用于評估腎毒性的手段和方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于腎毒性的診斷法和化學(xué)化合物風(fēng)險分級的毒理學(xué)評估領(lǐng)域。具體而言，它公開了用于診斷腎毒性的方法。它還公開了用于確定化合物是否能夠在受試者中誘導(dǎo)這種腎毒性的方法，和公開了鑒定用于治療腎毒性的藥物的方法。另外，本發(fā)明公開了用于診斷腎毒性的裝置和試劑盒。
【專利說明】用于評估腎毒性的手段和方法
[0001]發(fā)明描述
[0002]本發(fā)明涉及用于腎毒性的診斷法和化學(xué)化合物風(fēng)險分級的毒理學(xué)評估領(lǐng)域。具體而言，它涉及用于診斷腎毒性的方法。它還涉及一種用于確定化合物是否能夠在受試者中誘導(dǎo)這種腎毒性的方法并涉及一種鑒定用于治療腎毒性的藥物的方法。另外，本發(fā)明涉及用于診斷腎毒性的裝置和試劑盒。
[0003]腎是具有幾種功能的成對器官并且具有三個主要解剖區(qū)域:皮質(zhì)、髓質(zhì)和乳頭。腎皮質(zhì)是腎的最外區(qū)域并且含有腎小球、近端和遠(yuǎn)端腎小管和管周毛細(xì)血管。皮質(zhì)血流量高，皮層接受大約90%的腎血流量。由于血源性毒物將偏好地遞送至皮質(zhì)，故而它們更可能影響皮質(zhì)功能，而非髓質(zhì)或乳頭的那些功能。腎髓質(zhì)是中間部分并且主要含有亨勒袢、直小血管和集合管。雖然髓質(zhì)僅接受約6%的腎血流量，但是它可能暴露于管狀結(jié)構(gòu)內(nèi)部高濃度的毒物。乳頭是腎的最小解剖部分并且僅接受約1%的腎血流量。然而，因?yàn)樾」芤鹤畲蟪潭鹊貪饪s并管腔液最大程度地減少，所以乳頭中潛在毒物的濃度可能極高，導(dǎo)致在乳頭小管細(xì)胞和/或間質(zhì)細(xì)胞中的細(xì)胞損傷。腎單位是腎的功能單位。腎系統(tǒng)的主要功能是消除從內(nèi)源代謝或從生物異源物質(zhì)代謝衍生的廢物。腎還在調(diào)節(jié)身體穩(wěn)態(tài)、調(diào)節(jié)細(xì)胞外液容量和電解質(zhì)平衡中發(fā)揮重要作用。腎的其他功能包括合成影響代謝的激素。腎素，一種參與血管緊張素和醛固酮形成的激素，在腎中形成，幾種前列腺素也在腎中形成。
[0004]幾種因素涉及腎對許多種毒物的敏感性，不過高腎血流量和從小管液重吸收水后分泌產(chǎn)物的增加濃度明顯具有主要的重要性。腎構(gòu)成小于1%的身體質(zhì)量，但是它們接受大約25%的心輸出量。因而，顯著量的外源化學(xué)品和/或它們的代謝物遞送至腎。影響腎對化學(xué)品敏感性的第二個重要因素是其濃縮小管液并因此濃縮它含有的任何化學(xué)品的能力。腎小管的運(yùn)輸特征還有助于遞送潛在有毒濃度的化學(xué)品至細(xì)胞。如果一種化學(xué)品從血液主動分泌至小管液，則它將起初積累于近端腎小管的細(xì)胞內(nèi)，或，如果它從小管液重吸收，則它將以相對高的濃度進(jìn)入細(xì)胞?；瘜W(xué)品向反應(yīng)性并且因此潛在有毒的代謝物的生物轉(zhuǎn)化是腎毒性的關(guān)鍵特征。肝臟中存在的許多相同活化反應(yīng)也存在于腎中，并且許多毒物可以在這兩種器官任一者中活化，包括醋氨酚、溴代苯、氯仿和四氯化碳，因此具有肝毒性或腎毒性的潛力。腎的一些區(qū)域具有高水平的生物異源物質(zhì)代謝酶類，特別是近端腎小管直部(一個特別易遭化學(xué)損傷的區(qū)域)中的細(xì)胞色素P450。由于反應(yīng)性代謝物通常不穩(wěn)定，并且因此或多或少暫時地，它們可能與靠近生成部位的細(xì)胞大分子組分相互作用。因此，雖然活化酶如細(xì)胞色素P450的活性在腎中比肝臟中低，但是它們在腎毒性方面比肝臟的那些酶更重要性，原因在于它們靠近作用部位。與其他器官中的毒性一樣，毒性終點(diǎn)的最終表現(xiàn)是反應(yīng)性代謝物的產(chǎn)生與它們脫毒作用之間平衡的結(jié)果。腎毒物的其他例子包括重金屬。已知某些抗生素具有腎毒性，最值得注意地是氨基糖甙類。
[0005]腎代表經(jīng)常受生物異源物質(zhì)影響的器官，原因在于其獨(dú)特的功能和結(jié)構(gòu)組織形式以及其在控制身體穩(wěn)態(tài)和消除生物異源物質(zhì)中的作用。腎毒性，也稱作腎毒性，是指化學(xué)引起或驅(qū)動的腎損傷。歸因于腎毒素的可能作用的多樣性，評估腎毒性是相當(dāng)復(fù)雜的過程。當(dāng)前方法通常包括臨床研究(例如超聲檢查)，病理和組織病理研究以及生物化學(xué)分析。然而，這類參數(shù)受到相當(dāng)復(fù)雜地調(diào)節(jié)并且參數(shù)變化有時可以甚至在相當(dāng)進(jìn)展的階段出現(xiàn)。組織病理評估的主要缺點(diǎn)是，它們具有侵入性，并且甚至與臨床病理測量組合時，它們較不可靠，因?yàn)樗鼈儾糠值鼗趯?shí)施研究的毒理學(xué)家的個人解釋。另外，因腎毒素引起的腎毒性所致的前述疾病和病癥可能幾乎無法通過當(dāng)前臨床測量與所述疾病或病癥的其他病因區(qū)分(見，例如，Cohen AH(2006)Renal anatomy and basic concepts and methods inrenal pathology, 3-17,引自；Fogo AB, Cohen AH, Jennette JC, Bruijn JA, Colvin RB (編著)Fundamentals of renal pathology, Springer, New York, NY, USA ；Greaves P (1998)The urinary system, 89-125,引自:Target organ pathology, a basic text, Turton J和 Hooson J(編著)Taylor&Francis, London, United Kingdom, 1998;Hodgson E, LeviPE (2004)第 15 章 Nephrotoxicity, 273-278，引自:A textbook of modern toxicology,第 3 版(Hodgson 編著)，Wiley-VCH Verlag GmbH, Weinheim Germany ；Lemley KV, KrizW (1991) Kidney Internat.39:370-381 ；MoIema G, Meijer DKF (2OOl 編著)Drug TargetingOrgan-Specific Strategies,第 5 章,121-156, Wiley-VCH Verlag GmbH, WeinheimGermany ；Verlander J (1998), Toxiocl.Pathol.26:1-17)。
[0006]如果考慮到腎毒性迄今為止是藥物退出市場的最常見原因之一，則腎毒性的重要性可以是顯而易見的。而且，例如，在歐洲共同體的任何種類產(chǎn)業(yè)中使用的化學(xué)化合物現(xiàn)在將需要符合REACH(化學(xué)品注冊、評估和許可)。應(yīng)當(dāng)理解化學(xué)化合物誘導(dǎo)腎毒性的潛力將視為化合物的高風(fēng)險，并且因此，化合物將僅對有限的應(yīng)用并且在遵守高安全標(biāo)準(zhǔn)時可用。
[0007]以高效及可靠方式評估化學(xué)化合物的毒理學(xué)特性和特別是評估腎毒性的敏感及特異性方法仍不可獲得，但是將是高度期待的。
[0008]因此，本發(fā)明的技術(shù)問題可以視為提供用于符合前述需求的手段和方法。這個技術(shù)問題通過權(quán)利要求中表征及下文描述的實(shí)施方案來解決。
[0009]因此，本發(fā)明涉及一種用于診斷腎毒性的方法，所述方法包括:
[0010](a)確定疑似遭遇腎毒性的受試者的測試樣品中選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中任一表的至少一種生物標(biāo)志物的量,和
[0011](b)將步驟(a)中確定的量與參考比較，由此診斷腎毒性。
[0012]在前述方法的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述受試者已經(jīng)與疑似能夠誘導(dǎo)腎毒性的化合物接觸。
[0013]本發(fā)明還涉及一種確定化合物是否能夠在受試者中誘導(dǎo)腎毒性的方法，所述方法包括:
[0014](a)確定已經(jīng)與疑似能夠誘誘導(dǎo)腎毒性的化合物接觸的受試者的樣品中選自表la、lb、Ic、Id、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或lib中任一表的至少一種生物標(biāo)志物的量，和
[0015](b)將步驟(a)中確定的量與參考比較，由此確定化合物誘導(dǎo)腎毒性的能力。
[0016]在前述方法的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述化合物是選自以下的至少一種化合物:兩性霉素 B (Amphotericin B)、3 -紫羅酮(Beta-1onone)、咖啡因(Caffeine)、卡托普利(Captopril)、卡鉬(Carboplatin)、環(huán)孢菌素 A、高 2，4-滴丙酸(Dichlorprop-p)、安乃近(Dipyrone)、乙苯、呋塞米(Furosemide)、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利(Lisinopril)、石膽酸、MCPA>高2-甲-4-氯丙酸(Mecoprop-p)、青霉胺(Penicillamine)、五氯酌.(Pentachlorophenol)、丙磺舒(Probenecid)、雷米普利(RamipriI)、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.(Tobramycin s.c.)、磷酸三甲苯酯、1，1，2，2-四氯乙燒、2，2，4-三甲基戍燒、D-芋烯和萘烷。
[0017]在本發(fā)明方法的另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述參考源自(i)遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)已經(jīng)與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性霉素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷。在所述方法的一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，測試樣品中生物標(biāo)志物與參考的基本上相同的量指示腎毒性。
[0018]在本發(fā)明方法的另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述參考源自(i)已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性霉素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷。在所述方法的一個更優(yōu)選實(shí)施方案中，生物標(biāo)志物的在測試樣品中與參考相比不同的量指示腎毒性。
