專利名稱：動物食品中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙砷的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種動物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸與洛克沙砷殘留量的測定方法。
背景技術(shù)：
近年來，作為動物抗病原微生物和促生長類的飼料添加劑——有機(jī)砷類制劑在世界范圍內(nèi)廣泛使用。其種類主要有阿散酸(ASA)、洛克沙砷(ROX)、硝苯砷酸(NIT)?，F(xiàn)有技術(shù)中，關(guān)于它們的檢測方法主要是色譜和檢測器聯(lián)用技術(shù):如采用高效液相色譜-紫外檢測器測定了飼料中的阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷，但此法僅適用于飼料樣品的檢測；另如低檢出限、低溶劑消耗量、少量固定相的液相色譜-質(zhì)譜法測定有機(jī)砷獸藥的方法，特別是色譜與電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。該法靈敏度高，樣品前處理簡單。但由于其價格昂貴，運(yùn)行成本高，目前很難普及，而且樣品中的鹽分對ICP-MS測定砷時的干擾較大。另外，HPLC的流動相中通常會含有一定比例的有機(jī)溶劑，有機(jī)溶劑在ICP中所產(chǎn)生的碳可造成ICP-MS的進(jìn)樣管堵塞和采樣錐、截取錐兩錐孔變得越來越小甚至堵塞，從而導(dǎo)致ICP-MS的信號不穩(wěn)定；再如現(xiàn)有的改進(jìn)方案中，利用液相色譜-氫化物發(fā)生-原子熒光聯(lián)用同時檢測，砷化合物在一定的濃度范圍內(nèi)與熒光峰面積呈良好的線性關(guān)系，但該類方案對于復(fù)雜基質(zhì)樣品的溶劑提取和萃取效率低，因此，有必要對動物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸與洛克沙砷殘留量的測定方法作進(jìn) 一步的改進(jìn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對上述現(xiàn)有技術(shù)現(xiàn)狀而提供一種提取溶劑用量少，快速，基體影響小，萃取效率高且檢測準(zhǔn)確度高的動物食品中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙砷的測定方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:本發(fā)明的測定動物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸與洛克沙砷殘留量的方法，其特征在于，所述方法為:稱取質(zhì)量A的試樣于研缽中，加入質(zhì)量B的弗羅里硅土充分拌勻后，用體積比為3: 7的甲醇-水溶液做提取劑，用加速溶劑萃取儀提取，提取完成后，再用水定容到體積C。經(jīng)濾膜過濾后，供液相色譜-原子熒光光譜測定；上述的質(zhì)量A與質(zhì)量B的質(zhì)量比為1: 3。作為改進(jìn)，所述試樣選取豬肝或雞肝，動物源性樣品種類繁多，其中動物的肝臟和腎由于對砷有富集作用，因而有機(jī)砷絕大多數(shù)都?xì)埩粼谶@兩個部位，因此，我們選擇肝臟作為實(shí)驗(yàn)樣品。再改進(jìn)，通過實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化，所述加速溶劑萃取條件優(yōu)選為:提取溫度80°C ;壓強(qiáng)1500psi，靜態(tài)萃取時間為4分鐘；沖洗體積60% ;提取次數(shù)為3次；氮?dú)獯祾?0秒。再改進(jìn)，所述濾膜的濾孔大小優(yōu)選為0.45 μ m。
再改進(jìn)，所述液相色譜條件為:色譜柱采用C18柱(250_Χ4.60_，5μπι);流速為1.2mL/min ;進(jìn)樣量為100 μ L ;在反相色譜流動相中添加緩沖鹽，有助于改善色譜峰形并且提高色譜峰的分離度，因此流動相優(yōu)選為5%甲醇-0.1%三氟乙酸-0.05mol/L磷酸二氫鉀；再改進(jìn)，所述原子熒光工作條件為:綜合考慮靈敏度、燈的使用壽命、發(fā)射譜線的自蝕現(xiàn)象等因素，選擇總電流為100mA，負(fù)高壓為330V;為達(dá)到靈敏度最高，載氣流速優(yōu)選為300mL/min,屏蔽氣流速優(yōu)選為900mL/min ；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:本實(shí)施例研究并建立了加速溶劑萃取-液相色譜-原子熒光同時測定動物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷殘留量的方法；優(yōu)化了加速溶劑萃取技術(shù)的提取溶劑比例、提取溫度、提取時間和提取次數(shù)，提取溶劑用量少，快速，基體影響小，萃取效率高，選擇性好；研究了液相色譜流動相和原子熒光的工作條件；在O 2.0mg/L范圍內(nèi)內(nèi)阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷的線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)大于0.999，阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷檢出限(S/N = 3)分別為2.4μ g/L、7.4μ g/L、
