一種檢測(cè)倍他米松的試紙條及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)倍他米松的試紙條及其應(yīng)用。試紙條包括樣品吸收墊（1）、結(jié)合物釋放墊（2）、反應(yīng)膜（3）、吸水墊（4）和底板（7），所述反應(yīng)膜上具有包被有倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測(cè)線（5）和包被有羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控線（6），所述結(jié)合物釋放墊（2）噴涂有倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物。本發(fā)明還提供了一種應(yīng)用上述倍他米松試紙條檢測(cè)化妝品中倍他米松殘留的方法。本發(fā)明所提供的試紙條具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、檢測(cè)速度快、成本低等特點(diǎn)，適合大量樣本的篩查和現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控。
【專利說(shuō)明】一種檢測(cè)倍他米松的試紙條及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測(cè)倍他米松的試紙條及其應(yīng)用，具體涉及一種用于檢測(cè)倍他米松的膠體金試紙條，其特別適用于化妝品中倍他米松殘留的檢測(cè)。
【背景技術(shù)】
[0002]倍他米松屬于腎上腺皮質(zhì)激素類(lèi)藥物，具有抗菌、消炎的作用。由于其具有廣譜高效的殺菌作用，常被添加到祛痘類(lèi)產(chǎn)品中以達(dá)到消炎、祛痘、除螨及抗粉刺的目的。但這種藥物的不良反應(yīng)較多，有滁鈉作用，對(duì)生長(zhǎng)的抑制作用較強(qiáng)；還能引起皮質(zhì)炎固醇激素引起的各種不良反應(yīng)，如肌肉骨骼、胃腸道、皮膚、神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)的異常和水電解質(zhì)紊亂等。鑒于以上這些不良反應(yīng)，長(zhǎng)期使用添加有倍他米松的化妝品或皮膚性接觸此種藥物可嚴(yán)重影響人體健康，因此，我國(guó)衛(wèi)生部頒布的2007年版《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中規(guī)定，化妝品中不得添加倍他米松。
[0003]目前關(guān)于倍他米松檢測(cè)的文獻(xiàn)報(bào)道大都是針對(duì)倍他米松原料和藥品，也有關(guān)于動(dòng)物組織中倍他米松檢測(cè)的研究，主要有旋光法、分光光度法、高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等。旋光法影響因素較多，需要標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品和樣品的量較多，不適宜微量分析；分光光度法操作繁瑣，樣品處理過(guò)程中損失較多，且檢出限較高，重復(fù)性較差；高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法靈敏、準(zhǔn)確，特異性強(qiáng)、分離度好，可以同時(shí)測(cè)定多種藥物，但需要昂貴的儀器、樣品的前處理復(fù)雜、繁瑣費(fèi)時(shí)、檢測(cè)的成本較高，不能現(xiàn)場(chǎng)操作，而且需專業(yè)人員操作，所以限制了其應(yīng)用。因此，針對(duì)現(xiàn)有倍他米松檢測(cè)技術(shù)上的不足，我們?cè)O(shè)計(jì)了一種用膠體金免疫層析技術(shù)檢測(cè)化妝品中倍他米松的方法，該方法特異性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)成本低、適合于批量樣品的篩選檢測(cè)，是理想的快速篩選手段，能夠更好地滿足我國(guó)化妝品企業(yè)、政府職能監(jiān)管部門(mén)等開(kāi)展檢測(cè)工作。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、成本低、檢測(cè)時(shí)間短的倍他米松殘留檢測(cè)試紙條。
[0005]本發(fā)明所提供的檢測(cè)倍他米松殘留的試紙條，包括樣品吸收墊(I)、結(jié)合物釋放墊(2 )、反應(yīng)膜(3 )、吸水墊(4 )和底板(7 );所述反應(yīng)膜上具有包被有倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測(cè)線(5 )和包被有羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控線(6 )，所述結(jié)合物釋放墊(2 )噴涂有倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物。