[0019]在本發(fā)明方法的又一個實(shí)施方案中，所述參考是針對受試者群體中生物標(biāo)志物的經(jīng)計(jì)算的參考。在所述方法的一個更優(yōu)選實(shí)施方案中，生物標(biāo)志物的在測試樣品中與參考相比不同的量指示腎毒性。
[0020]本發(fā)明還構(gòu)思了一種鑒定用于治療腎毒性的物質(zhì)的方法，所述方法包括步驟:
[0021](a)確定遭遇腎毒性的受試者的樣品中選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中任一表的至少一種生物標(biāo)志物的量，所述受試者已經(jīng)與疑似能夠治療腎毒性的候選物質(zhì)接觸；和
[0022](b)將步驟(a)中確定的量與參考比較，由此鑒定能夠治療腎毒性的物質(zhì)。
[0023]在前述方法的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述參考源自(i)遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)已經(jīng)與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性霉素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷。在所述方法的一個更優(yōu)選實(shí)施方案中，測試樣品中生物標(biāo)志物與參考的不同的量指示能夠治療腎毒性的物質(zhì)。
[0024]在前述方法的另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述參考源自(i)已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性霉素B、β-紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷。在所述方法的一個更優(yōu)選實(shí)施方案中，測試樣品中生物標(biāo)志物與參考的基本上相同的量指示能夠治療腎毒性的物質(zhì)。
[0025]在前述方法的又一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述參考是針對受試者群體中生物標(biāo)志物的經(jīng)計(jì)算的參考。在所述方法的一個更優(yōu)選實(shí)施方案中，測試樣品中生物標(biāo)志物與參考的基本上相同的量指示能夠治療腎毒性的物質(zhì)。
[0026]本發(fā)明還涉及選自表la、lb、Ic、Id、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila或lib中任一表的至少一種生物標(biāo)志物或針對所述生物標(biāo)志
物的檢測劑用于診斷受試者樣品中腎毒性的用途。
[0027]另外，本發(fā)明涉及一種用于診斷疑似遭遇腎毒性的受試者的樣品中腎毒性的裝置，所述裝置包含:
[0028](a)分析單元，其包含針對選自表 la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila或Ilb中任一表的至少一種生物標(biāo)志物的檢測齊U，所述分析單元允許確定樣品中存在的所述生物標(biāo)志物的量；和與所述分析單元有效連接的，
[0029](b)包含存儲的參考和數(shù)據(jù)處理器的評價單元，所述評價單元允許相對于存儲的參考，比較由分析單元確定的所述至少一種生物標(biāo)志物的量，由此診斷腎毒性。
[0030]在本發(fā)明裝置的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述存儲的參考是源自已知遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經(jīng)與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組的參考:兩性霉素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷，并且所述數(shù)據(jù)處理器執(zhí)行指令以相對于存儲的參考，比較由分析單元確定的至少一種生物標(biāo)志物的量，其中測試樣品中至少一種生物標(biāo)志物與參考相比基本上相同的量指示存在腎毒性或其中測試樣品中至少一種生物標(biāo)志物與參考相比不同的量指示不存在腎毒性。
[0031]在本發(fā)明裝置的另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述存儲的參考是源自已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組的參考:兩性霉素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷，并且所述數(shù)據(jù)處理器執(zhí)行指令以相對于存儲的參考，比較由分析單元確定的至少一種生物標(biāo)志物的量，其中測試樣品中至少一種生物標(biāo)志物與參考相比不同的量指示存在腎毒性或其中測試樣品中至少一種生物標(biāo)志物與參考相比基本上相同的量指示不存在腎毒性。
[0032]另外，本發(fā)明涉及一種用于診斷腎毒性的試劑盒，所述試劑盒包含針對選自表la、Ib、Ic、Id、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或I Ib中任一表的至少一種生物標(biāo)志物的檢測劑和針對至少一種生物標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)物,所述標(biāo)準(zhǔn)物的濃度是源自已知遭遇腎毒性的受試者或受試者組或源自已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組。
[0033]具體而言，本發(fā)明還構(gòu)思了以下具體方法、用途、裝置和試劑盒。[0034]以下定義和解釋在已作必要修正的情況下適用于本發(fā)明的先前全部實(shí)施方案以及下文中描述的實(shí)施方案。
[0035]根據(jù)本發(fā)明提到的方法可以基本上由前述步驟組成或可以包括其他步驟。其他步驟可以涉及樣品預(yù)處理或評價通過所述方法獲得的診斷結(jié)果。本文中他處描述優(yōu)選的其他評價步驟。這些方法可以部分地或完全由自動化輔助。例如，涉及確定生物標(biāo)志物的量的步驟可以由機(jī)器人和自動化讀數(shù)裝置自動化。同樣地，涉及比較數(shù)量的步驟可以由合適的數(shù)據(jù)處理裝置(如計(jì)算機(jī))自動化，所述數(shù)據(jù)處理裝置包含當(dāng)執(zhí)行時自動實(shí)施該比較的程序代碼。這種情況下的參考將從從存儲的參考(例如，從數(shù)據(jù)庫)提供。應(yīng)當(dāng)理解該方法優(yōu)選地是對受試者樣品離體(ex vivo)實(shí)施,即不對人體或動物體實(shí)施的方法。
[0036]如本文所用，術(shù)語“診斷”指評估概率，其中根據(jù)所述概率，受試者正在遭遇某種病狀，如中毒，(本文中稱作疾病或病癥)或具有遭遇這種病狀的素質(zhì)。對素質(zhì)的診斷有時可以稱作預(yù)后或預(yù)測受試者未來將在預(yù)定時間窗內(nèi)形成該病狀的可能性。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，這種評估盡管優(yōu)選是對100%待診斷的受試者正確，但通?？赡懿皇菍?00%待診斷的受試者正確。然而，該術(shù)語要求可以將統(tǒng)計(jì)顯著部分的受試者鑒定為遭受該病狀或具有易遭受該病狀的素質(zhì)。某個部分是否為統(tǒng)計(jì)顯著可以在不另外費(fèi)力的情況下由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用使用各種熟知的統(tǒng)計(jì)評價工具(例如，置信區(qū)間確定、P-值測定、student t-檢驗(yàn)、Mann-Whitney 檢驗(yàn)等)確定。能在 Dowdy 和 Wearden, Statistics for Research, Johnffiley&Sons,New Yorkl983中找到詳細(xì)內(nèi)容。優(yōu)選的置信區(qū)間是至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%。P-值是優(yōu)選地0.2、0.1、0.05。
[0037]本發(fā)明的診斷還包括對病狀或其癥狀以及其素質(zhì)的監(jiān)測、證實(shí)和分類。監(jiān)測是指持續(xù)追蹤已經(jīng)診斷的病狀或素質(zhì)。監(jiān)測例如涵蓋確定該病狀或素質(zhì)的進(jìn)展、確定特定治療對病狀進(jìn)展的影響或預(yù)防性措施如預(yù)防性治療或膳食對具有疾病素質(zhì)的受試者中病狀之形成的影響。證實(shí)涉及增強(qiáng)或證明對已經(jīng)使用其他指示物或標(biāo)志物確定的病狀或該病狀素質(zhì)的診斷。分類涉及(i)將病狀劃分成不同類別，例如，對應(yīng)于伴隨病狀的癥狀的強(qiáng)度，或
(ii)區(qū)分伴隨病狀的不同階段、疾病或病癥。病狀的素質(zhì)可以基于風(fēng)險程度(即受試者稍后將形成該病狀的概率)分類。另外，分類還優(yōu)選地包括將作用模式分配給待通過本發(fā)明方法測試的化合物。具體而言，本發(fā)明的方法允許確定化合物的具體作用模式，對于所述化合物而言，這種作用模式尚未已知。這優(yōu)選地通過以下方式實(shí)現(xiàn):將針對代表所述化合物的至少一種生物標(biāo)志物或生物標(biāo)志物譜確定的量與針對作用模式已知的稱作參考的化合物所確定的生物標(biāo)志物或生物標(biāo)志物譜的量比較。因?yàn)榇_定了化合物的分子靶，所以作用模式的分類允許甚至更可靠地評估該化合物的毒性。
[0038]如本文所用的術(shù)語“腎毒性”涉及導(dǎo)致腎功能受損、尤其腎小管或腎小球功能受損的任何腎損傷或損害。優(yōu)選地，腎的排泄相關(guān)功能受腎毒性影響。優(yōu)選地，如本文所用的腎毒性由施用化學(xué)化合物或藥物引起或是施用化學(xué)化合物或藥物的結(jié)果，即所謂毒素引起的腎毒性。更優(yōu)選地，腎毒性伴有受損的腎小管功能。具體而言，近端腎小管受影響。最優(yōu)選地，位于近端腎小管直部中的P450脫毒酶的功能將受如本文提到的腎毒化合物影響。
