一種顯色質(zhì)控物及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種顯色質(zhì)控物及其應用，屬于質(zhì)控物【技術領域】。所述顯色質(zhì)控物是在普通質(zhì)控物中加濃度為0.001g/ml～1g/ml的染色劑得到的。該顯色質(zhì)控物可肉眼與檢測標本和陰陽性對照品區(qū)分，便于試驗時質(zhì)控物隨機分布在檢測標本中，更好的發(fā)揮質(zhì)控物的監(jiān)測作用，并避免加錯、漏加質(zhì)控物。更重要的是該顯色質(zhì)控物能很好的保持其原有穩(wěn)定的生物化學性狀，準確的完成酶聯(lián)免疫實驗。
【專利說明】—種顯色質(zhì)控物及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于質(zhì)控物【技術領域】，具體涉及一種顯色質(zhì)控物及其應用。
【背景技術】
[0002]酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)是臨床檢驗中最常用的檢測方法，因其靈敏度和特異性較高、自動化、價格低廉等優(yōu)勢，因此在高通量的血液檢測中極具優(yōu)勢，是我國目前采供血機構進行血液安全檢測的不可替代的方法。丙肝、梅毒、乙肝和艾滋病是衛(wèi)生部規(guī)定的所有采集的血液必須要檢測的四項傳染病指標，其檢測方法為ELISA。
[0003]做ELISA試驗時，必須與檢測的血液樣本一起做一孔或者多孔室內(nèi)質(zhì)控物來監(jiān)測每次試驗結果的有效性。室內(nèi)質(zhì)控物的基質(zhì)來自于人的血清，因此，目前大多數(shù)檢測機構所使用的質(zhì)控物其顏色與檢測的血清標本一樣，都為無色透明或微黃色(無色透明為血清經(jīng)過處理后的顏色)。在大批量檢測血液樣本時，采用全自動加樣設備將50μ I質(zhì)控物加于300ul的酶標板孔內(nèi)。由于其顏色與檢測的血液標本很難分辨，試驗中只能固定孔位，檢測者才能知道哪一孔做的是質(zhì)控物，而事實上做質(zhì)控物的要求是必須隨機分布于血液標本中間，與檢測標本一起試驗才能起到質(zhì)控物的監(jiān)測作用。且目前大多數(shù)試劑廠家生產(chǎn)的陰性對照、陽性對照與質(zhì)控物的顏色十分相似，肉眼幾乎不能辨別。因此，實驗人員也很難區(qū)分陰陽性對照物和質(zhì)控物是否有加錯位置，或者混加的現(xiàn)象。質(zhì)控物的試驗結果直接關系到整批實驗數(shù)據(jù)的有效性。實際工作中因質(zhì)控物顏色不好與陰陽性對照物和檢測的血清標本辨別而出現(xiàn)加錯、漏加或者量不足的現(xiàn)象時有發(fā)生，質(zhì)控物的結果關系到整批試驗結果的有效性，試驗結果無效常常會導致試驗必須重做，給病人和工作人員帶來不必要的麻煩和浪費。丙型肝炎、梅毒螺旋體、乙肝表面抗原和艾滋病毒是衛(wèi)生部規(guī)定的所有采集的血液必須要檢測的四項傳染病指標，因質(zhì)控物結果不合要求而導致試驗重做，嚴重時可能會影響到病人及時輸血，危及病人的生命。因此，對于質(zhì)控物的顏色性狀的改進變得尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是解決上述問題而提供了一種能保持質(zhì)控物原有的生物化學性狀，并且能用肉眼辨別的顯色質(zhì)控物及其應用。
[0005]本發(fā)明所采用的技術方案是:
[0006]一種顯色質(zhì)控物，所述顯色質(zhì)控物是在普通質(zhì)控物中加濃度為0.00lg/ml?Ig/ml的染色劑得到的。
[0007]進一步地，所述顯色質(zhì)控物中普通質(zhì)控物的原有生物化學性狀不會發(fā)生改變。
