測(cè)定氧化還原指示劑的色調(diào)變化的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供能夠利用于致齲菌數(shù)的測(cè)定等的、測(cè)定氧化還原指示劑的色調(diào)變化的方法。一種測(cè)定氧化還原指示劑的色調(diào)變化的方法，其包括使檢查試劑與受檢試樣反應(yīng)來(lái)測(cè)定色調(diào)變化的步驟，上述檢查試劑包含氧化還原指示劑、氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑及鹵素的鹽，利用該方法測(cè)定氧化還原指示劑的色調(diào)變化。
【專利說(shuō)明】測(cè)定氧化還原指示劑的色調(diào)變化的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及能夠利用于致齲菌數(shù)的測(cè)定等的、測(cè)定氧化還原指示劑的色調(diào)變化的方法、以及用于該方法的試驗(yàn)片。
【背景技術(shù)】
[0002]在口腔內(nèi)存在多種細(xì)菌，其中，將引起齲齒的細(xì)菌稱作致齲菌。例如，唾液中的致齲菌數(shù)越高，認(rèn)為齲齒風(fēng)險(xiǎn)越高，即顯示出口腔以哪種程度處于易患齲齒的狀態(tài)的風(fēng)險(xiǎn)越高。作為致齲菌的檢測(cè)法，已知使用作為氧化還原指示劑的刃天青的檢測(cè)法(專利文獻(xiàn)1、2)、利用基于NADH等的還原力的化學(xué)發(fā)光的檢測(cè)法(專利文獻(xiàn)3)等。
[0003]刃天青通常以作為氧化型的藍(lán)色色素的刃天青(極大吸收波長(zhǎng)605nm)形式存在，其被通過(guò)細(xì)菌的代謝生成的NADH、NADPH(以下，有時(shí)將它們統(tǒng)稱為“NAD(P)H”)還原，轉(zhuǎn)化為作為紅紫色色素(極大吸收波長(zhǎng)573nm)的試鹵靈。此外，試鹵靈進(jìn)一步被NAD (P)H還原，轉(zhuǎn)化為無(wú)色的氫化刃天青。因此，基于刃天青的色調(diào)變化，可以對(duì)受檢試樣中的細(xì)菌、主要是包含致齲菌的革蘭氏陽(yáng)性菌的菌數(shù)進(jìn)行測(cè)定。作為利用了刃天青的致齲菌數(shù)的測(cè)定系統(tǒng)，已知RD r ^卜“昭和”(商品名、昭和藥品化工株式會(huì)社制)、CAT21 7 r ^卜(商品名、々4 >尹 > 卜公司制)。`
[0004]1-甲氧基-5-甲基吩嗪I霧硫酸甲酯鹽(1-甲氧基PMS)、吩嗪鋪.硫酸甲酯鹽(PMS)、吩嗪硫酸乙酯(PES)等電子載體例如在使用四唑鍵鹽作為顯色試劑的反應(yīng)體系中作為四唑鍵鹽的氧化還原反應(yīng)的介質(zhì)(mediator)來(lái)利用。此外，PMS在使用刃天青作為
氧化還原指示劑的反應(yīng)體系中作為介質(zhì)(mediator)來(lái)利用(專利文獻(xiàn)4),但是,作為介質(zhì)(mediator),與PMS相比,更優(yōu)選黃遞酶(專利文獻(xiàn)4)。
[0005]但是，還不清楚在利用這樣的氧化還原指示劑、介質(zhì)的反應(yīng)體系中進(jìn)一步利用氯化鈉、氯化鉀等鹽。
[0006]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0007]專利文獻(xiàn)
[0008]專利文獻(xiàn)1:日本特開昭58-225029號(hào)公報(bào)
[0009]專利文獻(xiàn)2:日本特開2004-093335號(hào)公報(bào)
[0010]專利文獻(xiàn)3:日本特開平10-210998號(hào)公報(bào)
[0011]專利文獻(xiàn)4:日本特開昭62-239999號(hào)公報(bào)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]發(fā)明所要解決的問(wèn)題
[0013]在上述的以往的致齲菌數(shù)的測(cè)定系統(tǒng)中，需要32°C~37°C的溫度調(diào)節(jié)和15~20分鐘的反應(yīng)時(shí)間，無(wú)法在牙科醫(yī)院等以短時(shí)間進(jìn)行致齲菌數(shù)的測(cè)定。此外，在不進(jìn)行溫度調(diào)節(jié)的情況下，存在反應(yīng)所需時(shí)間進(jìn)一步增大的問(wèn)題。即，在以往的致齲菌數(shù)的測(cè)定法中，在反應(yīng)溫度、所需時(shí)間的方面尚有改善的余地。本發(fā)明的課題在于提供能夠利用于致齲菌數(shù)的測(cè)定等的、測(cè)定氧化還原指示劑的色調(diào)變化的新方法。
[0014]用于解決問(wèn)題的方法
[0015]本發(fā)明人進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在使用含有刃天青作為顯色指示劑的檢查試劑的致齲菌數(shù)的測(cè)定方法中，通過(guò)添加1-甲氧基-5-甲基吩嗪讀硫酸甲酯鹽(1-甲氧基PMS)作為檢查試劑的成分，顯色反應(yīng)性提高。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，通過(guò)進(jìn)一步添加氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉或溴化鉀作為檢查試劑的成分，顯色反應(yīng)性進(jìn)一步提高，從而完成了本發(fā)明。
[0016]S卩，本發(fā)明可以列舉如下示例。
[0017][I] 一種測(cè)定氧化還原指示劑的色調(diào)變化的方法，其包括使檢查試劑與受檢試樣反應(yīng)來(lái)測(cè)定色調(diào)變化的步驟，
[0018]上述檢查試劑包含氧化還原指示劑、氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑及鹵素的鹽。
[0019][2]如[I]所述的方法，其為對(duì)受檢試樣中的致齲菌數(shù)進(jìn)行測(cè)定的方法。
[0020][3]如[I]或[2]所述的方法，其中，上述氧化還原指示劑為刃天青。
[0021][4]如[I]?[3]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑為1-甲氧
基-5-甲基吩嗪鎌'硫酸甲酯鹽、吩嗪鍵硫酸甲酯鹽或吩嗪硫酸乙酯。