[0006]所述倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物是由倍他米松半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得至IJ，所述載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。
[0007]所述倍他米松單克隆抗體是以倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得，是由倍他米松單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株E-3-1 CGMCC N0.6501分泌獲得；所述羊抗鼠抗抗體是將鼠源抗體免疫羊得到。
[0008]所述樣品吸收墊(I)、結(jié)合物釋放墊(2)、反應(yīng)膜(3)、吸水墊(4)依次粘貼在底板(7 )上，所述結(jié)合物釋放墊1/3~1/2被覆蓋于樣品吸收墊下。
[0009]所述底板可為PVC底板或其他硬質(zhì)不吸水的材料；所述樣品吸收墊可為吸濾紙或?yàn)V油紙；所述結(jié)合物釋放墊可為玻璃棉或聚酯材料；所述吸水墊為吸水紙；所述反應(yīng)膜可為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜。
[0010]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備上述試紙條的方法，其包括步驟:
[0011]1)制備噴涂有倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的結(jié)合物釋放墊；
[0012]2)制備具有包被有倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測(cè)線和包被有羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控線的反應(yīng)膜；
[0013]3)將1)和2)制備好的結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜與樣品吸收墊、吸水墊和底板組裝成試紙條。
[0014]具體地說(shuō),步驟包括:
[0015]1)半抗原制備:將倍他米松與丙二胺反應(yīng)得到倍他米松半抗原；
[0016]2)將倍他米松半抗原與載體蛋白偶聯(lián)，得到倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物；
[0017]3)用倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物免疫小鼠，將小鼠脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞通過(guò)融合、篩選，得到倍他米松單克隆雜交瘤細(xì)胞株；
[0018]4)提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗體；
[0019]5)用檸檬酸三鈉與氯金酸反應(yīng)制備膠體金；
[0020]6)將步驟3)制備的倍他米松單克隆抗體加入步驟5)制備的膠體金中，得到倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物；
[0021]7)將倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物噴涂在結(jié)合物釋放墊上，37°C烘Ih后取出，置于干燥環(huán)境中保存?zhèn)溆茫?br> [0022]8)將倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物包被在反應(yīng)膜上構(gòu)成檢測(cè)線，將羊抗鼠抗抗體包被在反應(yīng)膜上構(gòu)成質(zhì)控線；
[0023]9)將樣品吸收墊用含0.5%牛血清白蛋白(體積分?jǐn)?shù))、pH為7.2,0.lmol/L磷酸鹽緩沖液浸泡2h，37°C下烘干2h ；
[0024]10)在底板上按順序粘貼上樣品吸收墊、結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜、吸水墊，樣品吸收墊蓋住結(jié)合物釋放墊，最后切成3mm寬的小條，加塑料盒，真空包裝，30?條件下可保存12個(gè)月。
[0025]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種應(yīng)用上述試紙條檢測(cè)化妝品中倍他米松殘留的方法，它包括步驟:
[0026](1)樣品前處理；
[0027](2)用試紙條進(jìn)行檢測(cè)；
[0028](3)分析檢測(cè)結(jié)果。
