專利名稱：一種用于檢測仙靈骨葆膠囊的質(zhì)量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥質(zhì)量的檢測領(lǐng)域，具體涉及一種包含淫羊藿、續(xù)斷、補骨脂、丹參、知母、地黃六味中藥的復方仙靈骨葆膠囊質(zhì)量的檢測方法。
背景技術(shù)：
中藥復方制劑“仙靈骨葆”膠囊是由著名骨傷科專家時光達教授依據(jù)中醫(yī)學“腎主骨”的骨代謝平衡理論，在苗族民間驗方的基礎上，結(jié)合多年臨床驗證篩選后研制而成。它是由淫羊藿、續(xù)斷、丹參、補骨脂、知母、地黃六味中藥組成的復方中成藥制劑。淫羊藿，別名仙靈脾，其性溫，味辛、甘，歸腎、肝經(jīng)，補腎精，強筋骨。續(xù)斷，其性微溫，味辛、甘、苦，歸腎、肝經(jīng)，補肝腎，行血脈，續(xù)筋骨。補骨脂，其性大溫，味辛、苦，歸腎、脾經(jīng)，補腎壯陽，固精縮尿。地黃，其性微溫，味甘，歸腎、肝經(jīng)，養(yǎng)血滋陰，補精益髓。丹參，其性微寒，味苦，益氣養(yǎng)血，活血化瘀。知母，其性寒，味苦、甘，活血化瘀，滋陰潤燥。方中以淫羊藿、續(xù)斷、補骨脂、地黃補精填髓，強精壯骨；由于有瘀血阻滯脈絡不通，不通則痛，氣血失去滋養(yǎng)，則以丹參、知母益氣活血，化瘀，瘀去則新生，通則不痛。全方以補腎壯骨為主，兼以活血化瘀，以達到標本兼治之效。通過現(xiàn)代循證醫(yī)學原則一“隨機分組、雙盲對照，多中心觀察”進行的臨床實驗，確認了 “仙靈骨葆”膠囊抗骨質(zhì)疏松的臨床療效及其安全性。2007年，美國藥品評價機構(gòu)信納克醫(yī)學研究中心按照循證醫(yī)學原理，對仙靈骨葆的臨床藥效進行了確認，隨后，又啟動了仙靈骨葆在美國的FDA認證程序。這是我國第一個按照國際通行藥品驗證標準和美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)標準評定的中藥相關(guān)實驗。仙靈骨葆膠囊已入選《國家基本藥物目錄》(2009版)。在臨床上，仙靈骨葆主要用于骨質(zhì)疏松癥的預防和治療。但是，到目前為止，對于仙靈骨葆的質(zhì)量標準較低，現(xiàn)行國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標準(試行)(WS-10269 (ZD-0269) -2002 )，僅對其中單個成分淫羊藿苷的含量進行了規(guī)定，即“每克仙靈骨葆膠囊粉末中淫羊藿苷的含量不低于3毫克”。根據(jù)2010年藥典編制大綱提出中成藥及中藥材應“逐步由單一指標性成分定性定量測定，向活性、有效成分及生物測定的綜合檢測過渡，向多成分和指紋或特征圖譜整體質(zhì)量控制模式轉(zhuǎn)化”。其中，在對鑒定的技術(shù)要求中指出，所采用的色譜特征圖譜，“應至少指認其中3個以上的有效成分、特征成分或主成分并對其比例作出規(guī)定，而指認峰的峰面積之和應大于總峰面積的50%。”(參見2010年版《中華人民共和國藥典》一部提取物質(zhì)量標準起草技術(shù)要求)。為此，有必要建立一種穩(wěn)定、精密度高的多成分和特征指紋圖譜，用以科學、有效地檢測中藥復方制劑仙靈骨葆膠囊的質(zhì)量。該指紋圖譜應具有以下幾個特點:1、至少應指認出指紋圖譜中3個以上的色譜峰，指認色譜峰的峰面積之和應大于總峰面積的50% ；2、指認的色譜峰應能覆蓋復方中的組成中藥；3、指認的色譜峰應當覆蓋與組方(復方)功效大體相應的活性成分。

發(fā)明內(nèi)容
