識(shí)別Tau的磷酸化特異抗體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及在由神經(jīng)原纖維纏結(jié)引起的或與之有關(guān)的疾病和病癥的治療中用于治療性和診斷性應(yīng)用的方法和組合物，特別是，本發(fā)明涉及特異性識(shí)別并結(jié)合至磷酸化病理蛋白Tau構(gòu)象體的抗體，以及涉及所述抗體在包括阿爾茨海默氏病(AD)的Tau病的治療中用于治療性和診斷性應(yīng)用的方法和組合物。
【專利說明】識(shí)別Tau的磷酸化特異抗體
[0001]本申請要求保護(hù)于2012年4月5日提交的歐洲專利申請N0.EP12163319.2和于2011年10月7日提交的國際專利申請N0.PCT/EP2011/067604的利益，其各自內(nèi)容據(jù)此通過引用整體并入。
[0002]本發(fā)明涉及用于在由神經(jīng)原纖維纏結(jié)所引起的或與之有關(guān)的疾病和病癥的治療中治療性和診斷性使用的方法和組合物。特別是，本發(fā)明涉及特異性識(shí)別并結(jié)合至磷酸化病理蛋白tau構(gòu)象體的抗體，并且涉及包括用于在包括阿爾茨海默氏病(AD)的Tau病(tauopathy)的治療中治療性和診斷性使用的所述抗體的方法和組合物。
[0003]神經(jīng)原纖維纏結(jié)和神經(jīng)氈線(NT)是阿爾茨海默氏病(AD)的主要神經(jīng)病理學(xué)標(biāo)志。它們由經(jīng)歷翻譯后修飾(包括在天冬酰胺?；蛱於滨埢系牧姿峄?、脫酰胺化和異構(gòu)化作用)的微管相關(guān)蛋白Tau組成。它們來源于超磷酸化蛋白Tau及其構(gòu)象體的聚集。AD與多種神經(jīng)退行性Tau病具有這種病理，特別是與特定類型的額顳葉癡呆(FTD)。
[0004]蛋白Tau是易溶解的“天然展開”的蛋白，其與微管(MT)強(qiáng)烈結(jié)合以促進(jìn)它們的組裝和穩(wěn)定。MT對神經(jīng)元的細(xì)胞骨架完整性至關(guān)重要，并借此對神經(jīng)元回路的正確形成與功能，以及因此對學(xué)習(xí)和記憶力至關(guān)重要。Tau與MT的結(jié)合受動(dòng)態(tài)磷酸化作用和脫磷酸化作用控制，如主要在體外和在非神經(jīng)元細(xì)胞中所顯示的。由于大量可能的磷酸化作用位點(diǎn)(>80)，每個(gè)位點(diǎn)的確切作用以及相關(guān)激酶的身份在體內(nèi)仍非常不明確。
[0005]在AD腦中，Tau病理的發(fā)展晚于淀粉狀蛋白病理，并因此可能響應(yīng)于淀粉狀蛋白病理，這構(gòu)成了淀粉樣蛋白級聯(lián)反應(yīng)假說的基本內(nèi)容。這是基于AD和唐氏綜合癥患者中的研究的并由這些研究所表明，并且通過在具有混合的淀粉狀蛋白和Tau病理的轉(zhuǎn)基因小鼠中的研究所證實(shí)(Lewis等人，2001 ；0ddo等人，2004 ；Ribe等人，2005 ；Muyllaert等人，2006 ；2008 ；TerweI 等人，2008)。
[0006]人AD患者中兩種病理的確切時(shí)機(jī)以及將淀粉狀蛋白與Tau病理相聯(lián)系的機(jī)制在很大程度上仍是未知的，但是提議其涉及作用于或通過作為主要“Tau-激酶”的GSK3和cdk5的神經(jīng)元信號(hào)通路的激活作用(Muyllaert等人，2006，2008中的綜述)。
[0007]Tau病不是良性副作用而是AD中的主要病理執(zhí)行者的假說是基于彼此完全印證的合理的遺傳學(xué)、病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)觀察的:
[0008].在由于淀粉狀蛋白前體(APP)或早老素中的突變的早期發(fā)病的家族AD病例中，必要的病原學(xué)原因是淀粉狀蛋白累積，但是一定地，病理包括平行的Tau病，這與晚期發(fā)病的散發(fā)AD病例相同；
[0009].認(rèn)知功能障礙和癡呆的嚴(yán)重性與Tau病相關(guān)，而不是與淀粉狀蛋白病理相關(guān)，這通過最近的幾項(xiàng)臨床I和II期研究(包括淀粉狀蛋白的PIB-PET成像并且鑒別了多個(gè)“假陽性”:具有高腦淀粉狀蛋白負(fù)荷的認(rèn)知正常個(gè)體)來舉例說明；
[0010]?在家族性FTD中，Tau病是通過突變體Tau引起的并直接導(dǎo)致無淀粉狀蛋白病理的神經(jīng)變性；
[0011].在實(shí)驗(yàn)小鼠模型中，通過蛋白質(zhì)Tau的缺失幾乎完全減輕了由淀粉狀蛋白病理所引起的認(rèn)知缺陷(Roberson等人，2007)。
[0012]組合的論據(jù)支持了以下假說:蛋白質(zhì)Tau是AD和相關(guān)神經(jīng)退行性Tau病中認(rèn)知死亡(cognitive demise)的主要作用因素。
[0013]涌現(xiàn)出的突出的AD治療是通過使用特異性mAb的被動(dòng)免疫療法以清除認(rèn)為具有神經(jīng)毒性或突觸毒性的淀粉狀蛋白肽以及它們的聚集物。
[0014]如本發(fā)明所提議的，預(yù)期靶向Tau病理的免疫療法抵消已知或假設(shè)會(huì)導(dǎo)致突觸功能障礙和神經(jīng)變性的病理學(xué)蛋白Tau構(gòu)象體。
[0015]尚缺乏靶向蛋白Tau的其他治療方法，并且所述方法主要包括:
[0016].認(rèn)為會(huì)將Tau的磷酸化作用提高至病理水平的激酶抑制劑
[0017].封閉超磷酸化蛋白Tau的胞質(zhì)聚集的化合物。
[0018]這些方法具有特異性和效力方面的多個(gè)缺陷，以及與改變APP和淀粉狀蛋白代謝的嘗試共有的問題，這些均強(qiáng)調(diào)了繼續(xù)尋找包括抗Tau免疫療法在內(nèi)的其它治療選擇的重要性。事實(shí)上，在具有綜合AD樣病理的臨床前小鼠模型中靶向淀粉狀蛋白的免疫療法還顯示了對Tau病理的作用，盡管Tau聚集物持續(xù)存在(Oddo等人，2004)。
[0019]對于通過免疫療法處理胞內(nèi)蛋白Tau的可行性仍有一些懷疑。最近在Tau病小鼠模型中的實(shí)驗(yàn)研究已消除了這些懷疑(Asuni等人，2007)。它們顯示出通過用蛋白Tau來源的磷酸肽接種疫苗的纏結(jié)病理的減少和功能性改善。這些數(shù)據(jù)證實(shí)了針對帕金森氏癥(PD)和路易體疾病模型中α-突觸核蛋白的免疫療法(Masliah等人，2005，2011)和肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)模型(Urushitiani等人，2007)中過氧化物歧化酶的上述報(bào)道。這些疾病是其中胞內(nèi)蛋白通過至今尚未完全了解的機(jī)制導(dǎo)致突觸缺陷和神經(jīng)變性的實(shí)例。
[0020]對于起作用以消除已知或假定會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)退行性病癥(如通過(例如)超磷酸化蛋白Tau的神經(jīng)元內(nèi)聚集物所造成的AD中的淀粉狀蛋白病理,所述聚集物對AD來說與淀粉狀蛋白一樣典型)的病理學(xué)蛋白構(gòu)象體的被動(dòng)和/或主動(dòng)免疫療法的需要仍未得到滿足。
[0021]本發(fā)明通過提供識(shí)別并且結(jié)合Tau蛋白的主要病理學(xué)磷酸表位的結(jié)合蛋白來滿足這種未滿足的需要。特別地，本發(fā)明提供了抗蛋白Tau上的，特別是據(jù)信導(dǎo)致Tau病(包括AD)中突觸-和神經(jīng)-毒性的聚集的Tau蛋白上的線性和構(gòu)象的，簡單和復(fù)雜的磷酸表位的特異性抗體。
[0022]因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，所述結(jié)合肽或蛋白或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至聚集的Tau蛋白上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中,其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)、特別是腦中的可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白水平，特別地其解離常數(shù)為至少ΙΟηΜ、特別是至少8ηΜ、特別是至少5ηΜ、特別是至少2ηΜ、特別是至少InM、特別是至少500pM、特別是至少400pM、特別是至少300pM、特別是至少200pM、特別是至少ΙΟΟρΜ、特別是至少50pM。
[0023]特別地，解離常數(shù)為2nM至80nM、特別是2nM至40nM、特別是2nM至1nM的范圍。
[0024]在某一方面，本文提供了抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段結(jié)合至具有在396位(pS396)和在404位(pS404)包含磷酸化Ser的氨基酸序列VYKSPVVS⑶TSPRHL(SEQ ID NO:62) (SEQ ID N0:67 的 Tau aa393_408，例如，如表 I 中所述)或在所述氨基酸序列內(nèi)的磷酸表位。
[0025]在第二實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中，其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其結(jié)合速率常數(shù)為14M4iT1或更高，特別是S-SXlO4M4iT1或更高，特別是15M-1S-1或以上；特別是2-9X 15M-1S-1或更高；特別是ΙΟ--或更高，特別是1-4X 16M-1S-1或更高，特別是17M-1S-1或更高。
[0026]特別地，解離速率常數(shù)為1.6χ103至5χ105、特別是2.4χ104至5χ105、3χ103至5χ105的范圍。
[0027]在第三實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中，其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且具有高結(jié)合親合力，其解離常數(shù)為至少4ηΜ并且結(jié)合速率常數(shù)為105Μ?或更高，特別是解離常數(shù)為至少3ηΜ并且結(jié)合速率常數(shù)為ΙΟ?1或更高，特別是解離常數(shù)為至少2ηΜ并且結(jié)合速率常數(shù)為14M^或更高，特別是解離常數(shù)為至少InM并且結(jié)合速率常數(shù)為15M^或更高，特別是解離常數(shù)為至少200ρΜ并且結(jié)合速率常數(shù)為15M^或更高，特別是解離常數(shù)為至少10pM并且結(jié)合速率常數(shù)為16M4iT1或更高。
[0028]特別是，解離常數(shù)為2ηΜ至80ηΜ的范圍且解離速率常數(shù)為1.6χ103至5x10s的范圍，特別是解離常數(shù)為2ηΜ至40ηΜ且解離速率常數(shù)為2.4χ104至5x10s的范圍,特別是解離常數(shù)為2ηΜ至1nM的范圍且解離速率常數(shù)為3χ103至5x10s的范圍。
[0029]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(4)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中,其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且所述結(jié)合肽或抗體結(jié)合至哺乳動(dòng)物，特別是如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白上的表位，所述表位選自在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa393_401、在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa396_401、在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa394-400、在 404 位(pS404)包含磷酸化 Ser 的 Tau aa402_406 和在 396 位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa393_400。
[0030]一個(gè)實(shí)施方案(5)涉及根據(jù)任何前述實(shí)施方案所述的結(jié)合肽或抗體，其中所述肽結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白上的表位，但尤其是如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白，其包括在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa393_401。
[0031]一個(gè)實(shí)施方案(6)涉及根據(jù)任何前述實(shí)施方案所述的結(jié)合肽或抗體，其中所述肽結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白上的表位，但尤其是如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白，其包括在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa396_401。
[0032]一個(gè)實(shí)施方案(7)涉及根據(jù)任何前述實(shí)施方案所述的結(jié)合肽或抗體，其中所述肽結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白上的表位，但尤其是如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白，其包括在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa394_400。
[0033]一個(gè)實(shí)施方案(8)涉及根據(jù)任何前述實(shí)施方案所述的結(jié)合肽或抗體，其中所述肽結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白上的表位，但尤其是如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白質(zhì)，其包括在404位(pS404)包含磷酸化Ser的Tau aa402_406。
[0034]一個(gè)實(shí)施方案(9)涉及根據(jù)任何前述實(shí)施方案所述的結(jié)合肽或抗體，其中所述肽結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白上的表位，但尤其是如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白質(zhì)，其包括在396位(pS396)包含磷酸化Ser Tau aa393_400。
[0035]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(10)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中，其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其中所述結(jié)合肽或抗體包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域依次包含:具有SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列的CDRl，具有SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列的⑶R2，和具有SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列的⑶R3，或與上述⑶R具有至少至少60 %、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90 %、至少91 %、至少92 %、至少93 %、至少94 %、特別是至少95 %、特別是至少96 %、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合抗體域依次包含:包含SEQ ID N0:70中所示的氨基酸序列、或與其具有至少95%、特別是98%、特別是99%同一性的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:71中所示的氨基酸序列、或與其具有至少94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的氨基酸序列的⑶R2，和包含SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列的⑶R3、或與上述⑶R具有至少至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列。
[0036]一方面，本文提供抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含:
[0037](a)第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含:包含SEQ ID NO: 73中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列的⑶R2和包含SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列的CDR3 ;和/或
[0038](b)包含氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述氨基酸序列包含:包含SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列的CDRl、包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列的CDR2和包含SEQID NO:72中所示的氨基酸序列的⑶R3。
[0039]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(11)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中,其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其中所述結(jié)合肽或抗體包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域依次包含:具有SEQ ID N0:81中所示的氨基酸序列的⑶R1，具有SEQID N0:82中所示的氨基酸序列的⑶R2，和具有SEQ ID N0:83中所示的氨基酸序列的⑶R3，或與上述⑶R具有至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98% 、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域依次包含:具有SEQ ID N0:78中所示的氨基酸序列的⑶R1，具有SEQ ID N0:79中所示的氨基酸序列的⑶R2，和具有SEQ ID N0:80中所示的氨基酸序列的⑶R3、或與上述⑶R具有至少至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列。
[0040]一方面，本文提供抗體或其功能性部分，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含:
[0041](a)第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含:包含SEQ ID N0:81中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQ ID N0:82中所示的氨基酸序列的⑶R2和包含SEQ ID N0:83中所示的氨基酸序列的CDR3 ;和/或
[0042](b)包含氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述氨基酸序列包含:包含SEQ ID NO:78中所示的氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:79中所示的氨基酸序列的CDR2和包含SEQID NO:80中所示的氨基酸序列的⑶R3。
[0043]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(12)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中,其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其中所述結(jié)合肽或抗體包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域依次包含:具有SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列的⑶R1，具有SEQID N0:94中所示的氨基酸序列的⑶R2，和具有SEQ ID N0:95中所示的氨基酸序列的⑶R3，或與上述⑶R中任一個(gè)具有至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97 %、特別是至少98 %、特別是至少99 %或100 %同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域依次包含:具有SEQ ID N0:89中所示的氨基酸序列的⑶R1，具有SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列的CDR2，和具有SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的CDR3、或與上述⑶R中任一個(gè)具有至少至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列。
[0044]在某一方面，本文提供抗體或其功能性部分，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含:
[0045](a)第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含:包含SEQ ID N0:93中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQ ID NO:94中所示的氨基酸序列的⑶R2和包含SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列的CDR3 ;和/或
[0046](b)包含氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述氨基酸序列包含:包含SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列的CDR2和包含SEQID N0:91中所示的氨基酸序列的⑶R3。
[0047]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(13)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中，其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其中所述結(jié)合肽或抗體包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域依次包含:具有SEQ ID NO: 101中所示的氨基酸序列的CDR1，具有SEQ ID NO: 102中所示的氨基酸序列的⑶R2，和具有SEQ ID NO: 103中所示的氨基酸序列的⑶R3，或與上述⑶R中任一個(gè)具有至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域依次包含:具有SEQ ID N0:98中所示的氨基酸序列的CDR1，具有SEQ ID N0:99中所示的氨基酸序列的CDR2，和具有SEQ ID NO: 100中所示的氨基酸序列的⑶R3、或與上述⑶R中任一個(gè)具有至少至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列。
[0048]一方面，本文提供抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含:
[0049](a)第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含:包含SEQ ID NO: 101中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQ ID NO: 102中所示的氨基酸序列的CDR2和包含SEQ ID NO: 103中所示的氨基酸序列的CDR3 ;和/或
[0050](b)包含氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述氨基酸序列包含:包含SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列的CDR2和包含SEQID NO: 100中所示的氨基酸序列的⑶R3。
[0051]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(14)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中，其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其中所述結(jié)合肽或抗體包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域依次包含:具有SEQ ID NO: 106中所示的氨基酸序列的CDR1，具有SEQ ID NO: 107中所示的氨基酸序列的CDR2，和具有SEQ ID NO: 108中所示的氨基酸序列的⑶R3，或與上述⑶R中任一個(gè)具有至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含:具有SEQ ID NO: 89中所示的氨基酸序列的⑶Rl，具有SEQ IDNO: 115中所示的氨基酸序列的⑶R2，和具有SEQ ID N0:91中所示的氨基酸序列的⑶R3，或與上述⑶R中任一個(gè)具有至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列。
[0052]在具體的一方面，本文提供抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含:
[0053](a)第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含:包含SEQ ID NO: 106中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQ ID NO: 107中所示的氨基酸序列的CDR2和包含SEQ ID NO: 108中所示的氨基酸序列的CDR3 ;和/或
[0054](b)包含氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述氨基酸序列包含:包含SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO: 115中所示的氨基酸序列的CDR2和包含SEQID N0:91中所示的氨基酸序列的⑶R3。
