分析試劑盒及分析方法
【專利摘要】本發(fā)明的題目是分析試劑盒及分析方法。本發(fā)明提供一種分析試劑盒，與分析物反應(yīng)，分析試劑盒包括多個(gè)反應(yīng)容器以及多個(gè)微粒。各反應(yīng)容器包括濾膜，且濾膜具有多個(gè)孔洞。各微粒的粒徑大于各孔洞，且直接或間接與分析物或其競爭物或識別分子結(jié)合。此外，本發(fā)明亦提供一種分析方法。
【專利說明】分析試劑盒及分析方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明關(guān)于一種分析試劑盒及分析方法。
【背景技術(shù)】
[0002]生物感測一向是環(huán)境監(jiān)控、科學(xué)研究分析、醫(yī)學(xué)診斷、工業(yè)品管以及食物安全等領(lǐng)域中的重要方法。利用識別分子與分析物間特異性辨識的分析法已經(jīng)長期且廣泛地被應(yīng)用于多項(xiàng)技術(shù)中。其中，包含微孔板分析法(microtiter plate based assay)、測流免疫層析法(lateral flow immunochromatographic assay)或微珠式分析法(bead based assay)
坐寸ο
[0003]微珠式分析法主要的優(yōu)勢為促使固相與液相分子混合的均勻分布性。目前微珠式分析法的應(yīng)用可例如結(jié)合流式細(xì)胞儀和不同熒光標(biāo)定的微珠，結(jié)合識別分子以后便可以廣泛應(yīng)用在目標(biāo)的檢測?；蚴抢镁哂写胖榈奈⒅榉治龅姆椒?，以進(jìn)行純化的應(yīng)用，其針對微珠與待分析的物質(zhì)特異性結(jié)合后，并以磁性進(jìn)一步將結(jié)合的待分析的磁珠分離出來。
[0004]然而，微珠式分析法要通過流式細(xì)胞儀的分析或是標(biāo)定多種具有不同分析功能的微珠，使制程變得復(fù)雜且需耗費(fèi)高成本，難以符合進(jìn)行大量及快速分析的需求。相較于磁珠的應(yīng)用，其通過磁力以達(dá)分離及純化的方式相對具有有效的提升分析的便利性、靈敏度、特異性、快速和簡便性等特性。但磁珠需通過磁力吸引以與其它物質(zhì)進(jìn)一步分離的過程，又難免造成步驟繁復(fù)且會因磁力不均勻或不足而有部分磁珠損失的疑慮。
[0005]因此，如何提供一種制程簡單、低成本以及可快速分析大量樣品的分析試劑盒及相關(guān)分析方法，已成為目前檢測分析領(lǐng)域中的重要課題之一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]有鑒于上述課題，本發(fā)明的目的為提供一種制程簡單、低成本以及可快速分析大量樣品的分析試劑盒及分析方法。
[0007]有鑒于上述的目的，本發(fā)明提供一種分析試劑盒，與分析物反應(yīng)，分析試劑盒包括多個(gè)反應(yīng)容器以及多個(gè)微粒。各反應(yīng)容器分別包括濾膜，濾膜上具有多個(gè)孔洞，而各微粒的粒徑大于各孔洞，且直接或間接與分析物或其競爭物或識別分子接合。
[0008]在本發(fā)明一實(shí)施例中，孔洞之一的孔徑介于Inm至Icm之間。
[0009]在本發(fā)明一實(shí)施例中，微粒的材料包括玻璃、乳膠、橡膠、磁石、樹脂、金屬、陶瓷、多糖、塑料、或硅。
[0010]在本發(fā)明一實(shí)施例中，分析物或其競爭物或識別分子為蛋白質(zhì)、肽、核酸、糖類、化合物、細(xì)胞、或微生物。
[0011]在本發(fā)明一實(shí)施例中，識別分子與分析物或其競爭物接合。
[0012]在本發(fā)明一實(shí)施例中，分析試劑盒還包括多個(gè)信號分子，分別與分析物或其競爭物或識別分子結(jié)合。
[0013]在本發(fā)明一實(shí)施例中，信號分子包括酶、酶受體、顯色劑、放射性物質(zhì)、納米脂粒、或金屬化合物。
[0014]在本發(fā)明一實(shí)施例中，分析試劑盒還包括封合件，設(shè)置于濾膜的流出側(cè)。
[0015]本發(fā)明另提供一種分析方法，與分析物反應(yīng)的分析試劑盒配合，分析試劑盒包括多個(gè)反應(yīng)容器以及多個(gè)微粒，各反應(yīng)容器包括具有多個(gè)孔洞的濾膜，分析方法包括將具有分析物或其競爭物或識別分子的溶液加入各反應(yīng)容器，微粒分別與分析物或其競爭物或識別分子進(jìn)行直接或間接接合、加入多個(gè)信號分子，信號分子連接至分析物或其競爭物或識別分子、濾除反應(yīng)容器中的溶液以及檢測信號分子所產(chǎn)生的信號強(qiáng)度。
[0016]在本發(fā)明一實(shí)施例中，各微粒的粒徑大于各孔洞。
[0017]在本發(fā)明一實(shí)施例中，識別分子與分析物或其競爭物接合。
[0018]綜上所述，本發(fā)明所提供的一種分析試劑盒，通過微粒的粒徑大于濾膜孔洞，能快速經(jīng)由濾除方式將直接或間接結(jié)合在微粒上的分析物或其競爭物或識別分子與其它物質(zhì)分離，并進(jìn)行定量分析。如此一來，能改善現(xiàn)有技術(shù)中需以提供磁性將磁珠在分離時(shí)的復(fù)雜程序。本發(fā)明的分析試劑盒還兼具分析容易且設(shè)備器材成本較低且能廣泛應(yīng)用于各種分析法等優(yōu)勢，且反應(yīng)容器能依據(jù)分析所需而制成各種容積，因此還能應(yīng)用于高通量的分析。另外，本發(fā)明亦提供一種分析方法，連同本發(fā)明的分析試劑盒，能實(shí)施間接型酶聯(lián)免疫吸附法、競爭型酶聯(lián)免疫吸附法以及夾心法酶聯(lián)免疫吸附法，相較現(xiàn)有技術(shù)的分析方法可更為快速且更容易地檢測到分析物。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1A至圖1D為本發(fā)明的一種分析試劑盒的其中一反應(yīng)容器及其變化態(tài)樣示意圖；
