專利名稱：一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行hplc檢測(cè)的前處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法屬于鹽酸小檗堿檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
鹽酸小檗堿片為抗菌藥，對(duì)痢疾桿菌、大腸桿菌引起的腸道感染有效，用于治療腸道感染、腹瀉。鹽酸小檗堿片收載于中國(guó)藥典2010年版二部，含量測(cè)定采用高效液相色譜法。在實(shí)際檢驗(yàn)工作中時(shí)有含量測(cè)定結(jié)果偏低、重復(fù)性差的現(xiàn)象發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種樣品損失少，檢測(cè)時(shí)重復(fù)性好的鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到一次定容溶液；
然后將所述一次定容溶液采用離心分離，取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣的前處理液。所述細(xì)粉的粒度為150-200目。所述流動(dòng)相為磷酸鹽溶液與乙腈按照體積比60:40配制而成，所述磷酸鹽溶液為
0.05mol/L的磷酸二氫鉀和0.05mol/L的庚烷磺酸鈉以體積比1:1混合，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0。所述一次定容溶液的濃度為3mg/L_5mg/L。所述離心分離的條件為1500-4000r/min,離心6_15min。所述前處理液的濃度為0.3mg/L-0.5mg/L。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有較好的效果為:本發(fā)明所采用的前處理方法使得鹽酸小檗堿的樣品損失少，HPLC檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性好。體現(xiàn)在前處理過程中不去包衣采用充分研磨的方法，降低了如果去具體包衣不當(dāng)樣品損失的問題；在溶解樣品是采用流動(dòng)相作為溶齊U，減少了淀粉等輔料在沸水中產(chǎn)生糊化現(xiàn)象對(duì)鹽酸小檗堿的吸附作用，保證了回收率；用離心分離的方法代替濾膜過濾，減少了膜過濾對(duì)重復(fù)性的影響，提高了測(cè)量的穩(wěn)定性。影響因素的討論:
一、包衣的影響
中國(guó)藥典2010年版二部未標(biāo)明需去除包衣。經(jīng)試驗(yàn)去糖衣前后的含量并無明顯差異。分析原因應(yīng)該為研磨、稱量、溶解過程和過濾等綜合因素影響。二、研磨程度的影響
由于各生產(chǎn)廠家所用輔料和制劑工藝不同，在研磨時(shí)發(fā)現(xiàn)研磨難易程度不盡相同。如果不能研磨成極細(xì)的粉末，細(xì)粉和顆粒中鹽酸小檗堿的含量是不均勻的，尤其是包衣部分以顆粒形式存在影響更為突出。三、溶劑的影響
中國(guó)藥典2010年版二部試驗(yàn)方法是:以沸水為溶劑溶解樣品和對(duì)照品。由于鹽酸小檗堿在水中微溶，在熱水中溶解。但以沸水溶解時(shí)鹽酸小檗堿片中的淀粉等輔料會(huì)產(chǎn)生糊化現(xiàn)象，影響濾過，以及對(duì)鹽酸小檗堿可能存在吸附作用。分別以沸水、40%乙腈和流動(dòng)相為溶齊U，以濾膜(0.45um)濾過，棄去初濾液約IOmL后進(jìn)行下一步稀釋。結(jié)果表明，以流動(dòng)相為溶劑含量最高。四、濾過方式的影響
中國(guó)藥典2010年版二部試驗(yàn)方法是:樣品溶液以濾膜(0.45um)濾過，棄去初濾液約8mL后進(jìn)行下一步稀釋。按中國(guó)藥典2010年版二部試驗(yàn)方法以水為溶劑配制樣品溶液和對(duì)照品溶液。樣品溶液采用濾膜(0.45um)、濾紙、垂熔漏斗濾過和2000r/min離心10 min處理后傾取上清液，其中前三種方法分別棄去IOmL初濾液；對(duì)照品溶液采用濾膜(0.45um)、濾紙和垂熔漏斗濾過，并棄去IOmL初濾液。結(jié)果表明，溶液采用不同處理方式，結(jié)果偏差較大。其中離心的效果是最佳的；濾紙和垂熔漏斗吸附較強(qiáng)；同時(shí)對(duì)照品的處理結(jié)果表明，濾膜(0.45um)濾過也有31.5%的吸附。因此不建議采用濾膜、濾紙和垂熔漏斗濾過。五、回收率試驗(yàn)
取經(jīng)105°C干燥4h后的鹽酸小檗堿對(duì)照品，加入處方量的輔料，分別用沸水和流動(dòng)相溶解，以2000 r/min離心lOmin，傾取上清液，按含量測(cè)定的方法測(cè)定回收率。結(jié)果表明，以沸水溶解樣品回收率偏低，偏差亦較大，制劑輔料有吸附；以流動(dòng)相溶解樣品回收率良好，制劑輔料無干擾。綜上影響因素和試驗(yàn)結(jié)果，鹽酸小檗堿片含量測(cè)定的改進(jìn)方法為:不去包衣，充分研磨至細(xì)粉狀，粒度均勻，尤其是包衣部分不能有明顯顆粒感；選擇流動(dòng)相作為溶劑溶解對(duì)照品和樣品；樣品溶液米用尚心后，取上清液備用。糖衣片和薄膜衣片若去包衣不當(dāng)，測(cè)定結(jié)果反倒會(huì)偏低，所以只要研磨足夠細(xì)，混合均勻，糖衣片和薄膜衣片是不必去包衣的。用流動(dòng)相作為溶劑溶解樣品，雖然檢驗(yàn)成本增加了，但不存在諸如淀粉等輔料在沸水中產(chǎn)生的糊化現(xiàn)象和對(duì)鹽酸小檗堿的吸附作用，且回收率較好。用濾紙和垂熔漏斗濾過吸附較強(qiáng),僅僅棄去IOmL初濾液是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，如果采用這兩種方法處理，即使棄去足夠多的初濾液，也很難保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，重復(fù)性也很差。按照中國(guó)藥典2010年版要求棄去初濾液IOmL,濾膜仍有3.5%的吸附。樣品溶液中存在較多的輔料，隨過濾量的加大，會(huì)影響濾膜的過濾效果，過濾會(huì)變得更加困難；并且還要保留足夠的續(xù)濾液供下一步稀釋，因此很難棄去較多的初濾液，吸附作用在所難免。離心的方法不但可以解決吸附的問題，還可以降低檢驗(yàn)成本。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例1
一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法:將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至180目，粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到濃度在3mg/L-5mg/L之間的一次定容溶液；
