膠乳增強免疫比濁法胰島素測定試劑盒制備方法
【專利摘要】膠乳增強免疫比濁法胰島素測定試劑盒制備方法，涉及胰島素測定試劑盒【技術(shù)領(lǐng)域】。它的制備步驟：第一步：設(shè)備準備；第二步：生產(chǎn)前清潔及檢測；第三步：試劑制備；第四部：試劑分裝；第五步：試劑盒組裝。它利用抗原抗體反應(yīng)原理測定胰島素的含量，標本中的胰島素與試劑中相應(yīng)的胰島素單克隆抗體乳膠顆粒特異性反應(yīng)，結(jié)合成抗原抗體復合物，形成一定的濁度，濁度的高低在足量抗體存在時與標本中的胰島素含量成正比，測定該濁度，與胰島素標準曲線比較，即能得出標本中胰島素含量，檢測胰島素含量防止使用過量產(chǎn)生抗藥性。
【專利說明】膠乳增強免疫比濁法膜島轟測定試劑盒制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及膜島素測定試劑盒【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及膠乳增強免疫比濁法膜島素測 定試劑盒制備方法。

【背景技術(shù)】：
[0002] 膜島素是由膜島目細胞受內(nèi)源性或外源性物質(zhì)如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、膜 高血糖素等的刺激而分泌的一種蛋白質(zhì)激素。膜島素是機體內(nèi)唯一降低血糖的激素，同時 促進糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成。外源性膜島素主要用來糖尿病治療，糖尿病患者早期使用膜 島素和超強抗氧化劑如（注射用硫辛酸、口服郵青素等）有望出現(xiàn)較長時間的蜜月期，膜島 素注射不會有成癒和依賴性。
[0003] 很少數(shù)病者有膜島素抗藥性，每日膜島素需要量超過200U，歷時48小時W上，同 時無麗癥酸中毒及其他內(nèi)分泌病引起的繼發(fā)性糖尿病者稱為膜島素抗藥性。所W對試劑膜 島素含量測定是很有必要的。


【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0004] 本發(fā)明的目的是提供膠乳增強免疫比濁法膜島素測定試劑盒制備方法，它利用抗 原抗體反應(yīng)原理測定膜島素的含量，標本中的膜島素與試劑中相應(yīng)的膜島素單克隆抗體乳 膠顆粒特異性反應(yīng)，結(jié)合成抗原抗體復合物，形成一定的濁度，濁度的高低在足量抗體存在 時與標本中的膜島素含量成正比，測定該濁度，與膜島素標準曲線比較，即能得出標本中膜 島素含量，檢測膜島素含量防止使用過量產(chǎn)生抗藥性。
[0005] 為了解決【背景技術(shù)】所存在的問題，本發(fā)明是采用W下制備方法；1、生產(chǎn)設(shè)備準備： 混合容器；容積大于試劑生產(chǎn)體積的高密度聚己帰桶4只。攬拌器：攬拌涂四氣己帰的慢速 電動攬拌器。稱量設(shè)備；天平為精度±0.0001克1臺。聚己帰容器；預稱原料用，有密封 蓋，2只。原料稱量用勺、伊。抑計，定標緩沖液，具有溫度補償功能的抑計和相應(yīng)的定標 液。儀器，日立7060全自動生化分析儀。過濾設(shè)備，孔徑Sum專用。標簽；用于原材料稱 量，標明原料名稱、重量等。標牌：用于標示：1-混合容器；2-整批待檢產(chǎn)品容器。標牌內(nèi) 容：產(chǎn)品代碼、產(chǎn)品名稱、批號、生產(chǎn)日期、過濾日期和操作者簽名。