[0020]圖2A為依據(jù)本發(fā)明一實(shí)施例的分析試劑盒組合剖面示意圖；
[0021]圖2B為依據(jù)本發(fā)明另一實(shí)施例的分析試劑盒組合俯視圖；
[0022]圖3為依據(jù)本發(fā)明的分析方法步驟流程圖；
[0023]圖4A至圖4E分別為以本發(fā)明的分析試劑盒及本發(fā)明的分析方法操作流程圖；以及
[0024]圖5A及圖5B分別為以本發(fā)明的分析試劑盒及本發(fā)明的分析方法分析慶大霉素的數(shù)據(jù)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0025]以下將參照相關(guān)附圖，說明依本發(fā)明提供的制程簡單、低成本以及快速分析的分析試劑盒，其能快速分析大量的樣品。另外，本發(fā)明又提供一種以此分析試劑盒進(jìn)行分析的分析方法，其中相同的組件將以相同的參照符號加以說明。
[0026]本發(fā)明所提供的一種分析試劑盒，能與分析物反應(yīng)，以檢測分析物的濃度，應(yīng)用領(lǐng)域可包含化學(xué)檢測分析以及免疫檢測等分析技術(shù)。圖1A為本發(fā)明一實(shí)施例的一種分析試劑盒的其中一反應(yīng)容器示意圖。請參照圖1A所示，本發(fā)明的分析試劑盒I包括多個(gè)反應(yīng)容器11以及多個(gè)微粒12。
[0027]本發(fā)明的各反應(yīng)容器11包括濾膜111，濾膜111可以設(shè)置于反應(yīng)容器11中間、底部或側(cè)壁。在本發(fā)明一實(shí)施例中，濾膜111沿反應(yīng)容器11底部邊緣設(shè)置，且設(shè)置于反應(yīng)容器11的流出側(cè)。而本發(fā)明所使用的濾膜111材料包括乙酸纖維素(cellulose acetate)、或聚醚砜(polyester sulfone)。另外,本發(fā)明的濾膜111具有多個(gè)孔洞P,每個(gè)孔洞P的孔徑大小介于約Inm至Icm之間，較佳介于0.1 μ m至100 μ m之間。各孔洞P的間距可以以一固定距離而設(shè)置，或是以不同距離相互設(shè)置于濾膜111上。
[0028]反應(yīng)容器11與濾膜111圍成的供操作及反應(yīng)進(jìn)行的容置空間，以供多個(gè)微粒12以及或分析物A的競爭者容置。在此，以各反應(yīng)容器11分別具有濾膜111為例，當(dāng)然，分析試劑盒I的反應(yīng)容器11也可以共享濾膜111，而各反應(yīng)容器11則分別對應(yīng)濾膜111的其中一部分。
[0029]微粒12的粒徑大于濾膜111的孔洞P的孔徑大小，使得微粒12于反應(yīng)容器11中能通過其粒徑較孔洞P的孔徑大而在過濾步驟后仍被保留在容置空間中。本發(fā)明的微粒12粒徑較佳介于2nm至2cm之間。且本發(fā)明的微粒12所使用的材料包括玻璃、乳膠、橡膠、磁石、樹脂、金屬、陶瓷、多糖、塑料、或硅。然而，本發(fā)明的微粒12的形狀不限于為球形、橢圓球形、方塊、或其它不規(guī)則形狀的結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明一實(shí)施例中，為使微粒12能具有較大表面積以接合分析物A，因此微粒12為一球形結(jié)構(gòu)。而微粒12球狀的表面積，可與含有分析物A的樣品溶液充分混合，增加反應(yīng)的均勻度。
[0030]本發(fā)明的微粒能直接或間接與分析物或其競爭物或識別分子接合。在此所謂”直接”指微粒與分析物或其競爭物接合時(shí)，兩者間未倚靠其它組件或分子即達(dá)成連接的情況而言；而相反地”間接”指微粒與分析物或其競爭物接合時(shí)，兩者間尚有其它組件或分子以連接兩者的情況而言。適用于本發(fā)明的分析試劑盒的分析物或其競爭物或識別分子包括蛋白質(zhì)、肽、核酸、糖類、化合物、細(xì)胞、微生物、或小分子。其中小分子可如環(huán)境激素如三聚氰胺(melamine)、二H惡英(dioxin)、萊克多巴胺(Ractopamine)(瘦肉精組成分)、鄰苯二甲酸鹽(phthalate)(塑化劑組成分)等；或如生理代謝產(chǎn)物如葡萄糖、或尿酸等；或如食品添加物等。分析物存在于任何樣品中，且為待分析的標(biāo)的物。
[0031]本發(fā)明依不同的分析方法進(jìn)行時(shí)，組件之間的連結(jié)關(guān)系會有些許不同，例如于圖1A中，進(jìn)行間接型酶聯(lián)免疫吸附法(indirect ELISA)時(shí)，微粒12與分析物A通過第一配體LI而間接結(jié)合；而當(dāng)進(jìn)行競爭型酶聯(lián)免疫吸附法時(shí)(如圖4A)，則除了分析物A能和微粒12間接結(jié)合以外(經(jīng)由第一配體LI)，樣品中與分析物A結(jié)構(gòu)相似的競爭物Al也能與分析物A相競爭，而間接結(jié)合至微粒12上。競爭物Al主要是在進(jìn)行分析時(shí)，為了協(xié)助間接分析分析物A濃度而加入的物質(zhì)。本發(fā)明中所謂的“競爭物”指該競爭物相對于分析物，亦具有能與特異性識別該分析物的識別分子結(jié)合能力。
[0032]本發(fā)明的微粒與分析物或其競爭物或識別分子直接結(jié)合的方式可以為兩者間以電荷吸引、或以結(jié)構(gòu)嵌合、或微粒及/或分析物經(jīng)由化學(xué)修飾具有特定官能團(tuán)可相互鍵合等方式。在本發(fā)明一實(shí)施例中，微粒例如為帶負(fù)電的樹脂，而分析物例如為帶有正電荷的熒光蛋白。故當(dāng)含有分析物的樣品溶液被置入反應(yīng)容器后，分析物即會被微粒吸引，而其余物質(zhì)則被濾除。由于分析物本身帶有熒光，故能直接定量出分析物的濃度。