[0022][5]如[I]?[4]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述鹵素的鹽為氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉或溴化鉀。
[0023][6]如[I]?[5]中任一項(xiàng)所述的方法，其使用具有支撐載體和負(fù)載于該支撐載體的吸收性載體的試驗(yàn)片進(jìn)行測(cè)定，所述試驗(yàn)片中，上述吸收性載體用于保持上述檢查試劑。
[0024][7] 一種NADH和NADPH的測(cè)定試劑，其包含氧化還原指示劑、氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑及鹵素的鹽。
[0025][8]如[7]所述的試劑,其中，上述氧化還原指示劑為刃天青。
[0026][9]如[7]或[8]所述的試劑，其中，上述氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑為1-甲氧基-5-甲基吩嗪_硫酸甲酯鹽、吩嗪鋪硫酸甲酯鹽或吩嗪硫酸乙酯。
[0027][10]如[7]?[9]中任一項(xiàng)所述的試劑，其中，上述鹵素的鹽為氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉或溴化鉀。
[0028][11] 一種用于測(cè)定NADH和NADPH的試驗(yàn)片,其具有支撐載體和負(fù)載于該支撐載體的吸收性載體，所述試驗(yàn)片中，
[0029]上述吸收性載體用于保持[7]?[10]中任一項(xiàng)所述的試劑。
[0030][12]如[11]所述的試驗(yàn)片，其為用于測(cè)定致齲菌數(shù)的試驗(yàn)片。
[0031]發(fā)明效果
[0032]根據(jù)本發(fā)明，能夠明確地測(cè)定氧化還原指示劑的色調(diào)變化。因此，根據(jù)本發(fā)明，能夠在室溫下以短時(shí)間測(cè)定致齲菌數(shù)。因此，根據(jù)本發(fā)明，在牙科醫(yī)院等臨床現(xiàn)場(chǎng)，能夠在無(wú)恒溫裝置等設(shè)備的條件下以短時(shí)間對(duì)多數(shù)樣本進(jìn)行處理，能夠進(jìn)行簡(jiǎn)便且迅速的致齲菌數(shù)的檢查。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0033]圖1(A)為表不本發(fā)明的試驗(yàn)片的一個(gè)實(shí)施方式的俯視圖，圖1(B)為表不本發(fā)明的試驗(yàn)片的一個(gè)實(shí)施方式的前視圖。
[0034]圖2為表示各研究成分對(duì)從反應(yīng)開始I分鐘起到5分鐘后的反射率變化(△ 4分鐘反射率)產(chǎn)生的效果的圖。
[0035]圖3為表示各研究成分對(duì)基本反射率產(chǎn)生的效果的圖。
[0036]圖4為表示各研究成分對(duì)Λ 4分鐘反射率產(chǎn)生的效果的圖。
[0037]圖5為表示在1-甲氧基PMS濃度為0.4mM的情況下添加鹽時(shí)和不添加鹽時(shí)吐出液中致齲菌數(shù)與Λ4分鐘反射率的相關(guān)關(guān)系的圖。
[0038]圖6為表示在1-甲氧基PMS濃度為0.5mM的情況下添加鹽時(shí)和不添加鹽時(shí)吐出液中致齲菌數(shù)與Λ4分鐘反射率的相關(guān)關(guān)系的圖。[0039]圖7為表示在1-甲氧基PMS濃度為0.6mM的情況下添加鹽時(shí)和不添加鹽時(shí)吐出液中致齲菌數(shù)與Λ4分鐘反射率的相關(guān)關(guān)系的圖。
[0040]圖8為表示各種鹽類對(duì)Λ 4分鐘反射率產(chǎn)生的效果的圖。
【具體實(shí)施方式】
[0041 ] 以下，對(duì)本發(fā)明詳細(xì)地進(jìn)行說(shuō)明。
[0042]本發(fā)明的方法為測(cè)定氧化還原指示劑的顯色的方法，其特征在于，利用氧化還原指示劑、氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑及鹵素的鹽。
[0043]即，本發(fā)明的方法為測(cè)定氧化還原指示劑的色調(diào)變化的方法，其包括使檢查試劑與受檢試樣反應(yīng)來(lái)測(cè)定色調(diào)變化的步驟，上述檢查試劑包含氧化還原指示劑、氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑及鹵素的鹽。
[0044]本發(fā)明的方法中，氧化還原指示劑為通過(guò)以NAD(P)H作為供電子體的氧化還原反應(yīng)而顯色的指示劑。因此，上述檢查試劑可以作為NAD(P)H的測(cè)定試劑來(lái)利用。
[0045]同樣，本發(fā)明的方法可以利用于受檢試樣所含的NAD(P)H和/或反應(yīng)體系中所生成的NAD(P)H的檢測(cè)。因此，利用本發(fā)明的方法，可以檢測(cè)例如通過(guò)受檢試樣中所含的細(xì)菌的代謝生成的NAD (P) H，由此可以檢測(cè)出受檢試樣中所含的細(xì)菌。作為此類細(xì)菌,具體而言，可列舉例如致齲菌。
[0046]即，本發(fā)明的方法的一個(gè)方式為測(cè)定受檢試樣中的致齲菌數(shù)的方法，其包括使檢查試劑與受檢試樣反應(yīng)來(lái)測(cè)定色調(diào)變化的步驟，上述檢查試劑包含氧化還原指示劑、氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑及鹵素的鹽。以下，舉例示出測(cè)定致齲菌數(shù)的方法，對(duì)本發(fā)明的方法進(jìn)行說(shuō)明。另外，以下，有時(shí)將氧化還原指示劑、氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑及鹵素的鹽統(tǒng)稱為“有效成分”。
[0047]本發(fā)明中，致齲菌是指能夠成為引起齲齒的原因的菌。作為致齲菌，具體而言，可列舉變形鏈球菌(Streptococcus mutans)及遠(yuǎn)緣鏈球菌(Streptococcus sobrinus)等。致頻菌數(shù)越多，認(rèn)為頻齒風(fēng)險(xiǎn)越高，即患有頻齒的風(fēng)險(xiǎn)越高。