[0039]腎毒性的前述表現(xiàn)的癥狀和臨床體征是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的并且在標(biāo)準(zhǔn)毒理學(xué)書籍，例如，H.Marquardt, S.G.Schiitcr, R.0.McClellan, F.Welsch (編著)，“Toxicology”,第 14 章:The Kidney,第 297-330 頁，1999，Academic Press, London.第 13 章:The Liver, 1999, Academic Press, London 中描述。
[0040]腎毒性的優(yōu)選方面涉及受損的多尿、腎小球-腎小管缺陷、腎小管缺陷、受損的弱酸排泄、腎小管壞死、ACE抑制劑誘導(dǎo)樣缺陷如腎損害或腎衰竭、間質(zhì)性腎炎、a2u球蛋白-腎病和/或直接腎小管缺陷。
[0041]優(yōu)選地被確定以便診斷受損的多尿作為腎毒性的一個方面的生物標(biāo)志物是表la、lb、Ic和Id中列出的那些。
[0042]優(yōu)選地被確定以便診斷腎小球-腎小管缺陷作為腎毒性的一個方面的生物標(biāo)志物是表2a、2b、2c和2d中列出的那些。
[0043]優(yōu)選地被確定以便診斷腎小管缺陷作為腎毒性的一個方面的生物標(biāo)志物是表3a、3b、3c和3d中列出的那些。
[0044]優(yōu)選地被確定以便診斷受損的弱酸排泄作為腎毒性的一個方面的生物標(biāo)志物是表4a、4b、4c和4d中列出的那些。
[0045]優(yōu)選地被確定以便診斷腎小管壞死作為腎毒性的一個方面的生物標(biāo)志物是表5a和5b中列出的那些。
[0046]優(yōu)選地被確定以便診斷ACE抑制劑誘導(dǎo)樣缺陷作為腎毒性的一個方面的生物標(biāo)志物是表6a和6b中列出的那些。
[0047]優(yōu)選地被確定以便診斷間質(zhì)性腎炎作為腎毒性的一個方面的生物標(biāo)志物是表7a和7b中列出的那些。
[0048]優(yōu)選地被確定以便診斷直接腎小管缺陷作為腎毒性的一個方面的生物標(biāo)志物是表8a和8b中列出的那些。
[0049]優(yōu)選地被確定以便診斷a 2u球蛋白-腎病作為腎毒性的一個方面的生物標(biāo)志物是表Ila和Ilb中列出的那些。
[0050]根據(jù)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，表中所列的多于一種生物標(biāo)志物的組合進(jìn)一步增強(qiáng)診斷，因?yàn)槊糠N生物標(biāo)志物是用于診斷的明顯統(tǒng)計(jì)獨(dú)立的預(yù)測物。另外，腎毒性的特異性還顯著地增力口，因?yàn)榈窒藖碜云渌M織對標(biāo)志物豐度的影響。因而，如本文所用，術(shù)語“至少一種”優(yōu)選地指至少2種、至少3種、至少4種、至少5種、至少6種、至少7種、至少8種、至少9種或至少10種在后續(xù)表的任一表中提到的生物標(biāo)志物的組合。優(yōu)選地，在任一表中提及的全部生物標(biāo)志物均根據(jù)本發(fā)明方法組合地確定。
[0051]因而，優(yōu)選地，至少一種生物標(biāo)志物是選自前述組的至少一種生物標(biāo)志物，或至少一種生物標(biāo)志物是由前述組的生物標(biāo)志物組成的生物標(biāo)志物組合或包含前述組的生物標(biāo)志物的生物標(biāo)志物組合。已經(jīng)鑒定前述生物標(biāo)志物和生物標(biāo)志物組合作為具有特別高的診斷價值的關(guān)鍵生物標(biāo)志物，如后續(xù)實(shí)施例中更詳細(xì)地描述。
[0052]另外，仍可以額外地確定其他生物標(biāo)志物或臨床參數(shù)，包括已知的代謝物、遺傳突變、轉(zhuǎn)錄物和/或蛋白質(zhì)數(shù)量或酶活性。可以根據(jù)本發(fā)明方法確定的這類額外的臨床或生物化學(xué)參數(shù)是本領(lǐng)域熟知的。
[0053]如本文所用，術(shù)語“生物標(biāo)志物”指這樣的化學(xué)化合物，其在樣品中的存在或濃度指示病狀(優(yōu)選地，如本文提到的腎毒性)的存在或不存在或強(qiáng)度。該化學(xué)化合物優(yōu)選地是代謝物或從其衍生的分析物。分析物是可以與生物中存在的實(shí)際代謝物相同的化學(xué)化合物。然而，該術(shù)語還包括這類代謝物的衍生物，所述衍生物內(nèi)源地生成或在分離或樣品預(yù)處理期間或因?qū)嵤┍景l(fā)明方法而生成，例如，在純化和/或確定步驟期間生成。在具體情況下，分析物還以化學(xué)特性如溶解度來表征。歸因于所述特性，分析物可以在純化和/或確定過程期間獲得的極性或脂質(zhì)級分中出現(xiàn)。因而，化學(xué)特性并且優(yōu)選地，溶解度，應(yīng)當(dāng)導(dǎo)致分析物在純化和/或確定過程期間所獲得的極性或脂質(zhì)級分中出現(xiàn)。因此，視作分析物在純化和/或確定過程期間所獲得的極性或脂質(zhì)級分中出現(xiàn)的所述化學(xué)特性和尤其溶解度應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步表征分析物并且輔助其鑒定。下文描述關(guān)于這些化學(xué)特性可以怎樣確定并且視為在后續(xù)實(shí)施例中存在的細(xì)節(jié)內(nèi)容。優(yōu)選地，分析物以定性和定量方式代表代謝物并且因此自然而然允許得出以下結(jié)論:在受試者中或至少在所述受試者的測試樣品中代謝物存在或不存在或代謝物的量。雖然生物標(biāo)志物、分析物和代謝物在本文中以單數(shù)形式提到，但所述術(shù)語是還包括復(fù)數(shù)形式的術(shù)語，即指相同分子種類的多個生物標(biāo)志物、分析物或代謝物分子。另外，本發(fā)明的生物標(biāo)志物并不必然地與一個分子種類相對應(yīng)。相反，生物標(biāo)志物可以包含化合物的立體異構(gòu)體或?qū)τ钞悩?gòu)體。另外，生物標(biāo)志物也可以代表生物類別的異構(gòu)分子的異構(gòu)體的總和。所述異構(gòu)體應(yīng)當(dāng)在一些情況下顯示相同分析特征，并且因此是通過各種分析方法不可區(qū)分的，所述分析方法包括在下文描述的后續(xù)實(shí)施例中應(yīng)用的那些。然而，異構(gòu)體將共有至少相同的總式參數(shù)并且因此，在例如脂類的情況下，共有相同的鏈長度和脂肪酸和/或鞘堿部分中相同的雙鍵數(shù)目。
[0054]如本文所用，術(shù)語“測試樣品”指待用于通過本發(fā)明方法診斷腎毒性的樣品。優(yōu)選地，所述測試樣品是生物樣品。來自生物來源的樣品(即生物樣品)通常包含多種代謝物。待用于本發(fā)明方法中的優(yōu)選生物樣品是來自體液、優(yōu)選地血液、血漿、血清、唾液、膽汁、尿或腦脊液的樣品，或(例如通過活組織檢查)源自細(xì)胞、組織或器官、優(yōu)選地源自肝臟的樣品。更優(yōu)選地，樣品是血液、血漿或血清樣品，最優(yōu)選地，是血漿樣品。生物樣品源自如本文中他處所述的受試者。用于獲得前述不同類型的生物樣品的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的。例如，血液樣品可以通過采血獲得，而組織或器官樣品將例如通過活組織檢查獲得。
[0055]前述樣品優(yōu)選地在它們用于本發(fā)明的方法之前預(yù)處理。如下文更詳細(xì)地描述，所述預(yù)處理可以包括為釋放或分離化合物或除去過多材料或廢物所需要的處理。合適的技術(shù)包括離心、提取、分級、超濾、蛋白質(zhì)沉淀，隨后實(shí)施化合物的過濾和純化和/或富集。另外，實(shí)施其他預(yù)處理，目的是以適于化合物分析的形式或濃度提供化合物。例如，如果在本發(fā)明的方法中使用氣相色譜偶聯(lián)質(zhì)譜法，則將需要在所述氣相色譜之前衍生化該化合物。合適和必需的預(yù)處理取決于用于實(shí)施本發(fā)明方法的手段并且是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。如之前描述的預(yù)處理樣品也由如根據(jù)本發(fā)明使用的術(shù)語“樣品”包含。
[0056]如本文所用的術(shù)語“受試者”指動物，優(yōu)選地涉及哺乳動物如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、倉鼠、豬、綿羊、犬、貓、馬、猴或奶牛，并且還優(yōu)選地涉及人。更優(yōu)選地，受試者是嚙齒類，并且最優(yōu)選地是大鼠?？梢圆捎帽景l(fā)明方法診斷的其他動物是魚類、鳥類或爬行類。優(yōu)選地，所述受試者接觸于疑似能夠誘導(dǎo)腎毒性的化合物或已經(jīng)與之接觸。已經(jīng)與疑似誘導(dǎo)腎毒性的化合物接觸的受試者可以例如是實(shí)驗(yàn)室動物，如在用于例如化合物毒性的篩選分析法中使用的大鼠。疑似已經(jīng)與能夠誘導(dǎo)腎毒性的化合物接觸的受試者可以還是待診斷以選擇合適治療的受試者。優(yōu)選地，如本文所用的能夠誘導(dǎo)腎毒性的化合物是兩性霉素B、β-紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素S.C.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷。
[0057]優(yōu)選地，如果受試者是雌性，則通過本發(fā)明方法待確定的至少一種生物標(biāo)志物選自表 la、lb、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a 或 5b 中的任一表。
[0058]優(yōu)選地，如果受試者是雄性，則通過本發(fā)明方法待確定的至少一種生物標(biāo)志物選自表 lc、ld、2c、2d、3c、3d、4c、4d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中的任一表。
[0059]優(yōu)選地待確定以便診斷受損的多尿作為腎毒性的一個方面的優(yōu)選生物標(biāo)志物組或組合涵蓋至少以下生物標(biāo)志物或基本上由以下生物標(biāo)志物組成:用于雌性受試者的18-羥-11-去氧皮質(zhì)酮、肌酸酐、纈氨酸、反-4-羥脯氨酸和脯氨酸；以及用于雄性受試者的膽堿縮醛磷脂No02、鞘磷脂(dl8:2，C16:0)、膽堿縮醛磷脂No03、蘇氨酸和神經(jīng)酰胺(dl8:l，C24:l)。更優(yōu)選地，相對于尚未與咖啡因、呋塞米、賴諾普利、可可堿或茶堿接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標(biāo)志物改變，如后續(xù)下表中所示。
[0060]優(yōu)選地待確定以便診斷腎小球-腎小管缺陷作為腎毒性的一個方面的優(yōu)選生物標(biāo)志物組或組合涵蓋至少以下生物標(biāo)志物或基本上由以下生物標(biāo)志物組成:用于雌性受試者的肌酸、葡糖胺、甘露糖胺、反油酸(C18:反[9]1)和3-羥基吲哚硫酸酯；以及用于雄性受試者的蘇糖酸、半胱氨酸、溶血磷脂酰膽堿(C18:2)、變腎上腺素和肌酸。更優(yōu)選地，相對于尚未與卡托普利、環(huán)孢菌素A、青霉胺、或磷酸三甲苯酯接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標(biāo)志物改變，如后續(xù)下表中所示。