[0033]然而，本發(fā)明的微粒亦可以間接結(jié)合方式結(jié)合識別分子、分析物及其競爭物。舉例來說，為增加各組件(微粒、識別分子、或分析物及其競爭物)之間結(jié)合能力，或當(dāng)識別分子、分析物或其競爭物無法通過上述的結(jié)構(gòu)嵌合或官能團(tuán)結(jié)合手段結(jié)合到微粒上時(shí)，本發(fā)明的分析試劑盒中，能通過提供具有較佳結(jié)合親和性或結(jié)合穩(wěn)定性的配體(ligand)來達(dá)成。配體能設(shè)置于微粒、識別分子、或分析物及其競爭物的至少其中之一的表面上，以協(xié)助微粒、識別分子、或分析物及其競爭物其中任兩個(gè)組件之間的結(jié)合。舉例來說，能通過配體來結(jié)合兩個(gè)組件；或是兩組件分別結(jié)合至不相同的兩個(gè)配體，再將此兩個(gè)配體相互結(jié)合。需注意的是，本發(fā)明的各組件不限定只能與一種配體結(jié)合，也可以同時(shí)連接兩種以上的配體(一配位組件)，以與另一組件結(jié)合，視檢測分析時(shí)的目的而定。
[0034]如圖1A所示，在本發(fā)明一實(shí)施例中，分析試劑盒I還包括第一配體LI。第一配體LI用以直接或間接接合分析物A或其競爭物，而使分析物A或其競爭物間接接合至微粒12上。舉例來說，當(dāng)分析物A或其競爭物與微粒12間的結(jié)合力較弱時(shí)，通過與微粒12具有較佳結(jié)合性的第一配體LI結(jié)合于微粒12后，同時(shí)第一配體LI又具有能與分析物A相結(jié)合的結(jié)構(gòu)，因此能將分析物A穩(wěn)定地間接接合至微粒12上。
[0035]如圖1B所示，另外，本發(fā)明的分析試劑盒還可包括一第二配體L2，其能與第一配體LI結(jié)合。第二配體L2用以連接識別分子、分析物或其競爭物Al，以使識別分子、分析物或其競爭物Al能間接連接至微粒12上。如圖中所示，第一配體LI直接接合至微粒12上，而第二配體L2與競爭物Al先接合后，由于第一配體LI與第二配體L2具有能相互嵌合的結(jié)構(gòu)，因而兩者之間具有較佳的結(jié)合性。當(dāng)然，在本實(shí)施例中，第一配體LI及第二配體L2輔助競爭物Al接合至微粒12上的方式，還可以當(dāng)?shù)诙潴wL2接合競爭物Al后，再與第一配體LI接合，最后才通過第一配體LI接合至微粒12上；或是，第一配體LI結(jié)合至微粒12后加入第二配體L2，當(dāng)?shù)诙潴wL2與第一配體LI結(jié)合后，再加入競爭物Al ;亦或是，第一配體LI與第二配體L2先結(jié)合后，以第一配體LI的一端結(jié)合至微粒12上后，再加入競爭物Al，本發(fā)明均不設(shè)限。
[0036]在本發(fā)明的另一實(shí)施例，本發(fā)明的分析試劑盒應(yīng)用于夾心法酶聯(lián)免疫吸附法(sandwich ELISA)。如圖1C所示，在本實(shí)施例中，識別分子13為捕捉型抗體(captureantibody),能與分析物A相結(jié)合,且識別分子13能直接結(jié)合至微粒12的表面。
[0037]同樣地在另一實(shí)施例中，如圖1D所示，微粒12及識別分子13可以先分別接合第一配體LI及第二配體L2，通過第一配體LI與第二配體L2結(jié)合，可使識別分子13間接結(jié)合至微粒12上。在此實(shí)施例中，第一配體LI與第二配體L2間的結(jié)合可以通過結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)特性或特有官能團(tuán)間的鍵合而結(jié)合。對此，需額外說明的是，本發(fā)明的分析試劑盒在進(jìn)行分析時(shí)，依據(jù)所使用的分析方法的不同或依分析的需求不同，本發(fā)明的分析試劑盒可具有一種以上的識別分子。如圖1C及圖1D所示，分析試劑盒還具有另一識別分子14，其為檢測抗體(detection antibody)。當(dāng)識別分子13與一分析物A特異性接合后,最后再由另一具特異性的識別分子14辨識分析物A，其中，識別分子13及識別分子14分別辨識分析物A結(jié)構(gòu)上的兩個(gè)不同部位。而本發(fā)明的夾心法酶聯(lián)免疫吸附法的其它操作流程及其分析原理，為本發(fā)明所屬【技術(shù)領(lǐng)域】中具有通常知識者所能理解，故不再贅述。
[0038]請同時(shí)參照圖1A至圖1D，當(dāng)本發(fā)明的第一配體LI與分析物A或競爭物Al或識別分子13直接或間接結(jié)合后，為便于定量結(jié)合分析物A或競爭物Al濃度，因此本發(fā)明的分析試劑盒I還包括多個(gè)信號分子S能直接或間接結(jié)合于分析物A或競爭物Al或識別分子13，使信號分子S濃度能與分析物A濃度呈現(xiàn)正相關(guān)或負(fù)相關(guān)，故通過檢測信號分子S的活化的信號強(qiáng)度，可作為檢測微粒12所結(jié)合的分析物A濃度的依據(jù)。其中，信號分子S可為酶、酶受體、顯色劑、放射性物質(zhì)、納米粒、或金屬化合物。其中，酶可例如熒光素酶(Iuciferase)、β-半乳糖酶(β-galactosidase)、辣根過氧化氫酶(horseradishperoxidase)、或堿性磷酸酶(alkaline phosphatase)等加入受質(zhì)能釋放突光信號者；酶受體可與酶連結(jié)而活化并產(chǎn)生信號；顯色劑則例如熒光劑異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocynate)、羅丹明(rhodamine)、藻紅素(phycoerythrin)、突光蛋白、磺酰羅丹明B (Sulforhodamine B, SRB)及冷光物質(zhì)等；放射性物質(zhì)如1251、35S、mTc等；金屬化合物可例如為釕絡(luò)合物(Ru complex)。另外，本發(fā)明的信號分子S為包覆有上述信號分子S的微脂體，其脂質(zhì)結(jié)構(gòu)中鑲嵌具有信號的信號分子之結(jié)構(gòu)。而部分信號分子S通常于分析定量前才加入或活化，以使信號分子S能于活性期間內(nèi)有效被檢測，以避免影響檢測強(qiáng)度衰弱造成的定量誤差。而檢測信號分子S的方法依據(jù)所使用的信號分子類型的不同而有所差異，例如檢測信號分子S的方法可包括檢測信號的吸光值或放射線強(qiáng)度等，并連同相關(guān)儀器進(jìn)行檢測信號的強(qiáng)度。然而，上述檢測信號分子的方法為本發(fā)明所屬【技術(shù)領(lǐng)域】具有通常知識者所能理解，故不再贅述。