[0048]本發(fā)明中，進(jìn)行致齲菌數(shù)的測(cè)定的受檢試樣并無(wú)特別限定。例如，作為進(jìn)行致齲菌數(shù)的測(cè)定的受檢試樣，可列舉從口腔得到的受檢試樣。作為從口腔得到的受檢試樣，例如可列舉安靜時(shí)唾液(非刺激唾液)、刺激唾液、漱口吐出液。作為刺激唾液，可列舉用口香糖進(jìn)行刺激而采集得到的唾液。其中，優(yōu)選漱口吐出液。漱口吐出液例如可以通過(guò)在口中含漱純化水并將其吐出而得到。具體而言，例如只要將3mL的純化水在口中含漱10秒再將其吐出至容器即可。純化水的容量、在口中含漱的時(shí)間可以根據(jù)需要適當(dāng)改變。所得的受檢試樣可以直接利用于以后的操作而不進(jìn)行特別的前處理，也可以根據(jù)需要進(jìn)行適當(dāng)稀釋等追加操作。此外，作為進(jìn)行致齲菌數(shù)的測(cè)定的受檢試樣，可列舉致齲菌的培養(yǎng)液等包含致齲菌的試樣。致齲菌的培養(yǎng)液可以是例如能夠從ATCC等生物資源庫(kù)獲得的經(jīng)分離得到的致齲菌株的培養(yǎng)液。
[0049]本發(fā)明中，檢查試劑包含氧化還原指示劑。本發(fā)明中，氧化還原指示劑只要是能夠通過(guò)以NAD(P)H作為供電子體的氧化還原反應(yīng)進(jìn)行顯色的指示劑，則并無(wú)特別限定。NAD(P)H通過(guò)細(xì)菌的代謝產(chǎn)生。即，根據(jù)受檢試樣中的細(xì)菌、主要是包含致齲菌的革蘭氏陽(yáng)性菌的活菌數(shù)，進(jìn)行氧化還原指示劑的還原。因此，通過(guò)氧化還原指示劑的還原而產(chǎn)生的色調(diào)變化會(huì)反映致齲菌數(shù)。需要說(shuō)明的是，“以NAD(P)H作為供電子體”是指:可以直接被NAD (P) H還原，也可以經(jīng)由被NAD (P) H還原的其他物質(zhì)(mediator)而間接地被還原。作為
氧化還原指示劑，具體而言，可列舉例如刃天青、四唑fl'鹽、亞甲基藍(lán)及二甲苯藍(lán)。其中，優(yōu)
選刃天青。這些氧化還原指示劑可以單獨(dú)含有，也可以以任意的組合含有。
[0050]刃天青通常以作為氧化型藍(lán)色色素的刃天青(極大吸收波長(zhǎng)605nm)形式存在，其被NAD (P)H還原，轉(zhuǎn)化為作為紅紫色色素(極大吸收波長(zhǎng)573nm)的試鹵靈。此外，試鹵靈進(jìn)一步被NAD (P) H還原,轉(zhuǎn)化為無(wú)色的氫化刃天青。
[0051]四唑鐵鹽被NAD (P) H還原，轉(zhuǎn)化為甲臘.色素。作為四唑餐鹽，具體而言，可列舉例如MTT(3-(4，5- 二甲基-2-噻唑基)-2，5- 二苯基-2H-四唑鋪溴化物)、XTT(2，3-雙(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-2H-四唑I1.-5-甲酰苯胺鹽)、MTS (3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5- (3-羧基甲氧基苯基)-2- (4-磺苯基)-2H-四唑鴒)、WST-1 (2- (4-碘苯基)-3- (4-硝基苯基)-5- (2，4- 二磺苯基)-2H-四唑鍵)及WST-8 (2- (2-甲氧基-4-硝基苯基)-3- (4-硝基苯基)-5- (2，4- 二磺苯基)-2H-四唑I翁)。其中，優(yōu)選WST-1或WST-8。
[0052]需要說(shuō)明的是，氧化還原指示劑的吸收光譜因各指示劑而異，因此，顯色反應(yīng)的檢測(cè)條件只要根據(jù)所使用的氧化還原指示劑進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定即可。
[0053]本發(fā)明的方法中，氧化還原指示劑的濃度只要根據(jù)受檢試樣中的致齲菌數(shù)而使顯色反應(yīng)進(jìn)行則并無(wú)特別限定，可以根據(jù)所使用的氧化還原指示劑的種類、其他成分等諸條件進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定。例如，在使用試驗(yàn)片進(jìn)行致齲菌數(shù)的測(cè)定時(shí)，用于制作試驗(yàn)片的試劑浸潰液中的氧化還原指示劑的濃度優(yōu)選為0.01?ImM，更優(yōu)選為0.05?0.3mM，進(jìn)一步優(yōu)選為
0.1 ?0.16mM。
[0054]本發(fā)明中，檢查試劑包含氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑。本發(fā)明中，氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑只要是促進(jìn)基于氧化還原反應(yīng)的氧化還原指示劑的顯色反應(yīng)的化合物，則并無(wú)特別限定。作為氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑，可列舉例如被NAD (P) H還原而成為還原型、且具有將其他物質(zhì)還原的功能的化合物。作為被還原型的氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑還原的其他物質(zhì)，可列舉氧化還
原指示劑。作為氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑，具體而言，可列舉例如1-甲氧基-5-甲基吩嗪_硫酸
甲酯鹽(1-甲氧基PMS)、吩嗪鍵:硫酸甲酯鹽(PMS)、吩嗪硫酸乙酯(PES)。其中，優(yōu)選1-甲
氧基PMS。這些氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑可以單獨(dú)含有，也可以以任意的組合含有。[0055]本發(fā)明的方法中，氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑的濃度只要能夠根據(jù)受檢試樣中的致齲菌數(shù)使顯色反應(yīng)進(jìn)行則并無(wú)特別限定，可以根據(jù)所使用的氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑的種類、其他成分等諸條件進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定。例如，試劑浸潰液中的氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑的濃度優(yōu)選為
0.01?5mM，更優(yōu)選為0.05?ImM，進(jìn)一步優(yōu)選為0.1?0.6mM。
[0056]本發(fā)明中，檢查試劑包含鹵素的鹽。本發(fā)明中，鹵素的鹽是指鹵素離子與任意的陽(yáng)離子進(jìn)行離子鍵合而得到的鹽。作為鹵素的鹽，可列舉例如氟化物鹽、氯化物鹽、溴化物鹽、碘化物鹽。作為鹵素的鹽，優(yōu)選氯化物鹽或溴化物鹽，更優(yōu)選氯化物鹽。此外，作為鹵素的鹽，優(yōu)選鹵素與堿金屬的鹽。作為堿金屬，優(yōu)選鈉或鉀。作為鹵素的鹽，具體而言，可優(yōu)選使用氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉或溴化鉀。這些鹵素的鹽可以單獨(dú)含有，也可以以任意的組合含有。