[0061]優(yōu)選地待確定以便診斷腎小管缺陷作為腎毒性的一個方面的優(yōu)選生物標(biāo)志物組或組合涵蓋至少以下生物標(biāo)志物或基本上由以下生物標(biāo)志物組成:用于雌性受試者的肌酸、溶血磷脂酰膽堿(C18:l)、吲哚-3-乙酸、組氨酸和極性級分甘油；以及用于雄性受試者的假尿苷、牛磺酸、TAG(C18:1，C18:2)、尿囊素和犬尿喹啉酸。更優(yōu)選地，相對于尚未與3 -紫羅酮、卡鉬或呋塞米、六氯丁二烯接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標(biāo)志物改變，如后續(xù)下表中所示。
[0062]優(yōu)選地待確定以便診斷受損的弱酸排泄作為腎毒性的一個方面的優(yōu)選生物標(biāo)志物組或組合涵蓋至少以下生物標(biāo)志物或基本上由以下生物標(biāo)志物組成:用于雌性受試者的脯氨酸、溶血磷脂酰膽堿(C18:2)、吲哚-3-乳酸，Y-亞麻酸(C18:順[6,9, 12] 3)和反-4-羥脯氨酸；以及用于雄性受試者的溶血磷脂酰膽堿(C18:0)、磷脂酰膽堿(C16:0，C20:5)、甲硫氨酸、吲哚-3-乳酸和神經(jīng)酸(C24:順[15] I)。更優(yōu)選地，相對于尚未與高2，4-滴丙酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、五氯酚或丙磺舒接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標(biāo)志物改變，如后續(xù)下表中所示。
[0063]優(yōu)選地待確定以便診斷腎小管壞死作為腎毒性的一個方面的優(yōu)選生物標(biāo)志物組或組合涵蓋至少以下生物標(biāo)志物或基本上由以下生物標(biāo)志物組成:用于雌性受試者的馬尿酸、二十二碳六烯酸(C22:順[4，7，10，13，16，19]6)、亮氨酸、二十二碳五烯酸(C22:順[7，10，13，16，19]5)和乳酸酯。更優(yōu)選地，相對于尚未與兩性霉素B、六氯丁二烯或妥布霉素s.c.接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標(biāo)志物改變，如后續(xù)下表中所示。
[0064]優(yōu)選地待確定以便診斷ACE抑制劑誘導(dǎo)樣缺陷作為腎毒性的一個方面的優(yōu)選生物標(biāo)志物組或組合涵蓋至少以下生物標(biāo)志物或基本上由以下生物標(biāo)志物組成:用于雄性受試者的賴氨酸、甘氨酸、胞嘧啶、1，5-失水山梨醇和谷氨酸鹽。更優(yōu)選地，相對于尚未與賴諾普利或雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.C.或磷酸三甲苯酯接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標(biāo)志物改變，如后續(xù)下表中所示。
[0065]優(yōu)選地待確定以便診斷間質(zhì)性腎炎作為腎毒性的一個方面的優(yōu)選生物標(biāo)志物組或組合涵蓋至少以下生物標(biāo)志物或基本上由以下生物標(biāo)志物組成:用于雄性受試者的二十四烷酸(C24:0)、肌酸、絲氨酸、蘇氨酸和二十烷酸(C20:0)。更優(yōu)選地，相對于尚未與安乃近、乙苯或石膽酸接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標(biāo)志物改變，如后續(xù)下表中所
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[0066]優(yōu)選地待確定以便診斷直接腎小管缺陷作為腎毒性的一個方面的優(yōu)選生物標(biāo)志物組或組合涵蓋至少以下生物標(biāo)志物或基本上由以下生物標(biāo)志物組成:用于雄性受試者的溶血磷脂酰乙醇胺(C22:0)、亮氨酸、油酸(C18:順[9]1)、TAG No02和極性級分甘油-3-磷酸。更優(yōu)選地，相對于尚未與六氯丁二烯或氫醌接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標(biāo)志物改變，如后續(xù)下表中所示。
[0067]如本文所用，術(shù)語“確定該量”指確定生物標(biāo)志物(即代謝物或分析物)的至少一個特征性特征。本發(fā)明的特征性特征是表征生物標(biāo)志物的物理和/或化學(xué)特性(包括生物化學(xué)特性)的特征。這類特性例如包括分子量、粘度、密度、電荷、自旋、光學(xué)活性、顏色、熒光、化學(xué)發(fā)光、元素組成、化學(xué)結(jié)構(gòu)、與其他化合物反應(yīng)的能力、在生物讀出系統(tǒng)中激發(fā)反應(yīng)的能力(例如，誘導(dǎo)報道基因)等。所述特性的值可以充當(dāng)特征性特征并且可以通過本領(lǐng)域熟知的技術(shù)確定。另外，特征性特征可以是通過標(biāo)準(zhǔn)操作(例如，數(shù)學(xué)計(jì)算如乘法、除法或?qū)?shù)演算)從生物標(biāo)志物的物理和/或化學(xué)特性的值推導(dǎo)出的任何特征。最優(yōu)選地，至少一個特征性特征允許確定和/或化學(xué)鑒定生物標(biāo)志物及其量。因此，特征值，優(yōu)選地，還包含信息，所述信息涉及推導(dǎo)出特征值的生物標(biāo)志物的豐度。例如，生物標(biāo)志物的特征值可以是質(zhì)譜中的峰。這種峰含有生物標(biāo)志物的特征信息，即m/z (質(zhì)/荷比)信息，以及與樣品中所述生物標(biāo)志物(即其量)的豐度相關(guān)的強(qiáng)度值。
[0068]如之前討論，根據(jù)本發(fā)明方法待確定的至少一種生物標(biāo)志物可以優(yōu)選地定量或半定量地確定。對于定量確定，將確定生物標(biāo)志物的絕對量或精確量；或生物標(biāo)志物的相對量將基于針對上文中提到的特征性特征所確定的值來確定。相對量可以在其中可以不確定或應(yīng)當(dāng)不確定生物標(biāo)志物的精確量的情況下確定。在這種情況下，可以確定生物標(biāo)志物存在的量是否相對于以第二量包含所述生物標(biāo)志物的第二樣品放大或削減。因此，定量分析生物標(biāo)志物還包括有時所稱的生物標(biāo)志物半定量分析。
[0069]另外，如在本發(fā)明方法中使用的確定優(yōu)選地包括在先前所提到的分析步驟之前使用化合物分離步驟。優(yōu)選地，所述化合物分離步驟導(dǎo)致由樣品包含的至少一種生物標(biāo)志物的時間分辨分離。因此，根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選待使用的合適分離技術(shù)包括全部色譜分離技術(shù)，如液相色譜(LC)、高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)、薄層層析、大小排阻或親和層析。這些技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的并且可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員在不另外費(fèi)力的情況下應(yīng)用。最優(yōu)選地，LC和/或GC是由本發(fā)明方法構(gòu)思的色譜技術(shù)。用于這類生物標(biāo)志物確定的合適裝置是本領(lǐng)域熟知的。優(yōu)選地，使用質(zhì)譜法，特別是氣相色譜質(zhì)譜法(GC-MS)，液相色譜質(zhì)譜法(LC-MS)、直接注入質(zhì)譜法或傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜法(FT-1CR-MS)、毛細(xì)管電泳質(zhì)譜法(CE-MS)、高效液相色譜偶聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS)、四極質(zhì)譜法、任何依次耦合質(zhì)譜法，如MS-MS或MS-MS-MS、電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)、熱解質(zhì)譜法(Py-MS)、離子遷移率質(zhì)譜法或時間飛行質(zhì)譜法(TOF)。最優(yōu)選地，使用LC-MS和/或GC-MS，如下文詳細(xì)描述。所述技術(shù)在 Nissenl995, Journal of Chromatography A, 703:37-57、US4, 540，884 或US5, 397，894中公開,所述文獻(xiàn)的公開內(nèi)容因而通過引用的方式并入作為參考。作為替代或除質(zhì)譜技術(shù)之外，以下技術(shù)可以用于化合物確定:核磁共振(NMR)、磁共振成像(MRI)Ji立葉變換紅外分析(FT-1R)、紫外(UV)光譜法、折射率(RI)、熒光檢測、放射化學(xué)檢測、電化學(xué)檢測、光散射(LS)，色散拉曼光譜法或火焰電離檢測(FID)。這些技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的并且可以在不另外費(fèi)力的情況下應(yīng)用。本發(fā)明的方法應(yīng)當(dāng)優(yōu)選地由自動化輔助。例如，樣品加工或預(yù)處理可以由機(jī)器人自動化。數(shù)據(jù)處理和比較優(yōu)選地由合適的計(jì)算機(jī)程序和數(shù)據(jù)庫輔助。如前文所述的自動化允許以高通量方案使用本發(fā)明的方法。