[0039]在本發(fā)明一實(shí)施例中，信號分子S與分析物A間接結(jié)合如圖1C及圖1D所示，所使用的信號分子S(星形)以微脂體(圓形)包覆以形成信號復(fù)合物15。信號復(fù)合物15能直接結(jié)合于分析物A或透過識別分子14間接結(jié)合于分析物A，并于定量分析前移除微脂體或破裂微脂體而使信號分子S (星形)露出，用以檢測信號分子S (星形)的濃度判斷分析物A的濃度。
[0040]同樣地，為使信號分子S與分析物A具有較佳的結(jié)合性，本發(fā)明的信號分子S可還包括配體(圖未表示)，配體能直接或間接結(jié)合于信號分子S或信號分子復(fù)合物15。信號分子S能通過配體與分析物A具有較佳的親和性，以進(jìn)一步與分析物A或與其結(jié)合的識別分子結(jié)合。而關(guān)于上述信號分子S及微脂體的相關(guān)制程及信號分子S結(jié)合配體的舉例說明及其制備的步驟流程，將于后續(xù)進(jìn)一步說明。除微脂體之外，本發(fā)明的信號分子S亦能通過連接其它連結(jié)件而結(jié)合至分析物，例如特異結(jié)合分析物的抗體或連接體(linker)。
[0041]再請同時(shí)參照圖1A至圖1D,本發(fā)明的分析試劑盒還包括一封合件112,封合件112設(shè)置于濾膜111的流出側(cè)。當(dāng)實(shí)施各分析法時(shí)，為使各反應(yīng)物質(zhì)間微粒12與第一配體L1、第一配體LI與分析物A或其競爭物Al或第二配體L2之間、信號分子S與分析物A或其競爭物Al或識別分子14等之間能有足夠時(shí)間進(jìn)行經(jīng)由浸泡以相互進(jìn)行特異性結(jié)合，封合件112能暫時(shí)封閉濾膜111的孔洞P，待反應(yīng)完全后再移除封合件112，以濾除多余的溶液。在本發(fā)明一實(shí)施例中，封合件112為薄膜、或盒蓋形式，且其材料可以是金屬、乳膠或塑料材料制成。
[0042]由于反應(yīng)容器11具有濾膜111，因此本發(fā)明的分析試劑盒的單一反應(yīng)容器可為具有至少一濾板(filter plate)或至少一管柱形式。當(dāng)反應(yīng)容器為濾板形式時(shí)，則可以同時(shí)進(jìn)行多種不同分析方法或同時(shí)分析不同的分析物。每個(gè)反應(yīng)容器的組合方式可如圖2A所示，相互并排于平面的方式組合成具有各種數(shù)目的反應(yīng)容器11的分析試劑盒2，組合方式較佳為一數(shù)組式排列，如96孔濾板、或384孔濾板、或1536孔濾板等。各濾盤或管柱的反應(yīng)空間深度可隨分析樣品的體積進(jìn)行調(diào)整，如可容置I μ I至IOOml溶液體積的空間。由于具有多個(gè)反應(yīng)容器11，故本發(fā)明的分析試劑盒I能進(jìn)行分析中的各項(xiàng)檢測及分析，包括以標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)濃度曲線、或于相同樣品之間進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。
[0043]舉例來說，如圖2Β所示，圖中所顯示為本發(fā)明的分析試劑盒以96孔濾板形式表示，且為俯視示意圖。Al?AS為稀釋不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品，并以此建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線對分析物濃度進(jìn)行分析，而BI?B8為針對八種不同的分析物進(jìn)行分析，Cl?C8及Dl?D8為BI?B8的另外兩個(gè)重復(fù)，將BI?B8、C1?C8及Dl?D8三者的三個(gè)重復(fù)分析結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到平均濃度。故，本發(fā)明的分析試劑盒除能用于標(biāo)準(zhǔn)曲線之建立以外，也能同時(shí)進(jìn)行多次重復(fù)分析。此外，由于各反應(yīng)容器的反應(yīng)空間能依應(yīng)用的分析樣品量調(diào)整，因此，也適用于高通量的樣品分析。
[0044]除此之外，本發(fā)明亦提供一種分析方法，與分析物反應(yīng)的分析試劑盒配合，分析試劑盒包括多個(gè)反應(yīng)容器以及多個(gè)微粒，各反應(yīng)容器包括具有多個(gè)孔洞的濾膜，分析方法步驟包括將具有分析物或其競爭物或識別分子的溶液加入各反應(yīng)容器，微粒分別與分析物或其競爭物或識別分子直接或間接接合(步驟SI)、加入多個(gè)信號分子，信號分子連接至分析物或其競爭物或識別分子(步驟S2)、濾除反應(yīng)容器中的溶液(步驟S3)以及檢測信號分子所產(chǎn)生的信號強(qiáng)度(步驟S4)。
[0045]而關(guān)于本發(fā)明的分析方法，所使用的分析試劑盒如上述的分析試劑盒，其中的反應(yīng)容器及其組成組件的相關(guān)說明請參照上述。本發(fā)明的步驟流程及操作流程示意圖分別如圖3及圖4A至圖4E所示。在此，圖4A至圖4E參照如圖1B結(jié)構(gòu)的分析試劑盒同時(shí)連同競爭型酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)一步說明。
[0046]于步驟SI，在本發(fā)明一實(shí)施例中，與分析物相競爭的競爭物能直接與微粒結(jié)合。對此，微粒先加入至反應(yīng)容器后，隨即加入含有競爭物的溶液與微粒作用一段時(shí)間，使競爭物能與微粒充分結(jié)合。