[0057]本發(fā)明的方法中，鹵素的鹽的濃度只要能夠根據(jù)受檢試樣中的致齲菌數(shù)使顯色反應(yīng)進(jìn)行則并無(wú)特別限定，可以根據(jù)所使用的鹵素的鹽的種類、其他成分等諸條件進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定。例如，試劑浸潰液中的鹵素的鹽的濃度優(yōu)選為I?IOOOmM,更優(yōu)選為5?500mM，特別優(yōu)選為50?200mM。
[0058]通過(guò)包含鹵素的鹽，可以期待例如顯色反應(yīng)的背景的降低。具體而言，例如，在氧化還原指示劑為刃天青、氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑為1-甲氧基PMS時(shí)，與單獨(dú)使用刃天青時(shí)相t匕，在將刃天青和1-甲氧基PMS混合使用的情況下，刃天青的藍(lán)色位移至紅色側(cè)，通過(guò)進(jìn)一步添加鹵素的鹽，可以使刃天青的色調(diào)回到藍(lán)色側(cè)。如上所述，刃天青(藍(lán)色)被NAD(P)H還原為試鹵靈(紅紫色)，因此，刃天青的藍(lán)色位移至紅色側(cè)意味著顯色反應(yīng)的背景增大，并且意味著色調(diào)可變化的范圍僅限于該位移的量。因此，利用鹵素的鹽使刃天青的色調(diào)回到藍(lán)色側(cè)意味著顯色反應(yīng)的背景降低，并且意味著能夠擴(kuò)大色調(diào)可變化的范圍。因此，本發(fā)明的方法中，通過(guò)包含鹵素的鹽，與不含鹵素的鹽的情況相比，更能明確地測(cè)定色調(diào)變化。因此，鹵素的鹽對(duì)于基于色調(diào)變化的致齲菌數(shù)的測(cè)定是有效的。
[0059]此外，只要能夠根據(jù)受檢試樣中的致齲菌數(shù)使顯色反應(yīng)進(jìn)行，則檢查試劑也可以含有其他成分。
[0060]檢查試劑優(yōu)選含有例如碳源。碳源優(yōu)選能夠使致齲菌同化的碳源以便能夠使致齲菌的代謝活化。作為碳源，可列舉糖類、有機(jī)酸，優(yōu)選糖類。作為糖類，具體而言，可列舉蔗糖、葡萄糖，特別優(yōu)選蔗糖。在含有碳源時(shí)，試劑浸潰液中的碳源的濃度優(yōu)選為I?IOOOmM,更優(yōu)選為5?500mM，特別優(yōu)選為20?250mM。
[0061]此外，檢查試劑可以含有例如pH緩沖劑。作為pH緩沖劑，具體而言，可列舉例如磷酸緩沖劑、HEPES緩沖劑、PIPES緩沖劑、MES緩沖劑、Tris緩沖劑、GTA廣域緩沖劑。在含有PH緩沖劑時(shí)，試劑浸潰液中的pH緩沖劑的濃度優(yōu)選為10?lOOOmM，更優(yōu)選為20?500mM，特別優(yōu)選為50?150mM。反應(yīng)液的pH例如通常為ρΗ4.0?9.0，優(yōu)選為5.5?8.0。
[0062]此外，檢查試劑可以含有例如粘合劑。作為粘合劑，具體而言，可列舉例如聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羧甲基纖維素。在含有粘合劑時(shí)，試劑浸潰液中的粘合劑的濃度優(yōu)選為0.01?5%，更優(yōu)選為0.05?3%，進(jìn)一步優(yōu)選為0.1?1%。需要說(shuō)明的是，本發(fā)明中，粘合劑的濃度的“％”只要無(wú)特別說(shuō)明則是指w/v%。
[0063]此外，檢查試劑也可以含有例如抑制除致齲菌以外的代謝的藥劑。作為此類藥劑，具體而言，可列舉例如用于抑制桿菌肽等致齲菌以外的細(xì)菌的增殖的藥劑、抑制亞碲酸鉀等革蘭氏陰性菌的增殖的藥劑。
[0064]這些成分均可以分別單獨(dú)含有，也可以以任意的組合含有。
[0065]本發(fā)明的方法可以使用試驗(yàn)片來(lái)實(shí)施。本發(fā)明的方法中使用的試驗(yàn)片(以下，也稱作本發(fā)明的試驗(yàn)片)為用于保持包含氧化還原指示劑、氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑及鹵素的鹽的檢查試劑的試驗(yàn)片。本發(fā)明的試驗(yàn)片可以為用于測(cè)定NAD(P)H的試驗(yàn)片，其一個(gè)方式為用于測(cè)定致齲菌數(shù)的試驗(yàn)片。以下，舉例示出用于測(cè)定致齲菌數(shù)的試驗(yàn)片，對(duì)本發(fā)明的試驗(yàn)片進(jìn)行說(shuō)明。
[0066]本發(fā)明的試驗(yàn)片優(yōu)選具有支撐載體和負(fù)載于該支撐載體的吸收性載體，且該吸收性載體用于保持檢查試劑。通過(guò)將受檢試樣點(diǎn)樣于用于保持檢查試劑的吸收性載體部分，能夠根據(jù)受檢試樣中的致齲菌數(shù)使顯色反應(yīng)進(jìn)行。圖1中舉例示出具有支撐載體10和負(fù)載于支撐載體10的吸收性載體11的、本發(fā)明的試驗(yàn)片的一個(gè)實(shí)施方式的試驗(yàn)片I。圖1(A)為試驗(yàn)片I的俯視圖，圖1 (B)為試驗(yàn)片I的前視圖。
[0067]作為吸收性載體，只要能夠保持檢查試劑且能夠測(cè)定基于氧化還原指示劑的還原的色調(diào)變化，則任意載體均可使用。即，作為吸收性載體，可列舉例如紙、纖維素、多孔陶瓷、化學(xué)纖維、合成樹脂制織布及無(wú)紡布，優(yōu)選為濾紙或玻璃纖維濾紙。作為濾紙或玻璃纖維濾紙，可以優(yōu)選使用例如市售的產(chǎn)品。
[0068]作為支撐載體，可以優(yōu)選使用膜、片或板等平面狀載體。支撐載體可以為塑料制或紙制。作為塑料，可以使用例如聚乙烯、聚丙烯、聚酯及聚氯乙烯等各種塑料。作為支撐載體，優(yōu)選例如聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯(PET)制載體。此外，支撐載體可以為復(fù)合材料，可以利用聚酯與聚乙烯的復(fù)合材料、將聚乙烯和鋁層疊而成的復(fù)合材料、其他各種復(fù)合材料。支撐載體的厚度優(yōu)選為10?500 μ m,更優(yōu)選為50?300 μ m。
[0069]本發(fā)明的試驗(yàn)片中，可以具備至少I個(gè)用于保持致齲菌數(shù)測(cè)定用檢查試劑的吸收性載體，也可以具備2個(gè)或2個(gè)以上用于保持致齲菌數(shù)測(cè)定用檢查試劑的吸收性載體。
