羅漢果止咳糖漿的質(zhì)量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種羅漢果止咳糖漿的質(zhì)量檢測方法，其是一種方法簡化、省時節(jié)能的、可操作性強(qiáng)的質(zhì)量控制方法，十分有利于工業(yè)化生產(chǎn)的應(yīng)用。
【專利說明】羅漢果止咳糖漿的質(zhì)量檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥的質(zhì)量控制，具體涉及羅漢果止咳糖漿的質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002]羅漢果止咳糖漿收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第二十冊177頁，標(biāo)準(zhǔn)代號為WS3-B-3882-98，具祛痰止咳的功能，用于感冒咳嗽及支氣管炎。羅漢果止咳糖漿在臨床上應(yīng)用多年，取得比較令人滿意的療效。羅漢果止咳糖漿處方由中藥材羅漢果46g、枇杷葉176g、桑白皮12g、白前18g、百部30g、桔梗12g、薄荷油0.2g組成，按以下工藝制成:以上七味，除薄荷油外，其余羅漢果等六味加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次I小時,合并煎液,濾過,濾液濃縮至約200ml，放冷，加入4倍量乙醇，攪拌，靜置，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至適量。另取蔗糖400g，加水煮沸使溶解，濾過，濾液與上述濃縮液混合，加入枸櫞酸Ig及適量的薄荷油乙醇溶液、防腐劑和香精，再加水至1000ml,攪勻，即得。處方中羅漢果為葫蘆科植物羅漢果Siraiti grosvenorii (Swin gle)C.Jeffrey ex A.Μ.Lu et Z.Y.Zhang的干燥果實(shí)；枇杷葉為薔薇科植物枇杷Er1botryajaponica(Thunb.) I, indl.的干燥葉；桑白皮為?？浦参锷orus alba L.的干燥根皮；白前為蘿蘑科植物柳葉白前Cynanchum stauntonii (Decne.) Schltr.ex Levl.或芫花葉白前Cyn, anchum glaucescens (Decne.) Hand.-Mazz.的干燥根莖和根；百部為百部科植物直立百部 Stemona sessilifolia(Miq.)Miq.蔓生百部 Stemona japonica(Bl.)Miq.或?qū)θ~百部Stemona tuberosa Lour.的干燥塊根；桔梗為桔?？浦参锝酃latycodongrandiflorus(Jacq.)A.DC.的干燥根；薄荷油本品為無色或淡黃色的澄清液體，系唇形科植物薄荷Menthahaplocalyx Briq.的新鮮莖和葉經(jīng)水蒸氣蒸懼、冷凍、部分脫腦加工提取的揮發(fā)油，是薄荷的主要成分之一。
[0003]羅漢果止咳糖漿原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅用常規(guī)檢查對產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行控制，故需對其質(zhì)量控制方法進(jìn)行研究，制定確實(shí)可行的方法保證產(chǎn)品質(zhì)量和臨床療效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種方法簡化、省時節(jié)能的、可操作性強(qiáng)的羅漢果止咳糖漿的質(zhì)量控制方法，十分有利于工業(yè)化生產(chǎn)的應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題:
[0006]羅漢果止咳糖漿的質(zhì)量控制方法包括以下步驟中的一種或多種:
[0007]1、用薄層色譜法對藥物中的羅漢果進(jìn)行定性鑒別:
[0008]取本品50ml，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水50ml洗滌，棄去水洗液，分取正丁醇層，蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為供試品溶液。另取羅漢果對照藥材lg，加水50ml，加熱回流I小時，放冷，用棉花濾過，取濾液，自“用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次”起，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4?8μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-丙酮-冰乙酸-水(4: I: 0.1: 4)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
[0009]2、用薄層色譜法對藥物中的白前進(jìn)行定性鑒別:
[0010]取本品50ml，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水50ml洗滌，棄去水洗液，分取正丁醇層，蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為供試品溶液。取白前對照藥材lg，加水50ml，加熱回流I小時，放冷，用棉花濾過，取濾液，自“用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次”起，同法制成白前對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4?8μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(5: 2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
