乳制品中植物甾醇的定量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及乳制品中植物甾醇的定量檢測方法，該方法可同時檢測原料及乳制品中植物甾醇所含有的β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇的具體含量。通過對樣品的處理方法，皂化條件、萃取劑及色譜柱的作用條件等進行優(yōu)化，確立檢測條件，建立檢測方法。該方法簡便、快速、準確，適合于基層推廣應用。
【專利說明】乳制品中植物甾醇的定量檢測方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學領域，具體地說，涉及一種乳制品中植物留醇的定量檢測方 法。

【背景技術】
[0002] 植物留醇是國家衛(wèi)生部2010年第3號公告批準的新資源食品，是利用大豆油等植 物油餾分或塔羅油為原料，通過皂化、萃取、結(jié)晶等工藝得到，然后將植物留醇和葵花籽油 脂肪酸進行酯化生產(chǎn)得到植物留醇酯。
[0003] 植物留醇存在于天然的蔬菜、水果、豆類、堅果和谷物中，是植物細胞膜的組成成 分，植物留醇能降低血中膽固醇濃度。這是因為植物留醇的化學結(jié)構(gòu)與膽固醇極其類似，可 作競爭性抑制腸內(nèi)膽固醇的水解，并在腸粘膜上皮細胞內(nèi)抑制游離膽固醇的再酯化，以及 能競爭性地占據(jù)腸內(nèi)膽固醇的位置，減少膽固醇與腸粘膜細胞的接觸機會，從而阻礙小腸 對膽固醇的吸收，使其直接從糞便中排出。植物留醇中所含有的成分最常見的包括谷 甾醇、菜油留醇、豆留醇，其次是植物留醇的飽和形式，S卩β_谷留烷醇和菜油留烷醇等。近 年來，國內(nèi)外對植物留醇的檢測方法，主要有高效液相色譜法、氣相色譜法和氣相色譜/質(zhì) 譜法。我國目前尚沒有乳制品中植物留醇的檢測方法標準。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種乳制品中植物留醇的定量檢測方法。
[0005] 為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種乳制品中植物留醇的定量檢測方法，包括以 下步驟：
[0006] 1)樣品的處理：向0.卜1. 5克樣品中加入0. 667g/mL氫氧化鉀溶液5-10mL和95% 乙醇5-30mL，搖動使樣品溶解，于70-100°C皂化l_4h ;然后加入有機溶劑萃取2-3次，合 并有機相，用蒸餾水洗滌至中性；然后用無水硫酸鈉脫水后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)至干，用正 已烷分次(優(yōu)選3次）將其轉(zhuǎn)入10mL容量瓶中定容，即得試樣；所述有機溶劑為正已烷、石 油醚或乙醚等；
[0007] 2)標準溶液的配制：標準儲備液的濃度為1. Omg/mL，標準工作液的濃度為50 μ g/ mL ；
[0008] 3)色譜分析：采用規(guī)格為30mX0. 25mmX0. 25μπι的毛細管色譜柱Elite-1、規(guī)格 為 30mX0. 32mmX0. 25μπι 的毛細管色譜柱 Elite-5 或規(guī)格為 30mX0. 25mmX0. 25μπι 的毛 細管色譜柱Elite-35 ;
[0009] 色譜條件：進樣口溫度270-320°C;檢測器溫度270-3KTC;程序升溫180-290°C;載 氣為氮氣，流速2mL/min ;氫氣流速40_45mL/min ;空氣流速400-450mL/min ;進樣量2 μ L ; 分流比10:1 ;
[0010] 4)標準曲線的繪制：將植物留醇標準溶液進樣后，以標樣濃度對峰面積作標準曲 線. -^4 ，
[0011] 5)試樣中植物留醇含量的測定：將試樣進樣，根據(jù)樣品的峰面積，代入公式（I)， 計算得出試樣中植物留醇的含量；
[0012]

【權利要求】