[0055]在某些實(shí)施方案中，本文描述的抗體或其抗體片段的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域是輕鏈可變區(qū)，且本文描述的抗體或其抗體片段的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域是重鏈可變區(qū)。
[0056]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(15)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中,其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其中所述結(jié)合肽或抗體包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含:選自SEQ ID N0:69、77、116/92、118、97、105的所示氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有特別是至少85 %、特別是至少90%、至少91 %、至少92 %、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID N0:68、
76、88、96、104中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列至少80%、特別是至少85%、特別是至少86%、特別是至少87%、特別是至少88%、特別是至少89%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列。
[0057]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(16)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中,其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其中所述結(jié)合肽或抗體包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID N0:69中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少98%或99%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID N0:68中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少90%、91%、92%或93%同一性的氨基酸序列。
[0058]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(17)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中,其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其中所述結(jié)合肽或抗體包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID N0:77中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少93%、94%或95%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID N0:76中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少88 %、89 %、或90 %同一性的氨基酸序列。
[0059]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(18)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中,其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其中所述結(jié)合肽或抗體包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO: 116,92或118中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少93%、94%或95%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ IDNO: 88中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少90 %、91 %、92 %或93 %同一性的氨基酸序列。
[0060]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(19)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中,其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其中所述結(jié)合肽或抗體包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID N0:97中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少99%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID N0:96中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少86 %、87 %、88 %或90 %同一性的氨基酸序列。
[0061]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(20)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是在一個(gè)實(shí)施方案中,其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其中所述結(jié)合肽或抗體包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO: 105中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少98%、或99%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID N0:104中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少88 %、89 %、或90 %同一性的氨基酸序列。
[0062]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(21)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，其中所述結(jié)合肽或抗體包括包含SEQ ID N0:69中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少99%同一性的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ ID NO:68中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少93%同一性的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
[0063]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(22)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，其中所述結(jié)合肽或抗體包括包含SEQ ID NO: 77中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ ID NO: 76中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
[0064]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(23)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，其中所述結(jié)合肽或抗體包括包含SEQ ID NO: 116、92或118中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少9395%同一性的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少93 %同一性的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
[0065]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(24)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，其中所述結(jié)合肽或抗體包括包含SEQ ID N0:97中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少99%同一性的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
[0066]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(25)涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，其中所述結(jié)合肽或抗體包括包含SEQ ID NO: 105中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少98%、或99%同一性的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ ID NO: 104中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少90 %同一性的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
[0067]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(26)涉及根據(jù)實(shí)施方案(16)的結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，其中所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域分別含有SEQ ID NO:73-75中所示的CDR，并且所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域含有SEQ ID NO:70-72中所示的⑶R。
[0068]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(27)涉及根據(jù)實(shí)施方案(17)的結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，其中所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域分別含有SEQ ID NO:81-83中所示的CDR，并且所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域含有SEQ ID NO:78-80中所示的⑶R。
[0069]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(28)涉及根據(jù)實(shí)施方案(18)的結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體， 特別是單克隆抗體或其功能性部分，其中所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域分別含有SEQ ID NO:93-95中所示的CDR，并且所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域含有SEQ ID NO:89-91中所示的⑶R。
[0070]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(29)涉及根據(jù)實(shí)施方案(19)的結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，其中所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域分別含有SEQ ID NO:101-103中所示的CDR，并且所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域含有SEQ ID NO =98-100中所示的⑶R。
[0071]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(30)涉及根據(jù)實(shí)施方案(18)的結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，其中所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域分別含有SEQ ID NO:89、115和91中所示的⑶R，并且所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域含有SEQ ID NO:106-108中所示的CDR。
[0072]在另一個(gè)實(shí)施方案(31)中，本發(fā)明涉及結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，特別是根據(jù)任何前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或抗體，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體，但是在一個(gè)實(shí)施方案中，其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力，并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平，并且其中所述結(jié)合肽或抗體包含
[0073]a.包含SEQ ID N0:69中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO:68中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域；或
[0074]b.包含SEQ ID NO: 77中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO:76中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域；或
[0075]c.包含SEQ ID NO: 116中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO:88中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域；或；
[0076]d.包含SEQ ID N0:92中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO:88中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域；或
[0077]e.包含SEQ ID N0:97中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO:96中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域；或
[0078]f.包含SEQ ID NO: 105中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO: 104中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
[0079]g.包含SEQ ID NO: 118中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO:88中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域
[0080]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(32)中，根據(jù)任何前述實(shí)施方案所述的結(jié)合肽是抗體，特別是IgG2a、IgG2b或IgG3同種型抗體,特別是多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體或完全人抗體。
[0081]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(33)涉及編碼根據(jù)任一前述實(shí)施方案所述的結(jié)合肽的多核苷酸。
[0082]在一個(gè)實(shí)施方案(34)中,所述多核苷酸包含核酸分子,其選自:
[0083]a.包含編碼多肽的核苷酸序列的核酸分子，所述多肽包含SEQ ID NO:84-87, SEQID NO: 109-114、117和119中所示的氨基酸序列；
[0084]b.包含與 SEQ ID NO:84-87、SEQ ID NO: 109-114、117 和 119 中所示的序列具有至少85%序列同一'丨生的核苷酸序列的核酸分子；
[0085]c.包含與 SE Q ID NO:84-87、SEQ ID NO: 109-114、117 和 119 中所示的序列具有至少90%序列同一'丨生的核苷酸序列的核酸分子；
[0086]d.包含與 SEQ ID NO:84-87、SEQ ID NO: 109-114、117 和 119 中所示的序列具有至少95%序列同一'丨生的核苷酸序列的核酸分子；
[0087]e.包含與 SEQ ID NO:84-87、SEQ ID NO: 109-114、117 和 119 中所示的序列具有至少98%序列同一'丨生的核苷酸序列的核酸分子；
[0088]f.包含與 SEQ ID NO:84-87、SEQ ID NO: 109-114、117 和 119 中所示的序列具有至少99%序列同一'丨生的核苷酸序列的核酸分子；
[0089]g.包含互補(bǔ)鏈與根據(jù)a)-f)中任一項(xiàng)的核酸分子雜交的核苷酸序列的核酸分子；
[0090]h.包含通過遺傳密碼的簡并度與根據(jù)a) _g)中任一項(xiàng)所定義的核苷酸序列不同的核苷酸序列的核酸分子，
[0091]其中如a)_h)中任一項(xiàng)所定義的所述核酸分子識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白上的磷酸表位，其選自在396位包含磷酸化Ser(pS396)的Tau aa393_401，在396位包含磷酸化Ser(pS396)的Tau aa396_401，在396位包含磷酸化Ser (pS396)的Tauaa396-400,在404位包含磷酸化Ser(pS404)的Tau aa402_406和在396位包含磷酸化Ser(pS396)的Tau aa393_400，其中在一個(gè)實(shí)施方案中，所述結(jié)合肽具有高結(jié)合親合力，其解離常數(shù)為至少ΙΟηΜ、特別是至少8nM、特別是至少5nM、特別是至少2nM、特別是至少InM、特別是至少500pM、特別是至少400pM、特別是至少300pM、特別是至少200pM、特別是至少ΙΟΟρΜ、特別是至少50pM，和/或其結(jié)合速率常數(shù)為14M-1S-1或更高，特別是3-5 X lO^s—1或更高，特別是15M-1S-1或更高；特別是6-9 X 15M-1S-1或更高；特別是10?4s—1或更高，特別是1-4X 16M4iT1或更高，特別是1lV1或更高，但是在一個(gè)實(shí)施方案中，其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位。
[0092]在本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方案(35)中，根據(jù)前述實(shí)施方案中的任一種，提供了結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分、或多核苷酸、或它們的組合其能夠特異性識(shí)別并結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白上的磷酸表位，特別是微管相關(guān)蛋白Tau，特別是聚集的微管相關(guān)和超磷酸化蛋白Tau，如以雙股螺旋形細(xì)絲(paired helical filament,PHF)存在的蛋白Tau,其是神經(jīng)原纖維纏結(jié)、神經(jīng)租線和營養(yǎng)不良性軸突中的主要結(jié)構(gòu)，但是在一個(gè)實(shí)施方案中，其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位。
[0093]在本發(fā)明具體的實(shí)施方案(36)中，人Tau蛋白是如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白。
[0094]因此，根據(jù)前述實(shí)施方案中任一種所述的結(jié)合肽和抗體可以用于(37)降低含有增加的可溶性Tau蛋白和/或可溶性磷酸化Tau蛋白水平的哺乳動(dòng)物或人腦中(特別是腦皮層和/或海馬中)總可溶性Tau蛋白的水平，特別是可溶性磷酸化Tau蛋白的水平。
[0095]根據(jù)前述實(shí)施方案中任一種所述的結(jié)合肽和抗體還可以用于(38)降低含有增加的所述PTau雙股螺旋形細(xì)絲(pTau PHF)水平的哺乳動(dòng)物或人腦中(特別是腦皮層和/或海馬中)含有超磷酸化Tau蛋白的雙股螺旋形細(xì)絲的水平。
[0096]含有增加的所述Tau蛋白變體(其促進(jìn)哺乳動(dòng)物或人中的Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況)水平的哺乳動(dòng)物或人的腦中(特別是腦皮層和/或海馬中)的總可溶性Tau蛋白和/或可溶性磷酸化Tau蛋白和/或pTau雙股螺旋形細(xì)絲的水平的降低可以導(dǎo)致與這些Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況有關(guān)的癥狀的改善和/或減輕(39)。
[0097]因此，根據(jù)前述實(shí)施方案中任一種所述的結(jié)合肽和抗體可以(40)用于治療，特別是在人治療中用于減緩或停止Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況的發(fā)展。
[0098]根據(jù)前述實(shí)施方案中任一種所述的結(jié)合肽和抗體還可以(41)在治療，特別是對人的治療中用于改善或減輕與Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況有關(guān)的癥狀，所述Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況如(例如)認(rèn)知功能(包括推理、情景判斷、記憶能力、學(xué)習(xí)、特殊導(dǎo)航等)的損傷或喪失。
[0099]在一個(gè)實(shí)施方案(42)中，本發(fā)明涉及根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)所述的結(jié)合肽和抗體，其用于治療，特別是用于治療Tau病(一組Tau蛋白相關(guān)疾病和病癥)，或用于減輕與Tau病有關(guān)的癥狀。
[0100]在一個(gè)實(shí)施方案(43)中，本發(fā)明涉及用于在患有Tau病的哺乳動(dòng)物中保持或提高認(rèn)知記憶能力的根據(jù)前述實(shí)施方案中任一種所述的結(jié)合肽和抗體。
[0101]在本發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方案(44)中，包含如分別在SEQ ID NO:73-75,81-83、93-95、101-103、106-108 中給出的抗體 ACI_35_2A1-Abl ;AC1-35_2A1-Ab2 ;AC1-35-4A6-Abl ;AC1-35-4A6_Ab2 ;AC1-35_1D2-Abl ;AC1-35-2G5_Abl ;AC1-35-2G5_Ab2 ；AC1-35-2G5-Ab3的輕鏈CDR中的至少一種或全部，和/或如在SEQ ID NO:70-72、78-80、89-91、98-100、(89、115、91)中給出的抗體 ACI_35_2A1-Abl ;AC1-35_2A1-Ab2 ；AC1-35-4A6-Abl ;AC1-35-4A6_Ab2 ;AC1-35_1D2-Abl ;AC1-35-2G5_Abl ;AC1-35-2G5_Ab2 ；AC1-35-2G5-Ab3的重鏈⑶R中的至少一種或全部的結(jié)合肽和抗體用于治療，特別是在人治療中用于改善或減輕與Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況有關(guān)的癥狀，所述Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況如(例如)認(rèn)知功能(包括推理、情景判斷、記憶、學(xué)習(xí)、特殊導(dǎo)航等)的損傷或喪失。
[0102]在本發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方案(45)中，包含如分別在SEQ ID N0:106_108中給出的抗體AC1-35-2G5-Ab2 ;ACI_35-2G5_Ab3的輕鏈CDR中的至少一種或全部，和/或如SEQ ID N0:89、115 和 91 中給出的抗體 AC1-35_2G5_Ab2 ;AC1-35-2G5_Ab3 的重鏈 CDR 中的至少一種或全部的結(jié)合肽和抗體用于治療，特別是在人治療中用于改善或減輕與Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況有關(guān)的癥狀，所述Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況如(例如)認(rèn)知功能(包括推理、情景判斷、記憶、學(xué)習(xí)、特殊導(dǎo)航等)的損傷或喪失。
[0103]如實(shí)施例中所述的，可以分別通過應(yīng)用所選擇的腦切片的蛋白免疫反應(yīng)性試驗(yàn)和通過腦勻漿液的免疫印跡法來確定根據(jù)前述實(shí)施方案所述的肽或抗體與Tau纏結(jié)和pTau在腦上的結(jié)合。
[0104]在另一個(gè)實(shí)施方案(46)中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含治療有效量的根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分、或多核苷酸、或它們的組合，以及藥學(xué)上可接受的載體。