[0011]3、用高效液相色譜法測定該藥物中羅漢果特征成分羅漢果苷V的含量:
[0012]照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定。
[0013]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(52: 48)為流動相；用蒸發(fā)光散射檢測器檢測。理論塔板數(shù)按羅漢果苷V峰計(jì)算應(yīng)不低于 2000。
[0014]對照品溶液的制備取羅漢果苷V對照品適量，精密稱定，加流動相制成每Iml分別含0.lmg、0.4mg的溶液，即得。
[0015]供試品溶液的制備精密量取本品15ml，通過已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，柱高1cm)，以水10ml洗脫，棄去水液，再用20%乙醇10ml洗脫，棄去洗脫液，繼用稀乙醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)昧鲃酉嗳芙?，轉(zhuǎn)移至1ml量瓶中，力口流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過，即得。
[0016]測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20μ 1，供試品溶液5?20 μ I，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。
[0017]本發(fā)明羅漢果止咳糖漿的質(zhì)量控制方法，通過大量試驗(yàn)研究對比，是一種方法簡化、省時節(jié)能的、可操作性強(qiáng)的羅漢果止咳糖漿的質(zhì)量控制方法，十分有利于工業(yè)化生產(chǎn)的應(yīng)用。
【具體實(shí)施方式】
[0018]本發(fā)明的質(zhì)量控制方法是經(jīng)過大量的試驗(yàn)篩選得到的最佳方案，以下試驗(yàn)研究為本發(fā)明的優(yōu)選過程。
[0019]一、羅漢果的薄層色譜鑒別
[0020]供試品、對照藥材溶液的制備同前文
【發(fā)明內(nèi)容】
(以下簡稱“前文”)，陰性對照溶液是按處方比例稱取除羅漢果外其余藥味，按制法制成陰性制劑，再按前文供試品溶液的方法制備。展開及檢視條件同前文。三批樣品(5310001、5310002、5310003)試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的綠色斑點(diǎn)。薄層色譜分離效果好，斑點(diǎn)清晰，比移值適中(Rf = 0.27)，重現(xiàn)性和專屬性好，陰性對照無干擾。
[0021]葫蘆素烷三萜類皂苷是羅漢果的主要有效成分之一，約占干果的3%，試驗(yàn)中對以下提取純化方法進(jìn)行了對比:
[0022]①取本品20ml，用正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；
[0023]②取本品40ml，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的氨試液洗滌2次，每次30ml，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；
[0024]③取本品20ml，用正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，加于DlOl型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑0.9cm,高15cm)上,用40%乙醇50ml洗脫，收集洗脫液,蒸干,殘洛加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；
[0025]④?、壑杏?0%乙醇洗脫后的柱子繼續(xù)用70%乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；
[0026]⑤取本品50ml，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，棄去乙酸乙酯液，取水液，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水50ml洗滌，棄去洗滌液，分取正丁醇層，蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為供試品溶液。
[0027]結(jié)果方法①③雜質(zhì)較多，背景深，方法④未能將特征斑點(diǎn)成分提取出來，方法②⑤與前文收載方法效果相當(dāng)，因前文收載方法能與白前鑒別用同一供試液，故采用。
[0028]試用了以下展開系統(tǒng)和檢視方法:
[0029]①正丁醇-乙醇-水(8: 2: 3)，噴以2%香草醛的10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；
