專利名稱：一種鑒別山茱萸藥材或衍生品的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥用植物的鑒別領(lǐng)域，具體地，涉及一種鑒別山茱萸藥材或衍生品的方法。
背景技術(shù)：
山茱萸(Salvia miltiorrhiza Bge.)是山茱萸科植物山茱萸(Cornusofficinalis Sieb.et Zucc.)的干燥成熟果肉，為我國(guó)著名的中藥材。山茱萸歸肝、腎經(jīng)，藥性微溫，味酸、澀，具有補(bǔ)益肝腎、收澀固脫的功效[國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版一部.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，26]。其活性成分主要為環(huán)烯醚萜苷類化合物，具有降血糖、抗失血性休克、抑制血小板聚集、調(diào)節(jié)免疫、抗菌抗炎等作用[劉洪，等.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)2003，19 (4): 254.]。定性鑒別上述某類活性成分或定量測(cè)定其某種活性成分含量，已成為評(píng)價(jià)山茱萸及其制劑質(zhì)量的重要方法。例如中國(guó)藥典2010版是用HPLC法對(duì)山茱萸藥材中環(huán)烯醚萜苷類成分馬錢苷進(jìn)行定性和定量分析。但這種針對(duì)單一成分進(jìn)行定性、定量分析的質(zhì)量檢測(cè)模式不能有效控制中藥材的內(nèi)在質(zhì)量，無(wú)法滿足當(dāng)前對(duì)于客觀有效地評(píng)價(jià)和控制山茱萸及其制劑質(zhì)量的迫切要求。指紋圖譜技術(shù)是目前國(guó)際公認(rèn)的控制中藥或天然藥物質(zhì)量最有效的方法。人們憑借實(shí)用的指紋圖譜不僅可確認(rèn)該產(chǎn)品的真?zhèn)危瑫r(shí)能評(píng)價(jià)其質(zhì)量。目前，山茱萸藥材及其制劑的環(huán)烯醚萜苷類化合物的指紋圖譜研究工作，集中在HPLC指紋圖譜[①王花紅，等.西北植物學(xué)報(bào)2004，24 (10):1922.②李小娜，等.中華中醫(yī)藥雜志2006，21 (10):617.]。而HPLC指紋圖譜由于受非色譜條件(如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、固定相牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速、混合流動(dòng)相各組分比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器靈敏度等)影響較大和需用多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品等等原因，重復(fù)性和可行性均存在許多局限性。I⑶核磁共振碳譜偶聯(lián)(I⑶13C NMR coupling)指紋圖譜技術(shù)，也叫反門控去偶核磁共振碳譜偶聯(lián)指紋圖譜技術(shù)，該技術(shù)是在已研究多年的核磁共振氫譜(1H NMR)指紋圖譜技術(shù)[趙天增，等.1HNMR指紋法鑒定植物中藥，中草藥2000，31 (11) =868-870]的基礎(chǔ)上聯(lián)合其他技術(shù)(例如目前應(yīng)用最廣泛的高效液相(HPLC)指紋圖譜技術(shù)[謝培山等，中藥色譜指紋圖譜，人民衛(wèi)生出版社，2005])提出的一種新的非單一手段綜合指紋圖譜技術(shù)。山茱萸的品質(zhì)不在于某個(gè)單一成分，其療效是多個(gè)成分協(xié)同配比的結(jié)果。因此，建立不僅能控制山茱萸活性成分，而且能控制這些活性成分之比例的IGD核磁共振碳譜偶聯(lián)指紋圖譜勢(shì)在必行。山茱萸藥材或衍生品核磁共振碳譜偶聯(lián)指紋圖譜的研究與應(yīng)用，不僅可以解決我國(guó)山茱萸藥材或衍生品鑒別和評(píng)價(jià)的難題，也為加強(qiáng)山茱萸藥材或衍生品內(nèi)在成分研究的系統(tǒng)化與標(biāo)準(zhǔn)化，實(shí)現(xiàn)與國(guó)際接軌提供了科學(xué)的保證。隨著該技術(shù)在其他中藥材或衍生品中的推廣應(yīng)用，該技術(shù)的重大科學(xué)價(jià)值必將日趨突出
發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有技術(shù)的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種鑒別山茱萸藥材或衍生品的方法，該方法利用了 IGD核磁共振碳譜偶聯(lián)指紋圖譜技術(shù)。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的鑒別山茱萸藥材或衍生品的方法，包括以下步驟:I)對(duì)山茱萸藥材或衍生品進(jìn)行提取，得到含有活性成分組的山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物；2)對(duì)所述山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物進(jìn)行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測(cè)，根據(jù)指紋圖譜得到所述山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物中若干個(gè)活性成分特征峰峰強(qiáng)度；并用相同方式(IGD核磁共振碳譜指紋圖譜)測(cè)定出所述各活性成分相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度；3)通過(guò)定量分析手段測(cè)定得到所述標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對(duì)含量；4)利用所述特征峰峰強(qiáng)度(各活性成分特征峰峰強(qiáng)度及相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度)的比值和所述絕對(duì)含量，計(jì)算出山茱萸藥材或衍生品中各活性成分的含量及該類活性成分的總含量，即活性成分組的含量。