[0105]在一個(gè)實(shí)施方案(47)中，根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，或多核苷酸，或藥物組合物，或它們的組合用于治療，特別是在人治療中用于治療或減輕Tau蛋白相關(guān)疾病或病癥(包括神經(jīng)退行性病癥，如Tau病)的癥狀。
[0106]因此，一旦將所述結(jié)合肽、抗體和/或藥物組合物施用至患有這些疾病或病況的動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物，特別是人，則根據(jù)前述實(shí)施方案中任一種所述的結(jié)合肽、抗體和/或藥物組合物可以用于(48)減緩或停止Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況的發(fā)展。
[0107]一旦將所述結(jié)合肽、抗體和/或藥物組合物施用至患有這些疾病或病況的動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物，特別是人，則根據(jù)前述實(shí)施方案中任一種所述的結(jié)合肽、抗體和/或藥物組合物還可以用于(49)改善或減輕與Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況有關(guān)的癥狀，所述Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況如(例如)認(rèn)知功能(包括推理、情景判斷、記憶能力、學(xué)習(xí)、特殊導(dǎo)航等)的損傷或喪失。
[0108]在一個(gè)實(shí)施方案(50)中，根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，或多核苷酸，或它們的組合，或藥物組合物用于治療由神經(jīng)原纖維病變的形成所引起的或與之有關(guān)的疾病和病癥，所述神經(jīng)原纖維病變是Tau病中主要的腦病理，其包括一組異質(zhì)性的神經(jīng)退行性疾病或病癥，包括顯示出Tau和淀粉狀蛋白病理共存的疾病或病癥，包括但不限于，阿爾茨海默氏病、克-雅二氏病(Creutzfeldt-Jacob disease)、拳擊員癡呆、唐氏綜合征、GSS病
(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、包涵體肌炎和朊蛋白腦淀粉樣血管病、倉1J
傷性腦損傷和不顯示單獨(dú)的淀粉狀蛋白病理的其它疾病或病癥，其包括但不限于關(guān)島型肌萎縮側(cè)索硬化/帕金森綜合征-癡呆復(fù)合征、具有神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病、嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底核退化癥、鈣化性彌散神經(jīng)原纖維纏結(jié)、連鎖于17號(hào)染色體伴帕金森病的額顳葉癡呆、Hallevorden-Spatz病、多系統(tǒng)萎縮癥、C型尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease, type C)、蒼白球腦橋黑質(zhì)變性、皮克病、進(jìn)行性皮質(zhì)下膠質(zhì)增生癥、進(jìn)行性核上麻痹、亞急性硬化性全腦炎、僅纏結(jié)型癡呆(Tangle only dementia)、腦炎后帕金森氏綜合征、肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良。
[0109]在一個(gè)實(shí)施方案(51)中，根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分、或多核苷酸、或藥物組合物，或它們的組合用于治療阿爾茨海默氏病。
[0110]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(52)中，提供了用于檢測和/或調(diào)節(jié)動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物或人的(特別是)體內(nèi)，特別是腦中(特別是腦皮層和/或海馬中)的可溶性和/或、寡聚和/或不溶性磷酸化Tau水平的方法，其包括向所述動(dòng)物，特別是向所述哺乳動(dòng)物或人施用根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)所述的結(jié)合肽或其功能性片段，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性片段、或多核苷酸、或藥物組合物，或它們的組合。
[0111]在一個(gè)方面，調(diào)節(jié)涉及降低含有增加的可溶性Tau蛋白和/或可溶性磷酸化Tau蛋白水平的動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物或人的腦中(特別是腦皮層和/或海馬中)可溶性Tau蛋白，特別是可溶性磷酸化Tau蛋白的水平。
[0112]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(53)中，提供了降低含有增加的不溶性Tau蛋白，特別是pTau雙股螺旋形細(xì)絲(pTau PHF)的動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物或人的腦中(特別是腦皮層和/或海馬中)不溶性Tau蛋白，特別是含有超磷酸化Tau蛋白的雙股螺旋形細(xì)絲(pTauPHF)的水平的方法，其包括向所述動(dòng)物，特別是向所述哺乳動(dòng)物或人施用根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分、或多核苷酸、或藥物組合物，或它們的組合。
[0113]在一個(gè)實(shí)施方案(54)中，本發(fā)明涉及減緩或停止動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物或人中Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況的發(fā)展的方法，其包括向患有這種疾病或病況的所述動(dòng)物，特別是向所述哺乳動(dòng)物或人施用根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分、或多核苷酸、或藥物組合物，或它們的組合。
[0114]在一個(gè)實(shí)施方案(55)中，本發(fā)明涉及用于改善或減輕動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物或人中與Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況有關(guān)的癥狀的方法，所述Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況如(例如)認(rèn)知功能(包括推理、情景判斷、記憶能力、學(xué)習(xí)、特殊導(dǎo)航等)的損傷或喪失，其包括向患有這種疾病或病況的所述動(dòng)物，特別是向所述哺乳動(dòng)物或人施用根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分、或多核苷酸、或藥物組合物，或它們的組合。
[0115]在一個(gè)實(shí)施方案(56)中，本發(fā)明涉及保持或提高患有Tau病的哺乳動(dòng)物中認(rèn)知記憶能力的方法。
[0116]在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案(57)中，提供了用于治療Tau蛋白相關(guān)疾病或病癥(包括神經(jīng)退行性疾病或病癥，如Tau病)的方法，其包括向患有這種疾病或病癥的動(dòng)物，特別是向哺乳動(dòng)物，但尤其是向人施用根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分、或多核苷酸、或藥物組合物，或它們的組合。
[0117]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(58)中，提供了治療由神經(jīng)原纖維病變的形成所引起的或與之有關(guān)的疾病和病癥的方法，所述神經(jīng)原纖維病變是Tau病中主要的腦病理，其包括一組異質(zhì)性的神經(jīng)退行性疾病或病癥，其包括顯示出Tau和淀粉狀蛋白病理共存的疾病或病癥，包括但不限于，阿爾茨海默氏病、克-雅二氏病、拳擊員癡呆、唐氏綜合征、GSS病、包涵體肌炎和朊蛋白腦淀粉樣血管病、創(chuàng)傷性腦損傷和不顯示單獨(dú)的淀粉狀蛋白病理的其它疾病或病癥，其包括但不限于關(guān)島型肌萎縮側(cè)索硬化/帕金森綜合征-癡呆復(fù)合征、具有神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病、嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底核退化癥、鈣化性彌散神經(jīng)原纖維纏結(jié)、連鎖于17號(hào)染色體伴帕金森病的額顳葉癡呆、Hallevorden-Spatz病、多系統(tǒng)萎縮癥、C型尼曼-皮克病、蒼白球腦橋黑質(zhì)變性、皮克病、進(jìn)行性皮質(zhì)下膠質(zhì)增生癥、進(jìn)行性核上麻痹、亞急性硬化性全腦炎、僅纏結(jié)型癡呆(Tangle only dementia)、腦炎后帕金森氏綜合征、肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良，所述方法包括向患有這種疾病或病癥的動(dòng)物，特別是向哺乳動(dòng)物，但尤其是向人施用根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分、或多核苷酸、或藥物組合物，或它們的組入口 ο
[0118]在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案(59)中，提供了通過向所述動(dòng)物或人施用根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性片段，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性片段、或多核苷酸、或藥物組合物，或它們的組合，來在患有神經(jīng)退行性病癥(如Tau病)的動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物或人中引起被動(dòng)免疫應(yīng)答的方法。
[0119]在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案(60)中，提供了診斷患者中Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況的方法，包括檢測根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其活性片段，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分與樣品中或與原位Tau蛋白的表位的免疫特異性結(jié)合，包括以下步驟:
[0120]a.使懷疑含有Tau蛋白的樣品或具體身體部分或身體區(qū)域與根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其片段，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分接觸，其中所述結(jié)合肽或抗體或其片段與所述Tau蛋白的表位結(jié)合；
[0121]b.允許所述結(jié)合肽，特別是所述抗體，特別是所述單克隆抗體或其功能性部分與Tau蛋白結(jié)合以形成免疫復(fù)合物；
[0122]c.檢測所述免疫復(fù)合物的形成；和
[0123]d.將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與樣品中或具體身體部分或區(qū)域中Tau蛋白的存在或不存在相關(guān)聯(lián)。
[0124]在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案(61)中，提供了用于診斷患者中對Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況的易患情況的方法，包括檢測根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其活性片段，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分與樣品中或與原位Tau蛋白的表位的免疫特異性結(jié)合，其包括以下步驟:
[0125]a.使懷疑含有Tau抗原的樣品或具體身體部分或身體區(qū)域與根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其活性片段，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分接觸，所述肽或其片段與所述Tau蛋白的表位結(jié)合；
[0126]b.允許所述結(jié)合肽，特別是所述抗體，特別是所述單克隆抗體或其功能性部分與Tau抗原結(jié)合以形成免疫復(fù)合物；
[0127]c.檢測所述免疫復(fù)合物的形成；和
[0128]d.將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與樣品中或具體身體部分或區(qū)域中Tau抗原的存在或不存在相關(guān)聯(lián)；
[0129]e.將所述免疫復(fù)合物的量與正常對照值進(jìn)行比較。
[0130]其中，與正常對照值相比，所述聚集物的量的增加表明所述患者患有Tau蛋白相關(guān)疾病或病況或具有發(fā)展Tau蛋白相關(guān)疾病或病況的風(fēng)險(xiǎn)。
[0131]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(62)中，提供了在用根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性片段，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性片段治療后監(jiān)測患者中最小殘留疾病的方法，其中所述方法包括:
[0132]a.使懷疑含有Tau抗原的樣品或具體身體部分或身體區(qū)域與根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分接觸，所述肽或其片段與所述Tau蛋白的表位結(jié)合；
[0133]b.允許所述結(jié)合肽，特別是所述抗體，特別是所述單克隆抗體或其功能性部分與Tau抗原結(jié)合以形成免疫復(fù)合物；
[0134]c.檢測所述免疫復(fù)合物的形成；和
[0135]d.將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與樣品中或具體身體部分或區(qū)域中Tau抗原的存在或不存在相關(guān)聯(lián)，
[0136]e.將所述免疫復(fù)合物的量與正常對照值進(jìn)行比較，
[0137]其中，與正常對照值相比，所述聚集物的量的增加表明所述患者仍患有最小殘留疾病。
[0138]在一個(gè)實(shí)施方案(63)中，提供了預(yù)測用根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分、或多核苷酸、或藥物組合物治療的患者的響應(yīng)性的方法，包括
[0139]a.使懷疑含有 Tau抗原的樣品或具體身體部分或身體區(qū)域與如中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其活性片段，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分接觸，所述肽或其片段與所述Tau蛋白的表位結(jié)合；
[0140]b.允許所述結(jié)合肽，特別是所述抗體，特別是所述單克隆抗體或其功能性部分與Tau抗原結(jié)合以形成免疫復(fù)合物；
[0141]c.檢測所述免疫復(fù)合物的形成；和
[0142]d.將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與樣品中或具體身體部分或區(qū)域中Tau抗原的存在或不存在相關(guān)聯(lián)，
[0143]e.比較治療開始前后所述免疫復(fù)合物的量，
[0144]其中所述聚集物的量的減少表明所述患者具有響應(yīng)于治療的高潛能。
[0145]抗-Tau抗體及其片段可用于本發(fā)明的上述方法中。在上述方法中，通過使含有抗體或其片段的樣品與附接至固體載體的抗-Tau抗體或其片段相接觸對所述樣品進(jìn)行免疫富集以增加樣品中Tau蛋白的濃度。
[0146]在步驟(a)之前，通過使所述樣品與附接至固體載體的抗-Tau抗體或其片段相接觸對所述樣品進(jìn)行免疫富集以增加樣品中Tau蛋白的濃度。
[0147]在另一個(gè)實(shí)施方案(64)中，本發(fā)明涉及用于檢測和診斷Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況的測試試劑盒，其包含根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其活性片段，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分。
[0148]在一個(gè)實(shí)施方案(65)中，所述測試試劑盒包含容納根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的一種或多種結(jié)合肽或其活性片段，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分的容器，和出于結(jié)合Tau抗原以形成免疫復(fù)合物并檢測所述免疫復(fù)合物的形成從而將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與Tau抗原的存在或不存在相關(guān)聯(lián)的目的使用所述結(jié)合肽或抗體的說明書。
[0149]在又另一個(gè)實(shí)施方案(66)中，本發(fā)明涉及在哺乳動(dòng)物上、特別是如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白上的表位，其選自在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa393_401、在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa396_401、在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa394-400、在 404 位(pS404)包含磷酸化 Ser 的 Tau aa402_406 和在 396 位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa393_400。
[0150]在一個(gè)實(shí)施方案(67)中，所述表位由在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tauaa393-401 組成。
[0151]在一個(gè)實(shí)施方案(68)中，所述表位由在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tauaa396-401 組成。
[0152]在一個(gè)實(shí)施方案(69)中，所述表位由在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tauaa394-400 組成。
[0153]在一個(gè)實(shí)施方案(70)中，所述表位由在404位(pS404)包含磷酸化Ser的Tauaa402-406 組成。
[0154]在一個(gè)實(shí)施方案(71)中，所述表位由在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tauaa393-400 組成。
[0155]在另一個(gè)實(shí)施方案(72)中，本發(fā)明涉及產(chǎn)生根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其活性片段，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分的細(xì)胞系。
[0156]在一個(gè)實(shí)施方案(73)中，本發(fā)明涉及細(xì)胞系，其是作為DSM ACC3136于2011年8月30日保藏的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-4A6-48。
[0157]在一個(gè)實(shí)施方案(74)中，本發(fā)明涉及細(xì)胞系，其是作為DSM ACC3137于2011年8月30日保藏的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-2G5-30。
[0158]在一個(gè)實(shí)施方案(75)中，本發(fā)明涉及細(xì)胞系，其是作為DSM ACC3138于2011年8月30日保藏的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-2G5-41。
[0159]在一個(gè)實(shí)施方案(76)中，本發(fā)明涉及細(xì)胞系，其是作為DSM ACC3139于2011年8月30日保藏的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-2A1-18。
[0160]在一個(gè)實(shí)施方案(77)中，本發(fā)明涉及細(xì)胞系，其是作為DSM ACC3140于2011年8月30日保藏的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-2A1-40。
[0161]在一個(gè)實(shí)施方案(78)中，本發(fā)明涉及細(xì)胞系，其是作為DSM ACC3141于2011年9月6日保藏的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-1D2-12。
[0162]在一個(gè)實(shí)施方案(79)中，本發(fā)明涉及包含輕鏈(VL)和/或重鏈(VH)域的單克隆抗體或其功能性部分，其由位于核苷酸片段上的多核苷酸編碼，所述核苷酸片段可以使用下列引物通過作為DSM ACC3139于2010年8月30日提交的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-2A1-18的DNA的PCR擴(kuò)增獲得
[0163]a.用于擴(kuò)增第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域的包含SEQ ID NO:149的5’ -引物和SEQ ID NO:51的3’-引物的引物對；和/或
[0164]b.用于擴(kuò)增第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域的包含選自SEQ ID NO: 120、123、124、136、137、138、139和140的5’-引物和選自SEQ ID NO:131、134和141-148的3’-引物的引物混合物。
[0165] 在一個(gè)實(shí)施方案(80)中，本發(fā)明涉及包含輕鏈(VL)和/或重鏈(VH)域的單克隆抗體或其功能性部分，其由位于核苷酸片段上的多核苷酸編碼，所述核苷酸片段可以使用下列引物通過作為DSM ACC3137于2011年8月30日提交的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-2G5-30的DNA的PCR擴(kuò)增獲得
[0166]a.用于擴(kuò)增第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域的包含選自SEQ ID NO:51和169-174的5’ -引物和SEQ ID NO:51的3’ -引物的引物混合物；和/或
[0167]b.用于擴(kuò)增第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域的包含選自SEQ ID NO: 124、127和150-158的5’-引物和選自SEQ ID NO:130和159-168的3’ -引物的引物混合物。
[0168]在一個(gè)實(shí)施方案(81)中，本發(fā)明涉及包含輕鏈(VL)和/或重鏈(VH)域的單克隆抗體或其功能性部分，其由位于核苷酸片段上的多核苷酸編碼，所述核苷酸片段可以使用下列引物通過作為DSM ACC3140于2011年8月30日提交的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-2A1-40的DNA的PCR擴(kuò)增獲得:
[0169]a.用于擴(kuò)增第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域的包含選自SEQ ID NO:178、179和180的5’-引物和SEQ ID NO:51的3’ -引物的引物混合物；和/或
[0170]b.用于擴(kuò)增第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域的包含選自SEQ ID NO:121、127、139、154、155和175的5’-引物和選自SEQ ID NO:128、129、147、176和177的3’-引物的引物混合物。
[0171]在一個(gè)實(shí)施方案(82)中，本發(fā)明涉及包含輕鏈(VL)和/或重鏈(VH)域的單克隆抗體或其功能性部分，其由位于核苷酸片段上的多核苷酸編碼，所述核苷酸片段可以使用下列引物通過作為DSM ACC3138于2011年8月30日提交的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-2G5-41的DNA的PCR擴(kuò)增獲得:
[0172]a.用于擴(kuò)增第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域的包含選自SEQ ID NO:51和188-192的5’ -引物和SEQ ID NO:51的3’ -引物的引物混合物；和/或
[0173]b.用于擴(kuò)增第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域的包含選自SEQ ID NO: 120、124、126、181、182和183的5’ -引物和選自SEQ ID NO =144,145和184-187的3’ -引物的引物混合物。
[0174]在一個(gè)實(shí)施方案(83)中，本發(fā)明涉及包含輕鏈(VL)和/或重鏈(VH)域的單克隆抗體或其功能性部分，其由位于核苷酸片段上的多核苷酸編碼，所述核苷酸片段可以使用下列引物通過作為DSM ACC3136于2011年8月30日提交的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-4A6-48的DNA的PCR擴(kuò)增獲得
[0175]a.用于擴(kuò)增第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域的包含選自SEQ ID NO:50和201-204的5’ -引物和SEQ ID NO:51的3’ -引物的引物混合物；和/或
[0176]b.用于擴(kuò)增第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域的包含選自SEQ ID NO:121、137、151和193-197的5’-引物和選自SEQ ID N0:131、141、144、166、198、199和200的3’-引物的引物混合物。