[0029]本發(fā)明的倍他米松快速檢測(cè)試紙條采用高度特異性的抗體抗原反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)，將倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物固定于結(jié)合物釋放墊上，樣品中的倍他米松在流動(dòng)過(guò)程中，與結(jié)合物釋放墊上的倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物結(jié)合，形成藥物-抗體-膠體金標(biāo)記物。樣本中的藥物與反應(yīng)膜檢測(cè)線上的倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物，根據(jù)檢測(cè)線紅色條帶有無(wú)或顏色深淺來(lái)判斷待測(cè)樣品液中是否含有倍他米松殘留。[0030]檢測(cè)時(shí)，樣品經(jīng)處理后滴入試紙條卡孔內(nèi)，當(dāng)倍他米松在樣品中的濃度低于檢測(cè)限或?yàn)榱銜r(shí)，單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物在層析過(guò)程中會(huì)與固定在反應(yīng)膜上的倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物結(jié)合，在檢測(cè)線(T)和質(zhì)控線(C)內(nèi)各出現(xiàn)一條紅色條帶；如果倍他米松在樣品中的濃度等于或高于檢測(cè)限，單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物會(huì)與倍他米松全部結(jié)合，從而在T線處因?yàn)楦?jìng)爭(zhēng)反應(yīng)不會(huì)與倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物結(jié)合而不出現(xiàn)紅色條帶。如圖2所示。
[0031]陰性:當(dāng)質(zhì)控線(C)顯示出紅色條帶，檢測(cè)線(T)同時(shí)也顯示出紅色條帶，判為陰性。
[0032]陽(yáng)性:當(dāng)質(zhì)控線(C)顯示出紅色條帶，而檢測(cè)線(T )不顯色，判為陽(yáng)性。
[0033]無(wú)效:當(dāng)質(zhì)控線(C)不顯示出紅色條帶，則無(wú)論檢測(cè)線(T)顯示出紅色條帶與否，該試紙條均判為無(wú)效。
[0034]本發(fā)明的試紙條具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、成本低、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短、適合各種單位使用、儲(chǔ)存簡(jiǎn)單、保質(zhì)期長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn)。用本發(fā)明試紙條檢測(cè)倍他米松殘留的方法簡(jiǎn)便、快速、直觀、準(zhǔn)確、適用范圍廣、成本低、易推廣使用。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0035]圖1為試紙條剖面結(jié)構(gòu)示意圖。
[0036]圖2為試紙條檢測(cè)結(jié)果判定圖。
[0037]圖3為倍他米松半抗原合成圖。
[0038]圖4為倍他米松半抗原核磁共振氫譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0039]下面結(jié)合具體的實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0040]實(shí)施例1倍他米松檢測(cè)試紙條的制備
[0041]該試紙條的制備方法主要包括以下步驟:
[0042]I)制備噴涂有倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的結(jié)合物釋放墊；
[0043]2)制備具有包被有倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測(cè)線和包被有羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控線的反應(yīng)膜；
[0044]3)將I)和2)制備好的結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜與樣品吸收墊、吸水墊和PVC底板組裝成試紙條。
[0045]下面分步詳細(xì)敘述:
[0046]1、倍他米松半抗原的制備
[0047]將0.39g倍他米松溶解在10 ml吡啶中，室溫下緩慢滴加入0.3ml I, 3_丙二胺，滴加完畢后，升溫至60°C，繼續(xù)反應(yīng)20h，旋蒸除去吡啶和未反應(yīng)的丙二胺，在正己烷-乙酸乙酯體系中重結(jié)晶得到白色結(jié)晶，即為目標(biāo)半抗原倍他米松-3-氨丙基烯胺，合成路線如圖3。
[0048]取上述產(chǎn)物經(jīng)核磁共振氫譜測(cè)定，如圖4所示，1.0-2.7ppm間增加的3組峰為丙二胺片段上的烷基信號(hào)峰，說(shuō)明目標(biāo)半抗原合成成功。[0049]2、免疫原的制備
