)。
[0200]圖24是示意性地示出了本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的另一實(shí)施方式的主要部分的示意圖。該實(shí)施方式中，在預(yù)排氣室2具備等離子體照射裝置或電子射線照射裝置18。
[0201]需要說明的是，該等離子體照射裝置或電子射線照射裝置18也可以設(shè)置于SEMl的試樣室。
[0202]另外，預(yù)排氣室2具備透明的鐘罩17?？梢愿糁撏该鞯溺娬?7照射來自等離子體照射裝置或電子束照射裝置18的等離子體及電子束。
[0203]例如，作為等離子體照射裝置，除了可以使用在以往的離子蝕刻中被使用的那樣的固定了照射部分的類型的裝置以外，還可以附加能夠手動(dòng)地把持及收納照射部分的那樣的手持型照射裝置并分別地加以使用。此外，如果使得等離子體的照射直徑可以在數(shù)rim?數(shù)十cm的范圍內(nèi)調(diào)整、從而根據(jù)試樣4的尺寸改變照射面積/強(qiáng)度，則可以得到不僅能夠控制電流量、而且能夠變更照射直徑本身的尺寸的裝置。
[0204]為了能夠利用電子射線、等離子體的照射使試樣整面發(fā)生均勻的聚合，也可以使配置了試樣4的試樣臺(tái)具有進(jìn)行三維旋轉(zhuǎn)的功能?；蛘?，為了使聚合能夠達(dá)到試樣背面，可以采取使電子射線或等離子體能夠通過試樣臺(tái)的設(shè)計(jì)。另外，可以設(shè)置拍攝預(yù)排氣室2內(nèi)的操作的CCD照相機(jī)，從而對預(yù)排氣狀態(tài)的試樣4的狀態(tài)及等離子體照射的狀態(tài)進(jìn)行監(jiān)視。
[0205]正如上述所舉的例子等那樣，通過在預(yù)排氣室2中設(shè)置能夠以各種條件照射等離子體、電子射線的裝置，能夠自動(dòng)或手動(dòng)地控制等離子體照射裝置或電子束照射裝置18的照射時(shí)間及電流量等。
[0206]圖25是示意性地示出了本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的另一實(shí)施方式的主要部分的圖。該實(shí)施方式中，在試樣室內(nèi)部19具備能夠作用于試樣4的三維操縱裝置21。
[0207]需要說明的是，該三維操縱裝置21也可以設(shè)置于預(yù)排氣室2。
[0208]該三維操縱裝置21用于對成為對象的保持存活的生物等試樣的動(dòng)作加以控制(包括觀看拍攝時(shí)的模糊減輕)。
[0209]該三維操縱裝置21還可以用于微細(xì)活體解剖、刺激、活體信號(hào)導(dǎo)出等。
[0210]例如，作為用于移動(dòng)試樣、進(jìn)行試樣的微細(xì)解剖、或移動(dòng)用以施加物理或化學(xué)刺激的部件的移動(dòng)機(jī)構(gòu)，可以在試樣室內(nèi)部19設(shè)置三維操縱裝置21。為了利用SEMl對試劑與活體試樣的接觸、浸透等反應(yīng)進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，需要能夠一邊射出電子射線從而觀察二次電子像等一邊開始反應(yīng)實(shí)驗(yàn)的裝置。因此，可以將作為移動(dòng)機(jī)構(gòu)的三維操縱裝置21用作一邊利用SEMl進(jìn)行觀察一邊進(jìn)行試樣4的微細(xì)解剖、物理或化學(xué)刺激等的裝置。圖26是示意性地示出了本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的另一實(shí)施方式的主要部分的圖。該實(shí)施方式中，在試樣室內(nèi)部19具備能夠?qū)Χ坞娮訖z測器22和試樣4的相對位置進(jìn)行三維調(diào)節(jié)的檢測位置調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)。
[0211]從而，可使二次電子檢測器22能夠在SEMl內(nèi)移動(dòng)，根據(jù)需要而接近試樣4或以特別的角度與試樣4接觸。由此，能夠?qū)崿F(xiàn)檢測二次電子的增強(qiáng)。
[0212]該檢測位置調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)適宜設(shè)置高速拍攝裝置。S卩，由于是能夠提高掃描速度、可實(shí)現(xiàn)慢速播放的TV模式，因此能夠進(jìn)行對檢測器的區(qū)域控制、以及對到達(dá)檢測器的工作距離的控制等，可以無浪費(fèi)地匯聚二次電子。取前后的差分來將動(dòng)作特征化的軟件等也可以作為插補(bǔ)技術(shù)加以應(yīng)用。
[0213]圖27是示意性地示出了本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的另一實(shí)施方式的主要部分的圖。該實(shí)施方式中，在試樣室內(nèi)部19具備能夠獲取試樣4的顏色信息的高速彩色照相機(jī)23。
[0214]根據(jù)本發(fā)明，能夠?qū)Ρ３执婊畹脑嚇?進(jìn)行觀察，因此可以原封不動(dòng)地保持試樣4的顏色。這樣，由于在試樣室內(nèi)部19設(shè)置高速彩色照相機(jī)23，對于顏色等信息也能夠進(jìn)行記錄，因此可以利用所記錄的實(shí)際顏色，作為模擬色應(yīng)用于SEM觀察到的圖像。
