專(zhuān)利名稱(chēng)：一種煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于痕量分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
苦參堿是由中草藥植物苦參的根、植株、果實(shí)經(jīng)乙醇等有機(jī)溶劑提取制成的天然植物源農(nóng)藥?？鄥A具有觸殺和胃毒作用，害蟲(chóng)一旦觸及，即麻痹神經(jīng)中樞，繼而使蟲(chóng)體蛋白質(zhì)凝固，堵死蟲(chóng)體氣孔，使害蟲(chóng)窒息而死?？鄥A作用譜廣，對(duì)各種作物上的黏蟲(chóng)、菜青蟲(chóng)、蚜蟲(chóng)、紅蜘蛛有明顯的防治效果。作為優(yōu)良的植物源殺蟲(chóng)劑，苦參堿在我國(guó)農(nóng)作物害蟲(chóng)防治過(guò)程中發(fā)揮了重大作用。但隨著苦參堿的大量應(yīng)用，其在環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品上的殘留問(wèn)題也日益受到人們的關(guān)注。經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，目前關(guān)于苦參堿殘留量的測(cè)定方法，大多只是測(cè)定苦參堿藥物如濕毒清膠囊、丹黃祛瘀片中苦參堿的含量，基質(zhì)簡(jiǎn)單，雜質(zhì)相對(duì)較少?！都洲r(nóng)業(yè)》2010年12期公開(kāi)了一種苦參堿在甘藍(lán)中的殘留分析方法，它是用乙腈提取，經(jīng)分散SPE填料凈化，用液質(zhì)(LC-MS-MS)檢測(cè)。檢測(cè)實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，這種殘留分析方法雖然操作簡(jiǎn)單，但存在以下不足:1)僅適應(yīng)于簡(jiǎn)單基質(zhì)，去除煙草中雜質(zhì)效果較差，并不適應(yīng)于含大量色素、油脂、雜質(zhì)的復(fù)雜基質(zhì)；2)對(duì)儀器要求較高，檢測(cè)費(fèi)用昂貴，難于進(jìn)行普及應(yīng)用?！吨袊?guó)藥業(yè)》2008年14期公開(kāi)了一種高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定山豆根中苦參堿和氧化苦參堿含量，它是用濃氨、三氯甲烷超聲提取，通過(guò)中性氧化鋁柱，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇各20mL洗脫。色譜柱以氨基鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為乙腈-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液(80: 10: 10)，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)205nm，柱溫30°C。這種方法用來(lái)檢測(cè)煙草中苦參堿殘留量存在的缺陷是:凈化過(guò)程洗脫液用量大，煙葉中許多雜質(zhì)被洗脫下來(lái)，導(dǎo)致凈化效果不理想，雜質(zhì)峰極易干擾檢測(cè)結(jié)果，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。在上述色譜條件下，苦參堿峰形較差，雜質(zhì)峰較多，目標(biāo)峰與煙草中雜質(zhì)峰不能有效分離，無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)算色譜法面積。除此之外，采用三氯甲烷作為提取劑和洗脫液，用量大，毒性強(qiáng)，對(duì)環(huán)境和人體安全存在潛在威脅。目前關(guān)于煙草中苦參堿殘留的檢測(cè)方法國(guó)內(nèi)外還未見(jiàn)報(bào)道。由于煙草樣品本身的復(fù)雜性，現(xiàn)有檢測(cè)藥物中苦參堿殘留的方法難于滿(mǎn)足對(duì)煙草中苦參堿殘留檢測(cè)的需要，極易造成結(jié)果的偏離，影響最終的檢測(cè)結(jié)果和對(duì)苦參堿在煙草上合理使用的評(píng)估。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于彌補(bǔ)現(xiàn)有苦參堿檢測(cè)技術(shù)的不足，提供一種快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)煙草中苦參堿殘留的檢測(cè)方法。該方法具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、迅速、可靠的特點(diǎn)，對(duì)控制煙草中苦參堿殘留、指導(dǎo)苦參堿在煙草上的安全合理使用具有重要價(jià)值。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
一種煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法，包括以下步驟:(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:稱(chēng)取一定質(zhì)量苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容，制成苦參堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，將苦參堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋?zhuān)渲瞥上盗袧舛葮?biāo)準(zhǔn)工作液；(2)提取:稱(chēng)取煙葉樣品置于錐形瓶中，加入煙草樣品的3 15倍二氯甲烷，經(jīng)振蕩后過(guò)濾，濃縮近干；(3)凈化:濃縮瓶中殘留物用二氯甲烷溶解，轉(zhuǎn)入二氯甲烷預(yù)淋洗的氧化鋁固相小柱中，二氯甲烷淋洗，二氯甲烷-甲醇混合溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮，定容；(4)檢測(cè):待儀器穩(wěn)定后，用步驟(I)配制的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣，保留時(shí)間定性，液相色譜檢測(cè)，在此基礎(chǔ)上，對(duì)步驟(3)收集的凈化樣品進(jìn)行液相色譜檢測(cè)；(5)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立:以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；(6)結(jié)果分析:按以下公式計(jì)算試樣中苦參堿的含量