[0177]在一個(gè)實(shí)施方案(84)中，本發(fā)明涉及包含輕鏈(VL)和/或重鏈(VH)域的單克隆抗體或其功能性片段，其由位于核苷酸片段上的多核苷酸編碼，所述核苷酸片段可以使用下列引物通過作為DSM ACC3141于2011年9月6日提交的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-1D2-12的DNA的PCR擴(kuò)增獲得
[0178]a.用于擴(kuò)增第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域的包含選自SEQ ID NO:209_214和219-221的5’-引物和SEQ ID NO:215的3’ -引物的引物混合物；和/或
[0179]b.用于擴(kuò)增第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域的包含選自SEQ ID NO:216、217和218的5’-引物和SEQ ID NO:208的3’ -引物的引物混合物。
[0180]在一個(gè)實(shí)施方案(85)中，根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)所述的抗體可以是多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人抗體、駱駝抗體、雙鏈抗體或者修飾或設(shè)計(jì)的抗體。
[0181]在一個(gè)實(shí)施方案(86)中，本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)所述的結(jié)合肽或抗體的方法，包括以下步驟:在適合的培養(yǎng)基中培養(yǎng)根據(jù)任何前述實(shí)施方案的細(xì)胞系，以及任選地從所述細(xì)胞系或培養(yǎng)基中純化所述結(jié)合肽或抗體。
[0182]在另一個(gè)實(shí)施方案(87)中，本發(fā)明提供了檢測腦樣品中磷酸Tau(pTau)多聚體的方法，包括
[0183]a.將所述樣品與根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段接觸，其抗體或其片段結(jié)合所述磷酸Tau蛋白的表位；
[0184]b.允許所述抗體或其片段與所述tau蛋白結(jié)合以形成免疫復(fù)合物；和
[0185]c.檢測所述免疫復(fù)合物的形成，特別是通過應(yīng)用ELISA測定。
[0186]特別是，本發(fā)明在具體實(shí)施方案(88)中涉及一種死后檢測來自懷疑患有tau相關(guān)疾病或病癥的受試者和來自健康對照受試者的腦樣品中的磷酸Tau(pTau)多聚體的方法，包括:
[0187]a.使所述受試者的腦樣品與根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或其片段接觸，所述肽或其片段結(jié)合所述磷酸Tau蛋白的表位；
[0188]b.允許所述抗體與所述Tau抗原結(jié)合以形成免疫復(fù)合物；
[0189]c.檢測所述免疫復(fù)合物的形成，特別是通過應(yīng)用ELISA測定和
[0190]d.使用相同條件將由所述受試者獲得的樣品中免疫復(fù)合物的量或強(qiáng)度與由對照樣品的免疫復(fù)合物的量或強(qiáng)度進(jìn)行比較，
[0191]其中與正常對照值相比，所述免疫復(fù)合物的量或強(qiáng)度的增加表明所述患者已患有tau相關(guān)疾病或病癥。
[0192]在一個(gè)實(shí)施方案(89)中，與正常對照值相比，所述測試樣品中觀察到的增加為30%至50%，特別是30%至45%。
[0193]在一個(gè)實(shí)施方案(90)中，本發(fā)明提供了根據(jù)任一前述實(shí)施方案的結(jié)合肽或蛋白或其功能性部分，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，其抗體或片段顯示有利的PK特征。特別是，所述抗體或片段在施用后具有多達(dá)10天的高血清濃度，這表明有利地支持所述抗體用作治療性抗體的用途的藥動(dòng)學(xué)(PK)特征。(Deng等人，Expert OpinDrug Metab Toxicol, 2012，8 (2) 141-60 ;Putman 等人，Trends B1tech, 2010 (28) 509-516 ;Bai, S.Clin Pharmacokinet2012 ；51 (2):119-135。
[0194]附圖和序列說明
[0195]MM
[0196]麗I顯示用 AC1-35-2Al-Abl (左圖)、AC1-35-2G5-Ab3(中圖)和對照抗體(HT7 ；右圖)檢測在來自對照和AD受試者的人腦勻漿中的磷酸化Tau多聚體的結(jié)果。
[0197]S 2(2A和2B)顯示用市售抗體檢測人腦勻漿中的總Tau和ρ-Tau的結(jié)果。
[0198]圖3(3A、3B、3C)顯示在用 ACI_35_2A1-Abl (A)、ACI_35_1D2-Abl (B)和AC1-35-2G5-Ab3 (C)檢測人腦勻漿中的磷酸-Tau。
[0199]Mi(4A、4B、4C)顯示使用 AlphaLISA，用 ACI_35_2A1-Abl (A)、ACI_35_1D2-Abl (B)和AC1-35-2G5-Ab3 (C)抗體檢測人AD和對照(Ctrl)腦中的Tau_pS396的結(jié)果。****p〈0.0001, **ρ〈0.01 (通過 Mann-Whitney 試驗(yàn))。
[0200]M5(5A和5B)顯示在用ACI_35_2G5_Ab3治療Tau轉(zhuǎn)基因小鼠后在杏仁核(K)和海馬(B)中的Tau-pT231(AT180)IHC染色的結(jié)果。
[0201]M6(6A和6B)顯示在用AC1-35_2G5_Ab3治療Tau轉(zhuǎn)基因小鼠后在杏仁核(A)和海馬(B)中的總Tau (HT7) IHC染色。
[0202]圖7顯示使用不同GSK3 β條件產(chǎn)生的Tau_pS396的SDS-PAGE，和使用AC1-35-2G5-Ab3抗體印跡的膜。
[0203]M8顯示使用AC1-35-2G5-Ab3-BT和Tau-13抗體的特異性AlphaLISA測定設(shè)置。
[0204]M9顯示檢測來自一個(gè)AD供體的人SI腦部分中的Tau_pS396 ；由通過IP富集的樣品和非-1P樣品獲得的信號(hào)的比較。
[0205]圖10顯示使用IP，隨后AlphaLISA，用ACI_35-2G5_Ab3抗體檢測人AD和對照(Ctrl) CSF 中的 Tau-pS396 的結(jié)果。***p = 0.0003 (Mann-ffhitney 試驗(yàn))。
[0206]序列
[0207]SEQ ID N0:46 - 57示出了 VH/VK正向和反向引物的核苷酸序列。
[0208]SEQ ID NO:62 示出了 Tau抗原、肽T3的氨基酸序列(參見表1)。
[0209]SEQ ID NO:67示出了也稱為Tau40的tau的最長同種型(441aa)的氨基酸序列。
[0210]SEQ ID N0:68示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-4A6-18產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-4A6-Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的氨基酸序列。
[0211]SEQ ID N0:69示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-4A6-18產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-4A6-Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的氨基酸序列。
[0212]SEQ ID NO: 70示出了單克隆抗體AC1-35_4A6_Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的CDRl的氨基酸序列。
[0213]SEQ ID N0:71示出了單克隆抗體ACI_35-4A6_Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的CDR2的氨基酸序列。
[0214]SEQ ID NO: 72示出了單克隆抗體AC1-35_4A6_Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的CDR3的氨基酸序列。
[0215]SEQ ID NO: 73示出了單克隆抗體ACI_35-4A6_Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDRl的氨基酸序列。
[0216]SEQ ID NO: 74示出了單克隆抗體AC1-35_4A6_Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDR2的氨基酸序列。
[0217]SEQ ID NO: 75示出了單克隆抗體ACI_35-4A6_Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDR3的氨基酸序列。
[0218]SEQ ID NO: 76示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-1D2-12產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-lD2-Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的氨基酸序列。
[0219]SEQ ID NO: 77示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-1D2-12產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-lD2-Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的氨基酸序列。
[0220]SEQ ID NO: 78示出了單克隆抗體ACI_35_1D2-Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的CDRl的氨基酸序列。
[0221]SEQ ID NO:79示出了單克隆抗體ACI_35_1D2-Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的CDR2的氨基酸序列。
[0222]SEQ ID NO: 80示出了單克隆抗體ACI_35_1D2-Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的CDR3的氨基酸序列。
[0223]SEQ ID NO: 81示出了單克隆抗體AC1-35_lD2_Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDRl的氨基酸序列。
[0224]SEQ ID NO: 82示出了單克隆抗體ACI_35_1D2-Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDR2的氨基酸序列。
[0225]SEQ ID NO: 83示出了單克隆抗體ACI_35_1D2-Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDR3的氨基酸序列。
[0226]SEQ ID NO:84示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4_4A6_18產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-4A6-Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的核苷酸序列。
[0227]SEQ ID NO:85示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-4A6-18產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-4A6-Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的核苷酸序列。
[0228]SEQ ID NO:86示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6_1D2_12產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-lD2-Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的核苷酸序列。
[0229]SEQ ID NO:87示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6_1D2_12產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-lD2-Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的核苷酸序列。
[0230]SEQ ID NO: 88 示出了分別通過雜交瘤細(xì)胞系 A4-2A1-18、A4-2A1_40 和 A4-4A6-48分別產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2Al-Abl、ACI_35_2A1-Ab2和ACI_35-4A6_Ab2的重鏈可變區(qū)(VH)的氨基酸序列。
[0231]SEQ ID NO:89 示出了單克隆抗體 ACI_35_2A1-Abl、ACI_35_2A1-Ab2、AC1-35-4A6-Ab2、AC1-35-2G5-AB2 和 AC1-35-2G5-AB3 分別的重鏈可變區(qū)(VH)的 CDRl 的氨基酸序列。
[0232]SEQ ID NO:90 示出了單克隆抗體 ACI_35_2A1-Abl、ACI_35_2A1-Ab2 和AC1-35-4A6-Ab2分別的重鏈可變區(qū)(VH)的⑶R2的氨基酸序列。
[0233]SEQ ID N0:91 示出了單克隆抗體 ACI_35_2A1-Abl、ACI_35_2A1-Ab2、AC1-35-4A6-Ab2、AC1-35-2G5-AB2 和 AC1-35-2G5-AB3 分別的重鏈可變區(qū)(VH)的 CDR3 的氨基酸序列。
[0234]SEQ ID NO:92示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4_2A1_40產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-4Al-Ab2的輕鏈可變區(qū)(VK)的氨基酸序列。
[0235]SEQ ID NO: 93示出了單克隆抗體ACI_35_2A1-Ab2的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDRl的氨基酸序列。
[0236]SEQ ID NO: 94示出了單克隆抗體ACI_35_2A1-Ab2的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDR2的氨基酸序列。
[0237]SEQ ID NO: 95示出了單克隆抗體ACI_35_2A1-Ab2的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDR3的氨基酸序列。
[0238]SEQ ID NO:96示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-2G5-08產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2G5-Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的氨基酸序列。
[0239]SEQ ID NO:97示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-2G5-08產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2G5-Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的氨基酸序列。
[0240]SEQ ID NO: 98示出了單克隆抗體ACI_35-2G5_Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的CDRl的氨基酸序列。
[0241]SEQ ID NO: 99示出了單克隆抗體AC1-35_2G5_Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的CDR2的氨基酸序列。
[0242]SEQ ID NO: 100示出了單克隆抗體ACI_35-2G5_Abl的重鏈可變區(qū)(VH)的CDR3的氨基酸序列。
[0243]SEQ ID NO: 101示出了單克隆抗體ACI_35-2G5_Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDRl的氨基酸序列。
[0244]SEQ ID NO: 102示出了單克隆抗體ACI_35-2G5_Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDR2的氨基酸序列。
[0245]SEQ ID NO: 103示出了單克隆抗體ACI_35-2G5_Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDR3的氨基酸序列。
[0246]SEQ ID NO: 104示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-2G5-30和A6-2G5-41分別產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2G5-AB2和AC1-35-2G5-AB3分別的重鏈可變區(qū)(VH)的氨基酸序列。
[0247]SEQ ID NO: 105示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-2G5-30和A6-2G5-41分別產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2G5-AB2和AC1-35-2G5-AB3分別的輕鏈可變區(qū)(VK)的氨基酸序列。
[0248]SEQ ID NO: 106 示出了單克隆抗體 AC1-35-2G5-AB2 和 AC1-35-2G5-AB3 分別的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDRl的氨基酸序列。
[0249]SEQ ID NO: 107 示出了單克隆抗體 AC1-35-2G5-AB2 和 AC1-35-2G5-AB3 分別的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDR2的氨基酸序列。
[0250]SEQ ID NO: 108 示出了單克隆抗體 AC1-35-2G5-AB2 和 AC1-35-2G5-AB3 分別的輕鏈可變區(qū)(VK)的CDR3的氨基酸序列。
[0251]SEQ ID NO: 109 示出了通過雜交瘤細(xì)胞系 A4-2A1-18、A4-2A1_40 和 A4-4A6-48 分別產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2Al-Abl、AC1-35_2Al_Ab2和AC1-35_4A6_Ab2分別的重鏈可變區(qū)(VH)的核苷酸序列。
[0252] SEQ ID NO: 110示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4_2A1_40產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2Al-Ab2的輕鏈可變區(qū)(VK)的核苷酸序列。
[0253]SEQ ID NO: 111示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6_2G5_08產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2G5-AB1的重鏈可變區(qū)(VH)的核苷酸序列。
[0254]SEQ ID NO: 112示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6_2G5_08產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2G5-AB1的輕鏈可變區(qū)(VK)的核苷酸序列。
[0255]SEQ ID NO: 113示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-2G5-30和A6-2G5-41分別產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2G5-AB2和AC1-35-2G5-AB3分別的重鏈可變區(qū)(VH)的核苷酸序列。
[0256]SEQ ID NO: 114示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-2G5-30和A6-2G5-41分別產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2G5-AB2和AC1-35-2G5-AB3分別的輕鏈可變區(qū)(VK)的核苷酸序列。
[0257]SEQ ID NO: 115 示出了單克隆抗體 AC1-35-2G5-AB2 和 AC1-35-2G5-AB3 的重鏈可變區(qū)(VH)的⑶R2的氨基酸序列。
[0258]SEQ ID NO: 116示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4_2A1_18產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2Al-Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的氨基酸序列。
[0259]SEQ ID NO: 117示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4_2A1_18產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-2Al-Abl的輕鏈可變區(qū)(VK)的核苷酸序列。
[0260]SEQ ID NO: 118示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-4A6-48產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-4A6-Ab2的輕鏈可變區(qū)(VK)的氨基酸序列。
[0261]SEQ ID NO: 119示出了通過雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-4A6-48產(chǎn)生的單克隆抗體AC1-35-4A6-Ab2的輕鏈可變區(qū)(VK)的核苷酸序列。
[0262]SEQ ID NO: 120 - 221示出了 VH/VK正向和反向引物的核苷酸序列。
[0263]術(shù)語的定義
[0264]如本文所使用的，術(shù)語“多肽”、“肽”和“蛋白”是可互換的并且定義為表示由通過肽鍵連接的氨基酸組成的生物分子。
[0265]術(shù)語“肽”或“結(jié)合肽”在本文中是可互換使用的并且表示氨基酸(通常是L-氨基酸)鏈，其α碳通過一個(gè)氨基酸的α碳的羧基和另一個(gè)氨基酸的α碳的氨基之間的縮合反應(yīng)所形成的肽鍵連接。位于所述鏈的一端的末端氨基酸(即，氨基末端)具有游離氨基，而位于所述鏈的另一端的末端氨基酸(即，羧基末端)具有游離羧基。照此，術(shù)語“氨基末端”(縮寫為N-末端)是指位于所述肽的氨基末端的氨基酸上的游離α-氨基，或位于所述肽內(nèi)任何其它位置的氨基酸的α-氨基(當(dāng)參與肽鍵時(shí)為亞氨基)。類似地，術(shù)語“羧基末端”(縮寫為C-末端)是指位于肽的羧基末端的氨基酸上的游離羧基，或位于所述肽內(nèi)的任何其它位置的氨基酸的羧基。結(jié)合肽可以組成抗體，如多克隆或單克隆抗體、人或人源化抗體、雙鏈抗體、駱駝抗體等，或如本文所定義的其功能性部分。
[0266]如本文在肽的上下文中所使用的術(shù)語“其片段”或“片段”是指功能性肽片段，其具有與本文所定義的完整肽基本相同的(生物)活性。該術(shù)語當(dāng)在本文的肽的上下文中所使用時(shí)是指包含完整抗體中含有完整抗體的抗原結(jié)合或可變區(qū)的一部分的抗體片段?？贵w片段的實(shí)例包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；雙鏈抗體；單鏈抗體分子，包括單鏈Fv(ScFv)分子；以及雙特異性和多特異性抗體和/或抗體片段。
[0267]通常，對構(gòu)成肽的氨基酸依次編號(hào)，從氨基末端開始并沿著向所述肽的羧基末端的方向增加。因此，當(dāng)據(jù)稱一個(gè)氨基酸“緊隨”另一個(gè)時(shí)，則該氨基酸的位置比前一個(gè)氨基酸更接近于所述肽的羧基末端。
[0268]本文所使用的術(shù)語“殘基”表示通過酰胺鍵引入到肽中的氨基酸。照此，所述氨基酸可以是天然存在的氨基酸，或除非另外限制，則可以涵蓋以與所述天然存在的氨基酸類似的方式起作用的已知的天然氨基酸的類似物(即，氨基酸模擬物)。此外，酰胺鍵模擬物包括本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的肽主鏈修飾。
[0269]本文所使用的短語“基本由......組成”來排除將顯著改變所述短語所涉及的肽的基本性質(zhì)的任何元素。因此，“基本由......組成”的肽的描述排除了將顯著改變所述肽的生物活性的任何氨基酸取代、添加或缺失。
[0270]此外，技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，如上所述，在編碼序列中改變、添加或缺失單個(gè)氨基酸或小百分比的氨基酸(通常小于5%，更通常地小于1% )的單個(gè)取代、缺失或添加是保守修飾變化，其中所述變化導(dǎo)致氨基酸被化學(xué)相似的氨基酸取代。在本領(lǐng)域中，提供功能相似氨基酸的保存性置換表是熟知的。下列6組分別含有彼此為保守置換的氨基酸:
[0271]I)丙氨酸(A)、絲氨酸(S)、蘇氨酸⑴；
[0272]2)門冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；
[0273]3)天門冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；
[0274]4)精氨酸(R)、賴氨酸⑷；
[0275]5)異亮氨酸⑴、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、纈氨酸(V);和
[0276]6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。
[0277]短語“分離的”或“生物純的”是指顯著或基本不含通常在其天然狀態(tài)中與之相伴存在的組分的材料。因此，本文所述的肽不含通常與它們的原位環(huán)境有關(guān)的材料。通常，本文所述的分離的免疫原性肽是至少約80%純的，通常至少約90%并且優(yōu)選地至少約95%純的，如通過銀染色凝膠上的譜帶強(qiáng)度所測量的。