[0030]②三氯甲烷-甲醇-水(13: 7: 2)的下層溶液，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光和紫外光燈(365nm)下檢視；
[0031]③正丁醇-丙酮-冰乙酸-水(4: I: 0.1: 4)的上層溶液，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。
[0032]結(jié)果方法①③供試品色譜中背景較深，方法②重現(xiàn)性不好，特征斑點(diǎn)不夠明顯，而前文收載方法分離效果較好，特征斑點(diǎn)清晰，故采用。
[0033]二、白前的薄層色譜鑒別
[0034]供試品、對照藥材溶液的制備同前文，陰性對照溶液是按處方比例稱取除白前外其余藥味，按制法制成陰性制劑，再按前文供試品溶液的方法制備。三批樣品(5310001、5310002,5310003)試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃綠色熒光斑點(diǎn)(Rf = 0.55)。薄層色譜分離效果好，斑點(diǎn)清晰圓整，比移值適中，重現(xiàn)性和專屬性好，陰性對照無干擾，故收入前文。
[0035]試驗(yàn)中還對以下提取方法進(jìn)行了研究:
[0036]①取本品40ml，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的氨試液洗滌2次，每次30ml，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液(同上述羅漢果項(xiàng)下提取方法②)；
[0037]②取本品20ml，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至10，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；
[0038]③取本品30ml，加入0.1 %鹽酸溶液20ml，搖勻，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。
[0039]結(jié)果方法③特征斑點(diǎn)不夠明顯，方法①②與前文收載方法相當(dāng)，因前文收載方法能與羅漢果鑒別用同一供試液，故采用。
[0040]展開系統(tǒng)試用了:
[0041]①用1%氫氧化鈉制備的硅膠G薄層板，正己烷-三氯甲烷-甲醇(5: 5: 0.2)；
[0042]②硅膠G薄層板，環(huán)己烷-乙酸乙酯-丙酮(5:1: 2)。
[0043]結(jié)果方法①比移動值偏低，邊緣效應(yīng)大，方法②與前文收載方法相當(dāng)，但前文收載方法為二元展開劑，較簡便，故采用。
[0044]三、羅漢果特征成分羅漢果苷V的含量測定方法研究
[0045]I儀器、試藥與樣品
[0046]儀器:日本島津LC-1OAtvp高效液相色譜儀，威瑪龍色譜工作站；美國奧泰ELSD2000ES蒸發(fā)光散射檢測器；十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(HypersilG0LD4.6X250mm)，菲羅門C184.0X3.0mm保護(hù)柱；梅特勒-托利多AB265-S電子天平；阿修羅AXLC1820超純水機(jī)。
[0047]試藥:羅漢果苷V化學(xué)對照品(含量測定用，批號:111754-200601，中國食品藥品檢定研究院提供)，純度經(jīng)檢查符合含量測定用化學(xué)對照品的技術(shù)要求，含量為100%，純度檢查詳見后；甲醇(色譜純)，水(自制超純水)，AB-8型大孔吸附樹脂(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)。
[0048]樣品:羅漢果止咳糖漿(批號:5310001、5310002、5310003、101201)及不含羅漢果藥材的陰性對照樣品，廣西靈峰藥業(yè)有限公司。
[0049]2供試品溶液制備方法選擇
[0050]2.1樣品溶液的制備
[0051]對照品溶液的制備精密稱取羅漢果苷V對照品9.92mg，置1ml量瓶中，加流動相使溶解并稀釋至刻度，搖勻(0.992mg/ml);精密量取1.0ml,3.5ml分別置1ml量瓶，加流動相至刻度，搖勻，即得(99.2 μ g/ml、347.2 μ g/ml)。
[0052]供試品溶液的制備精密量取本品15ml，通過已處理好的AB_8型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，柱高1cm)，以水10ml洗脫，再用20%乙醇10ml洗脫，棄去兩次洗脫液，繼續(xù)用稀乙醇10ml洗脫，收集稀乙醇洗脫液，蒸干，殘?jiān)昧鲃酉嗳芙?，轉(zhuǎn)移至1ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過，即得。
[0053]陰性樣品溶液的制備陰性樣品溶液是按處方比例稱取除羅漢果外其余輔料，按制法制成羅漢果陰性樣品，再取此陰性樣品按上述“供試品溶液的制備”方法制備不含羅漢果的陰性樣品溶液。
[0054]在供試品溶液制備方法研究中，對水洗脫量、20%乙醇洗脫量進(jìn)行了考察。結(jié)果以10ml水及100ml20%乙醇洗脫除雜為佳。
[0055]2.2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
[0056]色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(Hypersil G0LD4.6X250mm)，菲羅門C184.0X3.0mm保護(hù)柱；流動相:甲醇-水(52: 48)，流速:lml/min ;漂移管溫度:100°C，空氣流速:2.5L/min ;柱溫:室溫。