[0008]優(yōu)選地，所述染色劑為化學合成色素或天然色素。
[0009]更優(yōu)選地，所述化學合成色素為胭脂紅、檸檬黃或日落黃。
[0010]更優(yōu)選地，所述天然色素為甜菜紅。
[0011]優(yōu)選地，所述普通質(zhì)控物為艾滋病毒質(zhì)控物、丙肝質(zhì)控物、梅毒質(zhì)控物或者乙肝質(zhì)控物。[0012]進一步地，所述普通質(zhì)控物為艾滋病毒質(zhì)控物、梅毒質(zhì)控物或者乙肝質(zhì)控物時，力口入染色劑的濃度為0.lg/ml。
[0013]進一步地，所述普通質(zhì)控物為丙肝質(zhì)控物時，加入染色劑的濃度為0.2g/ml。
[0014]進一步地，所述顯色質(zhì)控物可以保證酶聯(lián)免疫吸附實驗的穩(wěn)定性。
[0015]本發(fā)明具有以下優(yōu)點:
[0016]本發(fā)明克服現(xiàn)有的質(zhì)控物的顏色性狀不足，提供一種顯色質(zhì)控物，該顯示質(zhì)控物可以保證普通的質(zhì)控物不僅能保持其原本的生物化學性狀、監(jiān)測酶聯(lián)免疫反應的過程，而且能輕易通過肉眼將其與陽性對照物、陰性對照物及檢測的血液樣本區(qū)分開來，并方便于將質(zhì)控物隨機設置在檢測的血液樣本中，使整個實驗進程更加安全可靠，質(zhì)控物的值更加能準確的反應試驗結果。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1為實施例1中顯色乙肝質(zhì)控物應用于酶聯(lián)免疫吸附實驗的顯色結果圖；
[0018]圖2為實施例2中顯色梅毒質(zhì)控物應用于酶聯(lián)免疫吸附實驗的顯色結果圖；
[0019]圖3為實施例3中顯色艾滋病毒質(zhì)控物應用于酶聯(lián)免疫吸附實驗的顯色結果圖；
[0020]圖4為實施例4中顯色丙肝質(zhì)控物應用于酶聯(lián)免疫吸附實驗的顯色結果圖。
【具體實施方式】
[0021]下面結合附圖和實施方式對本發(fā)明作進一步詳細的說明。
[0022]實施例1
[0023]本實施例提供了一種顯色乙肝質(zhì)控物的制備方法，包括如下步驟:
[0024](I)用分析天平稱取1.0g染料檸檬黃，以IOml去離子水溶解，稀釋。離心機1000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心I分鐘，待用。
[0025](2)取出抗-HBsAg質(zhì)控物I支(規(guī)格:0.5ml/支或Iml/支)，室溫平衡30分鐘。
[0026](3)吸取Iul已溶解的朽1檬黃染料加入0.5ml/支或Iml/支抗-HBsAg質(zhì)控物中，蓋上蓋子，來回顛倒混勻I分鐘，可見質(zhì)控物很快均勻染色。
[0027](4)質(zhì)控物的保存:保存于_20°C條件下。
[0028](5)使用之前放于4°C冰箱內(nèi)解凍一天后再放于室溫下平衡半小時備用。
[0029]將此顯色乙肝病毒質(zhì)控物應用于ELISA實驗，其實驗步驟如下:
[0030](I)取平衡好的抗-HBsAg酶聯(lián)免疫試劑，第一條酶標孔內(nèi)加上陰性對照2孔(Al、BI)、陽性對照2孔(C1、D1)質(zhì)控物I孔(E1)，每孔各lOOul，第二條及第三條和第四條微板內(nèi)(A2-H2、A3-H3、A4-H4)共24孔加入未添加染色劑的質(zhì)控物每孔各lOOul，第五條、六條及七條的(A、B、C、D、E、F、G、H即A5-H5、A6-H6、A7-H7)孔共24孔內(nèi)加入顯色乙肝質(zhì)控物，每孔各lOOul。其顯色結果參照圖1。
[0031](2)微板置于37°C孵育箱孵育I小時。
[0032](3)配置好的洗液洗板5次，扣干。