[0006] 2、生產(chǎn)；生產(chǎn)前準備；所有生產(chǎn)設(shè)備必須清潔。生產(chǎn)線清場；生產(chǎn)場地僅放置本批 量包裝試劑生產(chǎn)用品生產(chǎn)操作者穿戴防護用品：(a)清潔工作服；化）戴口罩；（C)防護眼 鏡；（d)乳膠手套或一次性手套；（e)發(fā)罩。核對各種生產(chǎn)運行單。測定所用純化水電導率， 應(yīng)小于2. Oy s/cm。原料包裝的核對；A、名稱正確；B、批號為指定使用者；C)原料物態(tài)正 常。如有不符，向生產(chǎn)車間主任報告。簽字，W示原料包裝已經(jīng)核對。預稱：所有原料都必 須預稱，并由第二人核對。預稱容器上有下列內(nèi)容的標簽：容器號、原料代碼、批號、容器和 蓋的皮重、原料凈重、預稱者簽名/日期/、核對者簽名/日期/。按規(guī)定的計算量稱取Tris 12. 114g，膜島素單克隆抗體乳膠顆粒2mg并密封容器蓋。核對稱取的原料量；總重量（原 料+容器）=原料凈重+皮重。將原料容器上的資料記錄到原料記錄單上。
[0007] 3、產(chǎn)品配制；混合容器和攬棒的準備；混合容器和攬棒用自來水沖洗5次；混合容 器和攬棒再用去離子水沖洗3次；干燥箱燒干密封裝袋備用；將電動攬拌機裝配到混合容 器上；在混合容器上標簽，標明產(chǎn)品代碼、批號、名稱、生產(chǎn)量、日期和操作者。在混合容器 A、B中加入生產(chǎn)總量90%的純化水。在混合容器A中加入Trisl2. 114g，攬拌至完全溶解。 補純化水至生產(chǎn)總量1L。然后用Imol/L的化OH溶液調(diào)抑值至8. 2 (2(TC )。用專用濾器 將上述混合溶液過濾入另一混合容器C中。在混合容器B中加入膜島素單克隆抗體乳膠顆 粒2mg，攬拌至完全溶解。補純化水至生產(chǎn)總量200ml。用專用濾器將上述混合溶液過濾入 另一混合容器D中。從混合容器C中取出1份IOOml樣品，從容器D中取出1份16ml樣品， 作下列過程試劑；a、空白吸光度（37°C，600nm) :< 1.2A;b、從混合容器中抽樣進行半成品 抽樣全檢。
[0008] 4、分裝；生產(chǎn)環(huán)境；分裝過程在十萬級凈化區(qū)內(nèi)進行，溫度IOC -26 C，濕度 45% -65%。分裝前清場，領(lǐng)取經(jīng)檢測合格的半成品試劑，核對領(lǐng)取的試劑批號是否與計劃 單一致，檢查試劑外觀是否正常，如試劑出現(xiàn)混濁、沉淀或顏色變化應(yīng)停止分裝，并報告給 生產(chǎn)主管。領(lǐng)取物料；根據(jù)生產(chǎn)計劃領(lǐng)取要求型號的試劑瓶、配套瓶蓋、標簽，準備分裝工 具、設(shè)備。分裝過程；根據(jù)分裝機型分裝；稱瓶重：按計劃數(shù)量準備瓶，稱量每十個試劑瓶 的重量，要求用于分裝同一批號試劑的瓶子重量相差不超過0. 5g，擺瓶；按《分裝作業(yè)指導 書》要求進行。分裝；使用蠕動粟進行分裝，過程中注意防止交叉污染，且裝量不低于標示裝 量。逐瓶進行檢查蓋子效果，如有漏液，不得進入下一工序。貼標簽；將檢查并經(jīng)過核實的 標簽貼在試劑瓶上，按《分裝作業(yè)指導書》操作。檢查；檢查分裝瓶數(shù)、試劑裝量、漏液情況、 貼簽情況、記錄填寫情況。清場：按《清場管理制度》對生產(chǎn)現(xiàn)場進行清場，并填寫記錄。