[0047]而于另一實(shí)施例中，競爭物間接與微粒結(jié)合。對此，本發(fā)明的分析方法還包括設(shè)置至少一第一配體于微粒的表面，第一配體能與分析物或其競爭物直接結(jié)合至微粒上。則在進(jìn)行步驟Si時(shí)，則接有第一配體的微粒直接先置于反應(yīng)容器中，再加入含有分析物或其競爭物的溶液至反應(yīng)容器中與微粒結(jié)合。而若分析物或其競爭物采間接結(jié)合方式至微粒時(shí)，則本發(fā)明的分析方法又可還包括設(shè)置第二配體于分析物或其競爭物。其中，第一配體及第二配體能相互結(jié)合，兩者的結(jié)合方式如上述說明。請同時(shí)參照如圖3及圖4A所示。在此實(shí)施例中，微粒12先與第一配體LI結(jié)合后，設(shè)置于反應(yīng)容器11中，而競爭物Al (方形斜線)則與第二配體L2進(jìn)行結(jié)合。圖4A中以單一個(gè)反應(yīng)容器11為例，而真正進(jìn)行操作時(shí)，可有多個(gè)反應(yīng)容器11 一同來進(jìn)行分析。于步驟SI中，本發(fā)明亦不限為先將第一配體LI與微粒12結(jié)合后才加入競爭物Al或第二配體L2，也可以先使第一配體LI與競爭物Al或第二配體L2特異性結(jié)合后，再通過第一配體LI連接到微粒12上，本發(fā)明不限于此。當(dāng)然在其它實(shí)施例中，與微粒12直接或間接接合者，也可為分析物A。
[0048]在本實(shí)施例中，微粒12為樹脂材料，第一配體LI為鏈霉親和素(streptavidin),且第二配體L2為生物素(biotin)為例，能與作為第一配體LI的鏈霉親和素嵌合。在本實(shí)施例中，微粒12浸泡于含有鏈霉親和素的溶液中進(jìn)行反應(yīng)，以使鏈霉親和素接合至微粒12表面。在此實(shí)施例中，競爭物Al通過第二配體L2而結(jié)合至第一配體LI之外，并可與分析物A共同競爭后續(xù)加入具專一結(jié)合性的識別分子14(如圖4B所示)。需額外說明的是，本發(fā)明中的分析方法中，競爭物Al與分析物A競爭識別分子14的方式，依分析的目的不同，而可以待接有第二配體L2的分析物A與微粒12上的第一配體LI結(jié)合后，再加入競爭物Al ；或是先加入接有第二配體L2的競爭物Al，待第二配體L2與微粒12上的第一配體LI結(jié)合后，再加入分析物A ;或是分析物A與競爭物Al先混合后再加入，而競爭物Al連接第二配體L2，以與連接在微粒12上的第一配體LI結(jié)合。然而，本發(fā)明的競爭物Al所扮演的競爭角色，視分析時(shí)檢測需求而定，本發(fā)明不限于此。在本實(shí)施例中，如圖4A所示，分析物A待競爭物Al所連接的第二配體L2與第一配體LI間接結(jié)合后才加入反應(yīng)容器11中，以競爭后續(xù)加入的識別分子14。
[0049]在本實(shí)施例中，第二配體L2為生物素，其標(biāo)定分析物A或競爭物Al的反應(yīng)使用Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin以抗生素20倍的摩爾數(shù)與競爭物Al溶液混合，在室溫下反應(yīng)2小時(shí)以后加入68mM牛血清蛋白使未與分析物反應(yīng)的Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin與牛血清蛋白上胺基反應(yīng)，再以Tris-HCl將剩余的自由NHS反應(yīng)官能團(tuán)結(jié)合，以Amiconultrafiltration(Millipore)將接合競爭物Al的生物素與接合牛血清蛋白(Bovineserum albumin, BSA)的生物素通過大小分離,取得溶有生物素標(biāo)定競爭物Al的過濾液并且加入其1.5倍量具有鏈霉親和素接合的微粒12均勻混合，于室溫反應(yīng)I小時(shí)，以使生物素與鏈霉親和素間相互結(jié)合。同時(shí)加入BSA溶液以阻斷微粒12表面非特異性吸附作用，最后利用離心清洗除去溶液中沒有結(jié)合上微粒12的其它物質(zhì)，其中包含游離的競爭物Al，反復(fù)離心清洗后，最后將合成好的接合競爭物Al之微粒12溶液儲存在4°C備用。
[0050]接著，如步驟S2，加入多個(gè)信號分子S，此步驟的示意圖如圖4C所示。在本實(shí)施例中，信號分子S以微脂體包覆以形成信號復(fù)合物15。本實(shí)施例中，信號復(fù)合物15通過識別分子14，而能特異性結(jié)合或標(biāo)定至分析物A或其競爭物Al。另外，為使信號復(fù)合物15與識別分子14間的特異性結(jié)合更佳，本實(shí)施例的信號復(fù)合物15還包括第三配體L3。第三配體L3與識別分子14具有較佳特異性，因而能使帶有信號分子S的信號復(fù)合物15間接接合至有識別分子14的分析物A或競爭物Al上。通過識別分子14與第三配體L3的結(jié)合，使信號分子S能標(biāo)定到分析物A及競爭物Al。當(dāng)然，于其它實(shí)施例中，信號復(fù)合物15也可能直接連結(jié)于分析物A及/或競爭物Al上，而不需要通過識別分子14或第三配體L3。