[0033](4)每孔加酶lOOul，繼續(xù)于37°C孵育箱孵育I小時。
[0034](5)配置好的洗液洗板5次，加入底物(A、B液各50ul)。
[0035](6)37°C孵育箱孵育30分鐘。[0036](7)每孔加入終止液lOOul，微板顯色，用酶標儀檢測OD值。
[0037]將原質(zhì)控物檢測到的OD值與顯色乙肝質(zhì)控物檢測到的OD值進行t檢驗比較，P=0.51 > 0.05，兩組數(shù)據(jù)無明顯統(tǒng)計學差異，說明該染色方法處理后的質(zhì)控物可以很好的保持了質(zhì)控物的生物化學性狀，可以穩(wěn)定的應用于酶聯(lián)免疫實驗。為證實改進后的質(zhì)控物對采供血機構日常工作不產(chǎn)生任何影響，在采供血機構檢測乙肝的微板所預留的空白孔內(nèi)加入改進后的質(zhì)控物lOOul，隨微板進入全自動FAME后處理儀器中實驗一個月，共做微板數(shù)為211板，將改進后的質(zhì)控物所得數(shù)值與原質(zhì)控物數(shù)值比較，(P=0.65>0.05，差別不具有統(tǒng)計學意義)。將改進后的質(zhì)控物與檢測標本一起隨機加入到微板內(nèi)任何一孔，共做微板30塊，將改進后質(zhì)控物所得的值與原質(zhì)控物OD值比較，(P=0.43>0.05，差別不具有統(tǒng)計學意義)。
[0038]實施例2
[0039]本實施例提供了一種顯色梅毒質(zhì)控物的制備方法，包括如下步驟:
[0040](I)用分析天平稱取1.0g染料檸檬黃，以IOml去離子水溶解，稀釋。離心機1000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心I分鐘，待用。
[0041](2)取出梅毒質(zhì)控物I支(規(guī)格:0.5ml/支或Iml/支)，室溫平衡30分鐘。
[0042](3)吸取Iul已溶解的檸檬黃染料加入0.5ml/支或Iml/支梅毒質(zhì)控物中，蓋上蓋子，來回顛倒混勻I分鐘，可見質(zhì)控物很快均勻染色。
[0043](4)質(zhì)控物的保存:保存于_20°C條件下。
[0044](5)使用之前放于4°C冰箱內(nèi)解凍一天后再放于室溫下平衡半小時備用。
[0045]將此顯色梅毒質(zhì)控物應用于ELISA實驗，其實驗步驟如下:
[0046](I)取平衡好的梅毒酶聯(lián)免疫試劑，第一條酶標孔內(nèi)加上陰性對照2孔(Al、BI)、陽性對照2孔(Cl、Dl)質(zhì)控物I孔(E1)，每孔各lOOul，第二條及第三條微板內(nèi)(A2-H2，A3-H3)共16孔加入未添加染色劑的質(zhì)控物每孔各lOOul，第五條、六條及七條的(A、B、C、
D、E)孔內(nèi)加入顯色梅毒質(zhì)控物每孔各lOOul。其顯色結果參照圖2。
[0047](2)微板置于37°C孵育箱孵育I小時。
[0048](3)配置好的洗液洗板5次，扣干。
[0049](4)每孔加酶lOOul，繼續(xù)于37°C孵育箱孵育I小時。
[0050](5)配置好的洗液洗板5次，加入底物(A、B液各50ul)。
[0051](6)37°C孵育箱孵育30分鐘。
[0052](7)每孔加入終止液50ul，微板顯色，用酶標儀檢測OD值。