[0070]另外，也可以通過特異性化學(xué)或生物測定法確定生物標(biāo)志物。所述測定法應(yīng)當(dāng)包含允許特異性檢測樣品中生物標(biāo)志物的手段。優(yōu)選地，所述手段能夠特異性識別生物標(biāo)志物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或能夠基于生物標(biāo)志物與其他化合物反應(yīng)的能力或它在生物讀出系統(tǒng)中激發(fā)反應(yīng)的能力(例如，誘導(dǎo)報道基因)特異性鑒定該生物標(biāo)志物。能夠特異性識別生物標(biāo)志物的化學(xué)結(jié)構(gòu)的手段優(yōu)選地是與生物標(biāo)志物特異性結(jié)合的檢測劑，更優(yōu)選地是與化學(xué)結(jié)構(gòu)特異性相互作用的抗體或其他蛋白質(zhì)，如受體或酶，或適配子。例如，可以使用生物標(biāo)志物作為抗原，通過本領(lǐng)域熟知的方法獲得特異性抗體。如本文提到的抗體包括多克隆和單克隆抗體，以及其能夠結(jié)合抗原或半抗原的片段，如Fv、Fab和F(ab) 2片段。本發(fā)明還包括人源化雜合抗體，其中顯示所需抗原特異性的非人類供體抗體的氨基酸序列與人類接納體抗體的序列組合。另外，涵蓋單鏈抗體。供體序列通常將至少包括供體的結(jié)合抗原的氨基酸殘基，但是也可以包含供體抗體的結(jié)構(gòu)上和/或功能上相關(guān)的其他氨基酸殘基?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域熟知的幾種方法制備這類雜合體。能夠特異性識別代謝物的合適蛋白質(zhì)優(yōu)選地是參與所述生物標(biāo)志物的代謝轉(zhuǎn)化的酶。所述酶可以利用生物標(biāo)志物(例如，代謝物)作為底物或可以將底物轉(zhuǎn)化成生物標(biāo)志物，例如，代謝物。另外，所述抗體可以用作基礎(chǔ)以產(chǎn)生特異性識別生物標(biāo)志物的寡肽。這些寡肽應(yīng)當(dāng)例如包含針對所述生物標(biāo)志物的酶結(jié)合結(jié)構(gòu)域或袋?；诳贵w和/或酶的合適測定法可以是RIA (放射免疫測定法)、ELISA (酶聯(lián)免疫吸附測定法)、夾心酶免疫試驗(yàn)、電化學(xué)發(fā)光夾心免疫測定法(ECLIA)、解離增強(qiáng)鑭系元素?zé)晒饷庖邷y定法(DELFIA)或固相免疫試驗(yàn)。與生物標(biāo)志物特異性結(jié)合的適配子可以通過本領(lǐng)域熟知的方法產(chǎn)生(Ellingtonl990, Nature346:818-822 ；Vater2003, Curr Opin DrugDiscov Devel6(2):253-261)。另外，也可以基于生物標(biāo)志物與其他化合物反應(yīng)的能力，即通過特定化學(xué)反應(yīng)鑒定生物標(biāo)志物。另外，可以基于生物標(biāo)志物在生物讀出系統(tǒng)中激發(fā)反應(yīng)的能力而確定樣品中的生物標(biāo)志物。應(yīng)當(dāng)將生物學(xué)反應(yīng)作為讀數(shù)檢出，所述讀數(shù)表示由樣品包含的代謝物的存在和/或其量。生物學(xué)反應(yīng)可以例如是誘導(dǎo)細(xì)胞或生物的基因表達(dá)或表型反應(yīng)。
[0071]術(shù)語“參考”指至少一種生物標(biāo)志物的特征性特征的值，并且優(yōu)選地，指表示能與腎毒性相關(guān)的所述生物標(biāo)志物的量的值。
[0072]這類參考優(yōu)選地從源自遭遇腎毒性的受試者或受試者組的樣品中或從源自已經(jīng)與兩性霉素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戍燒、D-芋烯或萘燒接觸的受試者或受試者組的樣品中獲得。受試者或受試者組可以分別通過局部或全身施用模式與所述化合物接觸，只要該化合物變得生物可利用即可。優(yōu)選的施用模式在下文后續(xù)實(shí)施例中描述。
[0073]備選地，但是卻仍是優(yōu)選地，參考可以從下述樣品獲得，所述樣品源自尚未與兩性霉素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯或萘烷接觸的受試者或受試者組或相對于腎毒性和更優(yōu)選地也相對于其他疾病而言的健康受試者或這類受試者的組。
[0074]可以如上文所述就生物標(biāo)志物的量確定參考。具體而言，優(yōu)選地通過以下方式從如本文提到的受試者組的樣品獲得參考:分別確定來自該組的每位個體的樣品中至少一種生物標(biāo)志物各自的相對量或絕對量并且隨后確定所述相對量或絕對量或通過使用本文中他處所提到的統(tǒng)計(jì)技術(shù)從其中推導(dǎo)出的任何參數(shù)的中位數(shù)或平均值。備選地，參考可以優(yōu)選地通過確定樣品中至少一種生物標(biāo)志物各自的相對量或絕對量來獲得，所述樣品來自如本文提到的受試者組的樣品的混合物。這種混合物優(yōu)選地由來自樣品的等體積部分組成，其中所述樣品從所述組的每位個體獲得。
[0075]另外，參考還優(yōu)選地可以是經(jīng)計(jì)算的參考，最優(yōu)選地是源自個體群體的至少一種生物標(biāo)志物各自的相對量或絕對量的平均值或中位值。所述個體群體是本發(fā)明方法待研究的受試者所來源的群體。然而，應(yīng)當(dāng)理解為確定經(jīng)計(jì)算的參考而待研究的受試者群體優(yōu)選地由表觀健康的受試者(例如未治療過)組成或包含許多位表觀健康的受試者，所述受試者多到足以在統(tǒng)計(jì)上抵抗因所述群體中存在試驗(yàn)對象所致的顯著平均數(shù)或中位數(shù)變化。可以如本文中他處所述那樣確定該群體的所述個體的至少一種生物標(biāo)志物的絕對量或相對量。如何計(jì)算合適的參考值，優(yōu)選地，平均數(shù)或中位數(shù)，是本領(lǐng)域熟知的。用于計(jì)算合適參考的其他技術(shù)包括使用接收者操作特征(ROC)曲線計(jì)算法優(yōu)化，所述計(jì)算法也是本領(lǐng)域熟知的并且可以基于給定的受試者組群在不另外費(fèi)力的情況下，對具有給定特異性和靈敏度的分析系統(tǒng)實(shí)施計(jì)算。之前所指的受試者群體或組應(yīng)當(dāng)包含多位受試者，優(yōu)選地，至少5、
10、50、100、1，000或10，000位受試者至多達(dá)整個群體。更優(yōu)選地，在這個情境下提到的受試者組是具有統(tǒng)計(jì)上代表給定群體的大小的受試者組，即統(tǒng)計(jì)代表性樣品。應(yīng)當(dāng)理解通過本發(fā)明方法待診斷的受試者和所述多個受試者中的受試者具有相同的物種并且優(yōu)選地具有相同的性別。
[0076]更優(yōu)選地，參考將存儲于合適的數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)如數(shù)據(jù)庫中，并且因此還可用于未來的診斷。這還允許有效地診斷腎毒性素質(zhì)，因?yàn)橐坏?在未來)已經(jīng)證實(shí)從中獲得相應(yīng)參考樣品的受試者(確實(shí))形成腎毒性，則可以在數(shù)據(jù)庫中鑒定合適的參考結(jié)果。
[0077]術(shù)語“比較”指評估至少一種生物標(biāo)志物的定性或定量確定的量是否與參考相同或與參考不同。
[0078]在參考結(jié)果從源自遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經(jīng)與兩性霉素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯或萘烷接觸的受試者或受試者組的樣品獲得的情況下，可以基于從測試樣品獲得的量和前述參考之間相同或相似性的程度，即基于就至少一種生物標(biāo)志物而言相同的定性或定量組成而診斷腎毒性。相同的量包括這些量，所述量并不以統(tǒng)計(jì)顯著方式不同并且優(yōu)選地至少處于參考的第I和第99百分位數(shù)、第5和第95百分位數(shù)，第10和第90百分位數(shù)，第20和第80百分位數(shù)、第30和第70百分位數(shù)、第40和第60百分位數(shù)之間、更優(yōu)選地，參考的第50、第60、第70、第80、第90或第95百分位數(shù)之間的區(qū)間內(nèi)部。從源自遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經(jīng)與兩性霉素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高
2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯或萘烷接觸的受試者或受試者組的樣品所獲得的參考可以在本發(fā)明的方法中應(yīng)用，以便診斷腎毒性或用于確定化合物是否能夠在受試者中誘導(dǎo)腎毒性。在這種情況下，優(yōu)選地，至少一種生物標(biāo)志物的與參考基本上相同的量將指示存在腎毒性或能夠誘導(dǎo)腎毒性的化合物，而至少一種生物標(biāo)志物的與參考不同的量將指示不存在腎毒性或不能夠誘導(dǎo)腎毒性的化合物。
[0079]另外，從源自遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經(jīng)與兩性霉素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯或萘烷接觸的受試者或受試者組的樣品所獲得的參考可以用于鑒定用于治療腎毒性的物質(zhì)。在這種情況下，優(yōu)選地，至少一種生物標(biāo)志物的與參考不同的量指示適于治療腎毒性的物質(zhì)，而至少一種生物標(biāo)志物的與參考基本上相同的量將指示不能夠治療腎毒性的物質(zhì)。
[0080]在參考結(jié)果從源自尚未與兩性霉素B、0 -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，1，2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯或萘烷接觸或未遭遇腎毒性的受試者或受試者組的樣品獲得的情況下，可以基于從測試樣品獲得的測試量和前述參考之間的差異，即就至少一種生物標(biāo)志物而言定性或定量組成的差異而診斷所述腎毒性。
[0081]如果使用如上所述的經(jīng)計(jì)算的參考，則同樣適用。
[0082]差異可以是至少一種生物標(biāo)志物的絕對量或相對量增加(有時稱作生物標(biāo)志物的上調(diào)；還見實(shí)施例)或所述量的減少或不存在可檢測量的生物標(biāo)志物(有時稱作生物標(biāo)志物的下調(diào)；還見實(shí)施例)。優(yōu)選地，相對量或絕對量的差異是顯著的，即處于參考的第45和第55百分位數(shù)、第40和第60百分位數(shù)、第30和第70百分位數(shù)、第20和第80百分位數(shù)、第10和第90百分位數(shù)、第5和第95百分位數(shù)、第I和第99百分位之間數(shù)之間的區(qū)間外部。
[0083]從源自尚未與兩性霉素B、(6-紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高
2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙 烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯或萘烷接觸或未遭遇腎毒性的受試者或受試者組的樣品所獲得的參考可以在本發(fā)明的方法中應(yīng)用，以便診斷腎毒性或用于確定化合物是否能夠在受試者中誘導(dǎo)腎毒性。在這種情況下，優(yōu)選地，至少一種生物標(biāo)志物的與參考不同的量將指示存在腎毒性或能夠誘導(dǎo)腎毒性的化合物，而至少一種生物標(biāo)志物的與參考基本上相同的量將指示不存在腎毒性或不能夠誘導(dǎo)腎毒性的化合物。另外，從源自尚未與兩性霉素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯或萘烷接觸或未遭遇腎毒性的受試者或受試者組的樣品所獲得的參考可以用來鑒定用于治療腎毒性的物質(zhì)。在這種情況下，優(yōu)選地，至少一種生物標(biāo)志物的與參考基本上相同的量指示適于治療腎毒性的物質(zhì)，而至少一種生物標(biāo)志物的與參考不同的量將指示不適于治療腎毒性的物質(zhì)。