[0215]圖28是示意性地示出了本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的另一實(shí)施方式的主要部分的圖。該實(shí)施方式中，具備能夠?qū)υ嚇邮覂?nèi)部19的試樣臺(tái)20的溫度加以調(diào)節(jié)的溫度調(diào)節(jié)裝置24。
[0216]例如，可以從鏡體外設(shè)置能夠?qū)⒃嚇优_(tái)20的溫度控制在_20°C?100°C之間的不受磁場影響的操作臺(tái)。具體而言，作為例如將試樣臺(tái)20的溫度保持恒定（例如37°C)的裝置，可設(shè)置拍爾帖（Peltier)兀件等。
[0217]利用該溫度調(diào)節(jié)裝置24，可以對配置于試樣臺(tái)20的生物試樣等試樣4的溫度進(jìn)行調(diào)節(jié)。
[0218]圖29是示意性地示出了本發(fā)明的掃描電子顯微鏡的另一實(shí)施方式的主要部分的圖。該實(shí)施方式中，在試樣室內(nèi)部19具備各種傳感器25。
[0219]作為傳感器25，可列舉例如電傳感器、光傳感器、氣體傳感器、水傳感器、溫度傳感器等。另外，可以設(shè)置能夠利用微弱光進(jìn)行測定的高靈敏度傳感器（帶有暗視場照相機(jī)）。
[0220]利用該傳感器25，可以獲得配置于試樣臺(tái)20的生物試樣等試樣4的信息，進(jìn)行對物理或化學(xué)刺激等的響應(yīng)、對聚合反應(yīng)等的監(jiān)視及測定等。
[0221]圖30是示意性地示出了本發(fā)明的透射電子顯微鏡的一實(shí)施方式的主要部分的圖、圖31是示意性地示出了圖30的主要部分的立體圖。該實(shí)施方式中，在配置試樣的柵網(wǎng)33的兩面上各自具有對上述蒸發(fā)抑制用組合物照射電子射線或等離子體而形成的聚合膜32。
[0222]如圖30所示，三明治狀的TEM用試樣架在C型環(huán)30、O型環(huán)31的下方配置有由上下的聚合膜32夾持的柵網(wǎng)33。也可以利用例如真空脂和O型環(huán)對聚合膜32進(jìn)行密封。
[0223]如圖31所示，對于試樣的細(xì)胞34，在柵網(wǎng)33上疊合利用等離子體形成的聚合膜32，并在該聚合膜32上載置細(xì)胞34，然后涂布上述蒸發(fā)抑制用組合物，進(jìn)行等離子體照射而形成聚合膜32。例如，透射電子顯微鏡與圖22的SEM的情況同樣，具備能夠?qū)肱渲糜阽R體內(nèi)的試樣室的試樣的預(yù)排氣室、和對試樣室及預(yù)排氣室進(jìn)行脫氣的排氣裝置。另外，與圖24的SEM的情況同樣，可以在試樣室或預(yù)排氣室中具備等離子體照射裝置或電子射線照射裝置。這樣，在為了實(shí)現(xiàn)在TEM的預(yù)排氣室內(nèi)進(jìn)行等離子體或電子射線聚合而加以改良時(shí)，可以涂布上述蒸發(fā)抑制用組合物并進(jìn)行等離子體照射而形成聚合膜32。通過在數(shù)nm?數(shù)十cm的范圍內(nèi)調(diào)節(jié)等離子體的照射直徑，可以根據(jù)試樣的尺寸而改變照射面積。另外，通過利用這樣的方法將標(biāo)的細(xì)胞及培養(yǎng)液密封于試樣架內(nèi)，在高真空中也能夠在保持存活的情況下進(jìn)行動(dòng)態(tài)解析。還能夠?qū)Y(jié)合了金膠體的試樣進(jìn)行觀察。此外，通過對STEM(掃描透射電子顯微鏡，Scanning transmission electron Microscope)加以改良，使照射至加入到TEM內(nèi)的存活試樣的電子射線量減少，可以實(shí)現(xiàn)長時(shí)間的觀察。
[0224]實(shí)施例
[0225]以下，結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行更為詳細(xì)的說明，但本發(fā)明完全不受這些實(shí)施例的限定。
[0226]在下述實(shí)施例中，典型的SEM觀察利用場致發(fā)射型掃描電子顯微鏡(FESEM、S-4800 (日立))、在5.0kV的加速電壓下進(jìn)行。為了記錄生物試樣的動(dòng)態(tài)活動(dòng)，SEM的圖像數(shù)據(jù)直接轉(zhuǎn)送至錄像/錄音機(jī)(H1-band digital formatted video recorder,Pioneer, DVR-DT95)。
[0227]典型的TEM觀察在120kV的加速電壓下利用JEM-1220 (JEOL)進(jìn)行。
[0228]典型的等離子體聚合利用拆卸掉金屬靶后的離子濺射裝置(JFC-1100，JE0L)進(jìn)行，在約1.0Pa的真空水平下、于室溫以1.0kV DC(8.0mA)進(jìn)行3分鐘等離子體照射。
[0229]<實(shí)施例1>
