專利名稱：一種龍膽瀉肝顆粒的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域，具體涉及一種龍膽瀉肝顆粒的檢測方法。
背景技術(shù)：
中藥成分復(fù)雜，特別是中藥復(fù)方往往含多類、多種成分，構(gòu)成了一個非常復(fù)雜的系統(tǒng)。目前，新的有效部位中藥制劑和現(xiàn)代復(fù)方中藥制劑的研發(fā)不斷增多，新的工藝及多種不同提取方式并用于藥品的研究及生產(chǎn)。隨著現(xiàn)代分析測試技術(shù)、設(shè)備儀器的迅猛發(fā)展，中藥的含量測定、色譜鑒別成為檢測的重要手段。但目前一般只建立某一指標化學(xué)成分的含量測定或鑒別，針對上述多種新工藝同時應(yīng)用的情況，僅建立某單一成分的含量測定或鑒別在很大程度上帶有較大的片面性。龍膽瀉肝顆粒具有清肝膽，利濕熱的功能。用于肝膽濕熱，頭暈?zāi)砍?，耳鳴耳聾，耳腫疼痛，脅痛口苦，尿赤潘痛，濕熱帶下。龍膽瀉肝顆粒為黃色至棕褐色的顆粒；氣微香、味甜，微苦。其處方是龍膽66g、柴胡66g、黃芩33g、桅子(炒)33g、澤瀉66g、木通33g、車前子(鹽炒)33g、當歸(酒炒)33g、地黃66g、甘草(蜜炙)33g。制法以上十味，取柴胡、當歸提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與其余龍膽等八味，加水煎煮二次，第一次加8倍量水，煎煮1. 5小時，第二次加6倍量水，煎煮1.5小時，合并煎液，濾過，濾液與上述水溶液合并，濃縮至相對密度為1. 25 1. 30 (50 55°C)的清膏。取清膏I份,鹿糖2. 5份,糊精2份及乙醇適量,制成顆粒,干燥,加入上述柴胡、當歸的揮發(fā)油，混勻，制成lOOOg，即得。每袋裝6g;開水沖服，一次6g，一日2次。方中龍膽瀉厥陰之熱，是君藥，黃芩、桅子清肺與三焦之熱以佐之，澤瀉瀉腎經(jīng)之濕，木通、車前子瀉小腸膀胱之濕以佐之，是為臣藥，然皆苦寒下瀉之藥。故用當歸、生地以養(yǎng)血而補肝，共為佐藥，用甘草以緩中而不使傷胃，為使藥也。龍膽瀉肝顆粒原來檢測方法中只有對臣藥桅子的鑒別，但眾所周知方中君藥所起的作用也是十分重要的，還有其它臣藥如黃芩，以及唯一的使藥甘草也有重要作用，如沒有相應(yīng)的檢測手段容易造成檢測方法帶有較大的片面性，所以僅有的對桅子的鑒別也不能全面的反映龍膽瀉肝顆粒重要成份的含量。同時作為臣藥的木通其中含有的馬兜鈴酸需要制備過程中去除，所以目前沒有對此的含量測定也是不完善的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種龍膽瀉肝顆粒的檢測方法，以解決目前檢測方法中存在的檢測不全面的問題。本發(fā)明采取的技術(shù)方案是，包括如下的鑒別方法和含量測定方法和檢查方法
(一)鑒別方法
(I)取本品龍膽瀉肝顆粒12g，加水30ml，加熱使溶解，放冷，用乙醚提取3次，每次15ml，棄去乙醚液，再用水飽合的正丁醇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，加等體積氨試液，搖勻，放置分層，分取上清液，減壓回收正丁醇至干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取桅子苷對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液,作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯丙酮甲酸水=5 5 1 :1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液，在110°C烘10分鐘，至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
(2)取本品龍膽瀉肝顆粒12g，研細，加甲醇50ml，加熱回流I小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15ml，加熱使溶解，放冷，用水飽合正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇提取液，減壓回收正丁醇至干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯丁酮甲 酸水=5 3 :1.1 :1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
(3)取上述(2)項下的供試品溶液，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材2g，加甲醇20ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，作為對照藥材溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯甲酸冰醋酸水=15 :1 :1 :2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
(4)取上述(2)項下的供試品溶液，加于已處理好的中性氧化鋁柱上，所裝中性氧化鋁120目，2g，柱內(nèi)徑15mm，用甲醇20ml洗脫，洗脫液濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取龍膽苦苷對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3 μ 1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿甲醇水=13 :6 :2，IO0C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢識；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
(二)含量測定方法
(I)對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每Iml含60 μ I的溶液，即得；
供試品溶液制備取裝量差異項下的本品龍膽瀉肝顆粒，充分研細，取1. 5g，精密稱定，置50ml量瓶中，加60%甲醇45ml，超聲處理，30分鐘，功率150W，頻率25KHz，放冷至室溫，加60%甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得；
照中國藥典2005年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇水磷酸=47 53 :0. 2為流動相；檢測波長為280nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計算，應(yīng)不低于2500 ；
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜液，測定，即
得;
(三)檢查方法
照中國藥典2005年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；甲醇水冰醋酸=57 43 1為流動相；檢測波長為317nm，理論塔板數(shù)按馬兜鈴酸A峰計算應(yīng)不低于8000 ；
