專利名稱：趕黃祛斑膠囊中丹酚酸b的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物制劑中活性成分的質(zhì)量檢測(cè)方法，具體來說，涉及的是一種治療黃褐斑的中藥膠囊制劑中丹酚酸B的質(zhì)量檢測(cè)方法，屬于藥品質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
本發(fā)明具體涉及的治療黃褐斑的中藥膠囊制劑即趕黃祛斑膠囊，由趕黃草835g和丹參300g制成稠膏后，經(jīng)加入適當(dāng)?shù)妮o料制備得到，其具體制備方法及用途已記載于公開號(hào)為CN101700276的發(fā)明專利中，該制劑具有退黃、化瘀、祛斑的作用，臨床上擬用于治療由于肝氣郁結(jié)引起的女性黃褐斑的治療。趕黃祛斑膠囊中含有趕黃草和丹參，經(jīng)研究證明，趕黃草的主要有效成分一槲皮素具有祛斑、抗炎、抗過敏，增強(qiáng)皮膚毛細(xì)血管通透性功能；丹參中的主要成分有丹參酮II Λ和丹酚酸B，其中:丹參酮II 4具有抗炎的功能，丹酚酸B具有強(qiáng)大的抗氧化的作用。在對(duì)趕黃祛斑膠囊的分析中也發(fā)現(xiàn)本品中的主要有效成分為槲皮素，丹參酮II八和丹酚酸B。通過查詢目前國內(nèi)外的相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，僅有單獨(dú)測(cè)定趕黃草制劑中的槲皮素或單獨(dú)測(cè)定丹參制劑中的丹參酮II八和丹酚酸B的報(bào)道，還沒有關(guān)于對(duì)由趕黃草、丹參兩味藥組成的復(fù)方制劑中的槲皮素，丹參酮II八和丹酚酸B進(jìn)行檢測(cè)的文獻(xiàn)報(bào)道。為了更好的控制趕黃祛斑膠囊的質(zhì)量，保證臨床用藥的安全性，有必要建立一套完整的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)以更好的控制本品的質(zhì)量。趕黃祛斑膠囊的制備工藝中主要涉及的稠膏制備方法為:丹參300g，加90%乙醇回流1.5小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至稠膏；丹參藥渣與趕黃草835g，加水煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對(duì)密度為1.15 1.18 (60 65°C)的清膏，冷卻，力口乙醇使含醇量達(dá)60%，攪拌，靜置，濾過，沉淀用60%乙醇洗滌三次，合并洗液與濾液，回收乙醇并濃縮成相對(duì)密度1.30 1.32的稠膏；合并上述兩種稠膏，備用。取稠膏，加入適量淀粉、微晶纖維素、滑石粉、硬脂酸鎂等，混勻，制粒干燥后分裝或浸膏直接干燥后打成粉末直接分裝，即得。這里得到的其實(shí)是膠囊的內(nèi)容物，經(jīng)過分析可以得知，整個(gè)生產(chǎn)工藝中質(zhì)量控制比較簡單和粗糙，可能會(huì)因?yàn)樯a(chǎn)批次的不一樣，或者就算是同一批次也會(huì)生產(chǎn)出含量各不相同、品質(zhì)不均勻的廣品。如果在內(nèi)容物制備完成或者在內(nèi)容物制備過程中，就對(duì)內(nèi)容物進(jìn)行適當(dāng)?shù)蔫b別和含量檢測(cè)，這無疑對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定和療效穩(wěn)定起著至關(guān)重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)目前國內(nèi)還沒有上市的藥物制劑趕黃祛斑膠囊，提供一種可以全面鑒別及檢測(cè)該制劑有效成分之一丹酚酸B的質(zhì)量檢測(cè)方法，確保了該藥物制劑的安全有效。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的具體技術(shù)方案如下: 趕黃祛斑膠囊中丹酚酸B的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于:以丹酚酸B為對(duì)照品，以甲醇、乙腈、甲酸和水的混合物為流動(dòng)相，甲醇:乙腈:甲酸:水v/v/v/v =23:10:1:66，用高效液相色譜法進(jìn)行鑒別和含量檢測(cè)。所述高效液相色譜的條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-乙腈-甲酸-水(23:10:1:66)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為286nm ;理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。所述鑒別檢測(cè)的具體方法如下:
A對(duì)照品溶液的制備:精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，用75%甲醇溶液制成每Iml中含
0.1mg的對(duì)照品溶液；
B供試品溶液的制備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物0.5g，置錐形瓶內(nèi)，加入甲醇:水v/v=75:25的溶液50ml，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液補(bǔ)足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；
C液相色譜測(cè)定色譜峰:分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測(cè)出供試品色譜中與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相一致的色譜峰。所述含量檢測(cè)的具體步驟如下:
A對(duì)照品溶液的制備:精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，用75%甲醇溶液制成每Iml中含
0.1mg的對(duì)照品溶液；
B供試品溶液的制備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物0.5g，置錐形瓶內(nèi)，加入甲醇:水v/v=75:25的溶液50ml，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液補(bǔ)足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；
C液相色譜測(cè)定含量:分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測(cè)定，即得。發(fā)明人對(duì)鑒別方法和含量測(cè)定方法的可行性進(jìn)行了驗(yàn)證研究；具體實(shí)驗(yàn)資料如下:
1、丹酚酸B的高效液相鑒別研究 方法:高效液相色譜法