[0230]將作為兩親性化合物的十二烷基苯磺酸鈉制成0.1 %水溶液，并將作為金屬化合物的亞乙基二胺鎳絡(luò)合物制成0.01wt%，使用它們制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0231]將存活的金花蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0232]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝(圖1)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到金花蟲活動(dòng)的情況。
[0233]并且，在進(jìn)行SEM觀察后，將金花蟲從試樣室取出后其仍然生存。
[0234]<實(shí)施例2>
[0235]將作為兩親性化合物的十二烷基苯磺酸鈉制成0.1 %水溶液，并將作為金屬化合物的亞乙基二胺鎳絡(luò)合物制成0.01wt%，使用它們制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0236]將存活的跳蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0237]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝(圖2)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到跳蟲活動(dòng)的情況。
[0238]并且，在進(jìn)行SEM觀察后，將跳蟲從試樣室取出后其仍然生存。
[0239]<實(shí)施例3>
[0240]將作為兩親性化合物的吐溫20制成10%水溶液，并將作為糖的海藻糖制成1%(w / V)、將普魯蘭多糖制成0.1% (w / V)，使用它們制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0241]將存活的羽搖蚊幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0242]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝(圖3)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到羽搖蚊的幼蟲活動(dòng)的情況。
[0243]并且，在進(jìn)行SEM觀察后，將羽搖蚊幼蟲從試樣室取出后其仍然生存，且變態(tài)為成蟲。
[0244]<實(shí)施例4>
[0245]將作為兩親性化合物的吐溫20制成10%水溶液，并將作為糖的海藻糖制成1%(w / V)、將普魯蘭多糖制成0.1% (w / V)，使用它們制備了蒸發(fā)抑制用組合物。[0246]將存活的孑孓（白紋伊蚊）幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0247]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝（圖4)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到孑孓幼蟲活動(dòng)的情況。
[0248]并且，在進(jìn)行SEM觀察后，將孑孓幼蟲從試樣室取出后其仍然生存，且變態(tài)為成蟲。
[0249]<實(shí)施例5>
[0250]將作為兩親性化合物的吐溫20制成10%水溶液，并將作為糖的海藻糖制成1%(w / V)、將普魯蘭多糖制成0.1% (w / V)，使用它們制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0251]將存活的孑孓幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0252]然后，放入TEM試樣室進(jìn)行了拍攝（圖5)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到孑孓幼蟲活動(dòng)的情況。
[0253]<實(shí)施例6>
[0254]將作為兩親性化合物的十二烷基苯磺酸鈉制成O. I %水溶液，并將作為金屬化合物的亞乙基二胺鎳絡(luò)合物制成O. 01wt%，使用它們制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0255]用明膠膠囊包入螞蟻，并用抗靜電用碳帶固定，用明膠將孔封閉。這樣，將螞蟻放入明膠膠囊后保持內(nèi)部的大氣，同時(shí)僅使觀察部位的腳伸出至膠囊外，在該腳部分涂布蒸發(fā)抑制用組合物，進(jìn)行了存活狀態(tài)下的SEM觀察。拍攝到了腳部分的活動(dòng)（圖6)。
[0256]另外，在進(jìn)行SEM觀察后，將螞蟻從試樣室取出后其仍然生存。
[0257]<實(shí)施例7>
[0258]將作為兩親性化合物的十二烷基苯磺酸鈉制成O. I %水溶液，并將作為金屬化合物的亞乙基二胺鎳絡(luò)合物制成O. 01wt%，使用它們制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0259]將存活的青鏘的鱗在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘，然后，放入TEM試樣室進(jìn)行了拍攝（圖7)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到內(nèi)部的微細(xì)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化的情況。