[0084]優(yōu)選的參考是在后續(xù)表中提到的那些或可以在后續(xù)實(shí)施例后產(chǎn)生的那些。另外，相對差異，即各個生物標(biāo)志物的量的增加或減少，優(yōu)選地是下表中列舉的那些。另外，優(yōu)選地，觀察到的差異(即增加或減少)的程度優(yōu)選地是根據(jù)下表中所示因素的增加或減少。
[0085]優(yōu)選地，當(dāng)選自表la、lc、2a、2c、3a、3c、4a、4c、5a、6a、7a、8a 或 Ila 時，至少一種生物標(biāo)志物相對于尚未與兩性霉素B、β-紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高
2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯或萘烷接觸或未遭遇腎毒性的參考和更優(yōu)選地相對于下表所用的參考而言增加。
[0086]優(yōu)選地，當(dāng)選自表lb、ld、2b、2d、3b、3d、4b、4d、5b、6b、7b、8b 或 Ilb 時，至少一
種生物標(biāo)志物相對于尚未與兩性霉素B、β-紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高
2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯或萘烷接觸或未遭遇腎毒性的參考和更優(yōu)選地相對于下表所用的參考而言減少。
[0087]比較優(yōu)選地由自動化輔助。例如，可以使用合適的計(jì)算機(jī)程序，所述計(jì)算機(jī)程序包含用于比較兩個不同數(shù)據(jù)集(例如，包含特征性特征的值的數(shù)據(jù)集)的算法。這類計(jì)算機(jī)程序和算法是本領(lǐng)域熟知的。不限于上文所述，也可以手工地實(shí)施比較。
[0088]術(shù)語“用于治療腎毒性的物質(zhì)”指這樣的化合物，所述化合物可以直接干擾引起在本說明書中其他地方提到的腎毒性的生物學(xué)機(jī)制。備選地，優(yōu)選的化合物還可以干擾與腎毒性相關(guān)的癥狀的形成或進(jìn)展。通過本發(fā)明方法待鑒定的物質(zhì)可以是有機(jī)和無機(jī)化學(xué)品，如小分子、多核苷酸、包括siRNA、核酶或微RNA分子的寡核苷酸、肽、包括抗體的多肽或其他人工或生物聚合物，如適配子(aptamer)。優(yōu)選地，該物質(zhì)適合作為藥物、前藥或用于開發(fā)藥物或前藥的前導(dǎo)物質(zhì)。
[0089]應(yīng)當(dāng)理解如果本發(fā)明的方法待用于鑒定用于治療腎毒性的藥物或用于毒理學(xué)評估化合物(即確定化合物是否能夠誘導(dǎo)腎毒性)，則可以出于統(tǒng)計(jì)原因研究多位受試者的試樣。優(yōu)選地，這種試驗(yàn)對象組群內(nèi)部的代謝組學(xué)應(yīng)當(dāng)盡可能地相似，以避免例如由除了待研究化合物之外的多種因素造成的差異。待用于所述方法的受試者優(yōu)選地是實(shí)驗(yàn)室動物如嚙齒類并且更優(yōu)選地是大鼠。應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步理解所述實(shí)驗(yàn)室動物應(yīng)當(dāng)優(yōu)選地在完成本發(fā)明的方法后處死。試驗(yàn)組群的全部受試者和參考動物應(yīng)當(dāng)在相同條件下維持以避免任何差異性環(huán)境影響。W02007/014825中詳述了提供這類動物的合適條件和方法。所述條件在此通過引用方式并入作為參考。
[0090]本發(fā)明的方法可以優(yōu)選地用本發(fā)明的裝置實(shí)施。如本文所用的裝置應(yīng)當(dāng)包括至少前述單元。該裝置的單元彼此有效連接。怎樣以運(yùn)行方式連接單元將取決于包括于該裝置中的單元的類型。例如，當(dāng)在分析單元中應(yīng)用自動定性或定量確定至少一種生物標(biāo)志物的手段情況下，通過所述自動運(yùn)行單元獲得的數(shù)據(jù)可以由評價單元處理，例如，由作為數(shù)據(jù)處理器的計(jì)算機(jī)上運(yùn)行的計(jì)算機(jī)程序處理以促進(jìn)診斷。在這種情況下，優(yōu)選地，所述單元由單一裝置包含。然而，分析單元和評價單元也可以物理地分離。在這種情況下，有效連接可以借助單元之間允許數(shù)據(jù)傳輸?shù)挠芯€和無線連接實(shí)現(xiàn)。無線連接可以使用無線局域網(wǎng)(WLAN)或互聯(lián)網(wǎng)。接線可以由單元之間的光纜連接和非光纜連接實(shí)現(xiàn)。用于有線連接的電纜優(yōu)選地適于高通量數(shù)據(jù)傳輸。
[0091]用于確定至少一種生物標(biāo)志物的優(yōu)選分析單元包括特異性識別如本文中他處所述的至少一種生物標(biāo)志物的檢測劑，如抗體、蛋白質(zhì)或適配子，和使所述檢測劑與待測試樣品接觸的區(qū)帶。檢測劑可以固定在用于接觸的區(qū)帶上或可以在已經(jīng)加載樣品后施加至所述區(qū)帶。分析單元應(yīng)當(dāng)優(yōu)選地適用于定性和/或定量確定檢測劑和至少一種生物標(biāo)志物的復(fù)合物的量。應(yīng)當(dāng)理解當(dāng)檢測劑與至少一種生物標(biāo)志物結(jié)合時,至少一種生物標(biāo)志物、檢測劑或兩者的至少一種可度量物理或化學(xué)特性將改變，從而可以通過檢測器測量所述改變，優(yōu)選地，所述檢測器包含于分析單元中。然而，在使用分析單元如測試條的情況下，檢測器和分析單元可以是僅為測量才置于一起的分別的組件。基于至少一種可度量物理或化學(xué)特性的檢測到的改變，分析單元可以計(jì)算如本文中他處所述的至少一種生物標(biāo)志物的強(qiáng)度值。隨后可以為進(jìn)一步加工和評價將所述強(qiáng)度值傳輸至評價單元。最優(yōu)選地，至少一種生物標(biāo)志物的量可以基于使用如本文中他處所述的檢測劑的技術(shù)，通過ELISA、EIA或RIA確定。備選地，如本文提到的分析單元優(yōu)選地包括用于分離生物標(biāo)志物的設(shè)備，如色譜設(shè)備，和用于確定生物標(biāo)志物的設(shè)備，如光譜測定設(shè)備。上文已經(jīng)詳細(xì)描述了合適的設(shè)備。待用于本發(fā)明系統(tǒng)中的用于分離化合物的優(yōu)選設(shè)備包括色譜設(shè)備，更優(yōu)選地用于液相色譜、HPLC和/或氣相色譜的設(shè)備。用于確定化合物的優(yōu)選設(shè)備包括質(zhì)譜設(shè)備，更優(yōu)選地，GC-MS、LC-MS、直接注入質(zhì)譜法、FT-1CR-MS、CE-MS、HPLC-MS、四極質(zhì)譜法、依次耦合質(zhì)譜法(包括MS-MS或MS-MS-MS)、ICP-MS, Py-MS或T0F。分離和確定設(shè)備優(yōu)選地彼此偶聯(lián)。最優(yōu)選地，LC-MS和/或GC-MS用于根據(jù)本發(fā)明提到的分析單元中。
[0092]本發(fā)明裝置的評價單元優(yōu)選地包括數(shù)據(jù)處理設(shè)備或計(jì)算機(jī)，其適應(yīng)于執(zhí)行用于實(shí)施如本文中他處所述的比較的規(guī)則。另外，評價單元優(yōu)選地包括具有存儲的參考的數(shù)據(jù)庫。如本文所用的數(shù)據(jù)庫包括在合適存儲介質(zhì)上的數(shù)據(jù)集合。另外，該數(shù)據(jù)庫優(yōu)選地還包含數(shù)據(jù)庫管理系統(tǒng)。數(shù)據(jù)庫管理系統(tǒng)優(yōu)選地是基于網(wǎng)絡(luò)、分層或面向?qū)ο蟮臄?shù)據(jù)庫管理系統(tǒng)。另夕卜，數(shù)據(jù)庫可以是聯(lián)邦或綜合數(shù)據(jù)庫。更優(yōu)選地，數(shù)據(jù)庫將作為分布式(聯(lián)邦)系統(tǒng)如作為客戶-服務(wù)器-系統(tǒng)執(zhí)行。更優(yōu)選地，將數(shù)據(jù)庫結(jié)構(gòu)化以便允許檢索算法將試驗(yàn)數(shù)據(jù)集與由數(shù)據(jù)集合構(gòu)成的數(shù)據(jù)集比較。具體而言，通過使用這種算法，可以就指示腎毒性的相似或相同數(shù)據(jù)集檢索數(shù)據(jù)庫(例如查詢檢索)。因而，如果可以在數(shù)據(jù)集合中鑒定到相同或相似的數(shù)據(jù)集，則試驗(yàn)數(shù)據(jù)集將與腎毒性相關(guān)。評價單元也可以優(yōu)選地包括其他數(shù)據(jù)庫或與之有效關(guān)聯(lián)，所述其他數(shù)據(jù)庫具有基于建立的腎毒性診斷對治療性或預(yù)防性介入或改進(jìn)生活方式的推薦。所述其他數(shù)據(jù)庫可以優(yōu)選地用通過評價單元所獲得的診斷結(jié)果自動檢索，以確定對于已經(jīng)從中獲得測試樣品的受試者合適的推薦，目的是治療或預(yù)防腎毒性。
[0093]在本發(fā)明裝置的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述存儲的參考是源自已知遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經(jīng)與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組的參考:兩性霉素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷，并且所述數(shù)據(jù)處理器執(zhí)行指令以相對于存儲的參考，比較由分析單元確定的至少一種生物標(biāo)志物的量，其中測試樣品中至少一種生物標(biāo)志物與參考相比基本上相同的量指示存在腎毒性或其中測試樣品中至少一種生物標(biāo)志物與參考相比不同的量指示不存在腎毒性。
[0094]在本發(fā)明裝置的另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述存儲的參考是源自已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組的參考:兩性霉素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷，并且所述數(shù)據(jù)處理器執(zhí)行指令以相對于存儲的參考，比較由分析單元確定的至少一種生物標(biāo)志物的量，其中測試樣品中至少一種生物標(biāo)志物與參考相比不同的量指示存在腎毒性或其中測試樣品中至少一種生物標(biāo)志物與參考相比基本上相同的量指示不存在腎毒性。