樣品和對(duì)照品處理方法:精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，加75%甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的對(duì)照品溶液液。供試品溶液制備:取供試品0.5g，精密稱定，置錐形瓶內(nèi)，加入50ml甲醇:水v/v=75:25的溶液，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液補(bǔ)足失去的重量，搖勻，濾過。作為供試品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀中，測(cè)定，即得。色譜柱:月旭XB-C18 (250mmX 4.6mm, 5 μ m)
流動(dòng)相:甲醇-乙腈-甲酸-水(23:10:1:66)
檢測(cè)波長:286nm
流速:1.0ml/min
結(jié)果:在擬定條件下，樣品中有與對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰。2、丹酚酸B的高效液相含量測(cè)定研究 方法:高效液相色譜法
1.儀器與實(shí)驗(yàn)藥 Alltech-426型高效液相，CQX25-06超聲波清洗器。甲醇，乙腈為色譜級(jí)，甲酸為分析純。丹酚酸B對(duì)照品為中國藥品生物制品檢定所提供，趕黃祛斑膠囊由成都力思特藥物研究有限公司提供。2.方法與結(jié)果 2.1色譜條件:
色譜柱:月旭 XB- C18 (250mmX 4.6mm, 5 μ m)
流動(dòng)相:甲醇-乙腈-甲酸-水(23:10:1:66)
檢測(cè)波長:286nm 流速:1.0ml/min
2.2溶液制備
2.2.1精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，加75%甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的對(duì)照品溶液液。2.2.2供試品溶液制備:取供試品約0.5g，精密稱定，置錐形瓶內(nèi)，加入50ml甲醇:水v/v=75:25的溶液，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液補(bǔ)足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。2.3系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn):分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μ 1，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，結(jié)果丹酹酸B的保留時(shí)間為17.214min,丹酹酸B峰與前后色譜峰的分離度均大于1.5，理論塔板以丹酚酸B峰計(jì)算為5474.2.4線性關(guān)系:分別精密吸取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液2.5，5，7.5，10，15，20 μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值A(chǔ)對(duì)進(jìn)樣量C進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A=1014741C-10244 r=0.9991，結(jié)果表明丹酚酸B進(jìn)樣量在2.5_20ng范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。2.5精密度研究，精密吸取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測(cè)定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得丹酚酸B峰面積RSD為1.32%，表明儀器精密度良好。2.6穩(wěn)定性研究，精密吸取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液20 μ 1，分別在O，2,4,6,8小時(shí)注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測(cè)定峰面積，測(cè)得丹酚酸B峰面積RSD為0.99%，表明供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密吸取2.2.2項(xiàng)下樣品溶液20μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測(cè)定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得丹酚酸B峰面積RSD為1.09%，表明儀器精密度良好。2.8回收率實(shí)驗(yàn):精密稱取已知含量的本品9份，每份0.5g，分成3組，每組3份，分別緊密添加丹酚酸B對(duì)照溶液適量，按照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率，回收率為99.05%, RSD=0.69%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本品具有良好的回收率。2.9樣品含量測(cè)定:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測(cè)定，即得。本品每Ig含丹酚酸B (C36H3tlO16)不得少于8.6mg。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是采用高效液相色譜法對(duì)丹酚酸B的鑒別及含量進(jìn)行檢測(cè)，方法更科學(xué)，檢測(cè)手段更先進(jìn)，定性定量更準(zhǔn)確，不僅可以更好更全面的反映趕黃祛斑膠囊的有效成分，而且還可以杜絕采用其他藥材代替趕黃草投料生產(chǎn)的情況，從而保證該藥品的質(zhì)量，保證人民用藥安全有效。本發(fā)明的另一優(yōu)點(diǎn)是，通過對(duì)丹酚酸B的鑒別和含量檢測(cè)，可以在膠囊填充之前就進(jìn)行質(zhì)量控制，以便生產(chǎn)出質(zhì)量合格的產(chǎn)品，同時(shí)，也可以為市售的流通產(chǎn)品提供一種科學(xué)合理的檢測(cè)方法，以便從生產(chǎn)和流通領(lǐng)域控制產(chǎn)品質(zhì)量。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明技術(shù)方案僅限于以下實(shí)施例。實(shí)施例1 丹酚酸B的鑒別