然后將所述一次定容溶液采用2000r/min,離心IOmin進(jìn)行離心分離,取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣，濃度在0.3mg/L-0.5mg/L的前處理液。所述流動(dòng)相為磷酸鹽溶液與乙腈按照體積比60:40配制而成，所述磷酸鹽溶液為
0.05mol/L的磷酸二氫鉀和0.05mol/L的庚烷磺酸鈉以體積比1:1混合，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0。實(shí)施例2
一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法:將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至200目，粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到濃度在3mg/L-5mg/L之間的一次定容溶液；
然后將所述一次定容溶液采用4000r/min,離心6min進(jìn)行離心分離,取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣，濃度在0.3mg/L-0.5mg/L的前處理液。所述流動(dòng)相為磷酸鹽溶液與乙腈按照體積比60:40配制而成，所述磷酸鹽溶液為
0.05mol/L的磷酸二氫鉀和0.05mol/L的庚烷磺酸鈉以體積比1:1混合，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0。實(shí)施例3
一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法:將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至150目，粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到濃度在3mg/L-5mg/L之間的一次定容溶液；
然后將所述一次定容溶液采用1500r/min,離心15min進(jìn)行離心分離,取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣，濃度在0.3mg/L-0.5mg/L的前處理液。所述流動(dòng)相為磷酸鹽溶液與乙腈按照體積比60:40配制而成，所述磷酸鹽溶液為
0.05mol/L的磷酸二氫鉀和0.05mol/L的庚烷磺酸鈉以體積比1:1混合，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0。實(shí)施例4
一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法:將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至170目，粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到濃度在3mg/L-5mg/L之間的一次定容溶液；
然后將所述一次定容溶液采用3000r/min,離心8min進(jìn)行離心分離,取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣，濃度在0.3mg/L-0.5mg/L的前處理液。所述流動(dòng)相為磷酸鹽溶液與乙腈按照體積比60:40配制而成，所述磷酸鹽溶液為
0.05mol/L的磷酸二氫鉀和0.05mol/L的庚烷磺酸鈉以體積比1:1混合，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0。本發(fā)明可用其他的不違背本發(fā)明的精神或主要特征的具體形式來概述。因此，無論從那一點(diǎn)來看，本發(fā)明的上述實(shí)施方案都只能認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明的說明而不能限制發(fā)明，權(quán)利要求書指出了本發(fā)明的范圍，而上述的說明并未指出本發(fā)明的范圍，因此，在與本發(fā)明的權(quán)利要求書相當(dāng)?shù)暮x和范圍內(nèi)的任何變化，都應(yīng)認(rèn)為是包括在權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法，其特征在于:將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到一次定容溶液； 然后將所述一次定容溶液采用離心分離，取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣的前處理液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法，其特征在于所述細(xì)粉的粒度為150-200目。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法，其特征在于所述流動(dòng)相為磷酸鹽溶液與乙腈按照體積比60:40配制而成，所述磷酸鹽溶液為0.05mol/L的磷酸二氫鉀和0.05mol/L的庚烷磺酸鈉以體積比1:1混合，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法，其特征在于所述一次定容溶液的濃度為3mg/L-5mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法，其特征在于所述離心分離的條件為1500-4000r/min,離心6_15min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法，其特征在于所述前處理液的濃度為0.3mg/L-0.5mg/Lo
全文摘要
本發(fā)明一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法屬于鹽酸小檗堿檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域；所要解決的技術(shù)問題為提供一種樣品損失少，檢測(cè)時(shí)重復(fù)性好的鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法；所采用的技術(shù)方案為將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到一次定容溶液；然后將所述一次定容溶液采用離心分離，取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣的前處理液；本發(fā)明廣泛應(yīng)用于鹽酸小檗堿HPLC檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
文檔編號(hào)G01N30/06GK103115987SQ20131005632
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月22日
發(fā)明者張俊萍 申請(qǐng)人:山西云鵬制藥有限公司