[0070]此外，本發(fā)明的試驗(yàn)片除了具有用于保持致齲菌數(shù)測(cè)定用檢查試劑的吸收性載體以外，還可以具有除致齲菌數(shù)以外的參數(shù)測(cè)定用的吸收性載體。進(jìn)而，本發(fā)明的試驗(yàn)片除了具有致齲菌數(shù)等的參數(shù)測(cè)定用的吸收性載體以外，還可以具有任意的試驗(yàn)紙、例如不用于參數(shù)的測(cè)定的空白樣本的吸收性載體。在本發(fā)明的試驗(yàn)片具有多個(gè)吸收性載體時(shí)，各吸收性載體只要根據(jù)所使用的檢測(cè)儀器的種類等進(jìn)行適當(dāng)排列即可。作為檢測(cè)儀器，可以優(yōu)選使用各種反射率測(cè)定儀器，例如，在使用Pocket Chem UA ro-4010 (愛科來(lái)株式會(huì)社制)作為檢測(cè)儀器時(shí)，優(yōu)選各吸收性載體在支撐載體上呈直線狀排列。
[0071]制造本發(fā)明的試驗(yàn)片的方法并無(wú)特別限定，本發(fā)明的試驗(yàn)片可以通過(guò)例如使預(yù)先保持有檢查試劑的吸收性載體負(fù)載于支撐載體來(lái)制造。使試劑保持于吸收性載體的方法并無(wú)特別限定，例如可以將吸收性載體浸潰于試劑溶液，也可以將試劑溶液點(diǎn)樣或涂布于吸收性載體。其中，優(yōu)選將吸收性載體浸潰于試劑溶液。需要說(shuō)明的是，試劑溶液為含有檢查試劑的溶液。使試劑保持于吸收性載體的步驟可以包含多次的浸潰、多次的點(diǎn)樣或多次的涂布等步驟。保持有試劑的吸收性載體可以在干燥后用于以后的步驟?？梢愿鶕?jù)需要將保持有試劑的吸收性載體切斷，再負(fù)載于支撐載體，由此來(lái)制造本發(fā)明的試驗(yàn)片。此外,本發(fā)明的試驗(yàn)片可以通過(guò)例如使檢查試劑保持于在支撐載體上預(yù)先負(fù)載的吸收性載體來(lái)制造。此時(shí)，優(yōu)選的是:通過(guò)將試劑溶液點(diǎn)樣或涂布于吸收性載體，使試劑保持于吸收性載體，之后使其干燥。本發(fā)明的試驗(yàn)片中，使吸收性載體負(fù)載于支撐載體的方法并無(wú)特別限制，例如可以優(yōu)選使用通常所使用的膠粘方法。例如，可以利用粘合帶進(jìn)行粘貼，也可以利用膠粘劑進(jìn)行粘貼。
[0072]根據(jù)本發(fā)明的方法，不進(jìn)行溫度調(diào)節(jié)即可測(cè)定致齲菌數(shù)。即，反應(yīng)溫度可以為室溫。具體而言，例如，反應(yīng)溫度通常為15°C?37°C，也可以為15°C?30°C。需要說(shuō)明的是，本發(fā)明的方法中可以適當(dāng)進(jìn)行溫度調(diào)節(jié)。
[0073]本發(fā)明的方法中，反應(yīng)時(shí)間可以根據(jù)反應(yīng)溫度、試劑成分等諸條件進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定。反應(yīng)時(shí)間例如通常為I?10分鐘。例如，反應(yīng)時(shí)間可以為5分鐘。
[0074]本發(fā)明的方法中，可以基于所測(cè)定的色調(diào)變化而測(cè)定致齲菌數(shù)。需要說(shuō)明的是，“測(cè)定致齲菌數(shù)”不限于算出受檢試樣中的致齲菌數(shù)的值本身，可以將受檢試樣中的致齲菌數(shù)的程度劃分成至少2個(gè)等級(jí)、優(yōu)選3個(gè)等級(jí)或3個(gè)以上的等級(jí)來(lái)判定。具體而言，例如只要判定出受檢試樣中的致齲菌數(shù)屬于“少”、“中等程度”或“多”3個(gè)等級(jí)中的哪一個(gè)即可。劃分為多個(gè)等級(jí)時(shí)的具體的菌數(shù)只要根據(jù)臨床數(shù)據(jù)、所使用的受檢試樣的形態(tài)進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定即可。若列舉一個(gè)例子，則以通過(guò)用3mL的純化水漱口 10秒而得的漱口吐出液中的致齲菌數(shù)計(jì)，在低于106CFU/mL時(shí)判定為“少”，在106CFU/mL以上且低于107CFU/mL時(shí)判定為“中等程度”，在107CFU/mL以上時(shí)判定為“多”。
[0075]利用本發(fā)明的方法測(cè)得的色調(diào)變化、致齲菌數(shù)的值或致齲菌數(shù)的程度可以用于判定采集受檢試樣的受檢者的齲齒風(fēng)險(xiǎn)。例如，基于色調(diào)變化、致齲菌數(shù)的值或致齲菌數(shù)的程度，可以將采集受檢試樣的受檢者的齲齒風(fēng)險(xiǎn)劃分為至少2個(gè)等級(jí)、優(yōu)選3個(gè)或3個(gè)以上的等級(jí)來(lái)判定。具體而言，例如只要判定出采集受檢試樣的受檢者的齲齒風(fēng)險(xiǎn)屬于“低”、“中等程度”或“高”3個(gè)等級(jí)中的哪一個(gè)即可。本發(fā)明的方法中，如此地判定齲齒風(fēng)險(xiǎn)也是“測(cè)定致齲菌數(shù)”的一個(gè)方式。需要說(shuō)明的是，利用本發(fā)明的方法測(cè)得的色調(diào)變化、致齲菌數(shù)的值或致齲菌數(shù)的程度可以單獨(dú)用于齲齒風(fēng)險(xiǎn)的判定，也可以與其他參數(shù)組合來(lái)用于齲齒風(fēng)險(xiǎn)的判定。
[0076]基于色調(diào)變化的致齲菌數(shù)的測(cè)定只要使用菌數(shù)已知的致齲菌標(biāo)準(zhǔn)試樣獲得致齲菌數(shù)與色調(diào)變化的相關(guān)數(shù)據(jù)并利用該相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行即可。相關(guān)數(shù)據(jù)是指例如標(biāo)準(zhǔn)曲線。此夕卜，在進(jìn)行齲齒風(fēng)險(xiǎn)的判定時(shí)，只要進(jìn)一步設(shè)定包含齲齒風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)數(shù)據(jù)并加以利用即可。
[0077]本發(fā)明的方法中，色調(diào)變化是指基于氧化還原指示劑的還原的在特定波長(zhǎng)下的吸光度的增減和/或極大吸收波長(zhǎng)的位移。即，本發(fā)明的方法中，氧化還原指示劑的一部分或全部被還原，由此根據(jù)被還原的氧化還原指示劑的量和/或比率而產(chǎn)生在特定波長(zhǎng)下的吸光度的增減和/或極大吸收波長(zhǎng)的位移。