[0050]取半抗原15mg用2.2ml 二甲基甲酰胺(DMF)溶解完全，制成溶液I ;取牛血清白蛋白(BSA) 70mg用6.8ml 0.lmol/L PBS (ρΗ7.0)溶解完全，制成溶液II ;將溶液I加入溶液II中，制成溶液III ;取碳化二亞胺(EDC) IOOmg用Iml水溶解后加入溶液III中，室溫反應(yīng)24h ;用0.01mol/L PBS透析三天，每天換液三次，得到免疫原。
[0051]3、包被原的制備
[0052]取半抗原15mg用2.2ml DMF溶解完全，制成溶液I ;取卵清蛋白(OVA) 70mg用
6.8ml 0.lmol/L PBS(pH7.0)溶解完全，制成溶液II ;將溶液I加入溶液II中，制成溶液III ；取EDC IOOmg用Iml水溶解后加入溶液III中，室溫反應(yīng)24h ;用0.01mol/L PBS透析三天，每天換液三次，得到包被原。
[0053]4、倍他米松單克隆抗體的制備
[0054]( I)動(dòng)物免疫
[0055]將步驟2得到的免疫原注入Balb/c小鼠體內(nèi)，免疫劑量為150 μ g/只，使其產(chǎn)生
抗血清。
[0056](2)細(xì)胞融合和克隆化
[0057]取免疫Balb/c小鼠脾細(xì)胞，按8:1 (數(shù)量配比)比例與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法測(cè)定細(xì)胞上清液，篩選陽(yáng)性孔。利用有限稀釋法對(duì)陽(yáng)性孔進(jìn)行克隆化，直到得到穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，并意外發(fā)現(xiàn)，其中一株效價(jià)顯著高于其它雜交瘤細(xì)胞株，將該倍他米松單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株命名為E-3-1，該細(xì)胞株已于2012年8月28日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，保藏號(hào)為CGMCC N0.6501。
[0058](3)細(xì)胞凍存和復(fù)蘇
[0059]將雜交瘤細(xì)胞用凍存液制成IX IO6個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，在液氮中長(zhǎng)期保存。復(fù)蘇時(shí)取出凍存管，立即放入37 °C水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)。
[0060](4)單克隆抗體的制備與純化
[0061]增量培養(yǎng)法:將雜交瘤細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)基中，在37°C條件下進(jìn)行培養(yǎng)，用辛酸-飽和硫酸銨法將得到的培養(yǎng)液進(jìn)行純化，得到單克隆抗體，_20°C保存。
[0062]所述細(xì)胞培養(yǎng)基為向RPMI1640培養(yǎng)基中添加小牛血清和碳酸氫鈉，使小牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)基中的終濃度為20%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，碳酸氫鈉在細(xì)胞培養(yǎng)基中的終濃度為0.2%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))；所述細(xì)胞培養(yǎng)基的PH為7.4。
[0063]5、羊抗鼠抗抗體的制備
[0064]以羊作為免疫動(dòng)物，以鼠源抗體為免疫原對(duì)無(wú)病原體羊進(jìn)行免疫，得到羊抗鼠抗抗體。
[0065]6、倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的制備
[0066](I)膠體金的制備
[0067]用雙蒸去離子水將1%氯金酸稀釋成0.01% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))，取IOOml置于錐形瓶中，用恒溫電磁攪拌器加熱至沸騰，在持續(xù)高溫、持續(xù)攪拌下加入2.5ml 1%檸檬酸三鈉，繼續(xù)勻速攪拌加熱至溶液呈透亮的紅色時(shí)停止，冷卻至室溫后用去離子水恢復(fù)到原體積，4°C保存。制備好的膠體金外觀純凈、透亮、無(wú)沉淀和漂浮物。[0068](2)倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的制備
[0069]在磁力攪拌下，用0.2mol/L碳酸鉀溶液調(diào)膠體金的pH值至7.0，按每毫升膠體金溶液中加入20-50μ g的標(biāo)準(zhǔn)向膠體金溶液中加入倍他米松單克隆抗體，繼續(xù)攪拌混勻30min，加入10%BSA，使其在膠體金溶液中的終濃度為1% (體積分?jǐn)?shù))，靜置lOmin。12000r/min、4°C離心40min，棄上清液，沉淀用復(fù)溶緩沖液洗滌兩次，用體積為初始膠體金體積1/10的復(fù)溶緩沖液將沉淀重懸，置4°C備用。
