專利名稱：布渣葉中黃酮類成分含量的快速測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥的質(zhì)量控制方法，具體涉及布渣葉中黃酮類成分含量的快速測定方法，可同時測定布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分的含量的快速測定，屬于中藥質(zhì)量檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
布渣葉為椴樹科植物破布葉Microcos paniculata L.的干燥葉，產(chǎn)于廣東、廣西、海南、云南等地，印度、印度尼西亞亦有分布；在我國，尤以兩廣地區(qū)資源豐富，其中廣東的陽西、湛江為主產(chǎn)地，均以野生為主。本品味微酸，性涼，無毒，具有清熱利濕、健胃消滯的功效，用于治療感冒發(fā)熱、黃疸、食欲不振、消化不良、脘腹脹痛、泄瀉、瘡瘍、蜈蚣咬傷等。布渣葉主要含有黃酮、生物堿、有機酸、揮發(fā)油、鞣質(zhì)、酚類等成分。其中的黃酮類成分具有多方面的生物活性，如抗脂質(zhì)過氧化、抗衰老、清除自由基、降低血脂及血膽固醇、抗菌消炎、抗病毒、增強免疫功能等。現(xiàn)有技術(shù)中采用HPLC法僅公開對布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分分別進行含量測定，已知的HPLC的含量快速測定方法均是對其中一種或兩種黃酮進行測定，未公開記載同時對四種黃酮類成份進行測定的HPLC的含量快速測定方法，因此其過程較長、用時較多、效率不高。因此，目前亟需建立一種可同時測定布渣葉4種黃酮類成分的快速快速測定方法，該方法滿足制藥過程中布渣葉藥材快速質(zhì)量控制的要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種可同時測定布渣葉4種黃酮類成分的快速快速測定方法。本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的所提供的技術(shù)方案是:一種布渣葉中黃酮類成分含量的快速測定方法，其特征在于，其采用HPLC法，該方法為一次性同時測定布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分的含量。其具體包括以下步驟:(I)色譜條件色譜柱:ShiseidoCapcell pak MG C18 (4.6 X 250mm, 5 μ m)柱；流動相:以甲醇為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫；檢測波長:280nm ;流速:1.0mL/min ;柱溫:25°C ；梯度洗脫條件為:O 35分鐘，流動相A21 35%，流動相B79 65% ；35 60分鐘，流動相A35 48%，流動相B65 52% ；60 62分鐘，流動相A48 80%，流動相B52 20% ；(2)對照品溶液的制備
取表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每HlL含表兒茶素60 μ g、牡荊苷25 μ g、異牡荊苷40 μ g和水仙苷60 μ g的混合溶液，即得；(3)供試品溶液的制備取布渣葉藥材粉末(過三號篩)約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz) I小時，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；(4)測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀進行測定，得表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量。本發(fā)明的快速測定方法簡單、快速、準(zhǔn)確，靈敏度高、精密度、穩(wěn)定性好，可一次性同時測定未知含量的布渣葉樣品中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量，可用于制藥過程中布渣葉藥材快速質(zhì)量控制。


圖1，本發(fā)明實施例中布渣葉HPLC譜圖，Α.供試品；B.混合對照品；I表兒茶素；2牡荊苷；3異牡荊苷；4水仙苷。
具體實施例方式本發(fā)明提供的采用HPLC法，同時測定布渣葉4種黃酮類成分的快速測定方法的步驟為:I儀器與試藥Agilentl200高效液相色譜儀，Mettler XS205DU型電子分析天平(瑞士)。布渣葉樣品分別采收自廣東省各市縣及在各大醫(yī)藥公司購買，共收集10份，所有樣品經(jīng)廣東省中醫(yī)研究所劉法錦教授鑒定為:鍛樹科植物破布葉Microcos paniculataL.的干燥葉，為《中國藥典》2010年版收載的品種。表兒茶素(批號:878-200102)、牡荊苷(批號:111687-200602)購于中國藥品生物制品檢定所；異牡荊苷(批號:Y-127_110705)、水仙苷(批號:S-063-110926)購于成都瑞芬思生物科技有限公司；甲醇為色譜純，液相用水為屈臣氏蒸餾水，其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱:ShiseidoCapcell pak MG C18 (4.6X 250mm, 5 μ m)柱；流動相:以甲醇為流動相A，以水為流動相B，按下表進行梯度洗脫；檢測波長:280nm ;流速:1.0mL/min ;柱溫:25°Co梯度洗脫條件為:O 35分鐘，流動相A21 35%，流動相B79 65% ；35 60分鐘，流動相A35 48%，流動相B65 52% ；60 62分鐘，流動相A48 80%，流動相B52 20% ；2.2對照品溶液的制備取表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每mL含表兒茶素145.80 μ g、牡荊苷58.10 μ g、異牡荊苷95.80 μ g和水仙苷144.40 μ g的混合溶液，作為儲備液。2.3供試品溶液的制備取布渣葉藥材粉末(過三號篩)約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz) I小時，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。2.4測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀進行測定。2.5線性關(guān)系考察精密量取混合對照品溶液0.5、l、2、4、6、8、10ml，分別置IOml量瓶中，加入70%甲醇溶解并稀釋至刻度，得表兒茶素質(zhì)量濃度為7.290、14.580,29.160,58.320,87.480、116.640、145.800μ g/ml,牡荊苷質(zhì)量濃度為 2.905,5.810、11.620,23.240,34.860、46.480,58.100 μ g/ml，異牡荊苷質(zhì)量濃度為 4.790,9.580、19.160,38.320,57.480、76.640,95.800 μ g/ml,水仙苷質(zhì)量濃度為 7.220、14.440、28.880、57.760、86.640、115.520、144.400 μ g/ml的系列溶液。精密吸取上述系列溶液各10 μ I注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進行測定。以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，進樣量(X，μ g/ml)為橫坐標(biāo)，進行線性回歸，得回歸方程為Y表兒茶素=6.1847X-9.3822 (r=0.9999, n=7) ；Ytt荊苷=14.671X-12.085 (r=0.9999, n=7) ;Y 異牡荊苷=19.632X—26.722 (r=0.9999, n=7) ;Y 水仙苷=8.1311Χ-13.749 (r=0.9999, n=7)。結(jié)果表明，牡荊苷和異牡荊苷的進樣量分別在