[0278]可以通過多種本領(lǐng)域中熟知的方法來指明蛋白質(zhì)的純度或均質(zhì)性，如蛋白質(zhì)樣品的聚丙烯酰胺凝膠電泳，并隨后通過染色顯像。出于某些目的，將需要高分辨率并且使用了HPLC或相似的純化方法。
[0279]當(dāng)所述免疫原性肽的長度相對較短時(shí)(即，小于約50個(gè)氨基酸)，則通常使用標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)肽合成技術(shù)來合成它們。
[0280]其中將序列的C末端氨基酸連接到不溶性載體上并隨后順序添加序列中剩余的氨基酸的固相合成法是本文所述的免疫原性肽的化學(xué)合成的優(yōu)選方法。用于固相合成的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的。
[0281]可選地，本文所述的免疫原性肽是使用重組核酸方法合成的。通常，這包括產(chǎn)生編碼所述肽的核酸序列，將所述核酸置于受特定啟動(dòng)子控制的表達(dá)盒中，在宿主中表達(dá)所述肽，分離所表達(dá)的肽或多肽，并且如果需要，使所述肽復(fù)性。足以指導(dǎo)技術(shù)人員進(jìn)行這些程序的技術(shù)見于文獻(xiàn)中。
[0282]一旦表達(dá)，可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)程序純化重組肽，所述標(biāo)準(zhǔn)程序包括硫酸銨沉淀、親和層析柱、柱色譜法、凝膠電泳等。優(yōu)選約50%至95%均質(zhì)性的基本純的組合物，并且最優(yōu)選80%至95%或以上均質(zhì)性的用作治療劑。
[0283]本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到化學(xué)合成、生物表達(dá)或純化后，所述免疫原性肽可以具有基本不同于組成肽天然構(gòu)象的構(gòu)象。在這種情況下，通常需要變性并減少抗增殖肽并然后使所述肽重折疊成優(yōu)選構(gòu)象。減少并變性蛋白質(zhì)以及引起重折疊的方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知的。
[0284]可以通過(例如)表明與免疫血清或與所產(chǎn)生的抗所述蛋白本身的抗血清之間的反應(yīng)來確認(rèn)純化蛋白的抗原性。
[0285]如本文所使用的術(shù)語“一個(gè)/種”和“所述”定義以表示“一個(gè)或多個(gè)”并且除非在不適合的情況下，否則包含復(fù)數(shù)。
[0286]如本文所使用的術(shù)語“檢測”表示使用用于檢測生物分子的已知技術(shù)(如免疫化學(xué)或組織學(xué)方法)并且是指定性或定量確定研究中生物分子的存在或濃度。
[0287]“分離的”表示不含至少一些與其一起天然存在的組分的生物分子。
[0288]如本文所使用的術(shù)語“抗體”或“其功能性片段”是本領(lǐng)域公認(rèn)的術(shù)語并且被理解為是指與已知抗原，特別是與免疫球蛋白分子或免疫球蛋白分子的免疫活性部分結(jié)合的分子或分子的活性片段，即含有免疫特異性結(jié)合抗原的結(jié)合位點(diǎn)的分子。根據(jù)本發(fā)明所述的免疫球蛋白可以是任何類型(IgG、IgM、IgD、IgE、IgA和IgY)或分類(IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亞類的免疫球蛋白分子。
[0289]“抗體”旨在本發(fā)明的范圍內(nèi)以包括單克隆抗體、多克隆、嵌合、單鏈、雙重特異性、猿源化、人和人源化抗體、駱駝抗體、雙鏈抗體及其功能性片段或其活性片段。與已知抗原結(jié)合的分子的活性片段的實(shí)例包括Fab和F(ab’)2片段，其包括Fab免疫球蛋白表達(dá)文庫的產(chǎn)物和如上所述的任何抗體和片段的表位結(jié)合片段。
[0290]這些活性片段可以通過多種技術(shù)來源于本發(fā)明的抗體。例如，可以用酶(如胃蛋白酶)切割純化的單克隆抗體并進(jìn)行HPLC凝膠過濾。然后，可以收集含有Fab片段的適合部分并通過膜過濾等濃縮。有關(guān)抗體活性片段分離的一般技術(shù)的進(jìn)一步說明，參見，例如，Khaw, B.A.等人，J.Nucl.Med.23:1011-1019 (1982) ；Rousseaux 等人,MethodsEnzymology, 121:663-69, Academic Press, (1986)。
[0291 ] “人源化抗體”是指一類工程抗體，其具有來源于非人供體免疫球蛋白的CDR，而所述分子其余的免疫球蛋白來源的部分來源于一個(gè)(或多個(gè))人免疫球蛋白。
[0292]人源化抗體還可以是指具有可變區(qū)的抗體，其中其框架區(qū)中的一個(gè)或多個(gè)具有人或靈長類氨基酸。另外，可以改變框架支持殘基(framework support residue)以保持結(jié)合親合力。獲得“人源化抗體”的方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知的。(參見，例如，Queen 等人，Proc.Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989)，Hodgson 等人，B1/Technoloy, 9:421(1991))ο
[0293]“人源化抗體”還可以通過能夠在大型動(dòng)物(例如，兔)中產(chǎn)生親合力成熟的人樣多克隆抗體的新型基因工程方法獲得。(http://www.rctech.com/b1ventures/therapeutic, php)。
[0294]術(shù)語“完全人抗體”或“人”抗體是指來源于具有人抗體基因的轉(zhuǎn)基因小鼠或來源于人細(xì)胞的抗體。然而，對于人免疫系統(tǒng)來說，“完全人”、“人”和“人源化”抗體之間的差異可以忽略或者可以是不存在的，并且照此所有三種可以具有相同的效力和安全性。
[0295]術(shù)語“單克隆抗體”也是本領(lǐng)域中公認(rèn)的并且是指在實(shí)驗(yàn)室中從單個(gè)克隆大量產(chǎn)生的并且僅識(shí)別一個(gè)抗原的抗體。通常通過將常規(guī)的短壽命的抗體產(chǎn)生B細(xì)胞融合至快速生長細(xì)胞例如癌細(xì)胞(有時(shí)稱為“永生”細(xì)胞)來制備單克隆抗體。所得的雜交細(xì)胞或雜交瘤快速增殖，從而獲得了產(chǎn)生大量抗體的克隆。
[0296]術(shù)語“抗原”是指可以在生物中，特別是在動(dòng)物中，更特別是在哺乳動(dòng)物(包括人)中引起免疫應(yīng)答的實(shí)體或其片段。所述術(shù)語包括免疫原和負(fù)責(zé)抗原性或抗原決定簇的區(qū)域。
[0297]如本文所使用的，術(shù)語“可溶性的”表示部分或完全溶解于水溶液中。
[0298]還如本文所使用的，術(shù)語“免疫原性的”是指引起或提高針對免疫原性試劑的抗體、T細(xì)胞及其他反應(yīng)性免疫細(xì)胞的產(chǎn)生并促進(jìn)在人或動(dòng)物中的免疫應(yīng)答的物質(zhì)。
[0299]當(dāng)個(gè)體針對所施用的本發(fā)明的免疫原性組合物產(chǎn)生足夠的抗體、T細(xì)胞及其它反應(yīng)性免疫細(xì)胞以緩解或減輕待治療病癥時(shí)，發(fā)生免疫應(yīng)答。
[0300]術(shù)語“雜交瘤”是本領(lǐng)域公認(rèn)的并且本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為其是指通過抗體產(chǎn)生細(xì)胞和永生細(xì)胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞)的融合產(chǎn)生的細(xì)胞。這種雜交細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗體的連續(xù)供應(yīng)。對于融合方法的更詳細(xì)說明，參見上述“單克隆抗體”的定義和以下實(shí)施例。
[0301]如本文所使用的術(shù)語“載體”表示其中可以引入或可以連接抗原肽或超分子構(gòu)造的結(jié)構(gòu)，借此將抗原肽或所述肽的部分提供或暴露于人或動(dòng)物的免疫系統(tǒng)?？梢栽诒景l(fā)明的背景中將可以適合地在動(dòng)物或人療法中使用的任何顆粒(如，例如，囊泡、顆?；蝾w粒體)用作載體。
[0302]術(shù)語“載體”還包括遞送方法，其中可以通過遞送機(jī)構(gòu)將包含所述抗原肽的超分子抗原構(gòu)造組合物輸送至所需位點(diǎn)。該遞送系統(tǒng)的一個(gè)實(shí)例利用了膠體金屬，如膠體金。
[0303]可以在本發(fā)明所述的超分子抗原構(gòu)造組合物中使用的載體蛋白包括(但不限于)麥芽糖結(jié)合肽“MBP”；牛血清白蛋白“BSA”；鑰孔血藍(lán)蛋白(keyhole Iympethemocyanin) “KLH”;卵清蛋白；鞭毛蛋白；甲狀球蛋白；任何種的血清白蛋白；任何種的丙種球蛋白；同基因細(xì)胞；具有Ia抗原的同基因細(xì)胞；和D-和/或L-氨基酸的聚合物。
[0304]此外，術(shù)語“治療有效量”或“藥物有效量”是指當(dāng)施用于人或動(dòng)物時(shí)，足以在所述人或動(dòng)物中導(dǎo)致治療效果的結(jié)合肽的量。本領(lǐng)域的技術(shù)人員按照常規(guī)程序能夠容易地確定所述有效量。
[0305]“pTau PHF”、“PHF”和“雙股螺旋形細(xì)絲”在本文中同義地使用并且表示纏繞成螺旋形的約1nm的雙股細(xì)絲，其在電鏡中可見的周期為160nm。寬度在10至22nm之間變化。PHF是阿爾茲海默氏病(AD)的神經(jīng)原纖維纏結(jié)和神經(jīng)氈線中的主要結(jié)構(gòu)。PHF還可以在一些但不是全部與神經(jīng)炎斑有關(guān)的營養(yǎng)障礙性軸突中可見。PHF的主要組分是微管相關(guān)蛋白Tau的超磷酸化形式。PHF是由通過二硫鍵連接的反向平行的超磷酸化Tau蛋白組成的。PHF Tau可被截去其C末端20個(gè)氨基酸殘基。PHF形成的潛在機(jī)制還不確定，但是Tau的超磷酸化可以使其從微管脫離，從而提高Tau的可溶性混合。
[0306]在本發(fā)明的范圍內(nèi)，據(jù)證實(shí)抗體引起的對根據(jù)本發(fā)明所述的抗原組合物的應(yīng)答在很大程度上是T細(xì)胞依賴的。在該方面使用了裸鼠模型，對裸鼠接種并測量抗體應(yīng)答以評價(jià)根據(jù)本發(fā)明的抗原組合物在免疫的裸鼠中引起的Αβ-特異性抗體應(yīng)答。裸鼠具有Foxnlnu突變并因此由于缺乏適當(dāng)?shù)男叵俣哂薪档偷腡細(xì)胞功能。
[0307]如本文所使用的“藥物有效量”是指足以治愈或至少部分停止所治療的疾病、病癥或病況或與此相關(guān)的任何并發(fā)癥的藥物組合物中活性成分的劑量。
[0308]本發(fā)明提供了識(shí)別并結(jié)合Tau蛋白的主要病理磷酸表位的結(jié)合肽。特別地，本發(fā)明提供了抗蛋白Tau上的線性和構(gòu)象的、簡單和復(fù)雜的磷酸表位的特異性抗體，據(jù)信所述磷酸表位導(dǎo)致了 Tau病(包括AD)中的突觸-和神經(jīng)-毒性。
[0309]因此，本發(fā)明在一個(gè)實(shí)施方案中涉及結(jié)合肽或其功能性片段，特別是涉及抗體，特別是單克隆抗體或其功能性片段，所述結(jié)合肽或抗體識(shí)別并且特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物上，特別是在人Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，特別是結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體，但是在一個(gè)實(shí)施方案中，其不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述結(jié)合肽或抗體具有高結(jié)合親合力，其解離常數(shù)為至少ΙΟηΜ、特別是至少8nM、特別是至少5nM、特別是至少2nM、特別是至少InM，特別是至少500pM、特別是至少400pM、特別是至少300pM、特別是至少200pM、特別是至少ΙΟΟρΜ、特別是至少50pM。
[0310]如本文所使用的“可溶性Tau”蛋白是指由完全溶解的Tau蛋白/肽單體，或由Tau樣肽/蛋白，或由修飾或截短的Tau肽/蛋白，或由Tau肽/蛋白單體的其它衍生物和由Tau蛋白寡聚物組成的蛋白質(zhì)?！翱扇苄訲au”特別地排除了神經(jīng)原纖維纏結(jié)(NFT)。
[0311 ] 如本文所使用的“不溶性Tau”分別是指Tau肽或蛋白，或Tau樣肽/蛋白，或修飾或截短的Tau肽/蛋白或形成寡聚或聚合結(jié)構(gòu)的Tau肽/蛋白的其它衍生物的多個(gè)聚集單體，它們體外在水溶液培養(yǎng)基中和體內(nèi)在哺乳動(dòng)物或人體中，更特別地在腦中均是不溶的，但是特別是指Tau或修飾或截短的Tau肽/蛋白或其衍生物的多個(gè)聚集單體，它們在哺乳動(dòng)物或人體中，更特別地在腦中是不溶的?！安蝗苄訲au”特別地包括神經(jīng)原纖維纏結(jié)(NFT)。
[0312]如本文所使用的“單體Tau”或“Tau單體”是指完全溶解的Tau蛋白，其在水溶液培養(yǎng)基中無聚集的復(fù)合物。
[0313]“聚集Tau”、“寡聚Tau”和“Tau寡聚物”分別是指Tau肽或蛋白，或Tau樣肽/蛋白，或修飾或截短的Tau肽/蛋白或形成寡聚或聚合結(jié)構(gòu)的Tau肽/蛋白的其它衍生物的多個(gè)聚集單體，它們體外在水溶液培養(yǎng)基中和體內(nèi)在哺乳動(dòng)物或人體中，更特別地在腦中是不溶的或可溶的，但是特別是指Tau或修飾或截短的Tau肽/蛋白或其衍生物的多個(gè)聚集單體，它們在哺乳動(dòng)物或人體中，更特別地在腦中是不溶的。
[0314]“調(diào)節(jié)抗體”是指如本文在各個(gè)實(shí)施方案中所述的抗體或其功能性片段，其可上調(diào)(例如，激活或刺激)、下調(diào)(例如，抑制或遏抑)或以其它方式改變含有增加的可溶性tau蛋白和/或可溶性磷酸化tau蛋白的水平的動(dòng)物(特別是哺乳動(dòng)物或人)體內(nèi)，特別是腦中(特別是腦皮層和/或海馬中)的可溶性和/或不溶性和/或寡聚Tau蛋白(特別是可溶性磷酸化tau蛋白)的功能性質(zhì)、生物活性或水平。調(diào)節(jié)抗體或其功能片段可用來調(diào)節(jié)tau蛋白或直接或間接編碼所述tau蛋白的多肽。在某些實(shí)施方案中,調(diào)節(jié)抗體或其功能片段降低可溶性和/或不溶性和/或寡聚、特別是可溶性和不溶性tau蛋白，特別是可溶性和不溶性和寡聚tau蛋白的水平。一方面，可溶性和/或不溶性和/或寡聚tau蛋白是含有增加的tau蛋白和/或磷酸化tau蛋白(特別是可溶性tau蛋白和/或可溶性磷酸化tau蛋白)的水平的動(dòng)物(特別是哺乳動(dòng)物或人)的腦中(特別是腦皮層和/或海馬中)的磷酸化tau蛋白，特別是可溶性磷酸化tau蛋白。
[0315]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含治療有效量的根據(jù)本文所述和所要求保護(hù)的實(shí)施方案中任一項(xiàng)的結(jié)合肽或其功能性部分，特別是抗體，特別是單克隆抗體或其功能性部分，或包含編碼所述結(jié)合肽或抗體的核酸序列的多核苷酸，或它們的組合，以及藥學(xué)上可接受的載體。
[0316]適合的藥用載體、稀釋劑和/或賦形劑在本領(lǐng)域中是公知的并且包括(例如)磷酸鹽緩沖鹽水溶液、水、乳狀液(如油/水乳狀液)、多種類型的潤濕劑、無菌溶液等。
[0317]可以使用已知技術(shù)將包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段的根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽制備成生理學(xué)可用的制劑，并且其可以包含藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑。例如，包括任何功能等效的結(jié)合肽或其功能性部分的根據(jù)本發(fā)明和如本文所述的結(jié)合肽，特別地包括任何功能等效的抗體或其功能性部分的本發(fā)明的單克隆抗體與藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑結(jié)合以形成治療性組合物。適合的藥用載體、稀釋劑和/或賦形劑在本領(lǐng)域中是熟知的并且包括(例如)磷酸鹽緩沖鹽水溶液、水、乳狀液(如油/水乳狀液)、多種類型的潤濕劑、無菌溶液等。
[0318]可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的標(biāo)準(zhǔn)方法完成根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物制劑。
[0319]可以將本發(fā)明的組合物以適合的藥學(xué)有效量以固體、液體或氣溶膠的形式施用給受試者。固體組合物的實(shí)例包括丸劑、乳膏劑和可植入的劑量單位。丸劑可以口服施用。治療性乳膏劑可以局部施用?？芍踩雱┝繂挝豢梢栽?例如)腫瘤位點(diǎn)上局部施用或者可以(例如)皮下植入以全身釋放治療性組合物。液體組分的實(shí)例包括適合于肌內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、皮下、動(dòng)脈內(nèi)注射的制劑和用于局部和眼內(nèi)施用的制劑。氣溶膠制劑的實(shí)例包括用于向肺部施用的吸入器制劑。
[0320]所述組合物可以通過標(biāo)準(zhǔn)施用途徑施用。一般地，可以通過局部、口服、直腸、鼻、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)或胃腸外(例如，靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi))途徑施用所述組合物。
[0321]另外，可以將所述組合物引入到緩釋基質(zhì)(如可生物降解的聚合物)中，將所述聚合物植入到需要遞送的位置(例如，腫瘤位點(diǎn))附近。所述方法包括單次劑量的施用，以預(yù)定時(shí)間間隔的重復(fù)劑量的施用和在預(yù)定時(shí)間段內(nèi)的持續(xù)施用。
[0322]如本文所使用的緩釋基質(zhì)是由通過酶促或酸/堿水解或通過溶解可降解的材料(通常是聚合物)制成的基質(zhì)。一旦插入體內(nèi)，所述基質(zhì)通過酶和體液開始起作用。期望的是，緩釋基質(zhì)選自生物相容性材料，如脂質(zhì)體、聚交酯(聚乳酸)、聚乙交酯(乙醇酸的聚合物)、聚丙交酯-共-乙交酯(乳酸和乙醇酸的共聚物)、聚酐、聚原酸酯、多肽、透明質(zhì)酸、膠原、硫酸軟骨素、羧酸、脂肪酸、磷脂、多糖、核酸、聚氨基酸、氨基酸(如苯丙氨酸、酪氨酸、異亮氨酸)、多核苷酸、聚乙烯丙烯、聚乙烯吡咯烷酮和聚硅氧烷。優(yōu)選的生物可降解基質(zhì)是聚丙交酯、聚乙交酯或聚丙交酯-共-乙交酯(乳酸和乙醇酸的共聚物)中的一種的基質(zhì)。
[0323]本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的組合物的劑量將取決于多種因素，如(例如)要治療的病況、所使用的具體的組合物和其他臨床因素，如患者的體重、尺寸、性別和一般健康狀況、體表面積、要施用的具體的化合物或組合物、同時(shí)施用的其他藥物和施用途徑。
[0324]根據(jù)本發(fā)明所述的組合物可以結(jié)合包含生理活性物質(zhì)或化合物的其它組合物施用，所述生理活性物質(zhì)或化合物如(例如)在Tau病和/或淀粉樣變性(一組與參與阿爾茨海默氏病的淀粉狀蛋白或淀粉狀蛋白樣蛋白(如淀粉狀蛋白β蛋白)有關(guān)的疾病和病癥)的藥物治療中使用的已知的化合物。
[0325]另一種生理活性物質(zhì)或化合物可以通過與根據(jù)本發(fā)明的治療性疫苗相同或相似的機(jī)制或通過獨(dú)立的作用機(jī)制或通過多個(gè)相關(guān)和/或獨(dú)立的作用機(jī)制來發(fā)揮其生物效應(yīng)。
[0326]通常，另一種生物學(xué)活性化合物可以包括神經(jīng)傳遞增強(qiáng)因子(neutron-transmiss1n enhancer)、精神治療藥、乙?；憠A脂酶抑制劑、1丐通道阻斷劑、生物胺、苯并二氮萆鎮(zhèn)定劑、乙酰膽堿合成、儲(chǔ)存或釋放增強(qiáng)子、乙酰膽堿突觸后受體激動(dòng)劑、單胺氧化酶-A或-B抑制劑、N-甲基-D-天冬氨酸谷氨酸受體拮抗劑、非留族抗炎藥、抗氧化劑和含血清素的受體拮抗劑。
[0327]特別地，所述生物活性劑或化合物可以包含至少一種化合物，其選自:抗氧化應(yīng)激化合物、抗凋亡化合物、金屬螯合劑、DNA修復(fù)抑制劑，如哌侖西平和代謝產(chǎn)物、3-氨基-1-丙烷磺酸(3APS)、1，3-丙烷二磺酸(I, 3PDS)、分泌酶激活劑、[β ]_和7-分泌酶抑制劑、Tau蛋白、神經(jīng)遞質(zhì)、β片層阻斷肽、抗炎分子、“非典型抗精神病藥物”，如(例如)氯氮平、齊拉西酮、利培酮、阿立哌唑或奧氮平或膽堿酯酶抑制劑(ChEI)，如他克林、利凡斯的明、多奈哌齊和/或加蘭他敏及其它藥物和營養(yǎng)添加劑，如(例如)維生素Β12、半胱氨酸、乙酰膽堿前體、卵磷脂、膽堿、銀杏、乙?；?L-卡尼汀、艾地苯醌、丙戊茶堿或黃嘌呤衍生物，以及根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合肽，其包括抗體、特別是單克隆抗體及其活性片段和任選地藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑和/或賦形劑，以及用于疾病治療的說明書。
[0328]在其他實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的組合物可以包含煙酸或美金剛，以及根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合肽，其包括抗體、特別是單克隆抗體及其活性片段和任選地藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑和/或賦形劑。
[0329]在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了組合物，其包含用于陽性和陰性精神病癥狀(其包括幻覺、錯(cuò)覺、思維內(nèi)容障礙(表現(xiàn)為顯著的思維不連貫、出軌、答非所問)和怪異或混亂的行為以及快感缺乏、情感障礙、冷漠和社會(huì)退縮)的治療的“非典型抗精神病藥物”，如(例如)氯氮平、齊拉西酮、利培酮、阿立哌唑或奧氮平，以及根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合肽，其包括抗體、特別是單克隆抗體及其活性片段和任選地藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑和/或賦形劑。
[0330]除根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽以外，可以適合地在組合物中使用的其它化合物為在例如W02004/058258中公開的那些(尤其參見第16和17頁)，其包括治療藥物靶標(biāo)(第36-39頁)、鏈烷磺酸和烷醇硫酸(第39-51頁)、膽堿酯酶抑制劑(第51-56頁)、NMDA受體拮抗劑(第56-58頁)、雌激素(第58-59頁)、非留族抗炎藥(第60-61頁)、抗氧化劑(第61-62頁)、過氧化物酶增殖劑激活受體(PPAR)激動(dòng)劑(第63-67頁)、降膽固醇劑(第68-75頁)；淀粉狀蛋白抑制劑(75-77頁)、淀粉狀蛋白形成抑制劑(第77-78頁)、金屬螯合劑(第78-79頁)、抗精神病藥和抗抑郁藥(第80-82頁)、營養(yǎng)添加劑(第83-89頁)和提高腦中生物活性物質(zhì)可用性的化合物(參見第89-93頁)和前體藥物(第93和94頁)，該文檔作為參考并入本文，但特別是在如上所述頁中提及的化合物。
[0331]蛋白質(zhì)藥物活性物質(zhì)可以以每劑量Ing至1mg之間的量存在。通常，施用方案應(yīng)在0.1 μ g至1mg根據(jù)本發(fā)明所述的抗體之間的范圍內(nèi)，特別是在1.0 μ g至1.0mg的范圍內(nèi)，并且更特別是在1.0 μ g至100 μ g之間的范圍內(nèi)，并且這些范圍內(nèi)的所有各個(gè)數(shù)值也是本發(fā)明的一部分。如果通過連續(xù)輸注進(jìn)行施用，則更適合的劑量可以在每公斤體重每小時(shí)0.01 μ g至1mg單位之間的范圍內(nèi)，并且這些范圍內(nèi)的所有各個(gè)數(shù)值也是本發(fā)明的一部分。
[0332]施用通常將是腸胃外施用，例如，靜脈內(nèi)或皮下施用。用于腸胃外施用的制劑包括無菌水性或非水性溶液、混懸液和乳狀液。非水性溶劑包括(但不限于)丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄欖油)和可注射的有機(jī)酯(如油酸乙酯)。水性溶劑可以選自水、醇/水溶液、乳狀液或混懸液，其包括鹽水和緩沖介質(zhì)。腸胃外賦形劑包括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖液、葡萄糖-氯化鈉液、乳酸林格氏液或非揮發(fā)性油。靜脈內(nèi)賦形劑包括液體和營養(yǎng)補(bǔ)充劑、電解質(zhì)補(bǔ)充劑(如基于林格氏葡萄糖液的那些)等等。還可以存在防腐劑，如(例如)抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。
[0333]所述藥物組合物還可以包含蛋白質(zhì)載體，如(例如)血清白蛋白或免疫球蛋白，特別是人源的。根據(jù)預(yù)期用途，其它生物活性劑可以存在于本發(fā)明的藥物組合物中。
[0334]當(dāng)結(jié)合靶標(biāo)位于腦中時(shí)，本發(fā)明的某些實(shí)施方案提供了根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽，其包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段以穿過血腦屏障。某些神經(jīng)退行性疾病與血腦屏障的滲透性增加有關(guān)，從而使得根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體或其活性片段)可以容易地進(jìn)入腦中。當(dāng)血腦屏障完整無損時(shí)，存在用于將分子輸送穿過血腦屏障的幾種本領(lǐng)域已知的方法，包括但不限于物理方法、基于脂質(zhì)的方法和基于受體和通道的方法。
[0335]輸送根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體或其活性片段)穿過血腦屏障的物理方法包括但不限于徹底繞過血腦屏障或通過在血腦屏障中開口。繞過(circumvent1n)方法包括但不限于向腦中直接注射(參見，例如，Papanastass1u等人，Gene Therapy9:398-406 (2002))和在腦中植入遞送裝置(參見，例如，Gill等A, Nature Med.9:589-595 (2003);和 Gliadel Wafers (TM), Guildford Pharmaceutical)。在所述屏障中產(chǎn)生開口的方法包括(但不限于)、超聲(參見，例如，美國專利公布N0.2002/0038086)、滲透壓(例如，高滲甘露醇(NeuweIt, E.A., Implicat1n of theBlood-Brain Barrier and its Manipulat1n, Volsl&2, Plenum Press, N.Y.(1989))、通過(例如)血管舒緩激肽或可透化劑A-7的透化作用(參見，例如，美國專利N0.5，112，596、5，268，164,5, 506，206和5，686，416)、和用含有編碼所述結(jié)合肽或抗原結(jié)合片段的基因的載體轉(zhuǎn)染跨在血腦屏障上的神經(jīng)元(參見，例如，美國專利公布N0.2003/0083299)。