4.1 μ g/L0附圖/表說明

圖1為發(fā)明的阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(lmg/L的LC-AFS譜圖)；圖2為載氣流量對砷形態(tài)熒光信號強(qiáng)度的影響的折線圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。如圖1至2所示，本實(shí)施例的動物食品中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙砷的測定方法，所述方法包括以下步驟:稱取2g(精確到0.0lg)試樣于研缽中，加入6.0OOg弗羅里硅土充分拌勻后，用體積比為3: 7的甲醇-水溶液做提取劑，用加速溶劑萃取儀提取。提取完成后，用水定容到10mL。此溶液過0.45 μ m濾膜后，供液相色譜-原子熒光光譜測定。所述試樣選取豬肝或雞肝。所述加速溶劑萃取條件為:提取溫度80°C ;壓強(qiáng)1500psi ;靜態(tài)萃取時間為4分鐘；沖洗體積60% ;提取次數(shù)為3次；氮?dú)獯祾?0秒。所述濾膜的濾孔大小為0.45 μ m。所述液相色譜條件為:色譜柱采用C18柱(250mmX4.60mm,5 μ m);流速為1.2mL/min ;進(jìn)樣量為100 μ L ;流動相為5%甲醇-0.1 %三氟乙酸-0.05mol/L磷酸二氫鉀。所述原子熒光工作條件為:總電流為IOOmA ;負(fù)高壓為330V ;載氣流速為300mL/min ;屏蔽氣流速為 900mL/min。 以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明:I實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器、試劑與樣品液相色譜/原子熒光光譜儀(LC-AFS9800):北京海光儀器公司；高速均質(zhì)器(德國IKA公司)；超聲波水浴器(美國Ney公司)；LD4_2型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；渦旋混合器(美國Fisher公司)；超純水儀(美國Millipore公司)；加速溶劑萃取儀(ASE300):美國戴安公司；0.45μπι濾膜(直徑47mm，美國Millipore公司)。甲醇為色譜純；鹽酸為優(yōu)級純；三氟乙酸、氫氧化鈉、硼氫化鉀、磷酸二氫鉀均為分析純；阿散酸標(biāo)準(zhǔn)品(純度99%，Dr.Ehrenstorfer GmbH，德國)；硝苯砷酸標(biāo)準(zhǔn)品(純度95%，日本和光純藥工業(yè)株式會社)；洛克沙砷標(biāo)準(zhǔn)品(純度97.5%,Dr.Ehrenstorfer GmbH,德國)；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。豬肝、雞肝均為市售。1.2溶液的配制載流:5%鹽酸(優(yōu)級純)；還原劑(0.5%氫氧化鈉-2.0%硼氫化鉀):稱取氫氧化鈉5g，硼氫化鉀20g溶于水中，并稀釋至IOOOmL混勻；提取劑:取甲醇300mL，倒入700mL水中，混勻；流動相(5%甲醇-0.1%三氟乙酸-0.05mol/L磷酸二氫鉀):取甲醇50mL，三氟乙酸lmL，磷酸二氫鉀3.9g溶于水中，并稀釋至IOOOmL混勻；標(biāo)準(zhǔn)儲備液:準(zhǔn)確稱取阿散酸、洛克沙砷、硝苯砷酸標(biāo)準(zhǔn)品各IOOmg于IOOmL容量瓶中，用超純水在超聲波水浴中溶解，配制成1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液；標(biāo)準(zhǔn)工作液:使用前將上述儲備液以超純水稀釋至所需濃度。1.3實(shí)驗(yàn)條件LC 條件:色譜柱:C18 柱(250_X4.60mm, 5 μ m);流速:1.2mL/min ;進(jìn)樣量:IOOyL ;流動相:5%甲醇-0.1 %三氟乙酸-0.05mol/L磷酸二氫鉀。原子熒光工作條件:總電流:100mA ;負(fù)高壓:330V ;載氣流速:300mL/min ;屏蔽氣流速:QOOmT ,/mi η。1.4樣品處理稱取2g(精確到0.0lg)試樣于研缽中，加入6.0OOg弗羅里硅土充分拌勻后，用體積比為3: 7的甲醇- 水溶液做提取劑，用加速溶劑萃取儀提取。提取溫度80°C，壓強(qiáng)1500psi，靜態(tài)萃取時間為4分鐘，沖洗體積60%，提取次數(shù)為3次，氮?dú)獯祾?0秒。提取完成后，用水定容到10mL。此溶液過0.45 μ m濾膜后，供液相色譜-原子熒光光譜測定。2結(jié)果與分析2.1超聲離心提取和加速溶劑萃取的比較2.1.1超聲離心提取樣品稱取試樣2g置于50mL高速離心管中，加入提取溶劑甲醇-水溶液(體積比
