一種紅花黃芪提取物的指紋圖譜的鑒別方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了紅花黃芪提取物的指紋圖譜鑒別方法，包括供試品溶液的制備、指紋圖譜的測定、對照指紋圖譜的確定和紅花黃芪提取物指紋圖譜的鑒別。通過對紅花黃芪提取物進行高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜測定和分析，確定了8個紅花黃芪提取物的特征峰，這些共有特征峰構(gòu)成了紅花黃芪提取物的指紋特征，可作為紅花黃芪提取物的對照指紋圖譜；對需要鑒別的紅花黃芪提取物可以與對照指紋圖譜進行比對，檢查共有特征峰的情況，以鑒別質(zhì)量。本發(fā)明具有方法簡便、重現(xiàn)性好、特征峰明顯、準確可靠等特點，有利于鑒別紅花黃芪提取物的質(zhì)量。
【專利說明】一種紅花黃芪提取物的指紋圖譜的鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種紅花黃芪提取物指紋圖譜的鑒別方法，具體地說是用高效液相色譜指紋圖譜法來對紅花黃芪提取物的有效成分進行質(zhì)量控制的一種鑒別方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紅花具有活血通徑、散瘀止痛的功效，為菊科植物紅花CarthamustinctoriusL.的干燥花。中國藥典2010版以羥基紅花黃色素A、山柰素(C15HltlO6)為指標進行含量測定；姚苗苗采用RP-HPLC法同時測定紅花中羥基紅花黃色素A與紅花黃色素A的含量(藥物分析雜志，2010年02期)。黃苗為豆科植物蒙古黃苗Astragalusmembranaceus (Fisch)Bge.var.mongholicus (Bge) Hsiao 或膜英黃苗 Astragalusmembranaceus (Fisch) Bge.的干燥根。黃芪含黃酮、皂苷類成分；黃酮類成分如芒柄花素、3’-羥基芒柄花黃素(毛蕊異黃酮)及其葡萄糖苷、2’，3’ - 二羥基-7，4’ -二甲氧基異黃酮、7，2’ - 二羥基-3’，4’ -二甲氧基異黃燒及其匍萄糖苷、7，3’- 二輕基-4’，5’- 二甲氧基異黃燒、3-輕基-9，10-二甲氧基紫檀烷及其葡萄糖苷等；皂苷類成分有黃芪皂苷I?珊及大豆皂苷I ;黃芪甲苷(即黃芪皂苷IV)與黃芪乙苷。中國藥典2010版黃芪以黃芪甲苷(C22H22Oltl)、毛蕊異黃酮葡萄糖苷(C22H22O10)為指標進行含量測定；李顏建立高效液相色譜法測定黃芪飲片中4個異黃酮成分毛蕊異黃酮-7-葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素的含量方法(中國藥師，2012年02期)；王宗權(quán)采用HPLC-ELSD法測定不同產(chǎn)地黃芪藥材中的黃芪皂苷1、黃芪皂苷II和黃芪皂苷IV的含量(藥物分析雜志，2010年07期)。
[0003]中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標示其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖。中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。“整體性”和“模糊性”為其顯著特點。中國食品藥品監(jiān)督管理局于2000年頒布了《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》，要求中藥注射劑必須進行指紋圖譜的研究，并建立其相關(guān)的標準。規(guī)范了中藥指紋圖譜的研究，從而掀起了國內(nèi)近幾年來對指紋圖譜的研究熱潮。目前，采用指紋圖譜技術(shù)除了能反映幾乎全部成分的含量、種類外，尚能反映成分的比例、未知成分(含量測定方法中可能已被作為無效或干擾成分扣除)的產(chǎn)生，更多的是從藥物穩(wěn)定性、安全性上進行監(jiān)測。目前中藥提取物產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，但其質(zhì)量控制技術(shù)水平不高，對質(zhì)量控制較成熟的方法有單個成分含量測定或一類成分如總皂苷、總黃酮等的紫外分光光度測定法，不能對提取物進行全面直觀的質(zhì)量控制。本發(fā)明通過指紋圖譜技術(shù)對紅花黃芪提取物種的化學(xué)成分進行整體控制和綜合評價，能夠有效的鑒別紅花黃芪提取物的質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種紅花黃芪提取物的指紋圖譜鑒別方法，通過指紋圖譜測定對紅花黃芪提取物進行全面而有效的鑒別。[0005]紅花黃芪提取物的制備方法:
以紅花、黃芪為原料，兩味藥材以重量份計為:紅花80-150g，黃芪150-280g。取紅花、黃芪，混合，加水煎煮，煎液濃縮后加乙醇沉淀，吸取上清液，回收乙醇，再加水稀釋，靜置，取上清液制成。
[0006]本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的。