1. 乳制品中植物留醇的定量檢測方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 樣品的處理：向0. 1-1. 5克樣品中加入0. 667g/mL氫氧化鉀溶液5-10mL和95%乙 醇5-30mL，搖動使樣品溶解，于70-10(TC皂化l_4h ;然后加入有機溶劑萃取2-3次，合并有 機相，用蒸餾水洗滌至中性；然后用無水硫酸鈉脫水后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)至干，用正已烷 分次將其轉(zhuǎn)入10mL容量瓶中定容，即得試樣；所述有機溶劑為正已烷、石油醚或乙醚； 2) 標準溶液的配制：標準儲備液的濃度為1. Omg/mL，標準工作液的濃度為50μ g/mL ; 3) 色譜分析：采用規(guī)格為30mX0. 25mmX0. 25μπι的毛細管色譜柱Elite-1、規(guī)格為 30mX0. 32mmX0. 25μπι 的毛細管色譜柱 Elite-5 或規(guī)格為 30mX0. 25mmX0. 25μπι 的毛細 管色譜柱Elite-35 ; 色譜條件：進樣口溫度270-320°C ;檢測器溫度270-3KTC ;程序升溫180-290°C ;載氣 為氮氣，流速2mL/min ;氫氣流速4〇-45mL/min ;空氣流速400-450mL/min ;進樣量2 μ L ;分 流比10:1 ; 4) 標準曲線的繪制：將植物留醇標準溶液進樣后，以標樣濃度對峰面積作標準曲線； 5) 試樣中植物留醇含量的測定：將試樣進樣，根據(jù)樣品的峰面積，代入公式（I)，計算 得出試樣中植物留醇的含量； A.xcx Vx 100 Χι =- (I) Α ν χ m χ 1000 式中： Xi--試樣中植物甾醇的含量； K--試樣中植物甾醇的峰面積； As--植物甾醇標準工作液的峰面積； c--植物留醇標準工作液濃度； V--試樣的定容體積； m--試樣的質(zhì)量。
2. 根據(jù)權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，所述植物留醇為β_谷留醇、菜 油甾醇、豆甾醇中的一種或多種。
3. 根據(jù)權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟1)中樣品處理為：向 0. 2-1. 2克樣品中加入0. 667g/mL氫氧化鉀溶液5-8mL和95%乙醇10-20mL，搖動使樣品溶 解，于80-KKTC皂化l_3h ;然后加入正已烷萃取2-3次。
4. 根據(jù)權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟1)中樣品處理為：向 0. 3-1. 0克樣品中加入0. 667g/mL氫氧化鉀溶液6-9mL和95%乙醇15-25mL，搖動使樣品溶 解，于70-KKTC皂化l_4h ;然后加入石油醚萃取2-3次。
5. 根據(jù)權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟3)中采用規(guī)格為 30mX0. 25mmX0. 25μπι的毛細管色譜柱Elite-Ι進行色譜分析；色譜條件：進樣口溫度 300°C ;檢測器溫度300°C ;程序升溫：210°C保持lmin，15°C /min升至285°C，保持6min。 載氣為氮氣，流速2mL/min ;氫氣流速40mL/min ;空氣流速400mL/min ;進樣量2μ L ;分流比 10:1。
6. 根據(jù)權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟3)中采用規(guī)格為 30mX0. 32mmX0. 25 μ m的毛細管色譜柱Elite-5進行色譜分析；色譜條件：進樣口溫度 310°C ;檢測器溫度300°C ;程序升溫：210°C保持lmin，15°C /min升至285°C，保持6min。 載氣為氮氣，流速2mL/min ;氫氣流速45mL/min ;空氣流速450mL/min ;進樣量2μ L ;分流比 10:1。
7.根據(jù)權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟3)中采用規(guī)格為 30mX0. 25mmX0. 25 μ m的毛細管色譜柱Elite-35進行色譜分析；色譜條件：進樣口溫度 310°C ;檢測器溫度300°C ;程序升溫：210°C保持lmin，15°C /min升至285°C，保持14min。 載氣為氮氣，流速2mL/min ;氫氣流速45mL/min ;空氣流速450mL/min ;進樣量2μ L ;分流比 10:1。
【文檔編號】G01N30/88GK104280467SQ201310289363
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2013年7月10日 優(yōu)先權日:2013年7月10日
【發(fā)明者】王青云, 王利, 楊曉波, 齊懿鳴, 孫健 申請人:黑龍江省完達山乳業(yè)股份有限公司