專利名稱：一種檢測三聚氰胺的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種色譜檢測方法，特別涉及一種三聚氰胺的高效液相色譜檢測方法。
背景技術(shù)：
三聚氰胺，即1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺，是ー種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物。幾乎無味，微溶于水(3.lg/L常溫)，可溶于甲醇、甲醛、こ酸、熱こニ醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚類。與甲醛縮合聚合可制得三聚氰胺樹脂，ー種熱固性樹脂，具有良好的耐電弧性、耐熱性及耐堿性，被廣泛用于塑料及涂料エ業(yè)。蛋白質(zhì)中含有大量氮元素，以常用的凱氏定氮法測定產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)含量吋，不能區(qū)分三聚氰胺和蛋白質(zhì)中的氮元素，因而ー些不良廠家將三聚氰胺添加到飼料和食品中，提高產(chǎn)品中蛋白質(zhì)的檢測數(shù)值，降低生產(chǎn)成本，牟取暴利。現(xiàn)有國標(biāo)檢測三聚氰胺的方法是《GB/T22400-2008原料乳三聚氰胺快速檢測液相色譜法》(下文簡稱GB/T22400)和《GB/T22388-2008原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》(下文簡稱GB/T22388)。GB/T22388中包含多種檢測方法，運(yùn)用高效液相色譜、液相色譜_質(zhì)譜/質(zhì)譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行測定，結(jié)果精確度高。但檢測時(shí)間通常較長，且所需設(shè)備要求較高，在一般企業(yè)內(nèi)部質(zhì)量控制部門進(jìn)行抽樣檢測時(shí)，容易受到條件限制。一般企業(yè)是按照GB/T22388第一法高效液相色譜法進(jìn)行檢測的，GB/T22388第一法的檢測條件:流動(dòng)相為離子對(duì)試劑緩沖溶液與こ腈比例為85:15(v/v)或90:10(v/v)的混合溶液，流速為1.0ml/min，儀器正常壓カ為1500-1600psi。流動(dòng)相比例為85:15(v/v)時(shí)，保留時(shí)間16-18min ;流動(dòng)相比例為90:10 (v/v),保留時(shí)間29_31min。檢測的全過程約需2小時(shí)，耗時(shí)長，效率低，不便于需要快速得到檢測結(jié)果的情況。其主要原因在于其前處理中用到的固相萃取凈化步驟耗時(shí)長，通常情況下僅固相萃取一歩就需要約I小吋。若是省略前處理中的固相萃取柱浄化步驟，雖然可以加快檢測速度，但很可能會(huì)受到雜質(zhì)峰的干擾，影響定性定量分析。為克服需要快速檢測情況下GB/T22388的不足，國家質(zhì)檢部門又推出GB/T22400檢測方法。GB/T22400檢測速度快，其色譜條件為:強(qiáng)離子交換色譜柱，SCX, 250mmX 4.6mm(1.d.流速為1.5ml/min。其中色譜柱并非常用C8、C18色譜柱,且價(jià)格較常用色譜柱高，儀器正常運(yùn)行情況下，柱壓為2500-2600psi ;高柱壓下色譜柱使用壽命較短，對(duì)于需要長期大量進(jìn)行原料乳中三聚氰胺檢測的乳品企業(yè)而言，檢測成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中檢測速度慢和檢測成本高的缺陷，提供ー種快速、結(jié)果準(zhǔn)確的檢測原料乳中三聚氰胺的方法。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的， 本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案:
一種檢測三聚氰胺的方法，包括以下步驟:( I)制備三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用高效液相色譜儀對(duì)其檢測，得三聚氰胺保留時(shí)間，并生成濃度與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)取樣品進(jìn)行預(yù)處理，得到分析試樣，利用所述高效液相色譜儀在與步驟(I)相同的條件下對(duì)其進(jìn)行檢測，得到所述樣品的檢測結(jié)果；(3)將步驟(2)中獲得的所述樣品的檢測結(jié)果與步驟(I)中得到的所述標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算確定樣品中三聚氰胺的含量；所述步驟(2)中的預(yù)處理包括以下步驟:稱取樣品(若為奶粉制品，加入純水還原，并記錄原始數(shù)據(jù)，計(jì)算稀釋倍數(shù))，加入こ腈劇烈震蕩混合6min，充分混勻后靜置3min，4000-8000r/min轉(zhuǎn)速離心5_10min，吸取上清液過濾，收集濾液，作為高效液相色譜儀分析試樣。進(jìn)ー步的,上述過濾步驟用0.22 ii m有機(jī)相濾膜過濾。進(jìn)ー步的，所述步驟(I)中高效液相色譜使用的流動(dòng)相為70/30 (體積比)離子對(duì)試劑緩沖溶液-こ腈。所述離子對(duì)試劑緩沖溶液為含1.0g/L十二烷基磺酸鈉和20mmol/L磷酸的水溶液。進(jìn)ー步的，上述流動(dòng)相超聲處理30-40min，經(jīng)0.22 y m有機(jī)相濾膜過濾后使用，效果更佳。超聲處理使流動(dòng)相更加均勻，檢測分析得到的結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。進(jìn)ー步的,所述步驟(I)中高效液相色譜條件:流速0.8-1.0ml/min ;柱溫40°C;檢測波長:240nm ;進(jìn)樣量:20 Uし本發(fā)明中，取樣品前處理為，加入こ腈劇烈震蕩混合6min，充分混勻后靜置3min，4000-8000r/min轉(zhuǎn)速離心5_10min，吸取上清液過濾，作為高效液相色譜儀分析試樣。制得的分析試樣雜質(zhì)少，能夠有效延長了色譜柱的使用壽命。同GB/T22388前處理方法相比較，無需固相萃取，簡便快速，降低了成本，只需30-40分鐘即可得到檢測結(jié)果，且回收率高。GB/T22388前處理方法若是省略固相萃取步驟，則制得檢測到樣品中雜質(zhì)保留時(shí)間與三聚氰胺保留時(shí)間相鄰近，易造成干擾。