[0260]<實(shí)施例8>
[0261]將作為兩親性化合物的吐溫20制成10%水溶液，并將作為糖的海藻糖制成1%(w / V)、將普魯蘭多糖制成0.1% (w / V)，使用它們制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0262]將花鏘連同飼養(yǎng)水一起封入微管，僅使尾鰭伸出至管外，用牙蠟將孔封閉。這樣，將花鏘放入微管后保持內(nèi)部的大氣及水系，同時(shí)僅使觀察部位的尾鰭伸出至管外，在該腳部分涂布蒸發(fā)抑制用組合物，進(jìn)行了存活狀態(tài)下的SEM觀察。在電子束照射開始后仍然可以拍攝到尾鰭的活動(dòng)（圖8)。
[0263]另外，在進(jìn)行SEM觀察后，將花鏘從試樣室取出后其仍然生存。
[0264]<實(shí)施例9>
[0265]將作為兩親性化合物的吐溫20制成10%水溶液，并將作為糖的海藻糖制成1%(w / V)、將普魯蘭多糖制成0.1% (w / V)，使用它們制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0266]將水螅外胚層性上皮細(xì)胞在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘，然后，放入TEM試樣室，在電子束照射開始后仍然可以在存活狀態(tài)下拍攝視頻（圖9)。圖中，左圖為光學(xué)顯微鏡圖像、右圖為TEM的視頻影像。未進(jìn)行傳統(tǒng)的前處理而是進(jìn)行上述處理之后，直接在高真空下進(jìn)行了 3分鐘電子射線照射(120kV)。
[0267]< 實(shí)施例 10>
[0268]作為蒸發(fā)抑制用組合物，使用了油脂類。
[0269]將存活的渦蟲在蒸發(fā)抑制用組合物(硅油)中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0270]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝(圖10)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到渦蟲活動(dòng)的情況。
[0271]并且，在進(jìn)行SEM觀察后，將渦蟲從試樣室取出后其仍然生存。
[0272]〈實(shí)施例11>
[0273]作為兩親性化合物，使用了吐溫20。為了制作自立的薄膜，將50% (V / v)的吐溫20溶解于100%乙醇中，并使用旋涂機(jī)(3000rpm、5s) (SC8001、Aiden)在玻璃上攤開，進(jìn)行了等離子體聚合。在乙醇中使聚合后的薄膜與玻璃板分離。
[0274]圖11 (a)為通過進(jìn)行等離子體照射而制成的自立性的聚合膜(吐溫20)的光學(xué)顯微鏡圖像、(b)為吐溫20的化學(xué)式、(c)為膜表面的AFM圖像、⑷為膜剖面的TEM圖像。
(d)中，箭頭之間為吐溫20的聚合膜。在照射側(cè)的表面(箭頭之間的部分)形成了薄層。
[0275]接著，將作為兩親性化合物的吐溫20制成1%水溶液，并使用其制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0276]將存活的孑孓幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0277]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝(圖12)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到孑孓幼蟲活動(dòng)的情況。
[0278]圖12為SEM傳統(tǒng)圖像、和由利用等離子體照射膜(吐溫20)包覆的試樣得到的新的SEM圖像。(a)為孑孓的光學(xué)顯微鏡圖像、(b)?⑷為SEM傳統(tǒng)圖像、(f)?(η)為等離子體照射個(gè)體(未涂布吐溫2的個(gè)體:(f-1);涂布了吐溫20的個(gè)體:(k-n))、(e，j, ο)為試樣剖面的TEM圖像。
[0279]對存活的孑孓(a, timeO)在SEM內(nèi)的高真空下照射了 30分鐘電子射線(b_d,time30)。箭頭代表靜電帶電的區(qū)域。
[0280]f-1中，向用I %吐溫20覆蓋的存活的孑孓進(jìn)行3分鐘等離子體照射(f，timeO)，然后用SEM進(jìn)行了 30分鐘觀察(g-1)。
[0281]k-n中，利用傳統(tǒng)SEM對存活的孑孓進(jìn)行了電子射線照射(k為光學(xué)顯微鏡圖像)，然后進(jìn)行了觀察(1-n)。
[0282]將b，g，l的各自中的四方內(nèi)放大(c，h，m)、進(jìn)一步放大(d，i，n)。
[0283](e, j, ο)為試樣剖面的TEM圖像，箭頭之間的層是通過等離子體處理而形成的聚合膜。
[0284]< 實(shí)施例 12>