[0095]該裝置因此也可以在沒有專門醫(yī)學(xué)知識的情況下由通過醫(yī)療或?qū)嶒?yàn)室工作人或患者使用，尤其在包括作出推薦的專家系統(tǒng)時使用。該裝置還適于貼近患者應(yīng)用，因?yàn)樵撗b置可以改造成便攜樣式。
[0096]術(shù)語“試劑盒”指前述組分的集合，所述組分優(yōu)選地分別或在單一容器中提供。該容器還包括用于實(shí)施本發(fā)明方法的說明書。這些說明書可以處于手冊的形式或可以由在計(jì)算機(jī)或數(shù)據(jù)處理裝置上執(zhí)行時能夠?qū)嵤┍景l(fā)明方法中所提到的比較并且因此建立診斷的計(jì)算機(jī)程序代碼提供。計(jì)算機(jī)程序代碼可以在數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)或設(shè)備如光或磁存儲介質(zhì)(例如，光盤(CD)、CD-ROM、硬盤、光儲存介質(zhì)或磁盤盒)上或直接在計(jì)算機(jī)或數(shù)據(jù)處理裝置上提供。結(jié)合本發(fā)明試劑盒所提到的“標(biāo)準(zhǔn)”是當(dāng)至少一種生物標(biāo)志物在溶液中存在或在預(yù)定體積溶液中溶解時，至少一種生物標(biāo)志物的與所述至少一種生物標(biāo)志物的下述量相似的量，所述量存在于(i)已知遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經(jīng)與選自兩性霉素B、^ -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組中，或(ii)源自已知未遭受腎毒性的受試者或受試者組或尚未與選自兩性霉素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素S.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組。
[0097]有利地，已經(jīng)在作為本發(fā)明基礎(chǔ)的研究中發(fā)現(xiàn)，如本文中指出的至少一種生物標(biāo)志物的量允許診斷腎毒性，具體而言，由兩性霉素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷引起的腎毒性。通過確定增加數(shù)目的或甚至全部的前述生物標(biāo)志物，甚至將更多地改善該方法的特異性和準(zhǔn)確度。代謝組學(xué)的定量和/或定性組成相對于這些特定生物標(biāo)志物的變化在所述毒性的其他體征臨床上出現(xiàn)之前就指示腎毒性。與本發(fā)明提供的生物標(biāo)志物確定相比，目前用于診斷腎毒性的形態(tài)學(xué)、生理學(xué)以及生物化學(xué)參數(shù)較不特異性并且較不靈敏。歸功于本發(fā)明，可以更有效地和可靠地評估化合物的腎毒性。另外，基于前述研究結(jié)果，可用于治療腎毒性的藥物篩選測試法是可行的。通常而言，本發(fā)明構(gòu)思了受試者樣品中選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中任一表的至少一種生物標(biāo)志物或針對所述生物標(biāo)志物的檢測劑的用途，用于診斷腎毒性、用于確定化合物是否能夠誘導(dǎo)腎毒性或用于鑒定能夠治療腎毒性的物質(zhì)。另外，本發(fā)明總體上構(gòu)思了受試者樣品中至少一種生物標(biāo)志物或針對該生物標(biāo)志物的檢測劑用于鑒定易響應(yīng)腎毒性治療的受試者的用途。在本發(fā)明的這種情境下待使用的優(yōu)選檢測劑是本文中他處所提到的那些。另外，本發(fā)明的方法可以有利地以裝置實(shí)施。另外，可以提供允許實(shí)施所述方法的試劑盒。
[0098]本發(fā)明還涉及數(shù)據(jù)集合,所述數(shù)據(jù)集合包含在表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 的任一表中所述的生物標(biāo)
志物的特征值。術(shù)語“數(shù)據(jù)集合”指可以按物理和/邏輯方式歸結(jié)分組的數(shù)據(jù)匯集。因此，可以在單獨(dú)的數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)中或在彼此有效連接的物理分立的數(shù)據(jù)儲存介質(zhì)中實(shí)施數(shù)據(jù)集合。優(yōu)選地，借助數(shù)據(jù)庫實(shí)施數(shù)據(jù)集合。因此，如本文所用的數(shù)據(jù)庫包括在合適存儲介質(zhì)上的數(shù)據(jù)集合。另外，該數(shù)據(jù)庫優(yōu)選地還包含數(shù)據(jù)庫管理系統(tǒng)。數(shù)據(jù)庫管理系統(tǒng)優(yōu)選地是基于網(wǎng)絡(luò)、分層或面向?qū)ο蟮臄?shù)據(jù)庫管理系統(tǒng)。另外，數(shù)據(jù)庫可以是聯(lián)邦或綜合數(shù)據(jù)庫。更優(yōu)選地，數(shù)據(jù)庫將作為分布式(聯(lián)邦)系統(tǒng)如作為客戶-服務(wù)器-系統(tǒng)執(zhí)行。更優(yōu)選地，將數(shù)據(jù)庫結(jié)構(gòu)化以便允許檢索算法將試驗(yàn)數(shù)據(jù)集與由數(shù)據(jù)集合構(gòu)成的數(shù)據(jù)集比較。具體而言，通過使用這種算法，可以就指示腎毒性的相似或相同數(shù)據(jù)集檢索數(shù)據(jù)庫(例如查詢檢索)。因而，如果可以在數(shù)據(jù)集合中鑒定到相同或相似的數(shù)據(jù)集，則試驗(yàn)數(shù)據(jù)集將與腎毒性相關(guān)。因此，從數(shù)據(jù)集合獲得的信息可以用來基于從受試者獲得的試驗(yàn)數(shù)據(jù)集診斷腎毒性。
[0099]另外，本發(fā)明涉及包含所述數(shù)據(jù)集合的數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)。如本文所用的術(shù)語“數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)”涵蓋基于單一物理實(shí)體的數(shù)據(jù)儲存介質(zhì)，如CD、CD-ROM、硬盤、光儲存介質(zhì)或磁盤盒。另外，該術(shù)語還包括由物理分立的實(shí)體組成的數(shù)據(jù)儲存介質(zhì)，所述數(shù)據(jù)儲存介彼此以如此方式有效連接，以至于提供前述數(shù)據(jù)集合，優(yōu)選地，以合適查詢檢索的方式提供。
[0100]本發(fā)明還涉及一個系統(tǒng)，該系統(tǒng)包含:
[0101](a)用于比較樣品的至少一種生物標(biāo)志物的特征值的設(shè)備，所述設(shè)備有效連接至
[0102](b)本發(fā)明的數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)。[0103]如本文所用的術(shù)語“系統(tǒng)”指彼此有效連接的不同設(shè)備。所述設(shè)備可以在單一裝置中實(shí)現(xiàn)或可以在彼此有效連接的物理分立的裝置中實(shí)現(xiàn)。用于比較生物標(biāo)志物的特征值的設(shè)備優(yōu)選地基于如之前提到的比較算法運(yùn)行。數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)，優(yōu)選地包含前述數(shù)據(jù)集合或數(shù)據(jù)庫，其中每種存儲的數(shù)據(jù)集指示腎毒性。因而，本發(fā)明的系統(tǒng)允許確定試驗(yàn)數(shù)據(jù)集是否包含于存儲在數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)中的數(shù)據(jù)集合中。因此，本發(fā)明的系統(tǒng)可以作為診斷腎毒性中的診斷手段應(yīng)用。在系統(tǒng)的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，包含用于確定樣品的生物標(biāo)志物的特征值的設(shè)備。術(shù)語“用于確定生物標(biāo)志物的特征值的設(shè)備”優(yōu)選地指用于確定生物標(biāo)志物的前述設(shè)備，如質(zhì)譜設(shè)備、ELISA設(shè)備、NMR設(shè)備或用于實(shí)施分析物的化學(xué)或生物測定的設(shè)備。
[0104]上文所提及的全部參考均就以上描述中明確提到的其完整公開內(nèi)容以及其特定公開內(nèi)容，通過引用的方式并入作為參考。以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的目的。無論如何，它們應(yīng)當(dāng)不被解釋為在任何方面限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例
[0105]實(shí)施例:與腎毒性相關(guān)的生物標(biāo)志物
[0106]在28日期間，對雄性大鼠和雌性大鼠各5只的組每日一次用所指示的化合物給藥(關(guān)于化合物、施加的劑量和施用細(xì)節(jié)，見下表9)。
[0107]研究中的每個劑量組由每種性別5只大鼠組成。雄性動物和雌性動物各5只的額外組充當(dāng)對照。在開始處理期之前，供應(yīng)時為62-64日齡的動物適應(yīng)于舍飼和環(huán)境條件7日。將動物群體的全部動物在相同的恒定溫度(20-24±3°C)和相同的恒定濕度(30-70%)下維持。動物群體的動物隨意采食。待使用的食物基本上不含化學(xué)污染物或微生物污染物。還隨意提供飲用水。因此，水不含如歐洲飲用水指令98/83/EG中制定的化學(xué)污染物和微生物污染物。照明期是12小時光照，隨后12小時黑暗(12小時光照，從6:00至18:00，和12小時黑暗，從18:00至6:00)。研究在AAALAC批準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室中根據(jù)德國動物福利法和歐洲理事會指令86/609/EE進(jìn)行。根據(jù)OE⑶407用于嚙齒類中重復(fù)劑量28日口服毒性研究的化學(xué)品檢驗(yàn)指南安排測試系統(tǒng)。如表中所述投予和施用測試物質(zhì)(表9中的化合物)。
[0108]在第7、14和28日早晨，從麻醉的禁食動物的眶后靜脈叢取得血液。從每只動物，采集Iml血液，以EDTA作為抗凝血劑。將樣品離心以便產(chǎn)生血漿。全部血漿樣品用N2氣覆蓋并隨后存儲在_80°C直至分析。