為解決現(xiàn)有技術(shù)存在的問題與不足，本發(fā)明的主要目的在于基于包含淫羊藿、續(xù)斷、補骨脂、丹參、知母、地黃六味中藥的復方仙靈骨葆膠囊的指紋圖譜提供一種簡便、穩(wěn)定、精密度高的質(zhì)量檢測方法。本發(fā)明的主要目的通過下列技術(shù)方案實現(xiàn):本發(fā)明提供用于檢測仙靈骨葆膠囊的質(zhì)量的方法，包括采用反相高效液相色譜法建立仙靈骨葆膠囊的標準指紋圖譜，其中所述標準指紋圖譜含有22-32個色譜峰，優(yōu)選27個色譜峰，所述色譜峰的峰面積總和大于50%的總峰面積,優(yōu)選地所述27個色譜峰的峰面積總和占總峰面積的50%至90%，優(yōu)選地60%至70%,更優(yōu)選地為70%。建立仙靈骨葆膠囊的標準指紋圖譜的步驟包括A.制備仙靈骨葆膠囊的供試品溶液；B.制備對照品溶液；C.采用高效液相色譜儀進行色譜分析，記錄色譜圖；D.以朝藿定C的色譜保留時間為I計算得到的各色譜峰的相對保留時間，得到所述標準指紋圖譜。本發(fā)明還包括確定所述標準指紋圖譜的重現(xiàn)性的步驟。通過對6份仙靈骨葆膠囊內(nèi)容物的指紋圖譜進行相似性分析，所述標準指紋圖譜的相似度為0.99。本發(fā)明還包括富集所述色譜峰及鑒定所述色譜峰對應的化合物結(jié)構(gòu)的步驟。本發(fā)明還包括在所述鑒定所述色譜峰對應的化合物結(jié)構(gòu)的步驟之后，分析所述化合物體外抗骨質(zhì)疏松活性的步驟。該指紋圖譜中的二十七個色譜峰的化學結(jié)構(gòu)已經(jīng)被準確指認。以朝藿定C的色譜保留時間為I計算得到的各色譜峰的相對保留時間，分別為木蘭堿0.504±0.01、芒果苷 0.519±0.02、當藥苷 0.519±0.02、補骨脂苷 0.562±0.02、異補骨脂苷 0.585±0.02、毛蕊花糖苷0.709±0.02、淫羊藿苷E0.828±0.02、雙葉淫羊藿B0.842±0.02、淫羊藿苷A0.849±0.02、丹酚酸B0.867±0.02、4”-0_乙?；?3”-O-吡喃木糖基淫羊藿苷A0.929±0.02、朝藿定 A0.970±0.02、朝藿定 B0.984±0.02、朝藿定 Cl.00、淫羊藿苷1.019±0.02、異補骨脂素1.049±0.02、大花淫羊藿苷Fl.187±0.02、2" -O-鼠李糖基淫羊藿次苷II1.334±0.02、異補骨脂二氫黃酮1.348±0.02、淫羊藿次苷II 1.383±0.02、新補骨脂異黃酮1.391 + 0.02、補骨脂定1.477 + 0.02、補骨脂乙素1.518 + 0.02、補骨脂二氫黃酮甲醚 1.535±0.02、corylifolAl.548±0.02、丹參酮 II Al.614±0.02、補骨脂酚1.625±0.02。在本發(fā)明的仙靈骨葆膠囊的質(zhì)量檢測方法中，仙靈骨葆膠囊指紋圖譜的建立包括以下步驟:-將仙靈骨葆膠囊內(nèi)容物加入到體積分數(shù)為60%甲醇中，使得仙靈骨葆膠囊內(nèi)容物的濃度為0.02g/ml，充分混合，離心，過0.45 μ m微孔濾膜，取續(xù)濾液即得仙靈骨葆膠囊的供試品溶液。在一個具體實施方式