[0285]作為兩親性化合物，使用了Triton?X-100。將 I % (v / V)的 TritonTMX_100溶解于蒸餾水，并使用旋涂機(jī)在玻璃上攤開，進(jìn)行了等離子體聚合，進(jìn)行與實(shí)施例11相同的操作，得到了自立性的薄膜。圖13(a)是通過等離子體照射制成的自立性的聚合膜(Triton?X-100)的光學(xué)顯微鏡圖像、圖13(b)是Triton? X-100的化學(xué)式。[0286]接著，將作為兩親性化合物的Triton? X-100制成I %水溶液，并使用其制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0287]將存活的孑孓幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0288]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝（圖13)。c表示Omin時(shí)的狀態(tài)、d表示30min時(shí)的狀態(tài)，將d的四方內(nèi)放大（e)、進(jìn)一步放大（f)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到孑孓幼蟲活動(dòng)的情況。
[0289]< 實(shí)施例 13>
[0290]作為兩親性化合物，使用了pluronic?F-127。將 I % (v / V)的 pluronic?F-127溶解于蒸餾水，并使用旋涂機(jī)在玻璃上攤開，進(jìn)行了等離子體聚合，進(jìn)行與實(shí)施例11相同的操作，得到了自立性的薄膜。圖14(a)是通過等離子體照射制成的自立性的聚合膜(Triton?X-100)的光學(xué)顯微鏡圖像、圖14(b)是pluronic?F_127的化學(xué)式。
[0291]接著，將作為兩親性化合物的pluronic?F-127制成I %水溶液，并使用其制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0292]將存活的孑孓幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0293]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝（圖14)。c表示Omin時(shí)的狀態(tài)、d表示30min時(shí)的狀態(tài)，將d的四方內(nèi)放大（e)、進(jìn)一步放大（f)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到孑孓幼蟲活動(dòng)的情況。
[0294]< 實(shí)施例 14>
[0295]作為兩親性化合物，使用了 Bri j?35。將1% (v / V)的Bri j?35溶解于蒸餾水，并使用旋涂機(jī)在玻璃上攤開，進(jìn)行了等離子體聚合，進(jìn)行與實(shí)施例11相同的操作，得到了自立性的薄膜。圖15(a)是通過等離子體照射制成的自立性的聚合膜（Brij?35)的光學(xué)顯微鏡圖像、圖15(b)是Brij?35的化學(xué)式。
[0296]接著，將作為兩親性化合物的Bri j?35制成I %水溶液，并使用其制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0297]將存活的孑孓幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0298]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝（圖15)。c表示Omin時(shí)的狀態(tài)、d表示30min時(shí)的狀態(tài)，將d的四方內(nèi)放大（e)、進(jìn)一步放大（f)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到孑孓幼蟲活動(dòng)的情況。
[0299]< 實(shí)施例 15>
[0300]作為兩親性化合物，使用了 CHAPS。將1% (V / V)的CHAPS溶解于蒸餾水，并使用旋涂機(jī)在玻璃上攤開，進(jìn)行了等離子體聚合，進(jìn)行與實(shí)施例11相同的操作，得到了自立性的薄膜。圖16(a)是通過等離子體照射制成的自立性的聚合膜（CHAPS)的光學(xué)顯微鏡圖像、圖16(b)是CHAPS的化學(xué)式。
[0301]接著，將作為兩親性化合物的CHAPS制成I %水溶液，并使用其制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0302]將存活的孑孓幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0303]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝(圖16)。c表示Omin時(shí)的狀態(tài)、d表示30min時(shí)的狀態(tài)，將d的四方內(nèi)放大(e)、進(jìn)一步放大(f)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到孑孓幼蟲活動(dòng)的情況。
[0304]< 實(shí)施例 16>