[0078]本發(fā)明的方法中，色調(diào)變化可以利用光學(xué)檢測(cè)儀器測(cè)定。色調(diào)變化優(yōu)選以在特定波長(zhǎng)下的吸光度的增減進(jìn)行測(cè)定。
[0079]在特定波長(zhǎng)下的吸光度的增減通?？梢酝ㄟ^(guò)如下方法測(cè)定:對(duì)顯色部位、即點(diǎn)樣有受檢試樣的吸收性載體部分照射該特定波長(zhǎng)的光，獲得在該特定波長(zhǎng)下的經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的反射率的變化值。在特定波長(zhǎng)下的吸光度的增加可以測(cè)定為在該特定波長(zhǎng)下的反射率的減少。在特定波長(zhǎng)下的吸光度的減少可以以在該特定波長(zhǎng)下的反射率的增加進(jìn)行測(cè)定。一定時(shí)間可以是從受檢試樣的剛點(diǎn)樣后起至經(jīng)過(guò)任意時(shí)間為止，也可以是從受檢試樣的點(diǎn)樣后的某個(gè)時(shí)刻起至進(jìn)一步經(jīng)過(guò)任意時(shí)間為止。一定時(shí)間的長(zhǎng)度可以根據(jù)反應(yīng)時(shí)間等諸條件進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定，例如通常為I?10分鐘，也可以為2?8分鐘。受檢試樣的點(diǎn)樣后的某個(gè)時(shí)刻可以根據(jù)反應(yīng)時(shí)間等諸條件進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定，例如優(yōu)選為受檢試樣的點(diǎn)樣的5秒后?3分鐘后，更優(yōu)選為10秒后?2分鐘后。具體而言，例如可以將反應(yīng)時(shí)間設(shè)為5分鐘并對(duì)直至反應(yīng)開始后I分鐘?5分鐘的4分鐘內(nèi)的反射率變化進(jìn)行測(cè)定?？梢詼y(cè)定至少2次反射率并以測(cè)定值之差算出反射率的變化值。反射率也可以測(cè)定3次或3次以上。經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的反射率的變化值可以基于多次測(cè)得的反射率而以反射率的變化速度的形式算出。
[0080]此外，在不需要測(cè)定在受檢試樣的剛點(diǎn)樣后或受檢試樣的點(diǎn)樣后的某個(gè)時(shí)刻的反射率時(shí)，可以減少反射率的測(cè)定次數(shù)。例如，在無(wú)論受檢試樣中的致齲菌數(shù)為何值均將受檢試樣的剛點(diǎn)樣后或受檢試樣的點(diǎn)樣后的某個(gè)時(shí)刻的反射率假定為一定的值時(shí)，也可以在自此后經(jīng)過(guò)任意時(shí)間的時(shí)刻僅進(jìn)行I次反射率的測(cè)定，以測(cè)定值與該一定的值之差計(jì)算出反射率的變化值。該一定的值只要在計(jì)算反射率的變化值時(shí)確定即可。需要說(shuō)明的是，在無(wú)論受檢試樣中的致齲菌數(shù)為何值均將受檢試樣的剛點(diǎn)樣后或受檢試樣的點(diǎn)樣后的某個(gè)時(shí)刻的反射率假定為一定的值時(shí)，利用在自此后經(jīng)過(guò)任意時(shí)間的時(shí)刻的反射率與致齲菌數(shù)的相關(guān)數(shù)據(jù)，由此無(wú)需計(jì)算反射率的變化值本身亦可測(cè)定致齲菌數(shù)。在這種無(wú)需計(jì)算反射率的變化值本身即可測(cè)定致齲菌數(shù)時(shí)，可以將測(cè)定反射率這件事本身看作“測(cè)定吸光度的增減”，并且也可以看作本發(fā)明的方法中的“測(cè)定色調(diào)變化”。即，這種無(wú)需計(jì)算反射率的變化值本身即可測(cè)定致齲菌數(shù)的情況也包括在基于色調(diào)變化測(cè)定致齲菌數(shù)的情況內(nèi)。
[0081]吸光度的增減只要基于至少I個(gè)測(cè)定用波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定即可，也可以基于包含至少I個(gè)測(cè)定用波長(zhǎng)的2個(gè)或2個(gè)以上的波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。例如可以利用2個(gè)或2個(gè)以上的測(cè)定用波長(zhǎng)，也可以分別設(shè)定測(cè)定用波長(zhǎng)和用于消除背景影響的參照用波長(zhǎng)并加以利用。為了測(cè)定吸光度的增減而使用的光源的波長(zhǎng)可以根據(jù)所使用的氧化還原指示劑、檢測(cè)儀器進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定。測(cè)定用波長(zhǎng)可以為所使用的氧化還原指示劑的氧化型的極大吸收波長(zhǎng)，也可以為還原型的極大吸收波長(zhǎng)，還可以是除此以外的波長(zhǎng)。例如，在使用刃天青作為氧化還原指示劑時(shí)，可以將測(cè)定波長(zhǎng)設(shè)為630?635nm、參照波長(zhǎng)設(shè)為750?760nm。
[0082]極大吸收波長(zhǎng)的位移可以通過(guò)對(duì)經(jīng)過(guò)一定時(shí)間之前和之后的極大吸收波長(zhǎng)進(jìn)行比較來(lái)測(cè)定。極大吸收波長(zhǎng)可以通過(guò)對(duì)顯色部位、即點(diǎn)樣有受檢試樣的吸收性載體部分照射多個(gè)波長(zhǎng)的光并測(cè)定各波長(zhǎng)下的反射率來(lái)確定。關(guān)于用于測(cè)定極大吸收波長(zhǎng)的位移的條件，除了使用多個(gè)波長(zhǎng)的光確定極大吸收波長(zhǎng)以外，與測(cè)定特定波長(zhǎng)下的吸光度的增減的情況相同。
[0083]需要說(shuō)明的是，以下，將為了測(cè)定色調(diào)變化而獲得的如上所述的數(shù)據(jù)、即特定波長(zhǎng)下的反射率、據(jù)此算出的反射率的變化值、極大吸收波長(zhǎng)等有時(shí)統(tǒng)稱為“反射率數(shù)據(jù)”。