權(quán)利要求
1.一種煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟: (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:稱(chēng)取一定質(zhì)量苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容，制成苦參堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，將苦參堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋?zhuān)渲瞥上盗袧舛葮?biāo)準(zhǔn)工作液； (2)提取:稱(chēng)取煙葉樣品置于錐形瓶中，加入煙草樣品的3 15倍二氯甲烷，經(jīng)振蕩后過(guò)濾，濃縮近干； (3)凈化:濃縮瓶中殘留物用二氯甲烷溶解，轉(zhuǎn)入二氯甲烷預(yù)淋洗的氧化鋁固相小柱中，二氯甲烷淋洗，二氯甲烷-甲醇混合溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮，定容； (4)檢測(cè):待儀器穩(wěn)定后，用步驟(I)配制的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣，保留時(shí)間定性，液相色譜檢測(cè)，在此基礎(chǔ)上，對(duì)步驟(3)收集的凈化樣品進(jìn)行液相色譜檢測(cè)； (5)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立:以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)； (6)結(jié)果分析:按以下公式計(jì)算試樣中苦參堿的含量
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于:所述步驟(I)中的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，是指稱(chēng)取0.0lOO g苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容至100 mL,制成100 mg/L儲(chǔ)備液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于:所述步驟(I)中的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液是指0.5、1.0,2.0,5.0、10、0、20.0 mg/L的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)工作液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于:所述步驟(2 )中的煙葉樣品，是指鮮煙葉、干煙葉中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于:所述步驟(2)中的樣品置于錐形瓶，是指Γ20 g樣品置于250 mL錐形瓶。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于:所述步驟(2)和(3)中的濃縮，是指用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取樣品在40°C 50°C的范圍內(nèi)濃縮近干。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于:所述步驟(3)中二氯甲烷-甲醇混合溶液，是指二氯甲烷和甲醇體積比為9:1的混合溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于:所述步驟(4)中的液相色譜檢測(cè)采用高效液相色譜儀-紫外檢測(cè)器，Waters Alliance2695/2487，色譜柱:Waters Sun Fire，C18 柱，5.0 Mm, 4.6X150 mm ;檢測(cè)條件:流動(dòng)相:乙腈/質(zhì)量濃度0.05%三乙胺水溶液，體積比55:45 ; 流速:0.8 mL/min ； 測(cè)定波長(zhǎng):219 nm ； 柱溫:30°C ; 進(jìn)樣量:10 μ _
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于:所述步驟(5)中的進(jìn) 樣濃度，是指0.5,1.0,2.0,5.0、10、0、20.0 mg/L。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種煙草中苦參堿殘留量的高效液相色譜檢測(cè)方法，包括以下步驟(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制稱(chēng)取一定質(zhì)量苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容，制成苦參堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，將苦參堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋?zhuān)渲瞥上盗袧舛葮?biāo)準(zhǔn)工作液；(2)提取以二氯甲烷作為提取劑提取煙葉中苦參堿；(3)凈化采用氧化鋁SPE固相萃取小柱對(duì)提取液進(jìn)行凈化；(4)液相色譜檢測(cè)；(5)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；(6)計(jì)算分析苦參堿殘留量。本發(fā)明的檢測(cè)方法具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、迅速、可靠的特點(diǎn)，對(duì)控制煙草中苦參堿殘留、指導(dǎo)苦參堿在煙草上的安全合理使用具有重要價(jià)值。
文檔編號(hào)G01N30/88GK103163264SQ201310086150
公開(kāi)日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2013年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月18日
發(fā)明者李義強(qiáng), 王秀國(guó), 王鳳龍, 孔凡玉, 孫惠青, 徐金麗, 徐光軍, 鄭曉 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所