[0109]對于基于質(zhì)譜的代謝物概況分析，提取血漿樣品并且獲得極性級分和非極性(脂質(zhì))級分。對于GC-MS分析，將非極性級分在酸性條件下用甲醇處理以產(chǎn)生脂肪酸甲酯。在分析之前，將兩種級分進(jìn)一步用鹽酸0-甲基-羥胺和吡啶衍生化以使氧代基團(tuán)轉(zhuǎn)化成0-甲基肟并且隨后用甲硅烷基化劑衍生化。在LC-MS分析中，將兩種級分均在適宜的溶劑混合物中重構(gòu)。通過在反相分離柱上梯度洗脫進(jìn)行HPLC。如W02003073464中所述應(yīng)用允許與完整篩選分析平行地靶向和高靈敏度MRM(多反應(yīng)監(jiān)測)概況分析的質(zhì)譜檢測。
[0110]通過在線SPE-LC-MS(固相提取-LC-MS)測量類固醇和它們的代謝物。如Yamada等人(Yamada2002, Journal of Analytical Toxicology, 26 (I): 17-22))所述，通過在線SPE-LC-MS測量」L茶酚胺和它們的代謝物。
[0111]在綜合的分析驗(yàn)證步驟后，將每種分析物的數(shù)據(jù)針對來自匯集樣品的數(shù)據(jù)歸一化。這些樣品在整個過程期間平行地進(jìn)行以解釋過程變異性。通過使用WELCH檢驗(yàn)比較處理組的均值和相應(yīng)的未處理對照組的均值,確定對性別、處理持續(xù)時間和代謝物特異的處理組值的顯著性并且用相對于對照的處理率和P-值定量。
[0112]通過下表中分析物的排序確定每種毒性模式的最重要生物標(biāo)志物。因此，將(表中顯示的)給定模式的參考處理中的代謝變化與其他不相關(guān)處理中相同代謝物的變化比較。對于每種代謝物，獲得參考和對照處理的T-值并且由Welch檢驗(yàn)比較以評估這兩個組是否為顯著差異。取相應(yīng)T值的最大絕對值表示該模式的最重要代謝物。
[0113]下表中顯示了表明處理大鼠后腎毒性的血漿代謝物組的變化:
[0114]表1a:雌性大鼠中腎毒性(多尿作用)的標(biāo)志物；標(biāo)出顯著上調(diào)變化(P-值(0.2) (*)。對于一些代謝物(以#標(biāo)記)，在表10中提供額外的信息。全部化合物均以高劑量施用。
[0115]
【權(quán)利要求】
1.一種用于診斷腎毒性的方法，包括: (a)確定疑似遭遇腎毒性的受:試者的測試樣品中選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 lib 中任一表的至少一種生物標(biāo)志物的量,和 (b)將步驟(a)中確定的量與參考比較，由此診斷腎毒性。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者已經(jīng)與疑似能夠誘導(dǎo)腎毒性的化合物接觸。
3.一種確定化合物是否能夠在受試者中誘導(dǎo)腎毒性的方法，包括: (a)確定已經(jīng)與疑似能夠誘導(dǎo)腎毒性的化合物接觸的受試者的樣品中選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中任一表的至少一種生物標(biāo)志物的量,和 (b)將步驟(a)中確定的量與參考比較，由此確定化合物誘導(dǎo)腎毒性的能力。
4.權(quán)利要求2或3的方法，其中所述化合物是選自以下的至少一種化合物:兩性霉素B、@ -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述參考源自(i)遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)已經(jīng)與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性霉素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷。
6.權(quán)利要求5的方法，其中測試樣品中生物標(biāo)志物與參考的基本上相同的量指示腎毒性。
7.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述參考源自(i)已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性霉素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷。
8.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述參考是針對受試者群體中生物標(biāo)志物的經(jīng)計(jì)算的參考。
9.權(quán)利要求7或8的方法，其中測試樣品中生物標(biāo)志物與參考相比不同的量指示腎毒性。
10.一種鑒定用于治療腎毒性的物質(zhì)的方法，包括步驟: (a)確定遭遇腎毒性的受試者的樣品中選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中任一表的至少一種生物標(biāo)志物的量，所述受試者已經(jīng)與疑似能夠治療腎毒性的候選物質(zhì)接觸；和 (b)將步驟(a)中確定的量與參考比較，由此鑒定能夠治療腎毒性的物質(zhì)。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述參考源自(i)遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)已經(jīng)與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性霉素B、β-紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可喊、茶喊、妥布霉素s.c.、和憐酸二甲苯酯、1，1, 2, 2-四氯乙燒、2，2，4- 二甲基戍燒、D-苧烯和萘烷。
12.權(quán)利要求11的方法，其中測試樣品中生物標(biāo)志物與參考的不同的量指示能夠治療腎毒性的物質(zhì)。
13.權(quán)利要求10的方法，其中所述參考源自(i)已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性霉素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，1, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷。
14.權(quán)利要求10的方法，其中所述參考是針對受試者群體中生物標(biāo)志物的經(jīng)計(jì)算的參考。
15.權(quán)利要求13或14的方法，其中測試樣品中生物標(biāo)志物與參考的基本上相同的量指示能夠治療腎毒性的物質(zhì)。
16.選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、lla或lib中任一表的至少一種生物標(biāo)志物的用途或針對所述生物標(biāo)志物的檢測劑的用途，用于診斷受試者樣品中的腎毒性。
17.一種用于診斷疑似遭遇腎毒性的受試者的樣品中腎毒性的裝置，包含: (a)分析單元，其包含針對選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、1la或1lb中任一表的至少一種生物標(biāo)志物的檢測劑，所述分析單元允許確定樣品中存在的所述生物標(biāo)志物的量；和與所述分析單元有效連接的， (b)包含存儲的參考和數(shù)據(jù)處理器的評價單元，所述評價單元允許相對于存儲的參考，比較由分析單元確定的所述至少一種生物標(biāo)志物的量，由此診斷腎毒性。
18.權(quán)利要求17的裝置，其中所述存儲的參考是源自已知遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經(jīng)與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組的參考:兩性霉素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，1, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷，并且所述數(shù)據(jù)處理器執(zhí)行指令以相對于存儲的參考，比較由分析單元確定的至少一種生物標(biāo)志物的量,其中測試樣品中至少一種生物標(biāo)志物與參考相比基本上相同的量指示存在腎毒性或其中測試樣品中至少一種生物標(biāo)志物與參考相比不同的量指示不存在腎毒性。
19.權(quán)利要求17的裝置，其中所述存儲的參考是源自已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組的參考:兩性霉素B、e -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷，并且所述數(shù)據(jù)處理器執(zhí)行指令以相對于存儲的參考，比較由分析單元確定的至少一種生物標(biāo)志物的量,其中測試樣品中至少一種生物標(biāo)志物與參考相比不同的量指示存在腎毒性或其中測試樣品中至少一種生物標(biāo)志物與參考相比基本上相同的量指示不存在腎毒性。
20.一種用于診斷腎毒性的試劑盒，包含針對選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中任一表的至少一種生物標(biāo)志物的檢測劑和針對至少一種生物標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)物，所述標(biāo)準(zhǔn)物的濃度源自(i)已知遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經(jīng)與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性霉素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷；或源自(ii)已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性霉素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡托普利、卡鉬、環(huán)孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青霉胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可堿、茶堿 、妥布霉素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-苧烯和萘烷。
【文檔編號】G01N33/53GK103814295SQ201280044868
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年9月14日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月14日
【發(fā)明者】H·坎普, T·B·沃克, B·V·拉文茲韋, W·梅勒特, E·法比安, V·施特勞斯, J·C·威爾莫, R·洛塞, M·M·赫羅爾德, A·普奧考汀 申請人:巴斯夫歐洲公司