[0007]本發(fā)明紅花黃芪提取物的指紋圖譜鑒別方法，該方法包括如下步驟:
(a)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈或甲醇、乙腈甲醇混合溶劑為流動相A，以甲酸水溶液或冰醋酸水溶液、磷酸水溶液、三氟乙酸水溶液為流動相B。檢測器為紫外檢測器、示差檢測器或蒸發(fā)光檢測器；
(b)精密吸取供試品溶液至量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，收取濾液，備用。
[0008](C)測定法吸取供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，即得。
[0009]進一步優(yōu)選的測定條件為:
(a)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(柱長l(T25cm，內(nèi)徑3~5cm，粒徑為f 10 μ m);以乙腈為流動相A，以0.0f 2%冰醋酸水溶液為流動相B ;紫外檢測器，檢測波長20(T400nm ;柱溫2(T50°C，流速為每分鐘0.2~2ml。
[0010](b)供試品溶液的制備精密吸取紅花黃芪提取物供試品溶液0.5~Iml至10~20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。用微孔濾膜0.22~0.45 μ m濾過，收取濾液，備用。
[0011](c)測定法吸取供試品溶液5~40 μ 1，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，SP得。
[0012]最佳測定條件:
(a)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱柱長為25cm,內(nèi)徑為4.6mm,粒徑為5 μ m ;以乙腈為流動相A，以0.3%冰醋酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫；檢測波長為280nm ;柱溫25°C ;流速為每分鐘0.9ml。
【權(quán)利要求】
1.紅花黃芪提取物的指紋圖譜鑒別方法，其特征在于包括以下步驟: (1)按下述方法制備紅花黃芪提取物: 將紅花80-150g、黃芪150-280g混合，加水煎煮，煎液濃縮后加乙醇沉淀，吸取上清液，回收乙醇，再加水稀釋，靜置，取上清液制成； (2)供試品溶液的制備:精密吸取紅花黃芪提取物供試品溶液0.5?Iml至10?20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜0.22?0.45 μ m濾過，收取濾液，備用； (3)指紋圖譜測定:取供試品溶液適量，注入高效液相色譜儀，記錄75分鐘以內(nèi)的色譜圖，得到由其共有特征峰構(gòu)成的紅花黃芪提取物對照高效液相指紋圖譜；其中高效液相色譜分析的條件如下:用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；AgilentZorbax Eclipse XDB C18色譜柱4.6X250mm ；乙臆-0.01-2%冰醋酸為流動相梯度洗脫，梯度程序為:0min — 5min — 30min — 45min — 60min — 62min — 75min對應(yīng)流動相:乙腈:2% — 7% — 15% — 20% — 35% — 50% — 50% ；0.01-2% 冰醋酸:98% — 93% — 85% — 80% — 65% — 50% — 50%,檢測波長為 200nm_400nm ;流速為 0.2ml/min-2ml/min ;柱溫為20°C -50°C ;所得到的紅花黃芪提取物的對照指紋圖譜有8個共有特征峰，其相對保留時間分別為:1號峰:0.18，2號峰:0.23，3號峰:0.24，4號峰:0.57，5號峰:0.76,6 號峰(S):1.00，7 號峰:1.15,8 號峰:1.75。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅花黃芪提取物的指紋圖譜鑒別方法，其特征在于:其中所述的檢測波長為280nm ;流速為0.9ml/min ;柱溫為25°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅花黃芪提取物的指紋圖譜鑒別方法，其特征在于:其中的流動相乙腈-0.01-2%冰醋酸用乙腈-0.03%磷酸溶液或乙腈-0.03%甲酸溶液代替。
【文檔編號】G01N30/88GK103969382SQ201310040438
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2013年2月2日 優(yōu)先權(quán)日:2013年2月2日
【發(fā)明者】果德安, 吳婉瑩, 趙丙賢, 呂延英, 劉蓉霞, 姚帥, 王俊平, 趙興, 蔡錄影, 王丹丹, 侯晉軍, 笪娟 申請人:西安世紀盛康藥業(yè)有限公司