7.290-145.8,2.905-58.10,4.790-95.80,7.220—144.4 μ g/ml 范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。2.6精密度試驗精密吸取同一混合對照品溶液(表兒茶素58.32 μ g、牡荊苷23.24 μ g、異牡荊苷38.32 μ g和水仙苷57.76 yg) 10 μ 1，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件重復(fù)進樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果，表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷峰面積的RSD分別為0.96%、
1.22%、1.04%和0.80% (η均為6)，表明儀器精密度良好。2.7穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品溶液(SlO) 1(^1，分別于0、1、2、4、8、12、2處進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷峰面積的RSD分別為1.08%,0.87%、
0.56%和0.67% (η均為7)，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.8重復(fù)性試驗精密稱取同一批布渣葉樣品(S9)適量，共6份，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，計算樣品中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。結(jié)果，表兒茶素的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.0929%，RSD=L 18% (n=6)；牡荊苷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1224%, RSD=0.89%(n=6);異牡荊苷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1604%,RSD=0.92% (n=6);水仙苷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2189%，RSD=0.98% (n=6)，表明本方法重復(fù)性良好。 2.9加樣回收率試驗取同一批已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的布渣葉樣品(S9)9份，每份約0.5g，精密稱定，分別精密加入一定質(zhì)量濃度的表兒荼素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷混合對照品的70%甲醇溶液
50ml，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算加樣回
收率，結(jié)果分別見表I 4。表I表兒荼素加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)
權(quán)利要求
1.一種布渣葉中黃酮類成分含量的快速測定方法，其特征在于，其采用HPLC法，該方法為一次性同時測定布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分的含量。
2.權(quán)利要求1所述的布渣葉中黃酮類成分含量的快速測定方法，其特征在于其包括以下步驟: (1)色譜條件 色譜柱:Shiseido Capcell pak MG C18,4.6 X 250mm、5 μ m柱;流動相:以甲醇為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫；檢測波長:280nm ;流速:1.0mL/min ;柱溫:25°C ； 梯度洗脫條件: O 35分鐘，流動相A21 35%，流動相B79 65% ； 35 60分鐘，流動相A35 48%，流動相B65 52% ； 60 62分鐘，流動相A48 80%，流動相B52 20% ； (2)對照品溶液的制備 取表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每mL含表兒茶素60 μ g、牡荊苷25 μ g、異牡荊苷40 μ g和水仙苷60 μ g的混合溶液，即得； (3)供試品溶液的制備 取布渣葉藥材粉末過三號篩約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲功率200W頻率40kHz，處理I小時，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； (4)測定法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀進行測定，得表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量。
全文摘要
本發(fā)明公開了布渣葉中黃酮類成分含量的快速測定方法，用來測定布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量，其特征在于，其采用HPLC法對含量進行快速測定，該方法能一次性同時測定布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分的含量。本發(fā)明提供的測定方法快速、簡單、準(zhǔn)確，靈敏度高，精密度、穩(wěn)定性好，非常有利于在制藥過程中布渣葉藥材快速質(zhì)量控制中的應(yīng)用。
文檔編號G01N30/02GK103149299SQ20131006872
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月4日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月4日
發(fā)明者孫冬梅, 羅文匯, 畢曉黎, 譚志燦, 胥愛麗, 李養(yǎng)學(xué), 李素梅, 江潔怡 申請人:廣東省中醫(yī)研究所