[0070]復(fù)溶緩沖液:含酪蛋白0.02%~0.1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))、吐溫-80 0.059Π).2%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))、ρΗ7.2的0.02mol/L磷酸鹽緩沖液。
[0071]7、結(jié)合物釋放墊的制備
[0072]將結(jié)合物釋放墊浸泡于含有牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在緩沖液中的濃度為0.5%)、pH為7.2,0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液中，均勻浸濕lh，37°C烘3h備用。用Isoflow噴膜儀將制備好的倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物均勻噴涂在結(jié)合物釋放墊上，每Icm結(jié)合物釋放墊噴涂0.01ml倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物后，置于37°C環(huán)境中(濕度< 20%) 60min后取出，置于干燥環(huán)境(濕度< 20%)中保存?zhèn)溆谩?br> [0073]8、反應(yīng)膜的制備
[0074]將倍他米松半抗原-卵清蛋白偶聯(lián)物包被到反應(yīng)膜上構(gòu)成檢測(cè)線，將羊抗鼠抗抗體包被在反應(yīng)膜上構(gòu)成質(zhì)控線。 [0075]包被過(guò)程:用磷酸緩沖液將倍他米松半抗原-卵清蛋白偶聯(lián)物稀釋到10mg/ml,用Isoflow點(diǎn)膜儀將其包被于硝酸纖維素膜上的檢測(cè)線(T線)，包被量為0.8 μ Ι/cm ;用0.01mol/L、pH7.4的磷酸鹽緩沖液將羊抗鼠抗抗體稀釋到200 μ g/ml,用Isoflow點(diǎn)膜儀將其包被于硝酸纖維素膜上的質(zhì)控線(C線)，包被量為1.0 μ Ι/cm。將包被好的反應(yīng)膜置于37°C條件下干燥2h，備用。
[0076]9、樣品吸收墊的制備
[0077]將樣品吸收墊置于含0.5%牛血清白蛋白(體積分?jǐn)?shù))、pH7.2,0.lmol/L磷酸鹽緩沖液中浸泡2h，37°C烘2h備用。
[0078]10、試紙條的組裝
[0079]將樣品吸收墊、結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜、吸水墊依次按順序粘貼在PVC底板上；結(jié)合物釋放墊從起始端有1/3區(qū)域被樣品吸收墊覆蓋，結(jié)合物釋放墊的末端與反應(yīng)膜的始端連接，反應(yīng)膜的末端與吸水墊的始端相連，樣品吸收墊的始端與PVC底板的始端對(duì)齊，吸水墊的末端與PVC底板的末端對(duì)齊；所述反應(yīng)膜上有檢測(cè)線和質(zhì)控線，檢測(cè)線(T線)和質(zhì)控線(C線)均為與所述試紙條的長(zhǎng)相垂直的條狀帶；檢測(cè)線位于靠近結(jié)合物釋放墊的末端的一側(cè)；質(zhì)控線位于遠(yuǎn)離結(jié)合物釋放墊的末端的一側(cè)；將試紙條用機(jī)器切成3_寬的小條，裝在特制的塑料制卡中，4~30°C條件下可保存12個(gè)月。
[0080]實(shí)施例2樣品中倍他米松殘留的檢測(cè)
[0081]1、樣品的前處理
[0082]稱取0.lg±0.01g (霜狀、乳液)或0.1ml (化妝水)樣品于IOml離心管中，加入10ml 0.02mol/L的磷酸鹽緩沖溶液，渦動(dòng)lmin，待檢。
[0083]2、用試紙條進(jìn)行檢測(cè)
[0084]用吸管吸取待檢樣品溶液垂直滴加2~3滴于加樣孔，液體流動(dòng)時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，反應(yīng)5~IOmin,判定結(jié)果。
[0085]3、分析檢測(cè)結(jié)果
[0086]陰性(-):T線和C線都顯色，表示樣品中倍他米松濃度低于檢測(cè)限，如圖2 (a)。
[0087]陽(yáng)性( + ):T線無(wú)顯色C線顯色，表示樣品中倍他米松濃度等于或高于檢測(cè)限，如圖
2(b)。
[0088]無(wú)效:未出現(xiàn)C線，表明不正確的操作過(guò)程或試紙條已變質(zhì)失效，如圖2 (C)。在此情況下，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，并用新的試紙條重新測(cè)試。
[0089]實(shí)施例3樣品檢測(cè)實(shí)例
[0090]1、檢測(cè)限試驗(yàn)
[0091]取空白化妝品樣本(霜、乳液或化妝水)，在其中分別添加倍他米松至終濃度為0.5、l、2mg/kg(L),取試紙條進(jìn)行檢測(cè),每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定三次。
[0092]用試紙條檢測(cè)化妝品樣本時(shí)，當(dāng)其中倍他米松添加濃度為0.5mg/kg(L)時(shí)，試紙條上顯示出肉眼可見(jiàn)的兩條紅色線條，呈陰性；當(dāng)其中倍他米松添加濃度為l、2mg/kg(L)時(shí)，試紙條質(zhì)控線顯色，檢測(cè)線不顯色，呈陽(yáng)性，表明本試紙條對(duì)化妝品中倍他米松的檢測(cè)限為 lmg/kg(L)。