中，取仙靈骨葆膠囊內(nèi)容物，精密稱定約0.2g，置IOmL容量瓶中，加入體積分數(shù)為60%甲醇約8mL，超聲處理(功率150W，頻率40kHz) 30min，取出，放冷至室溫，用60%甲醇定容,搖勻，提取液于9960rpm/min離心Imin,過0.45 μ m微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得仙靈骨葆膠囊的供試品溶液；-取朝藿定C對照品，以適量甲醇溶解，制成每ImL甲醇中含有朝藿定Clmg的溶液，即得朝藿定C對照品溶液；-精密取上述供試品及對照品溶液10μ L，參照國家藥典附錄中規(guī)定的高效液相分析方法，注入高效液相色譜儀進行色譜分析，記錄色譜圖；以朝藿定C的色譜保留時間為I計算得到的各色譜峰的相對保留時間，得到指紋圖譜。發(fā)明人經(jīng)過反復實驗，確立了優(yōu)選的色譜條件:采用十八烷基硅氧鍵合硅膠為固定相；以各自含體積分數(shù)0.1%的甲酸的乙腈和水(作為流動相，梯度洗脫；流速為0.5-1.lmL/min、優(yōu)選0.8mL/min ;檢測波長為240_300nm，優(yōu)選270nm ;色譜柱溫度為30-40° C優(yōu)選地35° C ;以朝藿定C計算，理論塔板數(shù)在5000-8000范圍之內(nèi)。發(fā)明者還利用公知的現(xiàn)代色譜分離手段，富集并分離得到了該標準指紋圖譜中的二十三個主要色譜峰，并利用核磁共振波譜、多級質(zhì)譜等手段，結(jié)合文獻，鑒定了上述二十三個化合物的結(jié)構(gòu)。對應剩余四個色譜峰的四個化合物從市場上訂購(注:指紋圖譜中的二十七個色譜峰的化學結(jié)構(gòu)已經(jīng)被準確指認，其中有二十三個是從仙靈骨葆膠囊中富集并分離得到，另四個則是從市場上訂購):芒果苷、丹酚酸B購于上海融禾生物科技有限公司，毛蕊花糖苷購于薩恩化學技術(shù)(上海)有限公司，丹參酮II A購于廣州牌牌生物科技有限公司。以朝藿定C的色譜保留時間為I計算得到的各色譜峰的相對保留時間及色譜峰對應的化學物質(zhì)依次是:I 號峰:0.51 ±0.01 (木蘭堿)；2 號峰:0.52±0.02 (芒果苷)；3 號峰:0.52±0.01 (當藥苷)；4 號峰:0.57±0.02 (補骨脂苷)；5號峰:0.59±0.02 (異補骨脂苷)；6號峰:0.71 ±0.02 (毛蕊花糖苷)；7 號峰:0.83±0.02 (淫羊藿苷 E)；8號峰:0.84±0.02 (雙葉淫羊藿B)；9 號峰:0.85 ±0.02 (淫羊藿苷 A)；10 號峰:0.87±0.02 (丹酚酸 B);11號峰:0.93±0.02 (4” _0_乙?；鵢3” _0_吡喃木糖基淫羊藿苷A);12 號峰:0.97±0.02 (朝藿定 A);13 號峰:0.98±0.01 (朝藿定 B);14 號峰:1.000 (朝藿定 C);15 號峰:1.02±0.02 (淫羊藿苷)；16號峰:1.05±0.02 (異補骨脂素);17號峰:1.19±0.01 (大花淫羊藿苷F);18號峰:1.33±0.02 (2〃 _0_鼠李糖基淫羊藿次苷II);19號峰:1.35±0.01 (異補骨脂二氫黃酮)；20 號峰:1.38±0.01 (淫羊藿次苷II);21號峰:1.39±0.02 (新補骨脂異黃酮)；22 號峰:1.48±0.02 (補骨脂定);23號峰:1.52±0.01 (補骨脂乙素);24號峰:1.54±0.02 (補骨脂二氫黃酮甲醚)；25 號峰:1.55±0.02 (corylifolA)；