其中，步驟I)中，山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物的制備方法，包括:稱取山茱萸藥材或飲片粉碎，加入體積為6 10倍量、2(Γ25%的乙醇回流提取或超聲提取2 3次，每次提取f 2小時(shí)，過(guò)濾后合并濾液，減壓濃縮；取濃縮后的濾液，用其重量為f 2倍量的大孔吸附樹脂裝柱，先后以10 20%乙醇、30 50%乙醇和90 95%乙醇沖柱，收集30 50%乙醇洗脫液，減壓蒸干，即得山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物。這里表示乙醇濃度的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量濃度。進(jìn)一步地，回流提取的溫度為9(T95°C，超聲提取的溫度為6(T65°C。進(jìn)一步地，山茱萸藥材或飲片粉碎后過(guò)24飛0目篩。進(jìn)一步地，所述大孔吸附樹脂的型號(hào)為HP-20、D-101、D-201、SP-825或SP-70，優(yōu)選 HP-20、D-101 或 SP-825。進(jìn)一步地，所述大孔吸附樹脂的徑高比為8 15:1，優(yōu)選1(Γ12:1。進(jìn)一步地，用于沖柱的乙醇的體積為濃縮后濾液的20-40倍，優(yōu)選三次沖柱的體積分布為20-25,30-40和20-25倍。其中，步驟2)中，對(duì)山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物進(jìn)行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測(cè)，溶解山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物的溶劑為氘代氯仿(⑶Cl3)、氘代甲醇(⑶3C(X:D3)或氘代二甲基亞砜(DMS0-d6)，優(yōu)選氘代甲醇；山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物和相應(yīng)溶劑的質(zhì)量體積比為55:1飛5:1 (mg:mL)，優(yōu)選60:1。山茱萸飲片可用上述方法進(jìn)行鑒別；其他山茱萸衍生品，如山茱萸環(huán)烯醚萜苷提取物可直接作為山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物，用上述方法進(jìn)行鑒別。其中，步驟2)中，山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物中的活性成分特征峰為C-1l吸收峰，其化學(xué)位移為5C164.0^220.00其中，步驟2)中，所述峰強(qiáng)度可以采用峰高法、面積積分法或重量法計(jì)算。其中，步驟3)中，所述定量分析手段為:高效液相(HPLC)法。進(jìn)一步地，所述高效液相法的條件包括:流動(dòng)相為乙腈冰=10^20:8(Γ9，優(yōu)選15:85 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm。

其中，步驟3)中，所述標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對(duì)含量是指:用定量分析手段測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)參照品的質(zhì)量百分含量。
進(jìn)一步地，山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物中的活性成分的標(biāo)準(zhǔn)參照品為馬錢苷。其中，步驟4)中，計(jì)算各活性成分的含量的偶聯(lián)公式為:
權(quán)利要求
1.一種鑒別山茱萸藥材或衍生品的方法，包括以下步驟: 1)對(duì)山茱萸藥材或衍生品進(jìn)行提取，得到含有活性成分組的山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物； 2)對(duì)所述山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物進(jìn)行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測(cè)，根據(jù)指紋圖譜得到所述山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物中若干個(gè)活性成分特征峰峰強(qiáng)度；并用相同方式測(cè)定出所述各活性成分相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度； 3)通過(guò)定量分析手段測(cè)定得到所述標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對(duì)含量； 