對照品溶液的制備精密稱取馬兜鈴酸A對照品5mg，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取O. 5ml，置IOOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，每Iml含馬兜鈴酸A為I μ g ;
供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品龍膽瀉肝顆粒，混勻，研細，取5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇甲酸=98: 2，50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，功率250W，頻率40kHz，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液10ml，蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用10%的鹽酸溶液調(diào)pH值2 — 3，用乙醚提取4次，每次10ml，合并乙醚提取液，置60°C水浴上揮干，殘渣加少量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，SP得。本發(fā)明優(yōu)點是規(guī)范了龍膽瀉肝顆粒的檢測方法，在原有對桅子鑒別的基礎(chǔ)上，通過建立對君藥龍膽的鑒別，及對臣藥黃芩、使藥甘草的鑒別，以及對臣藥黃芩的含量測定，能更全面的檢測藥物的成分和其配伍，了解其含量和穩(wěn)定性，也有助于說明藥物的藥用物質(zhì)基礎(chǔ)；同時增加對馬兜鈴酸的檢查，更有利于降低其毒副作用。
具體實施例方式龍膽瀉肝顆粒由吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司按背景技術(shù)中處方和工藝生產(chǎn)提供。包括如下的鑒別方法和含量測定方法和檢查方法
(一)鑒別方法
(1)取本品龍膽瀉肝顆粒12g，加水30ml，加熱使溶解，放冷，用乙醚提取3次，每次15ml，棄去乙醚液，再用水飽合的正丁醇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，加等體積氨試液，搖勻，放置分層，分取上清液，減壓回收正丁醇至干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取桅子苷對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液,作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯丙酮甲酸水=5 5 1 :1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液，在110°C烘10分鐘，至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
(2)取本品龍膽瀉肝顆粒12g，研細，加甲醇50ml，加熱回流I小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15ml，加熱使溶解，放冷，用水飽合正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇提取液，減壓回收正丁醇至干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯丁酮甲酸水=5 3 :1.1 :1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
(3)取上述(2)項下的供試品溶液，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材2g，加甲醇20ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，作為對照藥材溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯甲酸冰醋酸水=15 :1 :1 :2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
(4)取上述(2)項下的供試品溶液，加于已處理好的中性氧化鋁柱上，所裝中性氧化鋁120目，2g，柱內(nèi)徑15mm，用甲醇20ml洗脫，洗脫液濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取龍膽苦苷對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3 μ 1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿甲醇水=13 :6 :2，IO0C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢識；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
(二)含量測定方法
(I)對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每Iml含60 μ I的溶液，即得；
供試品溶液制備取裝量差異項下的本品龍膽瀉肝顆粒，充分研細，取1. 5g，精密稱定，置50ml量瓶中，加60%甲醇45ml，超聲處理，30分鐘，功率150W，頻率25KHz，放冷至室溫，加60%甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得；
照中國藥典2005年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇水磷酸=47 53 :0. 2為流動相；檢測波長為280nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計算，應(yīng)不低于2500 ；
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜液，測定，即
得;
(三)檢查方法
照中國藥典2005年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；甲醇水冰醋酸=57 43 1為流動相；檢測波長為317nm，理論塔板數(shù)按馬兜鈴酸A峰計算應(yīng)不低于8000 ；
對照品溶液的制備精密稱取馬兜鈴酸A對照品5mg，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取O. 5ml，置IOOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，每Iml含馬兜鈴酸A為I μ g ;
供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品龍膽瀉肝顆粒，混勻，研細，取5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇甲酸=98: 2，50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，功率250W，頻率40kHz，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液10ml，蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用10%的鹽酸溶液調(diào)pH值2 — 3，用乙醚提取4次，每次10ml，合并乙醚提取液，置60°C水浴上揮干，殘渣加少量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，SP得。