[0084]作為光學(xué)檢測(cè)儀器，并無(wú)特別限定，例如可以使用尿試驗(yàn)紙用或血液試驗(yàn)紙用的反射率測(cè)定儀器。作為尿試驗(yàn)紙用的反射率測(cè)定儀器，例如可以使用Pocket Chem UAPU-4010(愛科來(lái)株式會(huì)社制)。在使用Pocket Chem UA PU-4010時(shí)，可以利用雙波長(zhǎng)反射測(cè)光法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)于Pocket Chem UA PU-4010而言，可以在測(cè)光部利用多臺(tái)LED對(duì)顯色部位照射波長(zhǎng)不同的2種光、即測(cè)定波長(zhǎng)的光及參照波長(zhǎng)的光，基于其反射率測(cè)定色調(diào)變化。
[0085]具體而言,例如,在使用采用刃天青作為氧化還原指示劑的試驗(yàn)片并使用PocketChem UA ro-4010 (愛科來(lái)株式會(huì)社制)作為檢測(cè)儀器的情況下，在室溫、5分鐘的反應(yīng)時(shí)間的條件下，將測(cè)定波長(zhǎng)設(shè)為635nm、參照波長(zhǎng)設(shè)為760nm進(jìn)行測(cè)定。在該條件下，刃天青的還原反應(yīng)的進(jìn)行以635nm的吸光度的減少、即照射635nm的光時(shí)反射率的增加進(jìn)行檢測(cè)。在將反應(yīng)時(shí)間設(shè)為5分鐘時(shí)，例如只要對(duì)反應(yīng)開始后I分鐘?5分鐘的4分鐘內(nèi)的反射率變化進(jìn)行測(cè)定即可。
[0086]本發(fā)明的方法可以進(jìn)一步包括例如輸出所測(cè)定的色調(diào)變化、算出的致齲菌數(shù)的值、判定出的致齲菌數(shù)的程度和/或判定出的齲齒風(fēng)險(xiǎn)的程度的步驟，此外，還可以包括基于上述測(cè)定/判定結(jié)果輸出建議的步驟。建議是指例如對(duì)測(cè)定/判定結(jié)果的說(shuō)明。作為建議的例子，可列舉“唾液中的齲齒菌少，呈良好的狀態(tài)”。輸出例如可以通過(guò)顯示在設(shè)置于反射率測(cè)定儀器的顯示部來(lái)進(jìn)行。顯示部只要能夠顯示文字、圖像等信息，則并無(wú)特別限定，例如可以優(yōu)選使用具有LED背光燈的液晶顯示器。顯示通過(guò)文字、圖形、符號(hào)、色彩或它們的結(jié)合等任意形式來(lái)進(jìn)行。需要說(shuō)明的是，輸出的方式只要能夠使醫(yī)師、牙科保健師或受檢者等能夠識(shí)別所輸出的信息就沒(méi)有特別的限制，例如可以以印刷的方式輸出，也可以利用聲音輸出。此外，也可以將顯示部的視覺顯示、基于印刷的輸出及基于聲音的輸出等任意組合而進(jìn)行信息的輸出。
[0087]本發(fā)明的方法中，反射率數(shù)據(jù)的獲得、致齲菌數(shù)的計(jì)算等演算、以及測(cè)定/判定結(jié)果、建議的輸出等各步驟可以利用單個(gè)計(jì)算機(jī)來(lái)執(zhí)行，也可以利用物理上獨(dú)立的多個(gè)計(jì)算機(jī)來(lái)執(zhí)行。例如可以將所獲得的反射率數(shù)據(jù)利用電信線路等輸送到其他裝置，并利用該其他裝置進(jìn)行致齲菌數(shù)的計(jì)算等演算。此外，也可以將測(cè)定/判定結(jié)果利用電信線路等輸送到其他裝置，并利用該其他裝置顯示該測(cè)定/判定結(jié)果、基于該測(cè)定/判定結(jié)果的建議等信息。作為這樣的方式，可以例示如下方式:在WEB上輸入反射率數(shù)據(jù)，將反射率數(shù)據(jù)輸送到演算用服務(wù)器，利用該演算用服務(wù)器進(jìn)行致齲菌數(shù)的計(jì)算等演算，再將測(cè)定/判定結(jié)果顯示于WEB上。此外，可以采用基于利用電信線路等的數(shù)據(jù)的接收和輸送的收費(fèi)系統(tǒng)。作為此類收費(fèi)系統(tǒng)，例如可列舉:在使用者將測(cè)定/判定結(jié)果顯示于WEB瀏覽器上的時(shí)刻或完成包含測(cè)定/判定結(jié)果的文件夾的下載的時(shí)刻進(jìn)行收費(fèi)的系統(tǒng)。收費(fèi)可以通過(guò)顯示/下載從量制、及根據(jù)日、周或月等期間進(jìn)行收費(fèi)的定額制等任意的方式來(lái)實(shí)施。
[0088]以上，舉例示出測(cè)定致齲菌數(shù)的方法對(duì)本發(fā)明的方法進(jìn)行了說(shuō)明，但本發(fā)明的方法不限于致齲菌數(shù)的測(cè)定，其可以利用于使用受檢試樣所含的NAD (P)H和/或反應(yīng)體系中生成的NAD(P)H的檢測(cè)的任意的方法。例如，本發(fā)明的方法可以利用于直接或間接地生成NAD(P)H的酶反應(yīng)的檢測(cè)。需要說(shuō)明的是，本發(fā)明的方法可以以NAD(P)H的測(cè)定本身為目的，也可以不以其為目的。與測(cè)定致齲菌數(shù)的方法及同其相關(guān)的檢查試劑、試驗(yàn)片等有關(guān)的上述說(shuō)明也可以適用于本發(fā)明的方法的其他方式。例如，本發(fā)明的方法可以根據(jù)其方式包括基于所測(cè)定的色調(diào)變化算出NAD(P)H的量或程度的步驟，也可以包括基于所測(cè)定的色調(diào)變化算出與NAD (P) H量相關(guān)的檢測(cè)對(duì)象的量或程度的步驟。
[0089]此外，本發(fā)明的方法中，根據(jù)測(cè)定的目的等諸條件而不限于使用如上所述的試驗(yàn)片的方式，也可以以其他任意方式進(jìn)行顯色反應(yīng)。例如，本發(fā)明的方法中，可以在包含上述檢查試劑的容器內(nèi)進(jìn)行顯色反應(yīng)。具體而言，例如，可以將受檢試樣和上述檢查試劑裝入到任意的容器內(nèi)，由此根據(jù)受檢試樣所含的NAD(P)H和/或容器內(nèi)生成的NAD(P)H的量進(jìn)行顯色反應(yīng)。作為容器，并無(wú)特別限制，例如可列舉軟管、試管。
[0090]此外，本發(fā)明的方法中，根據(jù)測(cè)定的目的等諸條件而不限于使用如上所述的檢測(cè)儀器的方式，也可以以其他任意方式測(cè)定顯色反應(yīng)。例如，在本發(fā)明的方法中，可以用肉眼測(cè)定色調(diào)變化。但是，通常，為了有效地利用基于鹵素的鹽的顯色反應(yīng)的背景的降低效果，優(yōu)選使用光學(xué)檢測(cè)儀器定量地測(cè)定色調(diào)變化，此外，優(yōu)選基于色調(diào)變化的定量測(cè)定結(jié)果定量地進(jìn)行致齲菌數(shù)的測(cè)定等。