26 號峰:1.62±0.02 (丹參酮 II A);27 號峰:1.63±0.01 (補骨脂酚)；上述化學結(jié)構(gòu)已經(jīng)被準確指認的色譜峰的峰面積總和占總峰面積大于50%，優(yōu)選地為70%。本發(fā)明對由淫羊藿、續(xù)斷、補骨脂、丹參、知母、地黃六味中藥組成的復方仙靈骨葆膠囊，建立了覆蓋該復方六味組方中藥的27個主要特征峰的、組方來源清楚并且得到明確的化學指認的指紋圖譜。因此，本發(fā)明提供了仙靈骨葆的指紋圖譜，包括22-32個色譜峰，優(yōu)選地27個色譜峰，所述27個色譜峰的峰面積總和占總峰面積大于50%，優(yōu)選地為70%。所述27個色譜峰的化合物鑒定為以下27種化合物:木蘭堿、芒果苷、當藥苷、補骨脂苷、異補骨脂苷、毛蕊花糖苷、淫羊藿苷E、雙葉淫羊藿B、淫羊藿苷A、丹酚酸B、4” -O-乙?；?3” -O-吡喃木糖基淫羊藿苷A、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、異補骨脂素、大花淫羊藿苷F、2" -O-鼠李糖基淫羊藿次苷I1、異補骨脂二氫黃酮、淫羊藿次苷I1、新補骨脂異黃酮、補骨脂定、補骨脂乙素、補骨脂二氫黃酮甲醚、corylifol A、丹參酮II A、補骨脂酚。發(fā)明者進而利用體外抗骨質(zhì)疏松活性模型，從骨形成促進、骨吸收抑制及前成脂細胞的成脂分化三個方面，綜合考察了這些分離得到的單體化合物的體外抗骨質(zhì)疏松的活性。一種建立仙靈骨葆膠囊的指紋圖譜的方法，包括制備仙靈骨葆膠囊的供試品溶液；制備對照品溶液；采用高效液相色譜儀進行色譜分析，記錄色譜圖；以朝藿定C的色譜保留時間為I計算得到的各色譜峰的相對保留時間，得到指紋圖譜。本發(fā)明提供了該指紋圖譜在檢測仙靈骨葆膠囊的質(zhì)量中的應用?？梢詫⒃撝讣y圖譜與標準指紋圖譜進行相似性分析。本發(fā)明的仙靈骨葆膠囊的質(zhì)量檢測方法能夠用于鑒定由淫羊藿、續(xù)斷、補骨脂、丹參、知母、地黃六味中藥組成的復方仙靈骨葆膠囊的質(zhì)量。發(fā)明人應用指紋圖譜對市售中藥復方制劑仙靈骨葆膠囊的質(zhì)量進行了分析。28批市售仙靈骨葆膠囊的相似度評價結(jié)果顯示，23批制劑指紋圖譜的相似度均高于0.981，只有5批制劑指紋圖譜的相似度稍低(0.952 0.967)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果:提供了一種采用反相高效液相色譜法建立的HPLC指紋圖譜來檢測產(chǎn)品質(zhì)量的方法，指紋圖譜中包括二十七個已經(jīng)被準確指認了化學結(jié)構(gòu)的特征色譜峰，其中經(jīng)分離得到的二十三個單體化合物考察了其體外抗骨質(zhì)疏松活性，有二十個成分均具有一定的抗骨質(zhì)疏松活性；此外，運用國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件(2004A版)”對28批市售仙靈骨葆制劑指紋圖譜進行相似度評價，23批制劑指紋圖譜的相似度均高于0.981，只有5批制劑指紋圖譜的相似度稍低(0.952、.967)。利用該方法可以有效地檢測復方仙靈骨葆膠囊的產(chǎn)品質(zhì)量，該指紋圖譜重現(xiàn)性好、穩(wěn)定性高、精密度優(yōu)異且操作方法簡便。名詞解釋指紋圖譜在本文中是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標示其化學特征的色譜圖。對于指紋圖譜，峰的個數(shù)和相對位置，對應各種化學成分的個數(shù)和相對位置——保留時間，可作定性鑒別使用，而峰的高度或峰面積表示了某個化學成分的含量，而各峰的峰高(或峰面積)的比值體現(xiàn)了各種化學成分間的相對含量。反相高效液相色譜:由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系。它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系(正相色譜)相反。續(xù)濾液:液相色譜中，樣品溶液過濾時，最開始流出的溶液舍棄不用，隨即流下的液體即為續(xù)濾液。