[0009] 5、組裝；領(lǐng)料；根據(jù)生產(chǎn)計劃領(lǐng)取組裝膜島素雙試劑所需的說明書、紙盒、封簽、 合格證等物料，紙盒在組裝前應(yīng)先折好成型。半成品檢查：將半成品逐瓶檢查，執(zhí)行《分裝半 成檢查指導書》，由QA負責。組裝：執(zhí)行《組裝作業(yè)指導書》。將裝好的試劑盒合上蓋子，貼 上封簽、合格證，貼的位置要貼正，左右、上下等分距離。組裝完成后，QA進行成品取樣，每 個批號成品試劑取1盒，先進行包裝質(zhì)量的檢查、再由QC進行內(nèi)在質(zhì)量的檢查，執(zhí)行《產(chǎn)品 最終放行檢驗規(guī)范》。按《清場管理制度》清場，并填寫生產(chǎn)記錄。做好半成品、成品的入、 出庫手續(xù)。如半成品不能及時組裝出庫，應(yīng)按半成品膽存要求膽存。
[0010] 本發(fā)明工作原理；本試劑盒采用的技術(shù)原理是利用抗原抗體反應(yīng)原理測定膜島素 的含量。標本中的膜島素與試劑中相應(yīng)的膜島素單克隆抗體乳膠顆粒特異性反應(yīng)，結(jié)合成 抗原抗體復合物，形成一定的濁度，濁度的高低在足量抗體存在時與標本中的膜島素含量 成正比，測定該濁度，與膜島素標準曲線比較，即能得出標本中膜島素含量。免疫比濁測定 中抗原濃度與吸光度之間的線性主要取決于抗體活性、反應(yīng)體系和抗體抗原的比例H個方 面，所W反應(yīng)體系的研究包括樣本及試劑的上樣量、稀釋倍數(shù)，反應(yīng)時間，測定波長等等反 應(yīng)條件
[0011] 本發(fā)明具有W下有益效果：它利用抗原抗體反應(yīng)原理測定膜島素的含量，標本中 的膜島素與試劑中相應(yīng)的膜島素單克隆抗體乳膠顆粒特異性反應(yīng)，結(jié)合成抗原抗體復合 物，形成一定的濁度，濁度的高低在足量抗體存在時與標本中的膜島素含量成正比，測定該 濁度，與膜島素標準曲線比較，即能得出標本中膜島素含量，檢測膜島素含量防止使用過 量產(chǎn)生抗藥性。

【具體實施方式】：
[0012] 本【具體實施方式】采用W下技術(shù)方案；它包含1、生產(chǎn)設(shè)備準備：混合容器；容積大 于試劑生產(chǎn)體積的高密度聚己帰桶4只。攬拌器；攬拌涂四氣己帰的慢速電動攬拌器。稱 量設(shè)備：天平為精度±0. OOOl克1臺。聚己帰容器：預稱原料用，有密封蓋，2只。原料稱量 用勺、伊。抑計，定標緩沖液，具有溫度補償功能的抑計和相應(yīng)的定標液。儀器，日立7060 全自動生化分析儀。過濾設(shè)備，孔徑Sum專用。標簽：用于原材料稱量，標明原料名稱、重 量等。標牌：用于標示；1-混合容器；2-整批待檢產(chǎn)品容器。標牌內(nèi)容；產(chǎn)品代碼、產(chǎn)品名 稱、批號、生產(chǎn)日期、過濾日期和操作者簽名。
[0013] 2、生產(chǎn)；生產(chǎn)前準備；所有生產(chǎn)設(shè)備必須清潔。生產(chǎn)線清場；生產(chǎn)場地僅放置本批 量包裝試劑生產(chǎn)用品生產(chǎn)操作者穿戴防護用品：(a)清潔工作服；化）戴口罩；（C)防護眼 鏡；（d)乳膠手套或一次性手套；（e)發(fā)罩。核對各種生產(chǎn)運行單。測定所用純化水電導率， 應(yīng)小于2. Oy s/cm。原料包裝的核對；A、名稱正確；B、批號為指定使用者；C)原料物態(tài)正 常。如有不符，向生產(chǎn)車間主任報告。簽字，W示原料包裝已經(jīng)核對。預稱：所有原料都必 須預稱，并由第二人核對。預稱容器上有下列內(nèi)容的標簽：容器號、原料代碼、批號、容器和 蓋的皮重、原料凈重、預稱者簽名/日期/、核對者簽名/日期/。按規(guī)定的計算量稱取Tris 12. 114g，膜島素單克隆抗體乳膠顆粒2mg并密封容器蓋。核對稱取的原料量；總重量（原 料+容器）=原料凈重+皮重。將原料容器上的資料記錄到原料記錄單上。