[0051]在此實(shí)施例中，信號分子S為包覆于微脂體中的熒光物質(zhì)SRB (磺酰羅丹明，sulforhodamine B, Sigma)。本實(shí)施例中的微脂體及包覆突光物質(zhì)SRB之方法如下:微脂體的組成包含4.8 % DPPG( 二棕櫚酰磷脂酰甘油，dipalmi toy lphosphat idyl glycerol, Avanti Polar Lipids) >45.3 % DPPC ( 二掠櫚酸憐脂酸膽喊，dipalmi toy lphosphat idyl choline, Avanti Polar Lipids)、45.9 % 膽固醇(cholesterol, Sigma)以及4 % ATA-DPPE，以上的磷脂質(zhì)組成包覆有150mM的熒光物質(zhì)SRB (磺酰羅丹明，sulforhodamine B, Sigma)。事先將N-琥拍酰亞胺基S-乙?；虼宜猁}(N-Succinimidyl S-Acetylthioacetate) (SATA, Thermo)與 DPPE 1,2-二(十六酸)-sn-甘油基-3-憐酸乙醇胺(1，2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanola-mine, Avanti Polar Lipids)反應(yīng)30分鐘完成DPPE-ATA的制備，而后將膽固醇、DPPC及DPPG溶于3: I氯仿/甲醇有機(jī)溶劑中，再加入事先完成的SATA修飾的DPPE，以氮?dú)獬ビ袡C(jī)溶劑后形成膠狀透明脂質(zhì)膜再加入預(yù)熱至60°C的150mM SRB溶液，并于60°C的水浴槽中進(jìn)行熒光物質(zhì)SRB的包覆反應(yīng)(encapsulation)，45分鐘后將殘留塊狀的脂質(zhì)震蕩混合均勻在溶液中，再次利用60°C水浴槽繼續(xù)進(jìn)行熒光物質(zhì)SRB的包覆作用30分鐘至I小時(shí)。
[0052]最后,將已形成的突光微脂體溶液在60°C的條件下,來回?cái)D壓穿過200nm孔徑的聚碳酸酯針筒式濾器(polycarbonate syringe filers) (Avanti Polar Lipids) 30 次。此時(shí)，微脂體直徑已被調(diào)整成約200nm。將有包覆熒光物質(zhì)SRB的微脂體與未包覆在微脂體內(nèi)的突光物質(zhì)SRB利用大小排除層析法(size exclusion chromatography, SEC)分離,有包覆熒光物質(zhì)SRB的微脂體經(jīng)由SEC(CL-4B resin)被分離出來，其沖提液為TBS-蔗糖(25mMTris, 140mM NaCl, and 65g/L 鹿糖,酸堿值調(diào)整至 pH 7.5)。
[0053]在本實(shí)施例中，第三配體L3為蛋白質(zhì)G (protein G)，而識別分子14為免疫球蛋白G (immunoglobulin G, IgG),且為能與分析物A及其競爭物Al進(jìn)行特異性結(jié)合的抗體。由于蛋白質(zhì)G能與免疫球蛋白G特異性結(jié)合，因此，信號復(fù)合物15能通過第三配體L3而與識別分子14特異性結(jié)合。
[0054]將蛋白質(zhì)G接合至包覆有信號復(fù)合物15表面上的接合方法如下所述:接合反應(yīng)依Chen等人(2005)的方法改良，原方法中所使用的Sulfo-SMCC(4-(N-馬來酰亞胺甲基)環(huán)己燒-1-羧酸橫酸基玻拍酸亞胺酯，Sulfosuccinimidyl 4- (N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate)交聯(lián)劑以具有 24 個(gè) PEG(聚乙二醇，polyethylene glycol)的SM (PEG) 24(琥珀酰亞胺基-[(N-馬來酰亞胺基丙酰胺基)_ 二十四碳亞乙基二醇]酯，succinimidyl-[ (N~maleimidoprop1-namido) -tetracosaethyleneglycoI] ester)交聯(lián)劑(crosslinker, Thermo)取代。預(yù)期可以使蛋白質(zhì)G-微脂體-SRB足以突破空間障礙的困難而具有更大的靈活度與后續(xù)使用的作為識別分子14的抗體結(jié)合，利于分析的進(jìn)行。
[0055]關(guān)于信號復(fù)合物15中的微脂體與蛋白質(zhì)G的接合反應(yīng)(conjugation),其作法如下:首先由以SM(PEG) 24將蛋白質(zhì)G進(jìn)行衍生化作用(derivitization of neutravidinwith SM(PEG)24)以及微脂體-熒光物質(zhì)SRB表面的去乙酰反應(yīng)(deacetylation)同時(shí)平行進(jìn)行，其中蛋白質(zhì)G的衍生化反應(yīng)在酸堿值7至9之間在室溫下進(jìn)行I小時(shí)，產(chǎn)物由0.2MTris HCl將未反應(yīng)的官能團(tuán)結(jié)合后，以分子量大小限制為7K的離心柱(Zeba Desaltingcolumn)將接有SM(PEG)24的蛋白質(zhì)G與未反應(yīng)的SM(PEG)24分離，得到馬來酰亞胺衍生化(Maleimide-derivetized)的蛋白質(zhì)G,再與同樣經(jīng)過I小時(shí)、室溫下以0.5M輕基胺鹽酸鹽(hydroxylamine hydrochloride)去乙酰反應(yīng)完成后的表面硫醇基裸露的微脂體在酸堿值
6.5到7.5之間進(jìn)行反應(yīng)。此馬來酰亞胺衍生化的蛋白質(zhì)G與微脂體表面的硫醇基在室溫下反應(yīng)1.5個(gè)小時(shí)后以硫氫基結(jié)合劑NEM(N-ethylmaleimide)將未反應(yīng)的微脂體表面硫醇基阻斷，再經(jīng)由大小排除層析法將蛋白質(zhì)G接合成功的微脂體-熒光物質(zhì)SRB與未接合成功的蛋白質(zhì)G分離,沖提液同樣使用TBS-鹿糖(25mM Tris, 140mM NaCl, and 65g/L鹿糖，酸堿值調(diào)整至PH7.5)。
[0056]另外，如圖3及圖4D所示，本發(fā)明的分析方法于進(jìn)行步驟SI之后及/或步驟S2之后，可進(jìn)行一濾除步驟(步驟S3)。當(dāng)每個(gè)加入步驟(步驟SI或S2)后通過封合件112密合濾膜111的孔洞P，使各物質(zhì)之間充分作用及結(jié)合，之后再通過移除封合件112，使溶液中未結(jié)合至微粒12上的物質(zhì)如分析物A或其競爭物Al、第一配體L1、第二配體L2、識別分子14或信號復(fù)合物15等，由濾膜111的孔洞P流出。除此之外，本發(fā)明的濾除步驟還包括多個(gè)清洗的步驟，以達(dá)到充分移除非欲進(jìn)行檢測的物質(zhì)。
