專利名稱：豬瘟分支肽及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種豬瘟分支肽及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
豬瘟病毒E2蛋白可以誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體，是豬瘟病毒最主要的保護(hù)性抗原(Konig等，J Virol，1995，69:479-86)。關(guān)于E2蛋白抗原表位的鑒定已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展。其中，E2蛋白的829-837位氨基酸是一個(gè)主要的抗原表位，而且是保守的豬瘟特異性的線性表位(Lin等，J Virol, 2000, 74:11619-25)。大腸桿菌表達(dá)的該表位與GST的融合產(chǎn)物誘導(dǎo)了保護(hù)性免疫應(yīng)答(Liu等，J Virol Meth，2006，134:125-9)，并且串聯(lián)了 4個(gè)拷貝后，表達(dá)的融合蛋白能抵抗豬瘟病毒的攻擊(Liu等，Vaccine，2006，24:7175-7180)。把該表位人工合成的肽鏈與BSA偶聯(lián)后，免疫豬，僅僅顯示了微弱的保護(hù)效力(Dong等，Vaccine, 2006, 24:1906-1913)。利用合成重疊肽的方法，已經(jīng)鑒定出了一系列的豬瘟E2蛋白的線性中和表位，把上述表位分別與BSA偶聯(lián)后，免疫豬，能誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體，但并不能對(duì)豬提供完全的保護(hù)(Dong 等，Vaccine，2006，24:1906-1913 ;Dong 等，Vaccine，2006，24:426-434)。上述研究無論是表位與GST融合表達(dá)還是合成的肽鏈與BSA偶聯(lián)，免疫動(dòng)物后都不可避免地產(chǎn)生針對(duì)載體的免疫應(yīng)答，這可能會(huì)給免疫動(dòng)物帶來一定的風(fēng)險(xiǎn)。而且，短肽鏈與巨大的載體偶聯(lián)會(huì)更多地誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)載體的免疫應(yīng)答(cease等，Proc NatlAcad Sci U S A, 1987,84(12):4249-53)。因此，需要研制一種包含上述E2蛋白抗原表位的免疫原分子，能為豬提供安全、高效的免疫保護(hù)。對(duì)于豬瘟病毒抗體的檢測(cè)，目前公認(rèn)的方法是用中和試驗(yàn)來檢測(cè)，但是該方法操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)，而且需要高質(zhì)量的豬瘟單克隆抗體來檢測(cè)，普通的實(shí)驗(yàn)室很難達(dá)到上述要求。因此， 豬瘟抗體的檢測(cè)需要一種制備簡(jiǎn)單、可實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)的檢測(cè)抗原。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種豬瘟分支肽，該分支肽含有輔助性T細(xì)胞表位和具有中和活性的豬瘟病毒E2蛋白B細(xì)胞表位，該分支肽既可以作為免疫原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，又可以作為檢測(cè)抗原來檢測(cè)豬瘟病毒抗體，其作為免疫原時(shí)，不僅可避免載體蛋白誘導(dǎo)不期望的免疫應(yīng)答，而且能提高肽疫苗的免疫原性，增強(qiáng)免疫保護(hù)作用。此外，還需要提供一種豬瘟分支肽在制備預(yù)防或治療豬瘟病的藥物中的應(yīng)用，以及還提供一種豬瘟分支肽在制備檢測(cè)豬瘟病毒抗體的生物制品中的應(yīng)用。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種豬瘟分支肽，該分支肽具有B-L-T結(jié)構(gòu)，其中，T為通用型輔助性T細(xì)胞表位，該通用型輔助性T細(xì)胞表位的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示；B為豬瘟病毒E2蛋白B細(xì)胞表位，該B細(xì)胞表位的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
L為連接T與B的連接肽，該連接肽具有下述結(jié)構(gòu)式:
權(quán)利要求
1.一種豬瘟分支肽，其特征在于，所述分支肽具有B-L-T結(jié)構(gòu)，其中， T為通用型輔助性T細(xì)胞表位，該通用型輔助性T細(xì)胞表位的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示； B為豬瘟病毒E2蛋白B細(xì)胞表位，該B細(xì)胞表位的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示； L為連接T與B的連接肽，該連接肽具有下述結(jié)構(gòu)式:
2.一種疫苗組合物，其特征在于，用于免疫動(dòng)物以對(duì)抗豬瘟病毒的感染，所述疫苗組合物包含:權(quán)利要求1所述的豬瘟分支肽、以及佐劑。
3.權(quán)利要求1所述的豬瘟分支肽在制備預(yù)防或治療豬瘟病的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物包括豬瘟疫苗。
5.—種檢測(cè)豬瘟病毒抗體的試劑盒,其特征在于,包含權(quán)利要求1所述的豬瘟分支肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，還包含豬瘟病毒陽(yáng)性對(duì)照血清、豬瘟病毒陰性對(duì)照血清。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，還包含ELISA酶標(biāo)板、酶標(biāo)二抗、顯色液。
8.權(quán)利要求1所述的豬瘟分支肽在制備檢測(cè)豬瘟病毒抗體的生物制品中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述生物制品為檢測(cè)豬瘟病毒抗體的檢測(cè)抗原。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，通過ELISA的方法檢測(cè)豬瘟病毒抗體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種豬瘟分支肽，該分支肽將輔助性T細(xì)胞表位和豬瘟病毒E2蛋白B細(xì)胞表位用分支骨架結(jié)構(gòu)進(jìn)行連接。本發(fā)明還公開了上述豬瘟分支肽作為豬瘟疫苗及作為檢測(cè)豬瘟病毒抗體的檢測(cè)抗原的應(yīng)用。本發(fā)明豬瘟分支肽，作為豬瘟疫苗，不僅避免機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)載體的免疫應(yīng)答，而且提高了合成肽疫苗的免疫原性，其成份單純，沒有毒副作用和生物安全方面的擔(dān)憂，具有產(chǎn)業(yè)化優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明豬瘟分支肽，作為檢測(cè)抗原，不僅制備簡(jiǎn)單，且能快速檢測(cè)豬瘟病毒抗體，具有很好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)G01N33/68GK103159858SQ201310060318
公開日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2013年2月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月26日
發(fā)明者童光志, 李國(guó)新, 周艷君, 于海 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所