[0014] 3、產(chǎn)品配制；混合容器和攬棒的準備；混合容器和攬棒用自來水沖洗5次；混合 容器和攬棒再用去離子水沖洗3次；干燥箱燒干密封裝袋備用；將電動攬拌機裝配到混合 容器上；在混合容器上標簽，標明產(chǎn)品代碼、批號、名稱、生產(chǎn)量、日期和操作者。在混合容 器A、B中加入生產(chǎn)總量90%的純化水。在混合容器A中加入Trisl2. 114g，攬拌至完全溶 解。補純化水至生產(chǎn)總量1L。然后用Imol/L的化OH溶液調(diào)抑值至8. 2(2(TC )。用專用 濾器將上述混合溶液過濾入另一混合容器C中。在混合容器B中加入膜島素單克隆抗體乳 膠顆粒2mg，攬拌至完全溶解。補純化水至生產(chǎn)總量200ml。用專用濾器將上述混合溶液過 濾入另一混合容器D中。從混合容器C中取出1份IOOml樣品，從容器D中取出1份16ml 樣品，作下列過程試劑；a、空白吸光度（37°C，600nm) :< 1. 2A ;b、從混合容器中抽樣進行半 成品抽樣全檢。
[0015] 4、分裝；生產(chǎn)環(huán)境；分裝過程在十萬級凈化區(qū)內(nèi)進行，溫度IOC -26C，濕度 45% -65%。分裝前清場，領(lǐng)取經(jīng)檢測合格的半成品試劑，核對領(lǐng)取的試劑批號是否與計劃 單一致，檢查試劑外觀是否正常，如試劑出現(xiàn)混濁、沉淀或顏色變化應(yīng)停止分裝，并報告給 生產(chǎn)主管。領(lǐng)取物料；根據(jù)生產(chǎn)計劃領(lǐng)取要求型號的試劑瓶、配套瓶蓋、標簽，準備分裝工 具、設(shè)備。分裝過程；根據(jù)分裝機型分裝；稱瓶重：按計劃數(shù)量準備瓶，稱量每十個試劑瓶 的重量，要求用于分裝同一批號試劑的瓶子重量相差不超過0. 5g，擺瓶；按《分裝作業(yè)指導 書》要求進行。分裝；使用蠕動粟進行分裝，過程中注意防止交叉污染，且裝量不低于標示裝 量。逐瓶進行檢查蓋子效果，如有漏液，不得進入下一工序。貼標簽；將檢查并經(jīng)過核實的 標簽貼在試劑瓶上，按《分裝作業(yè)指導書》操作。檢查；檢查分裝瓶數(shù)、試劑裝量、漏液情況、 貼簽情況、記錄填寫情況。清場：按《清場管理制度》對生產(chǎn)現(xiàn)場進行清場，并填寫記錄。
[0016] 5、組裝；領(lǐng)料；根據(jù)生產(chǎn)計劃領(lǐng)取組裝膜島素雙試劑所需的說明書、紙盒、封簽、 合格證等物料，紙盒在組裝前應(yīng)先折好成型。半成品檢查：將半成品逐瓶檢查，執(zhí)行《分裝半 成檢查指導書》，由QA負責。組裝：執(zhí)行《組裝作業(yè)指導書》。將裝好的試劑盒合上蓋子，貼 上封簽、合格證，貼的位置要貼正，左右、上下等分距離。組裝完成后，QA進行成品取樣，每 個批號成品試劑取1盒，先進行包裝質(zhì)量的檢查、再由QC進行內(nèi)在質(zhì)量的檢查，執(zhí)行《產(chǎn)品 最終放行檢驗規(guī)范》。按《清場管理制度》清場，并填寫生產(chǎn)記錄。做好半成品、成品的入、 出庫手續(xù)。如半成品不能及時組裝出庫，應(yīng)按半成品膽存要求膽存