權(quán)利要求
1.一種龍膽瀉肝顆粒的檢測方法，包括桅子的鑒別方法取本品龍膽瀉肝顆粒12g，加水30ml，加熱使溶解，放冷，用乙醚提取3次，每次15ml， 棄去乙醚液，再用水飽合的正丁醇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，加等體積氨試液， 搖勻，放置分層，分取上清液，減壓回收正丁醇至干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取桅子苷對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液,作為對照品溶液；照中國藥典 2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯丙酮甲酸水=5 5 1 1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液，在110°C烘10分鐘，至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；其特征在于還包括如下的鑒別方法和含量測定方法和檢查方法(一)鑒別方法(1)取本品龍膽瀉肝顆粒12g，研細，加甲醇50ml，加熱回流I小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15ml，加熱使溶解，放冷，用水飽合正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇提取液， 減壓回收正丁醇至干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯丁酮甲酸水=5 3 :1.1 :1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中， 在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)取上述(I)項下的供試品溶液，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材2g，加甲醇 20ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，作為對照藥材溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯甲酸冰醋酸水=15 :1 :1 :2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取上述(I)項下的供試品溶液，加于已處理好的中性氧化鋁柱上，所裝中性氧化鋁 120目，2g，柱內(nèi)徑15mm，用甲醇20ml洗脫，洗脫液濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取龍膽苦苷對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3 μ 1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上， 以氯仿甲醇水=13 :6 :2，IO0C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm 紫外光燈下檢識；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(二)含量測定方法(I)對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每Iml含60 μ I的溶液，即得；供試品溶液制備取裝量差異項下的本品龍膽瀉肝顆粒，充分研細，取1. 5g，精密稱定，置50ml量瓶中，加60%甲醇45ml，超聲處理，30分鐘，功率150W，頻率25KHz，放冷至室溫，加60%甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得；照中國藥典2005年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇水磷酸=47 53 :0. 2為流動相；檢測波長為280nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計算，應(yīng)不低于2500 ；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜液，測定，即得；(三)檢查方法照中國藥典2005年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；甲醇水冰醋酸=57 43 1為流動相；檢測波長為317nm，理論塔板數(shù)按馬兜鈴酸A峰計算應(yīng)不低于8000 ； 對照品溶液的制備精密稱取馬兜鈴酸A對照品5mg，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取O. 5ml，置IOOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，每Iml含馬兜鈴酸A為I μ g ;供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品龍膽瀉肝顆粒，混勻，研細，取5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇甲酸=98: 2，50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，功率250W，頻率40kHz，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液10ml，蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用10%的鹽酸溶液調(diào)pH值2 — 3，用乙醚提取4 次，每次10ml，合并乙醚提取液，置60°C水浴上揮干，殘渣加少量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種龍膽瀉肝顆粒的檢測方法，屬于中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域。本發(fā)明規(guī)范了龍膽瀉肝顆粒的檢測方法，在原有對梔子鑒別的基礎(chǔ)上，通過建立對君藥龍膽的鑒別，及對臣藥黃芩、使藥甘草的鑒別，以及對臣藥黃芩的含量測定，能更全面的檢測藥物的成分和其配伍，了解其含量和穩(wěn)定性，也有助于說明藥物的藥用物質(zhì)基礎(chǔ)；同時增加對馬兜鈴酸的檢查，更有利于降低其毒副作用。
文檔編號G01N30/90GK103018394SQ201310000150
公開日2013年4月3日 申請日期2013年1月1日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月1日
發(fā)明者殷金龍, 李坤, 徐德輝, 高艷輝, 楊錫龍, 李男男, 馬偉才, 劉微, 樊艷霞, 王艷娟 申請人:吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司