圖1是仙靈骨葆膠囊指紋圖譜和27個混合對照品的HPLC圖譜，并且示出了圖譜中色譜峰的中藥來源。其中，★表示來源于淫羊藿色譜峰▲表示來源于補骨脂色譜峰 表示來源于續(xù)斷色譜峰 表示來源于丹參色譜峰■表示來源于知母色譜峰▼表示來源于地黃色譜峰。1^27個峰對應的化合物分別是:木蘭堿(magnoflorine)、芒果苷(mangiferin)、當藥苷(8￥61"08丨(16)、補骨脂苷(口80以161108丨(16)、異補骨脂苷(口80以161108丨(16)、毛蕊花糖苷(acteoside)、淫羊藿苷 E (epimedoside E)、雙葉淫羊藿 B (diphylloside B)、淫羊藿苷A (epimedoside A)、丹酌.酸 B (salvianolic acid Β)、4”_0_ 乙酸基-3”_0_ 卩比喃木糖基淫羊藿苷Α、朝藿定A (epimedin A)、朝藿定B (epimedin B)、朝藿定C (epimedin C)、淫羊藿苷(icariin)、異補骨脂素(isopsoralen)、大花淫羊藿苷 F (ikarisoside F)、2" -O-鼠李糖基淫羊藿次苷 11(2" -0-rhamnosylicariside II)、異補骨脂二氫黃酮(isobavachin)、淫羊藿次苷II (icariside II)、新補骨脂異黃酮(neobavaisoflavone)、補骨脂定(psoralidin)、補骨脂乙素(isobavachalcone)、補骨脂二氫黃酮甲釀(bavachinin)、corylifol A、丹參酮 II A (tanshinone II A)、補骨脂酌.(bukuchiol )。圖2示出了圖1中對應27個主要色譜峰的1-27個化合物的化學結(jié)構(gòu)；圖3示出了 仙靈骨葆膠囊的HPLC指紋圖譜的穩(wěn)定性(重現(xiàn)性)；圖4示出了 28批市售中藥復方制劑仙靈骨葆膠囊的HPLC指紋圖譜的相似度。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明做進一步地詳細說明，但本發(fā)明的實施方式并不局限于此。實施例1.仙靈骨葆膠囊指紋圖譜的建立取仙靈骨葆膠囊(貴州同濟堂制藥有限公司，批號為100929)內(nèi)容物，精密稱量約0.2g，置于IOmL容量瓶中，加入體積分數(shù)為60%甲醇約8mL，超聲處理(功率150W，頻率40kHz) 30min，取出，放冷至室溫，用60%甲醇定容(至10mL)，搖勻，提取液(即搖勻、靜置后的上清液)于9960rpm/min離心Imin,過0.45 μ m微孔濾膜,取續(xù)濾液即得仙靈骨德膠囊的供試品溶液。取各對照品(即將27種單體化合物混合在一起形成的混合對照品溶液)適量，以適量甲醇溶解，分別配置成儲備液后，再混合制得混合對照品溶液。分別精密取上述仙靈骨葆膠囊的供試品及混合對照品溶液10 μ L，參照國家藥典附錄中規(guī)定的高效液相分析方法，注入高效液相色譜儀進行色譜分析，記錄色譜圖(見圖1)。液相色譜條件為:采用十八烷基硅氧鍵合硅膠為固定相；以乙腈-水(各含體積分數(shù)為0.1%的甲酸)作為流動相，梯度洗脫；流速為0.8mL/min ;檢測波長為270nm;色譜柱溫度為35° C。獲得的仙靈骨葆膠囊高效液相色譜指紋圖譜有二十七個主要色譜峰，以朝藿定C的色譜保留時間為I計算得到的各色譜峰的相對保留時間，分別為木蘭堿0.51±0.01、芒果苷0.52±0.02、當藥苷0.52±0.02、補骨脂苷0.57±0.02、異補骨脂苷