4)利用各活性成分特征峰峰強(qiáng)度及相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度的比值和所述絕對(duì)含量，計(jì)算出山茱萸藥材或衍生品中各活性成分的含量及活性成分組的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I)中，山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物的制備方法，包括:稱取山茱萸藥材或飲片粉碎，加入體積為6 10倍量、2(Γ25%的乙醇回流提取或超聲提取2 3次，每次提取Γ2小時(shí)，過(guò)濾后合并濾液，減壓濃縮；取濃縮后的濾液，用其重量為I 2倍量的大孔吸附樹脂裝柱，先后以10 20%乙醇、30 50%乙醇和90 95%乙醇沖柱，收集3(Γ50%乙醇洗脫液，減壓蒸干，即得山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附樹脂的型號(hào)為ΗΡ-20、D-1OU D-20USP-825或SP-70 ;所述大孔吸附樹脂的徑高比為8 15:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，步驟2)中，對(duì)山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物進(jìn)行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測(cè)，溶解山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物的溶劑為氘代氯仿、氘代甲醇或氘代二甲基亞砜；山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物和相應(yīng)溶劑的質(zhì)量體積比為55:1 65:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求廣4任意一項(xiàng)所``述的方法，其特征在于，步驟2)中，山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物中的活性成分特征峰為C-1l吸收峰，其化學(xué)位移為δ c164.(Γ220.0。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中，所述定量分析手段為高效液相法。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中，所述標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對(duì)含量是指:用定量分析手段測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)參照品的質(zhì)量百分含量。
8.根據(jù)權(quán)利要求Γ7任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物中的活性成分的標(biāo)準(zhǔn)參照品為馬錢苷。
9.根據(jù)權(quán)利要求Γ8任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟4)中，計(jì)算各活性成分的含量的偶聯(lián)公式為:
10.根據(jù)權(quán)利要求1、任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述山茱萸衍生品包括:山茱萸飲片、山茱 萸提取物或山茱萸天然藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鑒別山茱萸藥材或衍生品的方法，包括1)對(duì)山茱萸藥材或衍生品進(jìn)行提取，得到含有活性成分組的山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物；2)對(duì)山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物進(jìn)行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測(cè)，根據(jù)指紋圖譜得到所述山茱萸環(huán)烯醚萜苷特征提取物中若干個(gè)活性成分特征峰峰強(qiáng)度；并用相同方式測(cè)定出各活性成分相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度；3)通過(guò)定量分析手段測(cè)定得到標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對(duì)含量；4)利用特征峰峰強(qiáng)度的比值和絕對(duì)含量，計(jì)算出山茱萸藥材或衍生品中各活性成分的含量及活性成分組的含量。本發(fā)明可以反映山茱萸中含有哪些山茱萸環(huán)烯醚萜苷類化合物以及它們之間的比例，達(dá)到對(duì)山茱萸藥材品種和質(zhì)量質(zhì)量鑒定的目的。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103105408SQ20131003605
公開日2013年5月15日 申請(qǐng)日期2013年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月30日
發(fā)明者張海艷, 趙天增, 董建軍, 李倩, 魏悅, 范毅, 常霞, 郭唯, 王偉, 李自紅 申請(qǐng)人:河南省科高植物天然產(chǎn)物開發(fā)工程技術(shù)有限公司