[0336]輸送根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體或其活性片段)穿過血腦屏障的基于脂質(zhì)的方法包括但不限于將根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體或其活性片段)包埋在脂質(zhì)體中，所述脂質(zhì)體與結(jié)合血腦屏障血管內(nèi)皮上的受體的其活性片段相連(參見，例如，美國專利申請公布N0.20020025313)，和在低密度脂蛋白顆粒(參見，例如，美國專利申請公布N0.20040204354)或載脂蛋白E (參見，例如，美國專利申請公布N0.20040131692)中涂覆根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體或其活性片段)。
[0337] 用于輸送根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體或其活性片段)穿過血腦屏障的基于受體和通道的方法包括但不限于使用糖皮質(zhì)激素阻斷劑提高血腦屏障的滲透性(參見，例如，美國專利申請公布N0.2002/0065259,2003/0162695和2005/0124533);激活鉀通道(參見，例如，美國專利申請公布N0.2005/0089473)、抑制ABC藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(參見，例如，美國專利申請公布N0.2003/0073713);用轉(zhuǎn)鐵蛋白涂覆抗體并調(diào)節(jié)所述一種或多種轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的活性(參見，例如，美國專利申請公布N0.2003/0129186)，和使所述抗體陽離子化(參見，例如，美國專利N0.5，004，697)。
[0338]可以在延長的一段時(shí)間內(nèi)向受試者提供根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體或其活性片段)或根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物的單次或重復(fù)施用。施用持續(xù)時(shí)間可以在I周至多至12個(gè)月或以上之間。在此期間，根據(jù)待治療受試者的需要，可以將所述結(jié)合肽、抗體或藥物組合物每周施用一次，每兩周、三周、四周等施用一次，或以更高或更低的頻率施用。
[0339]在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于檢測和診斷Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況的方法和試劑盒，所述Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況包括神經(jīng)退行性疾病或病癥(如Tau病)，其包括一組異質(zhì)性的神經(jīng)退行性疾病或病癥,其包括顯示出Tau和淀粉狀蛋白病理共存的疾病或病癥，包括但不限于，阿爾茨海默氏病、克-雅二氏病、拳擊員癡呆、唐氏綜合征、GSS病、包涵體肌炎和朊蛋白腦淀粉樣血管病、創(chuàng)傷性腦損傷和不顯示單獨(dú)的淀粉狀蛋白病理的其它疾病或病癥，其包括但不限于關(guān)島型肌萎縮側(cè)索硬化/帕金森綜合征-癡呆復(fù)合征、具有神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病、嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底核退化癥、鈣化性彌散神經(jīng)原纖維纏結(jié)、連鎖于17號(hào)染色體伴帕金森病的額顳葉癡呆、Hallevorden-Spatz病、多系統(tǒng)萎縮癥、C型尼曼-皮克病、蒼白球腦橋黑質(zhì)變性、皮克病、進(jìn)行性皮質(zhì)下膠質(zhì)增生癥、進(jìn)行性核上麻痹、亞急性硬化性全腦炎、僅纏結(jié)型癡呆(Tangleonly dementia)、腦炎后帕金森氏綜合征、肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良。所述病理異?？梢杂缮窠?jīng)原纖維病變的形成引起或與其有關(guān)，所述神經(jīng)原纖維病變是Tau病中主要的腦病理。
[0340]另外，本發(fā)明提供了用于診斷對Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況的易患情況的方法和試劑盒,所述Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況包括神經(jīng)退行性疾病或病癥(如Tau病)，其包括一組異質(zhì)性的神經(jīng)退行性疾病或病癥，其包括顯示出Tau和淀粉狀蛋白病理共存的疾病或病癥，或用于監(jiān)測患者中最小殘留疾病或用于預(yù)測患者對使用根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段)或根據(jù)本發(fā)明和如本文所述的組合物的治療的反應(yīng)性的方法和試劑盒。這些方法包括一般用于檢測或定量生物樣品中或原位條件下的物質(zhì)的已知免疫學(xué)方法。
[0341]可以通過檢測本發(fā)明的結(jié)合肽(特別是抗體，特別是單克隆抗體或其活性片段)與樣品中或原位Tau蛋白的表位的免疫特異性結(jié)合來實(shí)現(xiàn)在對其有需要的受試者(特別是哺乳動(dòng)物，更特別是為人)中Tau蛋白相關(guān)疾病或病況的診斷或?qū)au蛋白相關(guān)疾病或病況的易患情況的診斷，所述Tau蛋白相關(guān)疾病或病況包括神經(jīng)退行性疾病或病癥(如Tau病)，其包括一組異質(zhì)性的神經(jīng)退行性疾病或病癥，其包括顯示出Tau和淀粉狀蛋白病理共存的疾病或病癥，所述診斷包括將懷疑含有Tau蛋白的樣品或具體身體部分或身體區(qū)域與結(jié)合Tau蛋白表位的抗體接觸，允許所述抗體與所述Tau蛋白結(jié)合以形成免疫復(fù)合物，檢測所述免疫復(fù)合物的形成并將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與樣品或具體身體部分或區(qū)域中Tau蛋白的存在或不存在相關(guān)聯(lián)，任選地將所述免疫復(fù)合物的量與正常對照值相比較，其中與正常對照值相比，所述免疫復(fù)合物的量的增加表明所述受試者患有Tau蛋白相關(guān)疾病或病況或具有發(fā)展Tau蛋白相關(guān)疾病或病況的風(fēng)險(xiǎn)。
[0342]可以通過檢測本發(fā)明的結(jié)合肽(特別是抗體，特別是單克隆抗體或其活性片段)與樣品中或原位Tau蛋白的表位的免疫特異性結(jié)合來實(shí)現(xiàn)在使用根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段)或根據(jù)本發(fā)明的組合物治療后在受試者，特別是哺乳動(dòng)物，更特別是人中對最小殘留疾病的監(jiān)測，所述監(jiān)測包括將懷疑含有Tau蛋白的樣品或具體身體部分或身體區(qū)域與結(jié)合Tau蛋白表位的根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段)接觸，允許根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段)與所述Tau蛋白結(jié)合以形成免疫復(fù)合物，檢測所述免疫復(fù)合物的形成并將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與樣品或具體身體部分或區(qū)域中Tau蛋白的存在或不存在相關(guān)聯(lián)，任選地將所述免疫復(fù)合物的量與正常對照值相比較，其中與正常對照值相比，所述免疫復(fù)合物的量的增加表明所述受試者可能仍患有最小殘留疾病。
[0343]可以通過檢測結(jié)合肽(特別是單克隆抗體或其活性片段)與樣品中或原位Tau蛋白的表位的免疫特異性結(jié)合來實(shí)現(xiàn)對受試者(特別是哺乳動(dòng)物，更特別是人)對使用根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段)或根據(jù)本發(fā)明的組合物的治療的反應(yīng)性的預(yù)測，所述預(yù)測包括將懷疑含有Tau蛋白的樣品或具體身體部分或身體區(qū)域與結(jié)合Tau蛋白表位的根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段)接觸，允許根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段)與所述Tau蛋白結(jié)合以形成免疫復(fù)合物，檢測所述免疫復(fù)合物的形成并將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與樣品或具體身體部分或區(qū)域中Tau蛋白的存在或不存在相關(guān)聯(lián)，任選地比較治療開始前后所述免疫復(fù)合物的量，其中所述免疫復(fù)合物的量的減少表明所述患者具有對治療起反應(yīng)的高潛能。
[0344]可用于診斷Tau蛋白相關(guān)疾病或病況(包括神經(jīng)退行性疾病或病癥如Tau病，其包括一組異質(zhì)性的神經(jīng)退行性疾病或病癥(包括顯示出Tau和淀粉狀蛋白病理共存的疾病或病癥))，用于診斷對Tau蛋白相關(guān)疾病或病況的易患情況，或用于監(jiān)測患者中最小殘留疾病或用于預(yù)測患者對使用根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段)或根據(jù)本發(fā)明和如本文所述的組合物的治療的反應(yīng)性的生物樣品為(例如)液體，如血清、血漿、唾液、胃液分泌、粘液、腦脊液、淋巴液等，或者得自生物的組織或細(xì)胞樣品，如神經(jīng)、腦、心臟或血管組織。對于樣品中Tau蛋白存在與否的確定，可以使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知的任何免疫測定，如(例如)使用用于檢測的第二試劑的利用間接檢測方法的測定、ELISA以及免疫沉淀和凝集測定。這些測定的詳細(xì)說明可見于，例如，Harlow和 Lane, Antibodies: A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory, NewYorkl988555-612);授權(quán)于 Maertens 和 Stuyver 的 W096/13590 ；Zrein 等人(1998)和W096/29605。
[0345]對于原位診斷，可以通過本領(lǐng)域中已知的方法將根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(包括根據(jù)本發(fā)明的抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段，或其任何活性和功能性片段)施用于待診斷的生物，所述方法如(例如)靜脈內(nèi)、鼻內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)注射，從而使得根據(jù)本發(fā)明的抗體和淀粉狀蛋白上的表位區(qū)之間可以發(fā)生特異性結(jié)合?？梢酝ㄟ^連接到根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體，或其功能性片段)上的標(biāo)記物或任何其它本領(lǐng)域已知的檢測方法方便地檢測結(jié)合肽/抗原復(fù)合物。
[0346]在診斷應(yīng)用中使用的或者在用于診斷對Tau蛋白相關(guān)疾病或病況(包括神經(jīng)退行性疾病或病癥如Tau病，其包括一組異質(zhì)性的神經(jīng)退行性疾病或病癥(包括顯示出Tau和淀粉狀蛋白病理共存的疾病或病癥))的易患情況，或用于監(jiān)測患者中最小殘留疾病或用于預(yù)測患者對使用根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段)或根據(jù)本發(fā)明和如本文所述的組合物的治療的反應(yīng)性的應(yīng)用中使用的免疫測定通常依賴于標(biāo)記的抗原、結(jié)合肽或用于檢測的第二試劑。可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員通常所知的化合物標(biāo)記這些蛋白質(zhì)或試劑，其包括酶、放射性同位素和熒光、發(fā)光和生色物質(zhì)，其包括但不限于著色的顆粒，如膠體金和乳膠珠。在這些中，放射性標(biāo)記可以用于幾乎所有類型的測定并且具有最多的變化。當(dāng)必須避免放射性或當(dāng)需要快速結(jié)果時(shí)，酶結(jié)合的標(biāo)記物是特別有用的。盡管對于它們的使用需要昂貴的設(shè)備，但是熒色物提供了非常敏感的檢測方法。在這些測定中有用的結(jié)合肽是在本文的權(quán)利要求中公開的那些，其包括抗體，特別是單克隆抗體、多克隆抗體和親合純化的多克隆抗體。
[0347]可選地，可以通過與對免疫球蛋白具有親合力的標(biāo)記的物質(zhì)(如蛋白A或G或二抗)反應(yīng)來間接標(biāo)記根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(其包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段)?？梢詫⒏鶕?jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段)與第二物質(zhì)結(jié)合并用對結(jié)合至所述抗體的第二物質(zhì)具有親合力的標(biāo)記的第三物質(zhì)來檢測。例如，根據(jù)本發(fā)明所述的結(jié)合肽(包括抗體，特別是單克隆抗體及其活性片段)可以結(jié)合至生物素并使用標(biāo)記的抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素檢測的結(jié)合肽/生物素結(jié)合物。類似地，所述結(jié)合肽可以結(jié)合至半抗原并使用標(biāo)記的抗半抗原結(jié)合肽檢測結(jié)合肽/半抗原結(jié)合物。
[0348]本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道可以根據(jù)本發(fā)明使用的這些及其它適合的標(biāo)記物。可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員一般所知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)完成這些標(biāo)記物與結(jié)合肽或其片段的結(jié)合。Kennedy, J.H.等人,1976 (Clin.Chim.Acta70:1-31)和 Schurs, A.H.ff.Μ.等人，1977 (Clin.Chim Acta57:1-40)描述了典型技術(shù)。后者中提到的偶聯(lián)技術(shù)為戊二醛法、高碘酸鹽法、二馬來酰亞胺法等，所有技術(shù)作為參考并入本文。
[0349]目前免疫測定利用雙抗體法來檢測分析物的存在性，其中通過與已用可檢測標(biāo)記物標(biāo)記的二抗反應(yīng)來間接標(biāo)記所述抗體。所述二抗優(yōu)選地是與從中獲得所述單克隆抗體的動(dòng)物的抗體結(jié)合的抗體。換句話說，如果所述單克隆抗體是小鼠抗體，那么所述標(biāo)記的二抗是抗小鼠抗體。對于要在本文所述的測定中使用的抗體，該標(biāo)記物優(yōu)選地為抗體涂覆的珠，特別是磁性珠。對于要在本文所述的免疫測定中使用的抗體，所述標(biāo)記物優(yōu)選地為可檢測分子，如放射性、熒光或電化學(xué)發(fā)光物質(zhì)。
[0350]在本發(fā)明的范圍內(nèi)還可以使用通常稱為快速格式系統(tǒng)(fast format systems)的替代性雙抗體系統(tǒng)，這是由于它們適合于分析物存在性的快速測定。該系統(tǒng)需要抗體和分析物之間的高親合力。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，使用分別對淀粉狀蛋白特異的一對抗體確定淀粉狀蛋白的存在性。所述抗體對中的一個(gè)在本文中被稱為“檢測抗體”，而所述抗體對中的另一個(gè)在本文中被稱為“捕獲抗體”。根據(jù)本發(fā)明所述的單克隆抗體可以用作捕獲抗體或檢測抗體中的任一種。根據(jù)本發(fā)明所述的單克隆抗體還可以在單個(gè)測定中一起用作捕獲抗體和檢測抗體兩者。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案使用雙抗體夾心法來檢測生物液體樣品中的淀粉狀蛋白。在該方法中，將分析物(淀粉狀蛋白)夾在檢測抗體和捕獲抗體之間，而將所述捕獲抗體不可逆地固定在固體載體上。檢測抗體將含有可檢測標(biāo)記物，以鑒別抗體-分析物夾心的存在性，并因此鑒別分析物的存在性。
[0351]示例性固相物質(zhì)包括但不限于微量滴定板、聚苯乙烯試管、磁性、塑料或玻璃珠和載玻片，它們在放射免疫測定和酶免疫測定領(lǐng)域中是熟知的。用于將抗體連接至固相的方法也是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。最近，已將多種多孔材料如尼龍、硝化纖維素、醋酸纖維素、玻璃纖維及其它多孔聚合物用作固體載體。
[0352]本發(fā)明還涉及用于檢測生物樣品中Tau蛋白的診斷試劑盒，其包含如上定義的組合物。此外，本發(fā)明涉及后一種診斷試劑盒，除如上定義的組合物之外，所述試劑盒還包含如上定義的檢測試劑。一般說來，術(shù)語“診斷試劑盒”是指本領(lǐng)域中已知的任何診斷試劑盒。更特別地，后一個(gè)術(shù)語是指如Zrein等人(1998)所述的診斷試劑盒。
[0353]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于Tau蛋白相關(guān)疾病和病況的檢測和診斷的新型免疫探針和測試試劑盒，其包含根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合肽。對于免疫探針，所述結(jié)合肽直接或間接地連接至適合的報(bào)告分子，例如，酶或放射性核素。所述測試試劑盒包含容納根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合肽的容器和出于結(jié)合Tau抗原以形成免疫復(fù)合物并檢測所述免疫復(fù)合物的形成、從而將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與Tau蛋白的存在或不存在相關(guān)聯(lián)的目的使用所述結(jié)合肽的說明書。
實(shí)施例
[0354]實(shí)施例1:雜交瘤和抗體的產(chǎn)生和篩選
[0355]本研究的目的是產(chǎn)生和篩選抗Tau mAb (單克隆抗體)。通過Tau疫苗免疫的小鼠脾與骨髓瘤細(xì)胞系的融合產(chǎn)生雜交瘤。評價(jià)了雜交瘤對在疫苗制備中使用的磷酸化和非磷酸化全長Tau蛋白以及磷酸化和非磷酸化Tau抗原性肽的反應(yīng)性。還使用免疫化學(xué)在Tau轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片上通過雜交瘤上清液對Tau纏結(jié)的反應(yīng)性來進(jìn)行雜交瘤篩選。
[0356]1.1 方法
[0357]1.1.1 融合
[0358]將用AC1-35(Tau393-408[pS396，pS404])接種的野生型C57BL/6小鼠用于雜交瘤產(chǎn)生。在第O天并且在第4天再次用AC1-35疫苗強(qiáng)化小鼠，并且在第7天進(jìn)行融合。
[0359]將來自免疫小鼠的6X107(AC1-35)個(gè)脾細(xì)胞與2 X 17個(gè)SP2_0_Agl4骨髓瘤細(xì)胞以3個(gè)脾細(xì)胞/I個(gè)骨髓瘤細(xì)胞的比例融合。
[0360]該融合產(chǎn)生了 8X96孔板，并且根據(jù)板(1-8)，然后根據(jù)行(A-G)，最后根據(jù)列(1-12)來命名克隆。
[0361]1.1.2用于選擇克隆的篩選法
[0362]首先將8X96孔板對IgG表達(dá)篩選兩次。然后將陽性表達(dá)克隆轉(zhuǎn)移到24孔板中并在Tau ELISA篩選和免疫組織化學(xué)TAUPIR篩選中測試生長細(xì)胞的細(xì)胞上清液(=克隆)。將ELISA和/或TAUPIR中的陽性上清液轉(zhuǎn)移到T25三角瓶中并且在Tau ELISA篩選和TAUPIR篩選中再次對克隆篩選IgG表達(dá)。
[0363]1.1.3IgG 篩選
[0364]在4°C用 50 μ I/孔的抗小鼠 IgG 抗體(AbD Serotec, Diisseldorf, Germany)在涂覆緩沖液中的溶液涂覆ELISA板(Costar ；Sigma) 16小時(shí)。在用PBS/Tween清洗板之后，在室溫下將孔用100 μ I/孔的封閉溶液封閉I小時(shí)。在室溫下，將未稀釋的雜交瘤上清液(50μ I/孔)孵育I小時(shí)。在清洗后，在室溫下將辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合的抗小鼠IgGl、IgG2a、IgG2b、IgG3或IgM(AbD Serotec)的混合物應(yīng)用I小時(shí)。最終清洗后，用HRP底物(TMB, 3-3’，5，5’ -四甲基聯(lián)苯胺)進(jìn)行檢測，并使用酶標(biāo)儀在405nm對板讀數(shù)。結(jié)果表示為光密度(0.D.)。
[0365]1.1.4 雜交瘤 Tau ELISA 篩選
[0366]對pTau 肽(AC1-35, T3.5:Tau393-408 [pS396/pS404 ；PolyPeptide Laboratories, Hillcrod, Denmark)、相應(yīng)的非憐酸化 Tau 妝(T3.6:Tau393-408, PolyPeptide Laboratories)、憐酸化全長(441aa)Tau 蛋白(pTau 蛋白，Vandebroek 等人，2005)和全長(441aa)Tau 蛋白(Tau 蛋白，SignalChem, Richmond, Canada)進(jìn)行雜交瘤ELISA篩選。最后，將牛血清白蛋白(BSA)用作陰性對照。
[0367]在4 °C用10 μ g/ml相應(yīng)的Tau肽和I μ g/ml相應(yīng)的Tau蛋白涂覆板過夜。在用PBS-0.05%吐溫20清洗每個(gè)孔并用1% BSA在PBS-0.05%吐溫20中的溶液封閉后，將未稀釋的雜交瘤上清液或培養(yǎng)基陰性對照加入到板中并在37 °C孵育2小時(shí)。清洗后，在37 °C將板與堿性磷酸酶(AP)結(jié)合的抗小鼠IgG總抗體(JacksonLaboratories, Baltimore, PA, USA) 一起孵育2小時(shí)。清洗后，將板與作為AP的磷酸酶底物的PNPP (對硝基磷酸苯酯)一起孵育，并使用ELISA酶標(biāo)儀在405nm讀數(shù)。結(jié)果表示為0.D.(光密度)。
[0368]1.1.5雜交瘤IHC篩選:抗Tau抗體與轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片中的纏結(jié)的結(jié)合(TAUPIR)
[0369]根據(jù)實(shí)施例3.1.2的規(guī)程進(jìn)行TAUPIR實(shí)驗(yàn)。
[0370]1.1.6T25 三角瓶 IgG 篩選
[0371]在4 °C,用5ug/ml抗小鼠IgG F (ab') 2片段特異性抗體(JacksonLaboratories, Baltimore, PA, USA)在pH9.6的碳酸鹽-碳酸氫鹽涂覆緩沖液(Sigma, Buchs,瑞士)中的溶液涂覆ELISA板過夜。清洗板后，在室溫下將未稀釋的雜交瘤上清液、陽性對照IgGl抗體(6E10,濃度lug/ml:Covance, Emeryville, CA, USA)或陰性對照(僅培養(yǎng)基)孵育I小時(shí)。清洗步驟后，在37°C將第二 AP-結(jié)合的山羊抗小鼠IgG(亞類 l+2a+2b+3) Fe Y 片段特異性抗體(Jackson Laboratories, Baltimore, PA, USA)在板上孵育2小時(shí)。最終清洗后，用作為AP的磷酸酶底物的pNPP (對硝基磷酸苯酯)進(jìn)行檢測，并使用ELISA酶標(biāo)儀在405nm對板讀數(shù)。結(jié)果表示為0.D.(光密度)。
[0372]1.2 結(jié)果
[0373]對由融合產(chǎn)生的來自8X96孔板的細(xì)胞上清液篩選IgG的產(chǎn)生。在所測試的768個(gè)孔中(8X96孔板)，基于與疫苗磷酸肽和全長磷酸-Tau的最佳結(jié)合選擇對IgG產(chǎn)生是陽性的48個(gè)孔。選擇是基于通過ELISA的與肽和全長磷酸-Tau蛋白的結(jié)合，以及同時(shí)基于當(dāng)與非磷酸-肽和非磷酸全長Tau蛋白比較時(shí)與選擇性的結(jié)合。通過將每種雜交瘤以I個(gè)細(xì)胞/孔接種2個(gè)板和以0.5個(gè)細(xì)胞/孔接種I個(gè)板，對24種所選擇的雜交瘤進(jìn)行亞克隆。再次測試上清液與磷酸-肽和磷酸-肽的結(jié)合以驗(yàn)證結(jié)合特征，之后在6周培養(yǎng)中評價(jià)穩(wěn)定性。然后選擇八個(gè)穩(wěn)定的克隆并使用方法中所述的ELISA和TAUPIR測試其同種型和結(jié)合。
[0374]1.3 結(jié)論
[0375]所產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出對pTau肽的高特異性，而與非磷酸化肽僅有輕微結(jié)合。
[0376]選擇總計(jì)8種克隆用于進(jìn)一步亞克隆(參見表6和表7)并且將6種克隆在DSMZ保藏(參見表10)。
[0377]將如上所述的陽性母克隆在96孔板中進(jìn)一步培養(yǎng)，然后在24孔板中培養(yǎng)，最后在T25三角瓶中培養(yǎng)。在每個(gè)階段，通過ELISA、Taupir和免疫印跡篩選雜交瘤克隆的上清液。
[0378]實(shí)施例2:抗體輕鏈和重鏈可變區(qū)的克隆
[0379]將來自雜交瘤細(xì)胞的抗體重和輕可變區(qū)基因克隆并且確定DNA序列和互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的位置以及抗體結(jié)合特征。
[0380]使用Qiagen RNeasy微型試劑盒(Cat No:74104)從3X 16個(gè)雜交瘤細(xì)胞(I個(gè)小瓶)中制備總RNA。將RNA在50uL水中洗脫并在1.2%的瓊脂糖凝膠上檢驗(yàn)。
[0381]使用反轉(zhuǎn)錄酶通過IgG和K恒定區(qū)引物制備％和VKcDNA。使用較大的一組信號(hào)序列引物通過PCR擴(kuò)增第一鏈cDNAo將擴(kuò)增的DNA進(jìn)行凝膠純化并克隆到載體pGem?