[0017] 本發(fā)明工作原理；本試劑盒采用的技術(shù)原理是利用抗原抗體反應(yīng)原理測定膜島素 的含量。標本中的膜島素與試劑中相應(yīng)的膜島素單克隆抗體乳膠顆粒特異性反應(yīng)，結(jié)合成 抗原抗體復合物，形成一定的濁度，濁度的高低在足量抗體存在時與標本中的膜島素含量 成正比，測定該濁度，與膜島素標準曲線比較，即能得出標本中膜島素含量。免疫比濁測定 中抗原濃度與吸光度之間的線性主要取決于抗體活性、反應(yīng)體系和抗體抗原的比例H個方 面，所W反應(yīng)體系的研究包括樣本及試劑的上樣量、稀釋倍數(shù)，反應(yīng)時間，測定波長等等反 應(yīng)條件
[001引 實施例：
[0019] 1.1樣本要求
[0020] 血清采血后應(yīng)及時分離，不溶血血清。樣品2-8C可穩(wěn)定7天，-2(TC可穩(wěn)定一個 月（冷凍樣品只可復溶一次，不可反復凍溶）
[002U 1.2 波長
[0022] 膠乳增強免疫比濁法原理是光線通過免疫濁度試劑時光線偏折而散射，從而使透 射光減弱。該就決定了主波長和吸光度呈反比，所W波長的選擇決定了靈敏度的大小。
[0023] 膜島素測定試劑盒在600nm波長下檢測數(shù)據(jù)與康特膜島素試劑盒相關(guān)性最高，全 自動生化分析儀可W方便檢測，故選擇600nm為本產(chǎn)品的測試波長。
[0024] 1.3樣品試劑比
[0025] 試劑量的多少決定反應(yīng)體積中有效抗體的濃度，而樣本試劑比會影響試劑的線性 范圍。
[0026]

【權(quán)利要求】
1.膠乳增強免疫比濁法胰島素測定試劑盒制備方法，其特征在于它的制備方法：1、生 產(chǎn)設(shè)備準備：混合容器：容積大于試劑生產(chǎn)體積的高密度聚乙烯桶4只。攪拌器：攪拌涂四 氟乙烯的慢速電動攪拌器。稱量設(shè)備：天平為精度±0. 0001克1臺。聚乙烯容器：預稱原 料用，有密封蓋，2只。原料稱量用勺、鏟。pH計，定標緩沖液，具有溫度補償功能的pH計和 相應(yīng)的定標液。儀器，日立7060全自動生化分析儀。過濾設(shè)備，孔徑5μπι專用。標簽：用 于原材料稱量，標明原料名稱、重量等。標牌：用于標示：1_混合容器；2-整批待檢產(chǎn)品容 器。標牌內(nèi)容：產(chǎn)品代碼、產(chǎn)品名稱、批號、生產(chǎn)日期、過濾日期和操作者簽名。2、生產(chǎn)：生 產(chǎn)前準備：所有生產(chǎn)設(shè)備必須清潔。生產(chǎn)線清場：生產(chǎn)場地僅放置本批量包裝試劑生產(chǎn)用 品生產(chǎn)操作者穿戴防護用品：(a)清潔工作服；(b)戴口罩；（c)防護眼鏡；（d)乳膠手套或 一次性手套；（e)發(fā)罩。核對各種生產(chǎn)運行單。測定所用純化水電導率，應(yīng)小于2.0 μ s/cm。 原料包裝的核對:A、名稱正確；B、批號為指定使用者；C)原料物態(tài)正常。如有不符，向生產(chǎn) 車間主任報告。簽字，以示原料包裝已經(jīng)核對。預稱：所有原料都必須預稱，并由第二人核 對。預稱容器上有下列內(nèi)容的標簽：容器號、原料代碼、批號、容器和蓋的皮重、原料凈重、預 稱者簽名/日期/、核對者簽名/日期/。按規(guī)定的計算量稱取Tris 12. 114g，胰島素單克 隆抗體乳膠顆粒2mg并密封容器蓋。核對稱取的原料量：總重量（原料+容器）=原料凈 重+皮重。將原料容器上的資料記錄到原料記錄單上。