[0057]分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20 μ 1，供試品溶液及不含羅漢果的陰性樣品溶液各20μ 1，注入液相色譜儀，繪制色譜圖。此條件下羅漢果苷V與其它組分達(dá)到基線分離，分離度R > 1.5，理論塔板數(shù)按羅漢果苷V計(jì)算大于2000，羅漢果苷V保留時間約為12分鐘，見表1。陰性樣品溶液在色譜相應(yīng)位置無吸收峰，可見陰性無干擾。
[0058]表1理論塔板數(shù)、分離度、保留時間數(shù)據(jù)
[0059]
【權(quán)利要求】
1.一種具有祛痰止咳作用的羅漢果止咳糖漿的質(zhì)量檢測方法，其中該糖漿由中藥材羅漢果46g、枇杷葉176g、桑白皮12g、白前18g、百部30g、桔梗12g、薄荷油0.2g組成,按以下工藝制成:以上七味，除薄荷油外，其余羅漢果等六味加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次I小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約200ml，放冷，加入4倍量乙醇，攪拌，靜置，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至適量。另取蔗糖400g，加水煮沸使溶解，濾過，濾液與上述濃縮液混合，加入枸櫞酸Ig及適量的薄荷油乙醇溶液、防腐劑和香精，再加水至1000ml，攪勻，即得。該藥物的質(zhì)量檢測方法其特征在于:該方法包括以下全部或部分內(nèi)容:羅漢果的薄層色譜定性鑒別、白前的薄層色譜定性鑒別、羅漢果特征成分羅漢果苷V的含量測定。 a、羅漢果的薄層色譜定性鑒別: 取本品50ml，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水50ml洗滌，棄去水洗液，分取正丁醇層，蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為供試品溶液。另取羅漢果對照藥材lg，加水50ml，加熱回流I小時，放冷，用棉花濾過，取濾液，自“用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次”起，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4?8μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-丙酮-冰乙酸-水(4: I: 0.1: 4)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。 b、白前的薄層色譜定性鑒別: 取本品50ml，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水50ml洗滌，棄去水洗液，分取正丁醇層，蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為供試品溶液。取白前對照藥材lg，加水50ml，加熱回流I小時，放冷，用棉花濾過，取濾液，自“用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次”起，同法制成白前對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4?8μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(5: 2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。 C、羅漢果特征成分羅漢果苷V的含量測定: 照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(52: 48)為流動相；用蒸發(fā)光散射檢測器檢測。理論塔板數(shù)按羅漢果苷V峰計(jì)算應(yīng)不低于 2000。 對照品溶液的制備取羅漢果苷V對照品適量，精密稱定，加流動相制成每Irnl分別含.0.lmg、0.4mg的溶液，即得。 供試品溶液的制備精密量取本品15ml，通過已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，柱高10cm)，以水10ml洗脫，棄去水液，再用20%乙醇10ml洗脫，棄去洗脫液，繼用稀乙醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)昧鲃酉嗳芙?，轉(zhuǎn)移至1ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過，即得。 測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20 μ 1，供試品溶液5?20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。
【文檔編號】G01N30/90GK104034838SQ201310072531
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2013年3月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月7日
【發(fā)明者】廖展葦, 陳曉軍, 丘偉業(yè), 黃園, 周凱華, 鄧昶, 阮碧芳, 梁霞, 梁月釗 申請人:廣西靈峰藥業(yè)有限公司