[0305]作為兩親性化合物，使用了 MEGA8。將I % (V / V)的MEGA8溶解于蒸餾水，并使用旋涂機(jī)在玻璃上攤開，進(jìn)行了等離子體聚合，進(jìn)行與實(shí)施例11相同的操作，得到了自立性的薄膜。圖17(a)是通過等離子體照射制成的自立性的聚合膜(MEGA8)的光學(xué)顯微鏡圖像、圖17(b)是MEGA8的化學(xué)式。
[0306]接著，將作為兩親性化合物的MEGA8制成I %水溶液，并使用其制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0307]將存活的孑孓幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0308]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝(圖17)。c表示Omin時(shí)的狀態(tài)、d表示30min時(shí)的狀態(tài)，將d的四方內(nèi)放大(e)、進(jìn)一步放大(f)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到孑孓幼蟲活動(dòng)的情況。
[0309]< 實(shí)施例 17>
[0310]作為兩親性化合物，使用了膽酸鈉。將1% (V / V)的膽酸鈉溶解于蒸餾水，并使用旋涂機(jī)在玻璃上攤開，進(jìn)行了等離子體聚合，進(jìn)行與實(shí)施例11相同的操作，得到了自立性的薄膜。圖18(a)是通過等離子體照射制成的自立性的聚合膜(膽酸鈉)的光學(xué)顯微鏡圖像、圖18(b)是膽酸鈉的化學(xué)式。
[0311]接著，將作為兩親性化合物的膽酸鈉制成I %水溶液，并使用其制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0312]將存活的孑孓幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0313]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝(圖18)。c表示Omin時(shí)的狀態(tài)、d表示30min時(shí)的狀態(tài)，將d的四方內(nèi)放大(e)、進(jìn)一步放大(f)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到孑孓幼蟲活動(dòng)的情況。
[0314]〈實(shí)施例18>
[0315]作為兩親性化合物，使用了正十二烷基-D-麥芽糖苷。將I % (v / ν)的正十二烷基-β -D-麥芽糖苷溶解于蒸餾水，并使用旋涂機(jī)在玻璃上攤開，進(jìn)行了等離子體聚合，進(jìn)行與實(shí)施例11相同的操作，得到了自立性的薄膜。圖19(a)是通過等離子體照射制成的自立性的聚合膜(正十二烷基-β-D-麥芽糖苷)的光學(xué)顯微鏡圖像、圖19(b)是正十二烷基-β-D-麥芽糖苷的化學(xué)式。
[0316]接著，將作為兩親性化合物的正十二烷基-D-麥芽糖苷制成I %水溶液，并使用其制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0317]將存活的孑孓幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0318]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝(圖19)。c表示Omin時(shí)的狀態(tài)、d表示30min時(shí)的狀態(tài)，將d的四方內(nèi)放大（e)、進(jìn)一步放大（f)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到孑孓幼蟲活動(dòng)的情況。
[0319]〈實(shí)施例19>
[0320]作為兩親性化合物，使用了正辛基-D-葡糖苷。將1% (V / V)的正辛基-β -D-葡糖苷溶解于蒸餾水，并使用旋涂機(jī)在玻璃上攤開，進(jìn)行了等離子體聚合，進(jìn)行與實(shí)施例11相同的操作，得到了自立性的薄膜。圖20(a)是通過等離子體照射制成的自立性的聚合膜（正辛基-D-葡糖苷）的光學(xué)顯微鏡圖像、圖20(b)是正辛基-β-D-葡糖苷的化學(xué)式。
[0321]接著，將作為兩親性化合物的正辛基-D-葡糖苷制成I %水溶液，并使用其制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0322]將存活的孑孓幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0323]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝（圖20)。c表示Omin時(shí)的狀態(tài)、d表示30min時(shí)的狀態(tài)，將d的四方內(nèi)放大（e)、進(jìn)一步放大（f)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到孑孓幼蟲活動(dòng)的情況。
[0324]< 實(shí)施例 20>