3、產(chǎn)品配制：混合容器和攪棒的準 備；混合容器和攪棒用自來水沖洗5次；混合容器和攪棒再用去離子水沖洗3次；干燥箱燒 干密封裝袋備用；將電動攪拌機裝配到混合容器上；在混合容器上標簽，標明產(chǎn)品代碼、 批號、名稱、生產(chǎn)量、日期和操作者。在混合容器A、B中加入生產(chǎn)總量90%的純化水。在混 合容器A中加入Tris 12. 114g，攪拌至完全溶解。補純化水至生產(chǎn)總量1L。然后用lmol/ L的NaOH溶液調(diào)pH值至8. 2 (20°C )。用專用濾器將上述混合溶液過濾入另一混合容器C 中。在混合容器B中加入胰島素單克隆抗體乳膠顆粒2mg，攪拌至完全溶解。補純化水至生 產(chǎn)總量200ml。用專用濾器將上述混合溶液過濾入另一混合容器D中。從混合容器C中取 出1份100ml樣品，從容器D中取出1份16ml樣品，作下列過程試劑：a、空白吸光度（37°C， 600nm) :< 1. 2A ;b、從混合容器中抽樣進行半成品抽樣全檢。4、分裝：生產(chǎn)環(huán)境：分裝過程 在十萬級凈化區(qū)內(nèi)進行，溫度l〇°C -26°C，濕度45% -65%。分裝前清場，領(lǐng)取經(jīng)檢測合格的 半成品試劑，核對領(lǐng)取的試劑批號是否與計劃單一致，檢查試劑外觀是否正常，如試劑出現(xiàn) 混濁、沉淀或顏色變化應(yīng)停止分裝，并報告給生產(chǎn)主管。領(lǐng)取物料：根據(jù)生產(chǎn)計劃領(lǐng)取要求 型號的試劑瓶、配套瓶蓋、標簽，準備分裝工具、設(shè)備。分裝過程：根據(jù)分裝機型分裝；稱瓶 重：按計劃數(shù)量準備瓶，稱量每十個試劑瓶的重量，要求用于分裝同一批號試劑的瓶子重量 相差不超過0. 5g，擺瓶：按《分裝作業(yè)指導書》要求進行。分裝：使用蠕動泵進行分裝，過程 中注意防止交叉污染，且裝量不低于標示裝量。逐瓶進行檢查蓋子效果，如有漏液，不得進 入下一工序。貼標簽：將檢查并經(jīng)過核實的標簽貼在試劑瓶上，按《分裝作業(yè)指導書》操作。 檢查：檢查分裝瓶數(shù)、試劑裝量、漏液情況、貼簽情況、記錄填寫情況。清場：按《清場管理制 度》對生產(chǎn)現(xiàn)場進行清場，并填寫記錄。5、組裝：領(lǐng)料：根據(jù)生產(chǎn)計劃領(lǐng)取組裝胰島素雙試 劑所需的說明書、紙盒、封簽、合格證等物料，紙盒在組裝前應(yīng)先折好成型。半成品檢查：將 半成品逐瓶檢查，執(zhí)行《分裝半成檢查指導書》，由QA負責。組裝：執(zhí)行《組裝作業(yè)指導書》。 將裝好的試劑盒合上蓋子，貼上封簽、合格證，貼的位置要貼正，左右、上下等分距離。組裝 完成后，QA進行成品取樣，每個批號成品試劑取1盒，先進行包裝質(zhì)量的檢查、再由QC進行 內(nèi)在質(zhì)量的檢查，執(zhí)行《產(chǎn)品最終放行檢驗規(guī)范》。按《清場管理制度》清場，并填寫生產(chǎn)記 錄。做好半成品、成品的入、出庫手續(xù)。如半成品不能及時組裝出庫，應(yīng)按半成品貯存要求 貯存。
【文檔編號】G01N33/577GK104237498SQ201310234646
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2013年6月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月13日
【發(fā)明者】石麗萍 申請人:紹興圣康生物科技有限公司