0.59±0.02、毛蕊花糖苷0.71 ±0.02、淫羊藿苷E0.83±0.02、雙葉淫羊藿B0.84±0.02、淫羊藿苷A0.85±0.02、丹酚酸B0.87±0.02、4，’ -O-乙?；鵢3，’ -O-吡喃木糖基淫羊藿新ft (xylopyranosylepimedoside)A0.93±0.02、朝藿定 A0.97 + 0.02、朝藿定 B0.98±0.02、朝藿定Cl.00、淫羊藿苷1.02±0.02、異補骨脂素1.05±0.02、大花淫羊藿苷Fl.19±0.02、2' ' -O-鼠李糖基淫羊藿次苷II1.33±0.02、異補骨脂二氫黃酮1.35±0.02、淫羊藿次苷II 1.38±0.02、新補骨脂異黃酮1.39±0.02、補骨脂定1.48±0.02、補骨脂乙素 1.52±0.02、補骨脂 二氫黃酮甲醚 1.54±0.02、corylifol Al.55±0.02、丹參酮II Α1.62±0.02、補骨脂酚1.63±0.02。以朝藿定C計算，理論塔板數(shù)不低于5000。實施例1.確定指紋圖譜重現(xiàn)性:精密稱取仙靈骨葆膠囊(貴州同濟堂制藥有限公司)內(nèi)容物6份，每份0.2g，置IOmL容量瓶中，加入體積分數(shù)為60%甲醇約8mL，超聲處理(功率150W，頻率40kHz) 30min,取出，放冷至室溫，用60%甲醇定容,搖勻,提取液于9960rpm/min離心Imin,過0.45 μ m微孔濾膜，取續(xù)濾液即得。采用實施例1中所述液相條件進行色譜分析，記錄色譜圖(見圖3)。獲得的HPLC指紋圖譜中，二十七個色譜峰的相對保留時間均符合實施例1中的相關(guān)要求，指紋圖譜中27個主要色譜峰的相對保留時間的相對偏差均小于1.0% (見表1)，表明實施例I獲得的HPLC指紋圖譜具有較好的重現(xiàn)性。利用藥典委員會提供的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A》軟件計算，6份仙靈骨葆膠囊供試液的HPLC指紋圖譜的相似度大于
0.99 ο表I仙靈骨葆膠囊HPLC指紋圖譜相對保留時間的穩(wěn)定性
權(quán)利要求
1.一種用于檢測仙靈骨葆膠囊的質(zhì)量的方法，包括采用反相高效液相色譜法建立仙靈骨葆膠囊的標準指紋圖譜，其中所述標準指紋圖譜含有22-32個色譜峰，優(yōu)選27個色譜峰，所述色譜峰的峰面積總和大于50%的總峰面積，優(yōu)選地所述27個色譜峰的峰面積總和占總峰面積的50%至90%，優(yōu)選地60%至70%，更優(yōu)選地為70%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，建立仙靈骨葆膠囊的標準指紋圖譜的步驟包括A.制備仙靈骨葆膠囊的供試品溶液；B.制備對照品溶液；C.采用高效液相色譜儀進行色譜分析，記錄色譜圖；D.以朝藿定C的色譜保留時間為I計算得到的各色譜峰的相對保留時間，得到所述標準指紋圖譜。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述反相高效液相色譜法的色譜條件是:采用十八烷基硅氧鍵合硅膠為固定相；以各自含體積分數(shù)0.1%的甲酸的乙腈和水(作為流動相，梯度洗脫；流速為0.5-1.lmL/min、優(yōu)選0.8mL/min ;檢測波長為240_300nm，優(yōu)選270nm ;色譜柱溫度為30-40° C優(yōu)選地35° C ;以朝藿定C計算，理論塔板數(shù)在5000-8000范圍之內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括確定所述標準指紋圖譜的重現(xiàn)性的步驟。