[0093]2、假陽(yáng)性率、假陰性率試驗(yàn)
[0094]取已知倍他米松含量大于lmg/kg(L)的化妝品陽(yáng)性樣本20份和含量小于Img/kg(L)的化妝品陰性樣本20份，用三批試紙條進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算其陰陽(yáng)性率。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0095]表1檢測(cè)樣本結(jié)果
[0096]
【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)倍他米松的試紙條，包括樣品吸收墊(I)、結(jié)合物釋放墊(2)、反應(yīng)膜(3)、吸水墊(4 )和底板(7 )，其特征在于所述反應(yīng)膜上具有包被有倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測(cè)線(5 )和包被有羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控線(6 )，所述結(jié)合物釋放墊(2 )噴涂有倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物。
2.如權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于所述樣品吸收墊(I)、結(jié)合物釋放墊(2)、反應(yīng)膜(3 )、吸水墊(4 )依次粘貼在底板(7 )上。
3.如權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的試紙條，其特征在于所述結(jié)合物釋放墊1/3~1/2被覆蓋于樣品吸收墊下。
4.如權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于所述倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物由倍他米松半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得到，所述載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。
5.如權(quán)利要求1或4任一項(xiàng)所述的試紙條，其特征在于所述倍他米松半抗原是由倍他米松與丙二胺反應(yīng)得到，其分子結(jié)構(gòu)式為:

6.如權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于所述倍他米松單克隆抗體是以倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得，所述羊抗鼠抗抗體是將鼠源抗體免疫羊得到。
7.如權(quán)利要求1或6任一項(xiàng)所述的試紙條，其特征在于所述倍他米松單克隆抗體是由倍他米松單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株E-3-1 CGMCC N0.6501分泌獲得。
8.一種制備權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述試紙條的方法，其包括步驟: O制備噴涂有倍他米松單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的結(jié)合物釋放墊； 2)制備具有包被有倍他米松半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測(cè)線和包被有羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控線的反應(yīng)膜； 3)將I)和2)制備好的結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜與樣品吸收墊、吸水墊和底板組裝成試紙條。
9.一種檢測(cè)化妝品中倍他米松殘留的方法，其包括步驟: 1)樣本前處理； 2)用權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的試紙條進(jìn)行檢測(cè)； 3)分析檢測(cè)結(jié)果。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK103940999SQ201310020352
【公開(kāi)日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2013年1月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月19日
【發(fā)明者】何方洋, 萬(wàn)宇平, 羅曉琴, 吳鵬, 付軍權(quán), 蒲小容, 馮靜, 彭鴿 申請(qǐng)人:北京勤邦生物技術(shù)有限公司