[0057]最后，于步驟S4中檢測微粒12上競爭物Al所結(jié)合的信號復(fù)合物15釋放的信號分子S的信號強(qiáng)度。依據(jù)所接合的不同信號分子S種類，本發(fā)明的分析方法中能額外添加其受質(zhì)或催化酶等，使信號分子S活化后釋出信號。在本實(shí)施例中，如圖4E所示，信號復(fù)合物15通過加入界面活性劑使微脂體溶解后，釋放出SRB信號分子S。并且依據(jù)各種信號分子S的波長范圍或信號特性的不同以不同儀器進(jìn)行檢測，統(tǒng)計(jì)各分析數(shù)值后定量出分析物A的濃度。
[0058]需特別說明的是，在本實(shí)施例中，當(dāng)溶液中分析物A越多，則后續(xù)結(jié)合到競爭物Al的識別分子14及信號分子S量則越少；反之，溶液中分析物A越少，則后續(xù)結(jié)合到競爭物Al的識別分子14及信號分子S量則越多。又由于非與微粒12結(jié)合的分析物A于進(jìn)行步驟S3時(shí)會被濾除，因此，最后檢測被保留在反應(yīng)容器11中的信號分子S強(qiáng)度，將與所加入的分析物A濃度成反比，因而能間接推知分析物A的濃度。
[0059]當(dāng)然，若用于三明治分析方法時(shí)，加入至反應(yīng)容器中的溶液還包括至少一識別分子，識別分子能與分析物或其競爭物特異性結(jié)合，并能直接或間接地接合至微粒上。請參照圖3、圖1C及圖1D所示。同樣地，識別分子13能與分析物A特異性結(jié)合。在本實(shí)施例中，識別分子13為能與分析物A相結(jié)合的抗體。識別分子13能如圖1C所示，直接結(jié)合于微粒12的表面?；蚴?，為使識別分子13能穩(wěn)定地結(jié)合于微粒12上，于步驟SI前，如圖1D所示，微粒12可先直接結(jié)合第一配體LI，而識別分子13結(jié)合第二配體L2，而第一配體LI與第二配體L2的結(jié)合方式已于前文中詳細(xì)描述。然而，依所使用不同的第一配體LI及第二配體L2而有不同的結(jié)合手段。待識別分子13與微粒12直接或間接結(jié)合后，即加入分析物A或其競爭物Al以與識別分子13結(jié)合，進(jìn)而將分析物A或其競爭物Al直接或間接結(jié)合于微粒12上(步驟SI)。而后續(xù)施用于三明治分析方法的步驟S2、步驟S3及步驟S4如上所述，故在此不再贅述。
[0060]以下，本發(fā)明將以一實(shí)施例說明本發(fā)明的分析方法，能快速準(zhǔn)確建立檢測分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線及多重分析的可行性。
[0061]實(shí)驗(yàn)例:本發(fā)明的分析方法以競爭型分析法分析抗生素
[0062]于本實(shí)驗(yàn)例中，分析試劑盒所采用的各組件及其連結(jié)關(guān)系如圖4A所示。其中，微粒12為樹脂材料制成的粒子。分析物A及其競爭物Al均為慶大霉素硫酸鹽(gentamycinsulfate),微粒12上具有的多個(gè)第一配體LI為鏈霉親和素(streptavidin),慶大霉素以上述的方法標(biāo)定生物素(biotin)后與微粒12的卵蛋白結(jié)合，形成慶大霉素微粒。而在本實(shí)驗(yàn)例中，反應(yīng)容器11為一濾盤。
[0063]首先以牛血清蛋白阻斷在后續(xù)所有步驟中非特異性的吸附濾盤的可能性，接著將慶大霉素微粒與6種具有不同濃度的慶大霉素樣品(0(負(fù)控制組)、0.05、0.1、1、10以及100 μ g/mL)加入底部有封膜的濾盤中，利用微量盤式震動儀(micromixer，TAITEC)混合均勻數(shù)秒后加入所需要的抗慶大霉素抗體溶液在室溫下反應(yīng)I小時(shí)，待反應(yīng)過后移除封合件112，在此以鋁箔封膜為例，并將TBS-蔗糖加入濾盤中，使反應(yīng)后除了接有抗慶大霉素抗體的慶大霉素微粒以及未接有抗慶大霉素抗體的慶大霉素微粒以外，其余的抗慶大霉素抗體-慶大霉素、抗慶大霉素抗體、剩余的慶大霉素樣品皆隨TBS-蔗糖溶液流出濾盤以達(dá)到分離清洗的效果，總共清洗三次，最后一次清洗步驟后離心將多余液體移除。再次將96孔濾板底部加上鋁箔封膜，加入含信號復(fù)合物的溶液，即含有蛋白質(zhì)G-微脂體-SRB信號分子的溶液反應(yīng)30分鐘，移除封合件112以后仍使用TBS-蔗糖溶液清洗，將多余的蛋白質(zhì)G-微脂體-SRB洗除，清洗共兩次，同樣通過離心將多余液體移除。最后將濾盤按照各個(gè)孔洞的編號相對應(yīng)地組合在一般96孔濾板上,加入界面活性劑n-OG(noctyl-beta-d-glucopyranoside)將各孔洞中蛋白質(zhì)G-微脂體-SRB打破并且通過離心將濾盤中因打破蛋白質(zhì)G-微脂體-SRB而釋放出來的SRB接入一般96孔黑盤中，最終以synergy 2 (Synergy 2Mult1-Mode microplate reader, BioTek)在激發(fā)光 540nm 以及吸收光 590nm 的條件下測量記錄熒光信號的強(qiáng)弱，而后再統(tǒng)計(jì)分析。
[0064]利用本發(fā)明的分析方法，進(jìn)行針對慶大霉素的檢測，在6種不同的慶大霉素濃度五次重復(fù)下，同時(shí)在一個(gè)濾盤上一共30個(gè)孔洞中分別進(jìn)行如同上述的高通量濾盤微珠式競爭型分析反應(yīng)。其中，6種慶大霉素濃度包含分別在TBS(Tris buffered saline)溶液中濃度為0(負(fù)控制組)、0.05,0.U0.2,0.5以及I μ g/mL的慶大霉素，測量最后收集于一般96孔黑盤的熒光信號以后，結(jié)果如圖5A所示，本發(fā)明的分析試劑盒及分析方法所得到的檢測結(jié)果具有穩(wěn)定的線性關(guān)系(R2 = 0.995)。另外，在本發(fā)明另一實(shí)驗(yàn)例中，樣品為配制在脫脂牛奶中含有不同濃度的慶 大霉素溶液，并且依上述的實(shí)驗(yàn)步驟，依然可以檢測到R2 =
