專利名稱：用聯(lián)吡啶釕電致化學(xué)發(fā)光法測定痕量左旋咪唑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用聯(lián)吡啶釕電致化學(xué)發(fā)光法測定痕量左旋咪唑的方法。
背景技術(shù)：
由于其質(zhì)優(yōu)價廉、廣譜抗菌活性的特點，左旋咪唑是獸藥和人用藥品中常用的驅(qū)蟲藥之一。在血液和尿液中可以檢測出左旋咪唑的藥物殘留。對于左旋咪唑最大的藥物殘余量，美國藥典有規(guī)定。因此有必要在前有的基礎(chǔ)上提高靈敏度來研究一種對左旋咪唑具有高選擇性的檢測方法。電致化學(xué)發(fā)光法是一種高靈敏度、高選擇性的痕量分析方法。已報道測定左旋咪唑的方法存在靈敏度低、樣品處理復(fù)雜、儀器昂貴或?qū)嶋H應(yīng)用范圍窄等缺點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高靈敏度、高選擇性、線性范圍寬、儀器簡單、重現(xiàn)性好、容易控制的用聯(lián)吡啶釕電致化學(xué)發(fā)光法測定痕量左旋咪唑的方法。構(gòu)思如下:以聯(lián)吡啶釕作為電致化學(xué)發(fā)光試劑，聯(lián)吡啶釕具有水溶性好，化學(xué)性能穩(wěn)定，氧化還原可逆，發(fā)光效率高，應(yīng)用的PH范圍較寬，可電化學(xué)再生和激發(fā)態(tài)壽命長等特點被廣泛應(yīng)用于電致化學(xué)發(fā)光法(ECL)研究中；聯(lián)吡啶釕在其氧化電位下，有微弱的發(fā)光。左旋咪唑結(jié)構(gòu)中含有叔胺 基，可以有效的增強聯(lián)吡啶釕在其氧化電位下的發(fā)光強度；這樣可以通過加入左旋咪唑后聯(lián)吡啶釕溶液發(fā)光強度的變化直接檢測左旋咪唑的含量。本發(fā)明利用電致化學(xué)發(fā)光法，左旋咪唑增強聯(lián)吡啶釕發(fā)光強度，左旋咪唑濃度在2 X IO-10 I X IO-7 mol/L范圍內(nèi)與聯(lián)吡啶釕發(fā)光增強成良好的線性關(guān)系。具體步驟如下:
(I)鉬電極的處理:
將鉬電極依次用1.0 i! m、0.3 i! m和0.05 u m的氧化招粉進行表面拋光處理,然后依次在硝酸(體積百分比濃度為50%)、無水乙醇和純水中浸泡洗滌，取出后超聲洗滌5分鐘。(2)檢測方法:
將步驟(I)處理好的鉬電極放入含有2.0X10, 1.0X10_7 mol/L的左旋咪唑標準溶液的檢測體系統(tǒng)中，直接測定發(fā)光強度；檢測體系為:350 UL含有5 mmol/L聯(lián)吡啶釕的12 mmol/L硼砂緩沖溶液，硼砂緩沖溶液pH=9.0 ^MP1-A電致化學(xué)發(fā)光檢測儀進行電致化學(xué)發(fā)光檢測，掃描電位0.2 1.3V，光電倍增管高壓為800 V，放大倍數(shù)為4級。( 3)標準工作曲線的繪制:
在體積為350 u L的檢測池中加入含有濃度為2.0X 10_1Q 1.0X 10_7 mol/L的左旋咪唑和5 mmol/L聯(lián)批唳釕的12 mmol/L硼砂緩沖溶液,硼砂緩沖液pH=9.0,進行電致化學(xué)發(fā)光檢測；左旋咪唑在2X10, 1X10_7 mol/L范圍內(nèi)，IgC與發(fā)光峰增強(AJ)呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為-Al =269.6841gC-20.616，線性相關(guān)系數(shù)r =0.9977。本發(fā)明克服了已有技術(shù)在檢測時存在靈敏度低、樣品處理復(fù)雜、儀器昂貴或?qū)嶋H應(yīng)用范圍窄等缺點，更好地提高了靈敏度和選擇性，對于低濃度的左旋咪唑的檢測易于自動化。


圖1為本發(fā)明實施例鉬電極在pH=9的12 mmol/L的硼砂緩沖溶液，聯(lián)吡啶釕濃度為5 mmol/L的發(fā)光圖。其中:a為溶液中不包含左旋咪唑；b為溶液中包含左旋咪唑。圖2為本發(fā)明實施例左旋咪唑含量與電致化學(xué)發(fā)光峰高增加量的關(guān)系圖。
具體實施例方式實施例:
(I)鉬電極的處理:
將鉬電極依次用1.0 ii m、0.3 ii m和0.05 u m的氧化招粉進行表面拋光處理,然后依次在硝酸(體積百分比濃度為50%)、無水乙醇和純水中浸泡洗滌，取出后超聲洗滌5分鐘。(2)檢測方法:
將處理好的鉬電極放入含有2.0X10, 1.0X IO^7 mol/L的左旋咪唑標準溶液的檢測體系統(tǒng)中，直接測定發(fā)光強度。檢測體系為:350 UL含有5 mmol/L聯(lián)吡啶釕的12 mmol/L硼砂緩沖溶液，硼砂緩沖溶液pH=9.0 ;用MP1-A電致化學(xué)發(fā)光檢測儀進行電致化學(xué)發(fā)光檢測，掃描電位0.2 1.3V，光電倍增管高壓為800 V，放大倍數(shù)為4級。(3)標準工作曲線的繪制:
在檢測池中加入350 u L含有不同濃度左旋咪唑和5 mmol/L聯(lián)吡啶釕的硼砂緩沖溶液(pH=9.0)，進行電致化學(xué)發(fā)光檢測；左旋咪唑在2.0X10, l.0XlO—7 mol/L范圍內(nèi)，IgC與發(fā)光峰增強(AJ)呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為-Al =269.6841g^-20.616，線性相關(guān)系數(shù)r=0.9977。(4)血清樣中左旋咪唑含量的測定:
由桂林理工大學(xué)校醫(yī)院提供血清樣品中未檢出左旋咪唑，故采用加標回收實驗；取2mL血清樣品,加入2 mL飽和(NH4)2SO4溶液于離心管中,樣品在7000 rpm離心15分鐘,去上清液置于磷酸鹽緩沖溶液中(PH=7.4)透析過夜；在處理后的血清樣中分別加入濃度為
3.0X 10_9 mol/L和7.5X 10, mol/L的左旋咪唑，搖勻后直加入檢測池中，利用MP1-A電致化學(xué)發(fā)光檢測儀對待測液進行電致化學(xué)發(fā)`光測定，掃描電位0.2 1.3 V，光電倍增管高壓為800 V，放大倍數(shù)為4級，得到發(fā)光峰值I，根據(jù)校正曲線計算出左旋咪唑的濃度C，計算回收率，結(jié)果如表I所示:
表I加標固收試驗數(shù)據(jù)
樣品測得量加A左旋味唑量測出左旋味4總量 收率 mol Lmol 1.me 11%
~I3.0x10-:.S5-<10- P1~
I 未檢出7.540-二7.90x10--105J
權(quán)利要求
1.一種用聯(lián)吡啶釕電致化學(xué)發(fā)光法測定痕量左旋咪唑的方法，其特征在于具體步驟為: (1)鉬電極的處理: 將鉬電極依次用1.0 um>0.3 i! m和0.05 um的氧化招粉進行表面拋光處理,然后依次在體積百分比濃度為50%的硝酸、無水乙醇和純水中浸泡洗滌，取出后超聲洗滌5分鐘； (2)檢測方法: 將步驟(I)處理好的鉬電極放入含有2.0X10, 1.0X10_7 mol/L的左旋咪唑標準溶液的檢測體系統(tǒng)中，直接測定發(fā)光強度；檢測體系為:350 UL含有5 mmol/L聯(lián)吡啶釕的12 mmol/L硼砂緩沖溶液，硼砂緩沖溶液pH=9.0 ^MP1-A電致化學(xué)發(fā)光檢測儀進行電致化學(xué)發(fā)光檢測，掃描電位0.2 1.3V，光電倍增管高壓為800 V，放大倍數(shù)為4級； (3)標準工作曲線的繪制: 在體積為350 u L的檢測池中加入含有濃度為2.0X 10_1Q 1.0X 10_7 mol/L的左旋咪唑和5 mmol/L聯(lián)批唳釕的12 mmol/L硼砂緩沖溶液,硼砂緩沖液pH=9.0,進行電致化學(xué)發(fā)光檢測；左旋咪唑在2X10, 1X10_7 mol/L范圍內(nèi)，IgC與發(fā)光峰增強即AJ呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸 方程為-Al =269.6841gC-20.616，線性相關(guān)系數(shù)r =0.9977。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用聯(lián)吡啶釕電致化學(xué)發(fā)光法測定痕量左旋咪唑的方法。以鉑電極為工作電極，利用左旋咪唑中含有的叔胺基對聯(lián)吡啶釕(Ru(bpy)32+)發(fā)光增強的原理，建立一種測定痕量左旋咪唑的方法。掃描電位0.2V-1.3V，光電倍增管高壓為800V，放大倍數(shù)為4級。在pH=9.0的12mmol/L硼砂底液中，左旋咪唑濃度在2×10-10~1×10-7mol/L范圍內(nèi)，lgC與釕發(fā)光增強成良好的線性關(guān)系，檢出限為1.76×10-11mol/L。本發(fā)明靈敏、簡便、選擇性好，對于低濃度左旋咪唑的檢測易于自動化。
文檔編號G01N21/76GK103196898SQ201310085879
公開日2013年7月10日 申請日期2013年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月18日
發(fā)明者李建平, 肖穎, 魏小平 申請人:桂林理工大學(xué)