T Easy (Promega)中。將所獲得的Vh和Vk克隆篩選預(yù)期大小的插入。通過自動(dòng)DNA測序雙向確定所選克隆的DNA序列。參考其它抗體序列確定了序列中互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的位置(Kabat EA 等人,1991)。
[0382]實(shí)施例3:結(jié)合研究I
[0383]目的是測量從來源于用Tau脂質(zhì)體疫苗免疫的小鼠的亞克隆雜交瘤所產(chǎn)生的抗體的磷酸-Tau(pTau)結(jié)合。為了進(jìn)行該測試，將酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)用于測量純化抗體與磷酸化和非磷酸化全長Tau蛋白以及用于脂質(zhì)體疫苗制備的磷酸化和非磷酸化Tau抗原性肽的結(jié)合。
[0384]通過兩種其他方法完成篩選。使用抗Tau抗體作為一抗對來自Tau轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(TAUPIR)的腦切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)(IHC)。另外，使用抗Tau抗體作為印跡抗體對來自Tau轉(zhuǎn)基因小鼠的腦蛋白勻漿進(jìn)行免疫印跡(WB)。
[0385]3.1 方法
[0386]3.1.1ELISA:磷酸 Tau 結(jié)合測定
[0387]為了測試純化抗體與Tau和pTau的結(jié)合,使用了 ELISA測定。簡言之,用lyg/mL全長(441個(gè)aa) Tau蛋白(SignalChem, Richmond,加拿大)或憐酸化全長(441個(gè)aa) Tau蛋白涂覆 Nunc MaxiSorp96 孔板(Nunc, Roskilde,丹麥)(Vandebroek 等人，2005)。另外,用10 μ g/mL的Tau源性疫苗肽，Tau393_408 (在S396和S404磷酸化或未磷酸化)涂覆板。為了測試與在疫苗制備中未使用的Tau和具有不同pTau表位的pTau序列的交叉反應(yīng)性，用10 μ g/mL的下列肽涂覆板:Tau393-408 (在S396和S404磷酸化或未磷酸化)。在4°C在磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中涂覆過夜。用0.05%的吐溫20^^5徹底清洗板，然后在371:用I %牛血清白蛋白(BSA)在0.05%吐溫204^中的溶液封閉I小時(shí)。然后，以在20至
Oμ g/mL之間的8或16個(gè)兩倍稀釋系列加入測試抗體，并允許在37°C孵育2小時(shí)。然后如上所述清洗板，并且在37°C以在0.05%吐溫20/PBS中的1/6000稀釋液加入AP結(jié)合的抗小鼠 IgG 二抗(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Suffolk, England) 2 小時(shí)。清洗后，將板與P-硝基苯磷酸二鈉六水合物(pNPP ；Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland)磷酸酶底物溶液一起孵育，并在30min、l、2或16小時(shí)的孵育時(shí)間后使用ELISA酶標(biāo)儀在405nm讀數(shù)。
[0388]3.1.2.TAUPIR和Western印跡:抗Tau抗體與Tau轉(zhuǎn)基因動(dòng)物腦切片中Tau纏結(jié)的結(jié)合(TAUPIR)
[0389]對于TAUPIR染色，腦切片來自于TPLH小鼠(表達(dá)hTauP.的最長同種型(441aa)的轉(zhuǎn)基因小鼠)、年老的(>18個(gè)月大)雙轉(zhuǎn)基因biGT小鼠(與TPLH雜交的GSK-3 0轉(zhuǎn)基因小鼠)，和雙轉(zhuǎn)基因biAT小鼠(與TPLH雜交的hAPPvmi轉(zhuǎn)基因小鼠)。作為陰性對照，使用了來自Tau敲除小鼠(ΤΚ0 ;6個(gè)月大)的切片。將腦切片在PBS中清洗5分鐘，然后在室溫下在含1.5% H2O2的PBS:Me0H(l:1)中的溶液中孵育15分鐘以封閉內(nèi)源過氧化物酶活性。在PBST(PBS/0.1 % TritonXlOO)中清洗切片3次后，將它們在室溫下在PBST+10%FCS (胎牛血清)封閉溶液中孵育30分鐘。在4°C，用下列抗體濃度與所測試的抗Tau抗體過夜孵育:在 PBST/10 % FCS 中的 0.0053 μ g/mL 的 AC1-35-2Al_Abl、0.0048 μ g/mL 的AC1-35-2Al-Ab2、0.015μ g/mL 的 ACI_35-4A6_Abl、0.0047 μ g/mL 的 ACI_35_1D2-Abl、
0.0055μ g/mL 的 AC1-35-2G5-Abl 以及 0.01 μ g/mL 的 ACI_35-2G5_Ab2 和 ACI_35-2G5_Ab3。在用PBST再次清洗切片3次后，在室溫下與HRP結(jié)合的山羊抗小鼠(購自Dako，GloStrup，丹麥)二抗在PBST/10 % FCS中的溶液孵育I小時(shí)。檢測前，用PBST清洗切片3次并在50mMTris/HCl pH7.6中孵育5分鐘。通過將切片在二氨基聯(lián)苯胺(DAB:1片溶于1ml的50mMTris.HCl+3y I H20230% ；MP B1medicals, Solon, OH, USA)中孵育 3 分鐘來進(jìn)行檢測。通過用PBST清洗切片3次來終止反應(yīng)。然后，將切片轉(zhuǎn)移到硅烷化玻璃板上并在50°C在加熱板上空氣干燥2小時(shí)。通過與邁爾氏蘇木精(Fluka Chemie, Buchs,瑞士)孵育I分鐘,然后在流動(dòng)的自來水中清洗4分鐘來進(jìn)行復(fù)染色。經(jīng)由在50%、70%、90%乙醇浴中通過以及在100%乙醇浴中通過兩次，然后在二甲苯中通過2次(每次I分鐘)使切片脫水。最后，用DePeX(BDH Chemicals Ltd., Poole, England)將切片固定在玻璃蓋玻片下用于成像。
[0390]對SDS-PAGE (10 % )分離的來自野生型小鼠(FVB) Tau轉(zhuǎn)基因小鼠(TPLH和biGT)、或Tau敲除小鼠(TKO)的腦勻衆(zhòng)蛋白進(jìn)行另外的染色(Western印跡)。對于Western 印跡，使用下列濃度的抗體:0.53 μ g/mL 的 AC1-35-2Al_Abl、0.48 μ g/mL 的AC1-35-2Al-Ab2、0.5μ g/mL 的 AC1-35-4A6-Abl、0.47 μ g/mL 的 AC1-35_lD2-Abl、0.55 μ g/mL 的 AC1-35-2G5-Abl、0.33 μ g/mL 的 ACI_35-2G5_Ab2 和 0.5 μ g/mL 的 ACI_35-2G5_Ab3。
[0391]3.2 結(jié)果
[0392]抗體AC1-35-2Al-Abl、ACI_35_2A1-Ab2、ACI_35_1D2-Abl、ACI_35-2G5_Ab2 和AC1-35-2G5-Ab3顯示與磷酸化人Tau蛋白的高結(jié)合活性和特異性(表2)，與相應(yīng)的疫苗中所用的抗原磷酸-Tau肽的特異性更高。觀察到與非磷酸化Tau，或與所測試的其他磷酸化和非磷酸化Tau源性肽無交叉反應(yīng)性?？贵wAC1-35-4A6-Abl，根據(jù)其選擇，僅與疫苗制備中所用的抗原磷酸-Tau肽表現(xiàn)出高結(jié)合活性。發(fā)現(xiàn)與疫苗制備中所用的抗原肽的非磷酸對應(yīng)物的交叉反應(yīng)性較低，這是基于克隆選擇而期望的?？贵wAC1-35-2G5-Abl僅與疫苗制備中所用的抗原磷酸-Tau肽表現(xiàn)出高結(jié)合活性。觀察到與T4.5磷酸-肽(包含疫苗中所用的抗原肽序列的部分)的交叉反應(yīng)性較低。
[0393]使用TAUPIR和WB觀察與具有晚期Tau病(biGT>18個(gè)月)的小鼠的腦中的Tau纏結(jié)、以及與來源于這些小鼠的變性勻漿中的全長Tau的結(jié)合。分析不同腦區(qū):皮層以及海馬的CAU CA3和齒狀回(DG)部分?？贵wAC1-35-2Al-Abl和ACI_35_2A1-Ab2通過致密的胞質(zhì)染色和清楚的神經(jīng)氈線(尤其在海馬的CAl和CA3區(qū)中)表現(xiàn)出最佳TAUPIR結(jié)果。抗體AC1-35-4A6-Abl在TAUPIR中是陰性的，僅有微弱的散發(fā)纏結(jié)如輕微染色的結(jié)構(gòu)?？贵wAC1-35-lD2-Abl通過CAl區(qū)中的神經(jīng)氈線顯示良好的胞質(zhì)TAUPIR染色?？贵wAC1-35-2G5-Abl在TAUPIR中是陰性的，具有細(xì)胞核染色和僅有一些纏結(jié)染色。最終，AC1-35-2G5-Ab2和AC1-35_2G5_Ab3抗體表現(xiàn)出類似的良好胞質(zhì)TAUPIR染色，在海馬的CAl和CA3中觀察到神經(jīng)氈線。使用+或-符號(hào)對染色質(zhì)量的評級示于表2中。對來自Tau轉(zhuǎn)基因小鼠的腦勻漿印跡，顯示所有抗體與期望的Tau珠結(jié)合良好(表2，評級為+)，其中AC1-35-lD2-Abl和AC1-35_2G5_Abl也顯示另外的非特異性結(jié)合(_/+)。
[0394]實(shí)施例4:結(jié)合研究II
[0395]4.1 方法
[0396]4.1.1SPR 結(jié)合測定
[0397]所有SPR實(shí)驗(yàn)均在Biacore X儀(GE Healthcare)上進(jìn)行。傳感器芯片SA(鏈霉親和素衍生化的羧甲基葡聚糖)購自GE Healthcare。運(yùn)行緩沖液為PBS(Dulbecco’ sPBS, Sigma D8537)。通過進(jìn)樣16mM NaOH (水溶液)的8個(gè)脈沖(各~I μ L)，首先從傳感器表面除去非共價(jià)結(jié)合的鏈霉親和素。然后將磷酸-tau肽溶解于PBS中以得到I μ M的最終肽濃度，接著以5 μ Ι/min在傳感器芯片的流通池(fc)2上進(jìn)樣(35 μ L)。偶聯(lián)后，獲得130RU的最終固定化水平。為了研究抗體與芯片表面的結(jié)合，通過用運(yùn)行緩沖液的連續(xù)2倍稀釋液制備數(shù)個(gè)濃度的抗體。以50 μ L/min的流速在fcl和2上進(jìn)行進(jìn)樣120秒。流通池I是未衍生化的并且從fc2扣除fcl的響應(yīng)以修正儀器噪聲和本體折射率變化。每次進(jìn)樣后，直接用運(yùn)行緩沖液清洗表面100秒。為了從芯片除去任何剩余的結(jié)合抗體，通過進(jìn)樣I μ L的1mM Glycine-HCl pHl.7進(jìn)行表面再生。使用BIAevaluat1n3.0,利用數(shù)值積分和全局分析的算法進(jìn)行動(dòng)力學(xué)分析。對不同濃度的抗體進(jìn)樣所獲得的傳感圖并且將基線調(diào)至零。對于曲線擬合，同時(shí)將所有數(shù)據(jù)擬合至1:1均質(zhì)(Langmuir)模型。
[0398]所使用的肽
【權(quán)利要求】
1.一種抗體或其功能性片段，其識(shí)別并特異性結(jié)合至哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或抗體片段對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié)體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平。
2.一種抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段結(jié)合至具有在396位(pS396)和在404位(pS404)包含磷酸化Ser的氨基酸序列VYKSPVVS⑶TSPRHL (SEQ ID NO: 62) (SEQID NO:67的Tau aa393_408)或在所述氨基酸序列內(nèi)的磷酸表位。
3.如權(quán)利要求2所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段是調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物腦中的可溶性和/或不溶性Tau水平的調(diào)節(jié)抗體。
4.如權(quán)利要求3所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段調(diào)節(jié)腦皮層和/或海馬中的可溶性和/或不溶性Tau水平。
5.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段降低總可溶性和/或不溶性tau蛋白的水平。
6.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段降低可溶性和/或不溶性磷酸化tau蛋白的水平。
7.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段降低含有超磷酸化tau蛋白的雙股螺旋形細(xì)絲的水平。
8.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段降低總可溶性tau蛋白、可溶性磷酸化tau蛋白和pTau雙股螺旋形細(xì)絲的水平。
9.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
10.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段具有至少1nM的解離常數(shù)。
11.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段具有至少82nM、5nM、至少2nM ;至少InM、至少500pM、至少300pM、至少200pM、至少10pM的解離常數(shù)。
12.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段具有14IT1S4或更大JO5IT1S4或更大、16IT1S4或更大的解離速率常數(shù)。
13.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段具有高結(jié)合親合力，其解離常數(shù)為至少4nM且解離速率常數(shù)為15M^或更大。
14.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段具有高結(jié)合親合力，其解離常數(shù)為至少3nM且解離速率常數(shù)為16M^或更大。
15.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段具有高結(jié)合親合力，其解離常數(shù)為至少2nM且解離速率常數(shù)為14M^或更大。
16.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段具有高結(jié)合親合力，其解離常數(shù)為至少InM且解離速率常數(shù)為15M^或更大。
17.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段具有高結(jié)合親合力，其解離常數(shù)為至少200pM且解離速率常數(shù)為15M^或更大。
18.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段具有高結(jié)合親合力，其解離常數(shù)為至少10pM且解離速率常數(shù)為16M^或更大。
19.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或抗體片段結(jié)合至選自以下的表位: a.在396 位(pS396)包含磷酸化 Ser 的 VYKSPVVSG (SEQ ID NO: 67 的 Tau aa393_401)； b.在396 位(pS396)包含磷酸化 Ser 的 SPVVSG(SEQ ID NO:67 的 Tau aa396_401)； c.在396 位(pS396)包含磷酸化 Ser 的 YKSPWS(SEQ ID NO:67 的 Tau aa394_400)； d.在404 位(pS404)包含磷酸化 Ser ^ DTSPR(SEQ ID NO:67 的 Tau aa402_406);和 e.在396 位(pS396)包含磷酸化 Ser 的 VYKSPVVS (SEQ ID NO:67 的 Tau aa393_400)。
20.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或其片段結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白上，特別是在所述人Tau蛋白，但特別是包括在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa393_401 (VYKSPVVSG)的如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白上的表位。
21.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或其片段結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白上，特別是在所述人Tau蛋白，但特別是包括在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa396_401 (SPVVSG)的如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白上的表位。
22.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或其片段結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白上，特別是在所述人Tau蛋白，但特別是包括在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa394_400 (YKSPVVS)的如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白上的表位。
23.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或其片段結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白上，特別是在所述人Tau蛋白，但特別是包括在404位(pS404)包含磷酸化Ser的Tau aa402_406 (DTSPR)的如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白上的表位。
24.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或其片段結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白上，特別是在所述人Tau蛋白，但特別是包括在396位(pS396)包含磷酸化Ser的Tau aa393_400 (VYKSPVVS)的如SEQ ID NO:67中所示的人Tau蛋白上的表位。
25.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含:包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQID NO: 75中所示的氨基酸序列的⑶R3、或與上述⑶R具有至少至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含:包含SEQ ID NO: 70中所示的氨基酸序列、或與其具有至少95%、特別是98%、特別是99%同一性的氨基酸序列的⑶Rl，包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列、或與其具有至少94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的氨基酸序列的⑶R2，和包含SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列、或與其具有至少至少60 %、至少70 %、至少80 %、特別是至少85 %、特別是至少90 %、至少91 %、至少92 %、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列的⑶R3。
26.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含: a.第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含:包含SEQID N0:73中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQID NO: 74中所示的氨基酸序列的⑶R2和包含SEQ ID NO: 75中所示的氨基酸序列的⑶R3 ;和/或 b.包含氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述氨基酸序列包含:包含SEQID N0:70中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列的⑶R2和包含SEQ IDNO:72中所示的氨基酸序列的⑶R3。
27.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含:具有SEQ ID N0:81中所示的氨基酸序列的⑶Rl，具有SEQ ID N0:82中所示的氨基酸序列的⑶R2，和具有SEQ IDNO:83中所示的氨基酸序列的⑶R3，或與上述⑶R具有至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含:具有SEQ ID NO:78中所示的氨基酸序列的CDR1，具有SEQ ID NO: 79中所示的氨基酸序列的CDR2，和具有SEQ ID N0:80中所示的氨基酸序列的⑶R3、或與上述⑶R具有至少至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列。
28.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含: a.第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含:包含SEQID NO:81中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQID NO:82中所示的氨基酸序列的⑶R2和包含SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列的⑶R3 ;和/或 b.包含氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述氨基酸序列包含:包含SEQID NO:78中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQ ID NO:79中所示的氨基酸序列的⑶R2和包含SEQ IDNO:80中所示的氨基酸序列的⑶R3。
29.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含:具有SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列的⑶Rl，具有SEQ ID N0:94中所示的氨基酸序列的⑶R2，和具有SEQ IDNO:95中所示的氨基酸序列的⑶R3，或與上述⑶R中任一個(gè)具有至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含:具有SEQ ID NO: 89中所示的氨基酸序列的CDRl，具有SEQ ID N0:90中所示的氨基酸序列的CDR2，和具有SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的⑶R3、或與上述⑶R中任一個(gè)具有至少至少60 %、至少70 %、至少80 %、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95 %、特別是至少96 %、特別是至少97 %、特別是至少98 %、特別是至少99 %或100 %同一性的氨基酸序列。
30.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含: a.第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含:包含SEQID NO:93中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQID NO:94中所示的氨基酸序列的⑶R2和包含SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列的⑶R3 ；和/或 b.包含氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述氨基酸序列包含:包含SEQID NO:89中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列的⑶R2和包含SEQ IDNO:91中所示的氨基酸序列的⑶R3。
31.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含:具有SEQ ID NO: 101中所示的氨基酸序列的⑶R1，具有SEQ ID NO: 102中所示的氨基酸序列的⑶R2，和具有SEQ IDNO: 103中所示的氨基酸序列的⑶R3，或與上述⑶R中任一個(gè)具有至少60%、至少70%、至少80 %、特別是至少85 %、特別是至少90 %、至少91 %、至少92 %、至少93 %、至少94 %、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域依次包含:具有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的CDRl， 具有SEQ ID NO: 99中所示的氨基酸序列的CDR2，和具有SEQ ID NOilOO中所示的氨基酸序列的⑶R3、或與上述⑶R中任一個(gè)具有至少至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列。
32.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含: a.第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含:包含SEQID NO: 101中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQ ID NO: 102中所示的氨基酸序列的CDR2和包含SEQ ID NO: 103中所示的氨基酸序列的CDR3 ;和/或 b.包含氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述氨基酸序列包含:包含SEQID N0:98中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQ ID N0:99中所示的氨基酸序列的⑶R2和包含SEQ IDNO: 100中所示的氨基酸序列的⑶R3。
33.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含:具有SEQ ID NO: 106中所示的氨基酸序列的⑶R1，具有SEQ ID NO: 107中所示的氨基酸序列的⑶R2，和具有SEQ IDNO: 108中所示的氨基酸序列的⑶R3，或與上述⑶R中任一個(gè)具有至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含:具有SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列的CDRl，具有SEQ ID NO: 115中所示的氨基酸序列的CDR2，和具有SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的⑶R3，或與上述⑶R中任一個(gè)具有至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95 %、特別是至少96 %、特別是至少97 %、特別是至少98 %、特別是至少99 %或100 %同一性的氨基酸序列。