[0325]作為離子液體，使用了 1，3-二烯丙基咪唑鎗溴鹽。將1% (V / V)的1，3_ 二烯丙基咪唑鎗溴鹽溶解于蒸餾水，并使用旋涂機(jī)在玻璃上攤開，進(jìn)行了等離子體聚合，進(jìn)行與實(shí)施例11相同的操作，得到了自立性的薄膜。圖20(a)是通過等離子體照射制成的自立性的聚合膜（1，3-二烯丙基咪唑鎗溴鹽）的光學(xué)顯微鏡圖像、圖20(b)是1，3-二烯丙基咪唑鎗溴鹽的化學(xué)式。
[0326]接著，將作為離子液體的1，3_ 二烯丙基咪唑鎗溴鹽制成I %水溶液，并使用其制備了蒸發(fā)抑制用組合物。
[0327]將存活的孑孓幼蟲在蒸發(fā)抑制用組合物中浸潰I分鐘后取出，擦去多余部分，并利用薄膜覆蓋其體表。
[0328]然后，放入SEM試樣室進(jìn)行了拍攝（圖21)。c表示Omin時(shí)的狀態(tài)、d表示30min時(shí)的狀態(tài)，將d的四方內(nèi)放大（e)、進(jìn)一步放大（f)。在電子束照射開始后仍然可以觀察到孑孓幼蟲活動(dòng)的情況。
[0329]符號(hào)說明
[0330]I掃描電子顯微鏡（SEM)
[0331]2預(yù)排氣室
[0332]3試樣交換棒
[0333]4 試樣
[0334]5真空計(jì)
[0335]6調(diào)節(jié)閥
[0336]7真空泵
[0337]8 鏡體
[0338]9 電源
[0339]10試樣室[0340]11試樣架
[0341]12手套箱
[0342]13手套箱內(nèi)的罩體
[0343]14窗部
[0344]15操作用入口
[0345]16不活潑氣體儲(chǔ)氣瓶
[0346]17鐘罩
[0347]18等離子體照射裝置或電子射線照射裝置
[0348]19試樣室內(nèi)部
[0349]20試樣臺(tái)
[0350]21三維操縱裝置
[0351]22二次電子檢測器
[0352]23高速彩色照相機(jī)
[0353]24溫度調(diào)節(jié)裝置
[0354]25傳感器
[0355]30C 型環(huán)
[0356]31O 型環(huán)
[0357]32聚合膜
[0358]33柵網(wǎng)
[0359]34細(xì)胞
【權(quán)利要求】
1.一種利用電子顯微鏡觀察試樣的方法，其包括以下工序: 在試樣表面應(yīng)用蒸發(fā)抑制用組合物形成薄膜，從而利用薄膜覆蓋所述試樣的工序，所述蒸發(fā)抑制用組合物含有選自兩親性化合物、油脂類及離子液體中的至少1種；和 將收容于真空下的試樣室的用所述薄膜覆蓋的試樣的電子顯微鏡圖像顯示于顯示裝置的工序。
2.一種利用電子顯微鏡觀察試樣的方法，其包括以下工序: 在試樣表面應(yīng)用蒸發(fā)抑制用組合物的工序，所述蒸發(fā)抑制用組合物含有選自兩親性化合物、油脂類及離子液體中的至少1種； 向應(yīng)用了蒸發(fā)抑制用組合物的試樣照射電子射線或等離子體，從而在試樣表面形成作為薄膜的聚合膜，利用所述聚合膜覆蓋試樣的工序；以及 將收容于真空下的試樣室的用所述聚合膜覆蓋的試樣的電子顯微鏡圖像顯示于顯示裝置的工序。
3.如權(quán)利要求2所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法，其中，通過在電子顯微鏡的試樣室內(nèi)向試樣照射試樣觀察用電子射線，從而使聚合反應(yīng)進(jìn)行，在試樣表面形成作為薄膜的聚合膜。
4.如權(quán)利要求2所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法，其中，通過在利用電子顯微鏡觀察試樣之前，預(yù)先向 試樣照射與電子顯微鏡的試樣觀察用電子射線相區(qū)別的電子射線或等離子體，從而使聚合反應(yīng)進(jìn)行，在試樣表面形成作為薄膜的聚合膜。
5.如權(quán)利要求1~4中任一項(xiàng)所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法，其中，蒸發(fā)抑制用組合物含有兩親性化合物以及選自金屬化合物及糖中的至少1種。
6.如權(quán)利要求1~5中任一項(xiàng)所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法，其中，在不伴隨含水試樣的破壞的情況下，將含水試樣的保持濕潤的狀態(tài)的電子顯微鏡圖像顯示于所述顯示裝置。
7.如權(quán)利要求1~6中任一項(xiàng)所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法，其包括以下工序: 在生存著的生物試樣的體表應(yīng)用蒸發(fā)抑制用組合物形成薄膜，從而利用薄膜覆蓋所述試樣的工序；和 將置于真空下的試樣室的用所述薄膜覆蓋的生物試樣在保持存活狀態(tài)下的活動(dòng)的電子顯微鏡圖像顯示于顯示裝置。
8.如權(quán)利要求7所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法，其中，利用所述薄膜抑制與從生物試樣體內(nèi)的蒸發(fā)相伴隨的溫度降低，賦予生物試樣以活動(dòng)能力，且保持生物試樣本身的形態(tài)。
9.如權(quán)利要求7或8所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法，其中，利用所述薄膜，在真空下仍保持用以使生物試樣能夠活動(dòng)的體內(nèi)溫度。