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-甲酸-水(23:10:1:66)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為286nm ;理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，用75%甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取本品內(nèi)容物粉末約0.5g，精密稱定，置于錐形瓶內(nèi)，加入50ml甲醇:水v/v=75:25的溶液，精密稱重后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液補(bǔ)足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測(cè)，供試品色譜中應(yīng)存在與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相一致的色譜峰。實(shí)施例2 丹酚酸B的含量測(cè)定
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-甲酸-水(23:10:1:66)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為286nm ;理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，加75%甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液液。取本品內(nèi)容物粉末0.5g，精密稱定，置于錐形瓶內(nèi)，加入50ml甲醇:水v/v=75:25的溶液，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液補(bǔ)足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測(cè)定即得。
權(quán)利要求
1.趕黃祛斑膠囊中丹酚酸B的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于:以丹酚酸B為對(duì)照品，以甲醇、乙腈、甲酸和水的混合物為流動(dòng)相，甲醇:乙腈:甲酸:水v/v/v/v =23:10:1:66，用高效液相色譜法進(jìn)行鑒別和含量檢測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的趕黃祛斑膠囊中丹酚酸B的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于:所述高效液相色譜的條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比23:10:1:66的甲醇-乙腈-甲酸-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為286nm，理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算不低于2000。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的趕黃祛斑膠囊中丹酚酸B的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于:所述鑒別檢測(cè)的具體方法如下: A對(duì)照品溶液的制備:精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，用75%甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的對(duì)照品溶液； B供試品溶液的制備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物0.5g，置于錐形瓶內(nèi)，加入甲醇:水v/v=75:25的溶液50ml，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液補(bǔ)足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液； C液相色譜測(cè)定色譜峰:分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測(cè)出供試品色譜中與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相一致的色譜峰。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的趕黃祛斑膠囊中丹酚酸B的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于:所述含量檢測(cè)的具體步驟如下: A對(duì)照品溶液的制備:精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，用75%甲醇溶液制成每Iml中含.0.1mg的對(duì)照品溶液； B供試品溶液的制備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物0.5g，置于錐形瓶內(nèi)，加入甲醇:水v/v=75:25的溶液50ml，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液補(bǔ)足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液； C液相色譜測(cè)定含量:分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測(cè)定，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種趕黃祛斑膠囊中丹酚酸B的質(zhì)量檢測(cè)方法，屬于藥品質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明是以丹酚酸B為對(duì)照品，趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物為供試品，通過高效液相色譜法進(jìn)行的鑒別和含量檢測(cè)。高效液相色譜條件為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-乙腈-甲酸-水(2310166)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為286nm；理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。本發(fā)明采用高效液相色譜法對(duì)丹酚酸B進(jìn)行鑒別和含量檢測(cè)，方法更科學(xué)，檢測(cè)手段更先進(jìn)，定性定量更準(zhǔn)確，不僅可以更好更全面的反映趕黃祛斑膠囊的有效成分，而且還可以杜絕采用其他藥材代替丹參投料生產(chǎn)的情況，從而確保了該藥品的質(zhì)量，保證了用藥的安全有效。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103115975SQ20131002934
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月25日
發(fā)明者張玲, 張熠, 趙力科 申請(qǐng)人:成都力思特藥物研究有限公司