34.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其抗體或其片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其片段包含: a.第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含:包含SEQID NO: 106中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQ ID NO: 107中所示的氨基酸序列的CDR2和包含SEQ ID NO: 108中所示的氨基酸序列的CDR3 ;和/或 b.包含氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述氨基酸序列包含:包含SEQID NO:89中所示的氨基酸序列的⑶R1、包含SEQ ID NO: 115中所示的氨基酸序列的⑶R2和包含SEQ IDNO:91中所示的氨基酸序列的⑶R3。
35.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID N0:69、77、116、92、118、97、105的所示氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID N0:68、76、88、96、104中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列至少60%、至少70%、至少80%、特別是至少85%、特別是至少90%、至少91 %、至少92%、至少9 3%、至少94%、特別是至少95%、特別是至少96%、特別是至少97%、特別是至少98%、特別是至少99%或100%同一性的氨基酸序列。
36.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其功能片段包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:69中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少98%或99%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:68中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少90%、91%、92%或93%同一性的氨基酸序列。
37.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其功能片段包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:77中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少93%、94%或95%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:76中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少88 %、89 %、或90 %同一性的氨基酸序列。
38.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其功能片段包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含:SEQ ID NO:116、92或118中所示的氨基酸序列或與所述氨基酸序列具有至少93%、94%或95%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID N0:88中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少90%、.91 %、92%或93%同一性的氨基酸序列。
39.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其功能片段包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少99%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ IDNO: 96中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少86 %、87 %、88 %或90 %同一性的氨基酸序列。
40.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物Tau蛋白或其片段上的磷酸表位，其中所述抗體或其功能片段包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO: 105中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少98%、或99%同一性的氨基酸序列；所述第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO: 104中所示的氨基酸序列、或與所述氨基酸序列具有至少88%、89%、或90%同一性的氨基酸序列。
41.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其包含: a.包含SEQID NO:69中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO:68中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域；或 b.包含SEQID NO:77中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO:76中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域；或 c.包含SEQID NO: 116中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO:88中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域；或 d.包含SEQID NO:92中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO:88中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域；或 e.包含SEQID NO:97中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO:96中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域；或 f.包含SEQID NO: 105中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO: 104中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域；或 g.包含SEQID NO: 118中所示的氨基酸序列的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或包含SEQ IDNO:88中所示的氨基酸序列的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
42.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其是多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體、或完全人抗體或其功能性片段。
43.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其具有IgG2b、IgG2a或IgG3同種型。
44.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述哺乳動(dòng)物Tau蛋白是人Tau蛋白。
45.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段，其中所述抗體或其片段結(jié)合至病理蛋白Tau構(gòu)象體,但是不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位。
46.一種多核苷酸，其編碼如上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段。
47.如權(quán)利要求46所述的多核苷酸，其包含選自以下的核酸分子:a.包含核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列與SEQID NO:35-45 ；SEQ IDNO:84-87, SEQ ID NO: 109-112和117-119中所示的序列具有至少85%序列同一性； b.包含核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列與SEQID NO:35-45 ；SEQ IDNO:84-87, SEQ ID NO: 109-112和117中所示的序列具有至少90%序列同一性; c.包含核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列與SEQID NO:35-45 ；SEQ IDNO:84-87, SEQ ID NO: 109-112和117-119中所示的序列具有至少95%序列同一性； d.包含核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列與SEQID NO:35-45 ；SEQ IDNO:84-87, SEQ ID NO: 109-112和117-119中所示的序列具有至少98%序列同一性； e.包含核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列與SEQID NO:35-45 ；SEQ IDNO:84-87, SEQ ID NO: 109-112和117-119中所示的序列具有至少100%序列同一性； f.包含核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列的互補(bǔ)鏈與a)-d)中任一項(xiàng)的核酸分子雜交；或 g.包含核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列因遺傳密碼的簡并度與a)-e)中任一項(xiàng)定義的核苷酸序列不同: 其中如a) -g)中任一項(xiàng)中所定義的所述核酸分子編碼抗體或其功能性片段，所述抗體或其功能性片段識(shí)別并特異性結(jié)合至在哺乳動(dòng)物、特別是在人Tau蛋白或其片段上，特別是病理蛋白tau構(gòu)象體上的磷酸表位，但是不結(jié)合至相應(yīng)的非磷酸化表位和/或非相關(guān)表位，其中所述抗體或抗體片段對可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白具有高結(jié)合親合力并且能夠檢測和/或調(diào)節(jié) 體內(nèi)可溶性、寡聚和不溶性磷酸化Tau蛋白的水平。
48.一種藥物組合物，包含治療有效量的根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段、或其組合，以及藥學(xué)上可接受的載體。
49.如權(quán)利要求48所述的藥物組合物，其包含根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的至少兩個(gè)抗體或其功能片段，其識(shí)別并結(jié)合至所述哺乳動(dòng)物Tau蛋白上的兩個(gè)不同磷酸表位。
50.如權(quán)利要求48或49所述的藥物組合物，其進(jìn)一步包含識(shí)別并結(jié)合至促淀粉樣變蛋白或肽的另外的抗體或其功能性片段。
51.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段、多核苷酸或藥物組合物、或其組合，用于治療，特別是用于治療哺乳動(dòng)物、特別是需要這種治療的人中的神經(jīng)退行性疾病或病癥諸如Tau病。
52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的抗體或其功能片段、多核苷酸、藥物組合物、或其組合，用于治療哺乳動(dòng)物中的神經(jīng)退行性疾病或病癥，其中所述神經(jīng)退行性疾病或病癥是Tau病。
53.根據(jù)權(quán)利要求51或52所述的抗體或其功能片段、多核苷酸、藥物組合物、或其組合，用于治療哺乳動(dòng)物中的神經(jīng)退行性疾病或病癥諸如Tau病，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
54.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段、多核苷酸、或藥物組合物，用于治療或減輕哺乳動(dòng)物、特別是患有這種缺陷的人中的認(rèn)知缺陷。
55.根據(jù)權(quán)利要求54所述的抗體或其功能性片段、多核苷酸、或藥物組合物，其中哺乳動(dòng)物、特別是人中的認(rèn)知缺陷的治療或減輕導(dǎo)致認(rèn)知缺陷發(fā)展的停止。
56.根據(jù)權(quán)利要求54所述的抗體或其功能性片段、多核苷酸、或藥物組合物，其中哺乳動(dòng)物、特別是人中的認(rèn)知缺陷的治療或減輕導(dǎo)致所治療的受試者中認(rèn)知記憶能力的保持的提聞，特別是完全恢復(fù)。
57.根據(jù)權(quán)利要求52所述的抗體或其功能性片段、多核苷酸、或藥物組合物，其中所述Tau病選自阿爾茨海默氏病、克-雅二氏病、拳擊員癡呆、唐氏綜合征、GSS病、關(guān)島型肌萎縮性側(cè)索硬化/帕金森綜合征-癡呆復(fù)合征、具有神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病、嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底核退化癥、鈣化性彌散神經(jīng)原纖維纏結(jié)、連鎖于17號(hào)染色體伴帕金森病的額顳葉癡呆、額顳葉癡呆、Hallevorden-Spatz病、多系統(tǒng)萎縮癥、C型尼曼-皮克病、蒼白球腦橋黑質(zhì)變性、皮克病、進(jìn)行性皮質(zhì)下膠質(zhì)增生癥、進(jìn)行性核上麻痹、亞急性硬化性全腦炎、僅纏結(jié)型癡呆、腦炎后帕金森氏綜合征和肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良。
58.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段、多核苷酸、或藥物組合物，用于治療阿爾茨海默氏病或額顳葉癡呆。
59.根據(jù)權(quán)利要求51所述的抗體或其功能性片段、多核苷酸、或藥物組合物，其中所述神經(jīng)退行性疾病或病癥顯示tau和淀粉狀蛋白病理共存。
60.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段、多核苷酸、或藥物組合物，用于治療由神經(jīng)原纖維病變的形成所引起的或與之有關(guān)的疾病和病癥，所述神經(jīng)原纖維病變是Tau病中主要的腦病理，其包括一組異質(zhì)性的神經(jīng)退行性疾病或病癥，所述疾病或病癥包括顯示出Tau和淀粉狀蛋白病 理共存的疾病或病癥，包括但不限于阿爾茨海默氏病、克-雅二氏病、拳擊員癡呆、唐氏綜合征、GSS病、包涵體肌炎和朊蛋白腦淀粉狀蛋白血管病、創(chuàng)傷性腦損傷和不顯示單獨(dú)的淀粉狀蛋白病理的其他疾病或病癥，其包括但不限于關(guān)島型肌萎縮性側(cè)索硬化/帕金森綜合征-癡呆復(fù)合征、具有神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病、嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底核退化癥、鈣化性彌散神經(jīng)原纖維纏結(jié)、連鎖于17號(hào)染色體伴帕金森病的額顳葉癡呆、額顳葉癡呆、Hallevorden-Spatz病、多系統(tǒng)萎縮癥、C型尼曼-皮克病、蒼白球腦橋黑質(zhì)變性、皮克病、進(jìn)行性皮質(zhì)下膠質(zhì)增生癥、進(jìn)行性核上麻痹、亞急性硬化性全腦炎、僅纏結(jié)型癡呆、腦炎后帕金森氏綜合征和肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良。
61.根據(jù)權(quán)利要求54、55、56或58所述的抗體或其功能性片段、多核苷酸、或藥物組合物，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
62.一種用于治療、減輕或防止遭受神經(jīng)退行性疾病或病癥諸如Tau病的方法，包括向患有此類疾病或病癥的的哺乳動(dòng)物施用根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段、多核苷酸或藥物組合物、或其組合。
63.根據(jù)權(quán)利要求62所述的方法，其中所述神經(jīng)退行性疾病或病癥是Tau病。
64.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其中所述Tau病選自阿爾茨海默氏病、克-雅二氏病、拳擊員癡呆、唐氏綜合征、GSS病、包涵體肌炎和朊蛋白腦淀粉狀蛋白血管病、創(chuàng)傷性腦損傷、關(guān)島型肌萎縮性側(cè)索硬化/帕金森綜合征-癡呆復(fù)合征、具有神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病、嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底核退化癥、鈣化性彌散神經(jīng)原纖維纏結(jié)、連鎖于17號(hào)染色體伴帕金森病的額顳葉癡呆、額顳葉癡呆、Hallevorden-Spatz病、多系統(tǒng)萎縮癥、C型尼曼-皮克病、蒼白球腦橋黑質(zhì)變性、皮克病、進(jìn)行性皮質(zhì)下膠質(zhì)增生癥、進(jìn)行性核上麻痹、亞急性硬化性全腦炎、僅纏結(jié)型癡呆、腦炎后帕金森氏綜合征、肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良。
65.如權(quán)利要求62、63或64所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
66.一種用于在患有神經(jīng)退行性病癥諸如Tau病的動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物或人中引起被動(dòng)免疫應(yīng)答的方法，所述方法通過向所述動(dòng)物或人施用根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其功能性片段、或藥物組合物、或其組合。
67.一種用于診斷患者中的Tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況或?qū)au蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況的易患情況的方法，包括檢測抗體或其活性片段與樣品中或原位tau蛋白的表位的免疫特異性結(jié)合，其包括以下步驟: a.使懷疑含有所述Tau抗原的所述樣品或具體身體部分或身體區(qū)域與根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或其片段接觸，所述肽或其片段結(jié)合所述Tau蛋白的表位； b.允許所述抗體與所述Tau蛋白結(jié)合以形成免疫復(fù)合物； c.檢測所述免疫復(fù)合物的形成；和 d.將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與所述樣品中或具體身體部分或區(qū)域中Tau蛋白的存在或不存在相關(guān)聯(lián)， 其中與正常對照值相比，所述聚集物的量的增加表明所述患者患有或處于發(fā)展tau蛋白相關(guān)疾病或病況的風(fēng)險(xiǎn)。
68.一種用于監(jiān)測使用根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或藥物組合物治療后患者中的最小殘留疾病的方法，其中所述方法包括: a.使懷疑含有所述Tau抗原的所述樣品或具體身體部分或身體區(qū)域與根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體 或其片段接觸，所述肽或其片段結(jié)合所述Tau蛋白的表位； b.允許所述抗體與所述Tau抗原結(jié)合以形成免疫復(fù)合物； c.檢測所述免疫復(fù)合物的形成；和 d.將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與所述樣品中或具體身體部分或區(qū)域中Tau抗原的存在或不存在相關(guān)聯(lián)， 其中與正常對照值相比，所述免疫復(fù)合物的量的增加表明所述患者仍患有最小殘留疾病。
69.一種用于預(yù)測使用根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或藥物組合物治療的患者的反應(yīng)性的方法，包括: a.使懷疑含有所述Tau抗原的所述樣品或具體身體部分或身體區(qū)域與根據(jù)權(quán)利要求1-45中任一項(xiàng)的抗體或其片段接觸，所述肽或其片段結(jié)合所述Tau蛋白的表位； b.允許所述抗體與所述Tau抗原結(jié)合以形成免疫復(fù)合物； c.檢測所述免疫復(fù)合物的形成；和 d.將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與所述樣品中或具體身體部分或區(qū)域中Tau抗原的存在或不存在相關(guān)聯(lián)， e.比較治療開始前后所述免疫復(fù)合物的量， 其中，所述免疫復(fù)合物的量的減少表明所述患者仍患有最小殘留疾病。
70.如權(quán)利要求67-69中任一項(xiàng)所述的方法，其中將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與樣品中或具體身體部分或區(qū)域中Tau抗原的存在或不存在相關(guān)聯(lián)的步驟包括將所述免疫復(fù)合物的量與正常對照值進(jìn)行比較的步驟。
71.如權(quán)利要求67-70中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述樣品是腦勻漿或腦脊液。
72.—種死后檢測來自懷疑患有tau相關(guān)疾病或病癥的受試者的腦樣品中的磷酸Tau(pTau)多聚體的方法,包括:a.使所述受試者的腦樣品與根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或其片段接觸，所述肽或其片段結(jié)合所述磷酸Tau蛋白的表位； b.允許所述抗體與所述Tau抗原結(jié)合以形成免疫復(fù)合物； c.檢測所述免疫復(fù)合物的形成；和 d.使用相同條件將由所述受試者獲得的樣品中免疫復(fù)合物的量或強(qiáng)度與由健康對照受試者獲得的免疫復(fù)合物的量或強(qiáng)度進(jìn)行比較， 其中與正常對照值相比，所述免疫復(fù)合物的量或強(qiáng)度的增加表明所述患者已患有tau相關(guān)疾病或病癥。
73.如權(quán)利要求72所述的方法，其中與正常對照值相比，所述測試樣品中觀察到的增加為30%至100%。
74.如權(quán)利要求67-73中任一項(xiàng)所述的用于診斷Tau蛋白相關(guān)疾病的方法，其中，在步驟(a)之前，通過使所述樣品與附接至固體載體的抗-Tau抗體或其片段相接觸對所述樣品進(jìn)行免疫富集以增加樣品中Tau蛋白的濃度。
75.用于檢測和診斷tau蛋白相關(guān)疾病、病癥或病況的測試試劑盒，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-45所述的抗體。
76.根據(jù)前述權(quán)利要求所述的測試試劑盒，包含容納根據(jù)權(quán)利要求1-45中任一項(xiàng)所述的一種或多種抗體或其功能性片段的容器，和出于結(jié)合Tau抗原以形成免疫復(fù)合物并檢測所述免疫復(fù)合物的形成從 而將所述免疫復(fù)合物的存在或不存在與Tau抗原的存在或不存在相關(guān)聯(lián)的目的使用所述抗體的說明書。
77.一種選自以下的表位:在396位(pS396)包含磷酸化Ser的VYKSPVVSG (SEQ IDNO:67 的 Tau aa393_401)、在 396 位(pS396)包含磷酸化 Ser 的 SPVVSG(SEQ ID NO:67的 Tau aa396-401)、在 396 位(pS396)包含磷酸化 Ser 的 YKSPVVS (SEQ ID NO: 67 的 Tauaa394-400)、在404位(pS404)包含磷酸化Ser的DTSPR(SEQ ID NO:67 的 Tau aa402_406)、和在 396 位(pS396)包含磷酸化 Ser 的 VYKSPVVS (SEQ ID NO: 67 的 Tau aa393_400)。
78.一種細(xì)胞系，產(chǎn)生根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體。
79.如權(quán)利要求78所述的細(xì)胞系，其是作為DSMACC3136于2011年8月30日保藏的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-4A6-48。
80.如權(quán)利要求78所述的細(xì)胞系，其是作為DSMACC3137于2011年8月30日保藏的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-2G5-30。
81.如權(quán)利要求78所述的細(xì)胞系，其是作為DSMACC3138于2011年8月30日保藏的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-2G5-41。
82.如權(quán)利要求78所述的細(xì)胞系，其是作為DSMACC3139于2011年8月30日保藏的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-2A1-18。
83.如權(quán)利要求78所述的細(xì)胞系，其是作為DSMACC3140于2011年8月30日保藏的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)4-2A1-40。
84.如權(quán)利要求78所述的細(xì)胞系，其是作為DSMACC3141于2011年9月6日保藏的雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)6-1D2-12。
85.—種載體,包含權(quán)利要求46或47所述的多核苷酸,其中所述多核苷酸是可操作連接的。
86.—種宿主細(xì)胞，包含如權(quán)利要求85所述的載體。
87.如權(quán)利要求86所述的宿主細(xì)胞，產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求1-45中任一項(xiàng)所述的抗體、或其功能性片段。
88.如權(quán)利要求86或權(quán)利要求87所述的宿主細(xì)胞，其是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
89.如權(quán)利要求86或權(quán)利要求87所述的宿主細(xì)胞，其是中國倉鼠卵巢細(xì)胞。
90.一種用于產(chǎn)生如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體、或其功能性片段的方法，其包括在適合于表達(dá)抗體或片段的條件下培養(yǎng)如權(quán)利要求86-89中任一項(xiàng)所述的宿主細(xì)胞，以及回收所述抗體或片段。
91.一種檢測腦樣品中磷酸Tau(pTau)多聚體的方法，包括 a.將所述樣品與根據(jù)權(quán)利要求1-45中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段接觸，其抗體或其片段結(jié)合所述磷酸Tau蛋白的表位； b.允許所述抗體或其片段與所述tau蛋白結(jié)合以形成免疫復(fù)合物；和 c.檢測所述免疫復(fù)合物 的形成。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104080806SQ201280060349
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2012年10月5日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月7日
【發(fā)明者】A.法伊弗, A.穆斯, M.皮爾格倫, O.阿道夫森, F.范勒芬 申請人:Ac免疫有限公司, 勒芬天主教大學(xué)