10.如權(quán)利要求1~9中任一項(xiàng)所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法，其中，使用掃描電子顯微鏡，在不引起試樣發(fā)生電荷積累的情況下，將試樣的電子顯微鏡圖像顯示于顯示裝置。
11.一種真空下的蒸發(fā)抑制用組合物，其用于在含有真空下具有蒸發(fā)性的物質(zhì)的試樣表面形成薄膜而覆蓋所述試樣，從而賦予所述具有蒸發(fā)性的物質(zhì)以抑制其在真空下蒸發(fā)的阻隔能力，其中，所述蒸發(fā)抑制用組合物含有選自兩親性化合物、油脂類及離子液體中的至少1種。
12.如權(quán)利要求11所述的真空下的蒸發(fā)抑制用組合物，其用于在生存著的生物試樣的體表形成薄膜而覆蓋所述生物試樣，從而賦予生物試樣體內(nèi)的具有蒸發(fā)性的物質(zhì)以抑制其在真空下蒸發(fā)的阻隔能力。
13.如權(quán)利要求11或12所述的真空下的蒸發(fā)抑制用組合物，其通過向應(yīng)用了蒸發(fā)抑制用組合物的試樣照射電子射線或等離子體，在試樣表面形成作為薄膜的聚合膜，利用所述聚合膜覆蓋試樣。
14.如權(quán)利要求11~13中任一項(xiàng)所述的蒸發(fā)抑制用組合物，其含有兩親性化合物以及選自金屬化合物及糖中的至少1種。
15.—種掃描電子顯微鏡，其是用于權(quán)利要求1~10中任一項(xiàng)所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法的掃描電子顯微鏡，其具備能夠?qū)⑴渲糜阽R體內(nèi)的試樣室的試樣導(dǎo)入的預(yù)排氣室，以及對試樣室及預(yù)排氣室進(jìn)行脫氣的排氣裝置。
16.如權(quán)利要求15所述的掃描電子顯微鏡，其中，預(yù)排氣室具備手套箱。
17.如權(quán)利要求15所述的掃描電子顯微鏡，其中，試樣室或預(yù)排氣室中具備等離子體照射裝置或電子射線照射裝置。
18.如權(quán)利要求15所述的掃描電子顯微鏡，其中，試樣室或預(yù)排氣室中具備能夠作用于試樣的三維操縱裝置。
19.一種掃描電子顯微鏡，其是用于權(quán)利要求1~10中任一項(xiàng)所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法的掃描電子顯微鏡，其在試樣室內(nèi)具備能夠三維地調(diào)節(jié)二次電子的檢測器與試樣的相對位置的檢測位置調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)。
20.—種掃描電子顯微鏡，其是用于權(quán)利要求1~10中任一項(xiàng)所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法的掃描電子顯微鏡，其在試樣室內(nèi)具備能夠獲取試樣的顏色信息的高速彩色照相機(jī)。
21.—種掃描電子顯微鏡，其是用于權(quán)利要求1~10中任一項(xiàng)所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法的掃描電子顯微鏡，其具備能夠調(diào)節(jié)試樣室內(nèi)的試樣臺(tái)的溫度的溫度調(diào)節(jié) |101|裝直。
22.—種掃描電子顯微鏡，其是用于權(quán)利要求1~10中任一項(xiàng)所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法的掃描電子顯微鏡，其在試樣室內(nèi)具備選自電傳感器、光傳感器、氣體傳感器、水傳感器及溫度傳感器中的至少1種傳感器。
23.一種透射電子顯微鏡，其是用于權(quán)利要求1~10中任一項(xiàng)所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法的透射電子顯微鏡，其具備能夠?qū)⑴渲糜阽R體內(nèi)的試樣室的試樣導(dǎo)入的預(yù)排氣室，以及對試樣室及預(yù)排氣室進(jìn)行脫氣的排氣裝置。
24.如權(quán)利要求23所述的透射電子顯微鏡，其中，預(yù)排氣室具備手套箱。
25.如權(quán)利要求23所述的透射電子顯微鏡，其中，試樣室或預(yù)排氣室中具備等離子體照射裝置或電子射線照射裝置。
26.—種透射電子顯微鏡，其是用于權(quán)利要求1~10中任一項(xiàng)所述的利用電子顯微鏡觀察試樣的方法的透射電子顯微鏡，在配置試樣的柵網(wǎng)的兩面分別具有向所述蒸發(fā)抑制用組合物照射電子射線或等離子體而形成的聚合膜。
【文檔編號(hào)】G01N1/28GK103843106SQ201280044046
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2012年9月7日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月9日
【發(fā)明者】針山孝彥, 高久康春, 鈴木浩司, 村中祥悟, 太田勛, 下村政嗣, 石井大佑 申請人:獨(dú)立行政法人科學(xué)技術(shù)振興機(jī)構(gòu)