[0091]此外，本發(fā)明的方法中，根據(jù)測(cè)定的目的等諸條件，只要最終利用氧化還原指示劑、氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑及鹵素的鹽作為有效成分，則可以從反應(yīng)開始時(shí)起在反應(yīng)體系中包含受檢試樣和這些所有的有效成分，也可以不從反應(yīng)開始時(shí)起在反應(yīng)體系中包含受檢試樣和這些所有的有效成分。例如，可以在受檢試樣中充分進(jìn)行NAD (P) H的生成后，將檢查試劑添加到反應(yīng)體系中。此外，例如也可以在不同的時(shí)機(jī)將各有效成分添加到反應(yīng)體系中。需要說(shuō)明的是，為了得到基于鹵素的鹽的顯色反應(yīng)的背景的降低效果，通常，優(yōu)選將鹵素的鹽在將受檢試樣、氧化還原指示劑和氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑全都添加到反應(yīng)體系中之前添加到反應(yīng)體系中，更優(yōu)選將鹵素的鹽預(yù)先添加到氧化還原指示劑或者氧化還原指示劑與氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑的混合物中。
[0092]此外，本發(fā)明中，檢查試劑只要含有各有效成分，則可以以任意的方式提供。例如，檢查試劑可以如上述那樣以保持于試驗(yàn)片的方式提供，也可以以裝入任意容器的方式提供。此外，檢查試劑可以以固體狀、液體狀、凝膠狀等任意形態(tài)進(jìn)行制劑化后提供。在制劑化時(shí)，可以使用通常作為制劑載體使用的賦形劑、結(jié)合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、穩(wěn)定劑、矯味矯臭劑、稀釋劑、表面活性劑或溶劑等添加劑。檢查試劑可以直接利用于本發(fā)明的方法，或者使用水、生理鹽水、緩沖液等稀釋、分散或溶解后利用于本發(fā)明的方法。這樣進(jìn)行稀釋、分散或溶解等的情況當(dāng)然也包括在本發(fā)明的檢查試劑的范圍內(nèi)。需要說(shuō)明的是，各有效成分可以經(jīng)過(guò)混合后包含在檢查試劑中，也可以不經(jīng)過(guò)混合而分別包含在檢查試劑中。本發(fā)明的檢查試劑中的各有效成分的濃度只要根據(jù)測(cè)定的目的等諸條件進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定即可，例如，可以為在反應(yīng)體系中與受檢試樣混合的液體狀態(tài)下達(dá)到上述的試劑浸潰液的優(yōu)選濃度的濃度。
[0093]此外，本發(fā)明的檢查試劑可以以NAD(P)H測(cè)定用或致齲菌數(shù)測(cè)定用等的試劑盒的形式提供。試劑盒只要含有本發(fā)明的檢查試劑，則并無(wú)特別限制。
[0094]實(shí)施例
[0095]以下，通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明更具體地進(jìn)行說(shuō)明。但是，本發(fā)明不受這些實(shí)施例的限定。
[0096][實(shí)驗(yàn)例1]敏化劑的確定
[0097]本實(shí)驗(yàn)例中，在使用刃天青作為氧化還原指示劑時(shí)，進(jìn)行能夠作為敏化劑利用的化合物的篩選。
[0098]<試劑浸潰液處方>
[0099]對(duì)于將刃天青鈉(東京化成制)42mg、IM磷酸緩沖液(ρΗ6.0) 120mL、蔗糖(f力9^ ^ ^々制)12g溶解于蒸餾水11OOmL而得到的基本組成，按照表1所示濃度添加各研究成分，制備試劑浸潰液。
[0100]表1
【權(quán)利要求】
1.一種測(cè)定氧化還原指示劑的色調(diào)變化的方法， 其包括使檢查試劑與受檢試樣反應(yīng)來(lái)測(cè)定色調(diào)變化的步驟， 所述檢查試劑包含氧化還原指示劑、氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑及鹵素的鹽。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其為對(duì)受檢試樣中的致齲菌數(shù)進(jìn)行測(cè)定的方法。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述氧化還原指示劑為刃天青。
4.如權(quán)利要求1?3中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑為1-甲氧基-5-甲基吩嗪_硫酸甲酯鹽、吩嗪鍵疏酸甲酯鹽或吩嗪硫酸乙酯。
5.如權(quán)利要求1?4中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述鹵素的鹽為氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉或溴化鉀。
6.如權(quán)利要求1?5中任一項(xiàng)所述的方法,其使用具有支撐載體和負(fù)載于該支撐載體的吸收性載體的試驗(yàn)片進(jìn)行測(cè)定，所述試驗(yàn)片中，所述吸收性載體用于保持所述檢查試劑。
7.—種NADH和NADPH的測(cè)定試劑，其包含氧化還原指示劑、氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑及鹵素的鹽。
8.如權(quán)利要求7所述的試劑，其中，所述氧化還原指示劑為刃天青。
9.如權(quán)利要求7或8所述的試劑，其中，所述氧化還原反應(yīng)促進(jìn)劑為1-甲氧基-5-甲基吩嗪鋪硫酸甲酯鹽、吩嗪鋪硫酸甲酯鹽或吩嗪硫酸乙酯。
10.如權(quán)利要求7?9中任一項(xiàng)所述的試劑，其中，所述鹵素的鹽為氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉或溴化鉀。
11.一種用于測(cè)定NADH和NADPH的試驗(yàn)片,其具有支撐載體和負(fù)載于該支撐載體的吸收性載體，所述試驗(yàn)片中， 所述吸收性載體用于保持權(quán)利要求7?10中任一項(xiàng)所述的試劑。
12.如權(quán)利要求11所述的試驗(yàn)片，其為用于測(cè)定致齲菌數(shù)的試驗(yàn)片。
【文檔編號(hào)】G01N33/52GK103842816SQ201280047646
【公開日】2014年6月4日 申請(qǐng)日期:2012年8月17日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月30日
【發(fā)明者】西永英司, 鈴木苗穗, 濱隆志, 福田功 申請(qǐng)人:獅王株式會(huì)社, 愛科來(lái)株式會(huì)社