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述所述的方法，其特征在于，還包括富集所述色譜峰及鑒定所述色譜峰對應的化合物結(jié)構(gòu)的步驟。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，還包括在所述鑒定所述色譜峰對應的化合物結(jié)構(gòu)的步驟之后，分析所述化合物體外抗骨質(zhì)疏松活性的步驟。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述標準指紋圖譜含有27個色譜峰，所述27個色譜峰鑒定為木蘭堿、芒果苷、當藥苷、補骨脂苷、異補骨脂苷、毛蕊花糖苷、淫羊藿苷E、雙葉淫羊藿B、淫羊藿苷A、丹酚酸B、4”-0-乙?；?3”-0-吡喃木糖基淫羊藿苷A、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、異補骨脂素、大花淫羊藿苷F、2" -O-鼠李糖基淫羊藿次苷I1、異補骨脂二氫黃酮、淫羊藿次苷I1、新補骨脂異黃酮、補骨脂定、補骨脂乙素、補骨脂二氫黃酮甲醚、corylifolA、丹參酮II A、補骨脂酚。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述制備仙靈骨葆膠囊的供試品溶液的步驟包括將仙靈骨葆膠囊內(nèi)容物加入到體積分數(shù)為60%甲醇中，使得仙靈骨葆膠囊內(nèi)容物的濃度為0.02g/ml，充分混合，離心，過0.45 μ m微孔濾膜，取續(xù)濾液即得仙靈骨葆膠囊的供試品溶液。
9.一種建立仙靈骨葆膠囊的指紋圖譜的方法，包括 制備仙靈骨葆膠囊的供試品溶液； 制備對照品溶液: 采用高效液相色譜儀進行色譜分析，記錄色譜圖； 以朝藿定C的色譜保留時間為I計算得到的各色譜峰的相對保留時間，得到指紋圖譜。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法獲得的指紋圖譜在檢測仙靈骨葆膠囊的質(zhì)量中的應用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于檢測仙靈骨葆膠囊的質(zhì)量的方法，包括采用反相高效液相色譜法建立仙靈骨葆膠囊的標準指紋圖譜，其中所述標準指紋圖譜含有22-32個色譜峰，優(yōu)選27個色譜峰，所述色譜峰的峰面積總和大于50%的總峰面積，優(yōu)選地所述27個色譜峰的峰面積總和占總峰面積的50%至90%，優(yōu)選地60%至70%，更優(yōu)選地為70%。本發(fā)明還確認了二十七個色譜峰對應的化合物的化學結(jié)構(gòu)。本發(fā)明還評價了多批次市售制劑指紋圖譜的相似度(不小于0.952)。本發(fā)明的方法可以有效的檢測中藥復方制劑仙靈骨葆膠囊的產(chǎn)品質(zhì)量，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性高，精密度優(yōu)異，且操作方法簡便。
文檔編號G01N30/02GK103105444SQ20131003098
公開日2013年5月15日 申請日期2013年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月25日
發(fā)明者姚志紅, 戴毅, 屠鳳娟, 程紅, 王新巒, 秦嶺, 姚新生, 王曉春, 周寧 申請人:貴州同濟堂制藥有限公司