本發(fā)明方法與GB/T22388相比，流動(dòng)相中，用十二烷基磺酸鈉代替辛烷磺酸鈉，同時(shí)增大こ腈的比例，離子對(duì)試劑緩沖溶液與こ腈比例調(diào)整為70:30。本發(fā)明方法對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行調(diào)整后，檢測優(yōu)勢在于:三聚氰胺出峰時(shí)間縮短，保留時(shí)間在10-llmin。確保在最短的時(shí)間內(nèi)將三聚氰胺和雜質(zhì)分離開，防止雜質(zhì)峰對(duì)三聚氰胺的檢測的干擾，準(zhǔn)確的定性定量測定出原料奶中的三聚氰胺含量。既能保證快速出峰，達(dá)到迅速檢測的目的；又能保證分離效果，完全將雜質(zhì)和三聚氰胺分離開來，雜質(zhì)峰不對(duì)三聚氰胺檢測造成干擾。本發(fā)明方法，采用上述前處理方法和流動(dòng)相，檢測三聚氰胺時(shí)雜質(zhì)峰和三聚氰胺峰能夠完全分離開，不會(huì)因?yàn)殡s質(zhì)峰與三聚氰胺峰出現(xiàn)重疊而影響檢測，有利于進(jìn)行定性定量分析。本發(fā)明對(duì)色譜流動(dòng)相和流速進(jìn)行了調(diào)整。本發(fā)明方法，流速為0.8-1.0ml/min，正常壓カ為1200-1400psi。降低流速，有效的保護(hù)了泵系統(tǒng)和色譜分析系統(tǒng)，延長色譜柱的使用壽命。且在0.8ml/min流速下,三聚氰胺保留時(shí)間為ll_13min,不影響檢測速度。本發(fā)明檢測三聚氰胺的方法適用于原料奶，純牛奶(成品)，奶粉(復(fù)原后同純牛奶)，中性奶(早餐奶，大棗牛奶等)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果:使用本發(fā)明提供的三聚氰胺檢測方法，預(yù)處理簡單方便，檢測速度快，三聚氰胺分離效果好，檢測結(jié)果精確度高，適用于各種需要快速檢測分析原料奶中三聚氰胺的場合。本發(fā)明使用常用的C18色譜柱，價(jià)格較低，容易獲得。本發(fā)明方法檢測三聚氰胺過程中，柱壓較低，有利于保護(hù)檢測系統(tǒng)，増加色譜柱的使用壽命，有利于控制檢測成本。


:見下表I表I


權(quán)利要求
1.一種檢測三聚氰胺的方法，其特征在于，包括以下步驟: 制備三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用高效液相色譜儀對(duì)其檢測，得三聚氰胺保留時(shí)間，井生成濃度與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線； 取樣品進(jìn)行預(yù)處理，得到分析試樣，利用所述高效液相色譜儀在與步驟(I)相同的條件下對(duì)其進(jìn)行檢測，得到所述樣品的檢測結(jié)果； 將步驟(2)中獲得的所述樣品的檢測結(jié)果與步驟(I)中得到的所述標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算確定樣品中三聚氰胺的含量； 所述步驟(I)中高效液相色譜使用的流動(dòng)相為70/30體積比的離子對(duì)試劑緩沖溶液-こ腈; 所述離子對(duì)試劑緩沖溶液為含1.0g/L十二烷基磺酸鈉和20mmol/L磷酸的水溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測三聚氰胺的方法，其特征在于，所述高效液相色譜使用的流動(dòng)相經(jīng)0.22 m有機(jī)相濾膜過濾完成后超聲處理30-40min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測三聚氰胺的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的預(yù)處理包括以下步驟:稱取樣品，加入こ腈劇烈震蕩混合6min，充分混勻后靜置3min，4000-8000r/min轉(zhuǎn)速離心5-10min,吸取上清液過濾,收集濾液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述檢測三聚氰胺的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的預(yù)處理中過濾步驟用的是0.22 y m有機(jī)相濾膜進(jìn)行過濾。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測三聚氰胺的方法，其特征在于，所述步驟(I)中高效液相色譜條件:流速0.8-1.0ml/min ;柱溫40°C ;檢測波長:240nm ;進(jìn)樣量:20 Uし
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測三聚氰胺的方法在原料奶，純牛奶，奶粉和中性奶的檢測分析中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測三聚氰胺的方法，包括以下步驟(1)制備三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用高效液相色譜儀對(duì)其檢測，得保留時(shí)間，并生成濃度與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)取樣品進(jìn)行預(yù)處理，得到分析試樣，利用所述高效液相色譜儀在與步驟(1)相同的條件下對(duì)其進(jìn)行檢測，得到所述樣品的檢測結(jié)果；(3)將步驟(2)中獲得的檢測結(jié)果與步驟(1)中得到所述標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算確定樣品中三聚氰胺的含量。本發(fā)明提供的三聚氰胺檢測方法，預(yù)處理簡單方便，檢測速度快，三聚氰胺分離效果好，檢測結(jié)果精確度高，適用需要快速分析原料乳中三聚氰胺的場合。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103091419SQ20131001488
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2013年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月15日
發(fā)明者王旭霞, 康紅彥, 劉翠霞, 劉海燕, 李啟明 申請(qǐng)人:新希望乳業(yè)控股有限公司