3: 7) 30mL，均質(zhì)2分鐘，然后置于超聲波水浴器中超聲20分鐘。超聲完成后，置于LD4-2型離心機(jī)，12000r/min離心10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶中。向殘?jiān)械渭?0mL3: 7甲醇-水提取劑，在渦旋混合器上充分混合均勻，然后12000r/min高速離心5分鐘，合并上清液于50mL容量瓶中，用去離子水定容。此溶液過0.45um濾膜后，供LC-AFS測定。2.1.2加速溶劑提取樣品稱取試樣2g于研缽中，加入6.0OOg弗羅里硅土充分拌勻后，裝入到不銹鋼的加速溶劑萃取池，放置在加速溶劑萃取儀的樣品臺卡口處，然后將提取條件輸入到加速溶劑萃取儀的控制面板:提取溫度80°C，壓強(qiáng)1500psi，預(yù)熱5分鐘，用體積比為3: 7的甲醇-水溶液做提取劑，靜態(tài)萃取時間為4分鐘，沖洗體積60%，提取次數(shù)為3次，氮?dú)獯祾?0秒，收集全部的提取溶液。提取完成后，用水定容到10mL。此溶液過0.45 μ m濾膜后，供LC-AFS測定。2.1.3超聲離心提取和加速溶劑提取的比較在超聲離心提取方法中，優(yōu)化了提取溶劑的組成、超聲時間、離心時間以及提取次數(shù)，最后得到的最優(yōu)化超聲離心提取方法是:提取溶劑:甲醇:水(3: 7)，超聲時間20分鐘，離心時間10分鐘，提取次數(shù)3次；在加速溶劑提取方法中，優(yōu)化了提取溶劑的組成、提取溫度、提取過程中的靜態(tài)時間以及提取次數(shù)，最后得到的最優(yōu)化加速溶劑提取方法是:提取溶劑:甲醇:水(3: 7)，提取溫度80°C，提取過程中的靜態(tài)時間為4分鐘，提取次數(shù)為3次。以加標(biāo)lug/mL的樣品分別采用超聲離心提取和快速溶劑提取，兩種提取方法均在最優(yōu)化條件下進(jìn)行，連續(xù)測定4次，其三種砷形態(tài)回收率結(jié)果見表I和表2。表I超聲離心提取方法的加標(biāo)回收率The sp iked recoveries of ultrasound centrifugation extraction
權(quán)利要求
1.一種動物食品中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙砷的測定方法，其特征在于，所述測定方法包括以下步驟為: 稱取待測樣品A克于研缽中，加入弗羅里硅土 3A克充分拌勻后，用甲醇比水的體積比為3: 7的甲醇水溶液做提取劑，用加速溶劑萃取儀提取，提取完成后，再用水定容到體積5A毫升；經(jīng)濾膜過濾后，供液相色譜-原子熒光光譜測定；所述A為不為零的整數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于:所述待測樣品為豬肝或雞肝。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述加速溶劑萃取條件為:提取溫度800C ;壓強(qiáng)1500pa ;靜態(tài)萃取時間為4分鐘；沖洗體積60% ;提取次數(shù)為3次；氮?dú)獯祾?0秒。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于:所述濾膜的濾孔大小為0.45 μ m。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述液相色譜條件為:色譜柱采用C18柱；流速為1.2mL/min ;進(jìn)樣量為100 μ L ;流動相為5%甲醇-0.1%三氟乙酸-0.05mol/L磷酸二氫鉀。
6.根據(jù)權(quán)利要求 1所述的測定方法，其特征在于，所述原子熒光工作條件為:總電流為IOOmA ;負(fù)高壓為330V ;載氣流速為300mL/min ;屏蔽氣流速為900mL/min。
全文摘要
一種動物食品中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙砷的測定方法，其特征在于，所述測定方法包括以下步驟為稱取待測樣品A克于研缽中，加入弗羅里硅土3A克充分拌勻后，用甲醇比水的體積比為3∶7的甲醇水溶液做提取劑，用加速溶劑萃取儀提取，提取完成后，再用水定容到體積5A毫升；經(jīng)濾膜過濾后，供液相色譜-原子熒光光譜測定；所述A為不為零的整數(shù)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于本實(shí)施例研究并建立了加速溶劑萃取-液相色譜-原子熒光同時測定動物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷殘留量的方法；優(yōu)化了加速溶劑萃取技術(shù)的提取溶劑比例、提取溫度、提取時間和提取次數(shù)，提取溶劑用量少，快速，基體影響小，萃取效率高，選擇性好。
文檔編號G01N21/64GK103234946SQ20131011490
公開日2013年8月7日 申請日期2013年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月19日
發(fā)明者肖亞兵, 張霞, 王偉, 崔穎 申請人:天津出入境檢驗(yàn)檢疫局動植物與食品檢測中心