0.9314的線性關(guān)系。在此實(shí)驗(yàn)結(jié)果中更說明了，本發(fā)明的分析試劑盒及分析方法具有極佳的特異性，于分析過程中不會受到溶液中其它物質(zhì)的干擾。因此，在得到的穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線且具特異性的分析條件下，本發(fā)明的分析試劑盒及分析方法能還進(jìn)一步對未知濃度的分析物進(jìn)行檢測，而可得到準(zhǔn)確地檢測結(jié)果。
[0065]為了測量飽和的劑量反應(yīng)曲線(Dose response curve)選擇O (負(fù)控制組)、
0.05、0.1、1、10 以及 100 μ g/mL。結(jié)果如圖 5B 所示，定義檢測極限(Limit ofdetection,L0D)為該濃度的信號值為負(fù)控制組的數(shù)據(jù)平均扣除三倍負(fù)控制組數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)差(standarddeviation, SD)。樣品配制在TBS溶液中所得到的LOD為52.65ng/mL,以及樣品配制在脫脂牛奶中所得到的LOD為14.16ng/mL，足以檢測慶大霉素的法規(guī)所定的最高殘余限量(Maximum residue level, MRL)為200ng/mL。除此之外,本發(fā)明的分析試劑盒及分析方法能將此30個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)驗(yàn)在2小時(shí)以內(nèi)即可完成，具有快速準(zhǔn)確分析的功效。
[0066]綜上所述，本發(fā)明所提供的一種分析試劑盒，通過微粒的粒徑大于濾膜孔洞，能快速經(jīng)由濾除方式將直接或間接結(jié)合在微粒上的分析物或其競爭物或識別分子與其它物質(zhì)分離，并進(jìn)行定量分析。如此一來，能改善現(xiàn)有技術(shù)中需以提供磁性將磁珠于分離時(shí)的復(fù)雜程序。本發(fā)明的分析試劑盒還兼具分析容易且設(shè)備器材成本較低且能廣泛應(yīng)用于各種分析法等優(yōu)勢，且反應(yīng)容器能依據(jù)分析所需而制成各種容積，因此還能應(yīng)用于高通量的分析。另外，本發(fā)明亦提供一種分析方法，連同本發(fā)明的分析試劑盒，能實(shí)施間接型酶聯(lián)免疫吸附法、競爭型酶聯(lián)免疫吸附法以及夾心法酶聯(lián)免疫吸附法，相較現(xiàn)有技術(shù)的分析方法可還為快速且靈敏地分析及定量分析物。
[0067]以上所述僅為舉例性，而非為限制性。任何未脫離本發(fā)明的精神與范疇，而對其進(jìn)行的等效修改或變更，均應(yīng)包含于后附的權(quán)利要求中。
[0068]【主要組件符號說明】
[0069]1、2:分析試劑盒
[0070]11:反應(yīng)容器
[0071]111:濾膜
[0072]112:封合件
[0073]12:微粒
[0074]13、14:識別分子
[0075]15:信號復(fù)合物[0076]A:分析物
[0077]Al:競爭物
[0078]L1:第一配體
[0079]L2:第二配體
[0080]L3:第三配體
[0081]P:孔洞
[0082]S:信號分子
[0083]SI ?S4:步驟
【權(quán)利要求】
1.一種分析試劑盒,與分析物反應(yīng),所述分析試劑盒包括: 多個(gè)反應(yīng)容器，分別包括濾膜，所述濾膜具有多個(gè)孔洞；以及 多個(gè)微粒，各微粒的粒徑大于各孔洞，且直接或間接與所述分析物或其競爭物或識別分子接合。
2.如權(quán)利要求1所述的分析試劑盒，其中所述孔洞的孔徑介于Inm至Icm之間。
3.如權(quán)利要求1所述的分析試劑盒，其中所述微粒的材料包括玻璃、乳膠、橡膠、磁石、樹脂、金屬、陶瓷、多糖、塑料、或硅。
4.如權(quán)利要求1所述的分析試劑盒，其中所述分析物或其競爭物或所述識別分子為蛋白質(zhì)、肽、核酸、糖類、化合物、細(xì)胞、或微生物。
5.如權(quán)利要求1所述的分析試劑盒，其中所述識別分子與所述分析物或其競爭物結(jié)口 ο
6.如權(quán)利要求1所述的分析試劑盒，還包括: 多個(gè)信號分子，分別與所述分析物或其競爭物或所述識別分子結(jié)合。
7.如權(quán)利要求6所述的分析試劑盒，其中所述信號分子包括酶、酶受體、顯色劑、放射性物質(zhì)、納米脂粒、金屬化合物。
8.如權(quán)利要求1所述的分析試劑盒，還包括: 封合件，設(shè)置于所述濾膜的流出側(cè)。
9.一種分析方法，與分析物反應(yīng)的分析試劑盒配合，所述分析試劑盒包括多個(gè)反應(yīng)容器以及多個(gè)微粒，各反應(yīng)容器包括具有多個(gè)孔洞的濾膜，所述分析方法包括: 將具有所述分析物或其競爭物或識別分子的溶液加入各反應(yīng)容器，所述微粒分別與所述分析物或其競爭物或所述識別分子進(jìn)行直接或間接結(jié)合； 加入多個(gè)信號分子，所述信號分子連接至所述分析物或其競爭物或所述識別分子； 濾除所述反應(yīng)容器中的所述溶液；以及 檢測所述信號分子所產(chǎn)生的信號強(qiáng)度。
10.如權(quán)利要求9所述的分析方法，其中各微粒的粒徑大于各孔洞。
11.如權(quán)利要求9所述的分析方法，其中所述識別分子與所述分析物或其競爭物接合。
【文檔編號】G01N33/543GK103954765SQ201310292413
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2013年7月12日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月24日
【發(fā)明者】陳健生, 何天瑜 申請人:國立中央大學(xué)