[0053](8)將原質(zhì)控物檢測到的OD值與顯色梅毒質(zhì)控物檢測到的OD值進行t檢驗比較，P=0.88 > 0.05，兩組數(shù)據(jù)無明顯統(tǒng)計學差異，說明該染色方法處理后的質(zhì)控物可以很好的保持了質(zhì)控物的生物化學性狀，可以穩(wěn)定的應用于酶聯(lián)免疫實驗。為證實改進后的質(zhì)控物對采供血機構日常工作不產(chǎn)生任何影響，在采供血機構檢測梅毒的微板所預留的空白孔內(nèi)加入改進后的質(zhì)控物lOOul，隨微板進入全自動FAME后處理儀器中實驗一個月，共做微板數(shù)為200板，將改進后的質(zhì)控物所得數(shù)值與原質(zhì)控物數(shù)值比較，(P=0.72>0.05，差別不具有統(tǒng)計學意義)。將改進后的質(zhì)控物與檢測標本一起隨機加入到微板內(nèi)任何一孔，共做微板30塊，將改進后質(zhì)控物所得的值與原質(zhì)控物OD值比較，(P=0.55>0.05，差別不具有統(tǒng)計學意義)。[0054]實施例3
[0055]本實施例提供了一種顯色艾滋病毒質(zhì)控物的制備方法，包括如下步驟:
[0056](I)用分析天平稱取1.0g染料日落黃，以IOml去離子水溶解，稀釋。離心機1000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心I分鐘，待用。
[0057](2)取出艾滋病毒質(zhì)控物I支(規(guī)格:0.5ml/支或Iml/支)，室溫平衡30分鐘。
[0058](3)吸取Iul已溶解的日落黃染料加入0.5ml/支或Iml/支乙肝質(zhì)控物中，蓋上蓋子，來回顛倒混勻I分鐘，可見質(zhì)控物很快均勻染色。
[0059](4)質(zhì)控物的保存:保存于_20°C條件下。
[0060](5)使用之前放于4°C冰箱內(nèi)解凍一天后再放于室溫下平衡半小時備用。
[0061]將此顯色艾滋病毒質(zhì)控物應用于ELISA實驗，其實驗步驟如下:
[0062](I)取平衡好的艾滋病毒酶聯(lián)免疫試劑，第一條酶標孔內(nèi)加上陰性對照2孔(Al、BI )、陽性對照2孔(Cl、D1)質(zhì)控物I孔(El )，每孔各IOOul，第二條及第三條微板內(nèi)(A2-H2，A3-H3)共24孔加入未添加染色劑的質(zhì)控物每孔各50ul，第五條、六條及七條的(A、B、C、D、
E、F、G、H即A5-H5、A6-H6、A7-H7)孔共24孔內(nèi)加入顯色艾滋病毒質(zhì)控物每孔各lOOul。其顯色結果參照圖3。
[0063](2)微板置于37°C孵育箱孵育I小時。
[0064](3)配置好的洗液洗板5次，扣干。
[0065](4)每孔加酶lOOul，繼續(xù)于37°C孵育箱孵育I小時。
[0066](5)配置好的洗液洗板5次，加入底物(A、B液各50ul)。
[0067](6)37°C孵育箱孵育30分鐘。
[0068](7)每孔加入終止液lOOul，微板顯色，用酶標儀檢測OD值。
[0069](8)將原質(zhì)控物檢測到的OD值與顯色艾滋病毒質(zhì)控物測到的OD值進行t檢驗比較，P=0.45 > 0.05，兩組數(shù)據(jù)無明顯統(tǒng)計學差異，說明該染色方法處理后的質(zhì)控物可以很好的保持了質(zhì)控物的生物化學性狀，可以穩(wěn)定的應用于酶聯(lián)免疫實驗。為證實改進后的質(zhì)控物對采供血機構日常工作不產(chǎn)生任何影響，在采供血機構檢測艾滋病毒的微板所預留的空白孔內(nèi)加入改進后的質(zhì)控物lOOul，隨微板進入全自動FAME后處理儀器中實驗一個月，共做微板數(shù)為163板，將改進后的質(zhì)控物所得數(shù)值與原質(zhì)控物數(shù)值比較，(P=0.77>0.05，差別不具有統(tǒng)計學意義)。將改進后的質(zhì)控物與檢測標本一起隨機加入到微板內(nèi)任何一孔，共做微板20塊，將改進后質(zhì)控物所得的值與原質(zhì)控物OD值比較，(P=0.41>0.05，差別不具有統(tǒng)計學意義)。
[0070]實施例4
[0071]本實施例提供了一種顯色丙肝質(zhì)控物的制備方法，包括如下步驟:
[0072](I)用分析天平稱取1.0g染料胭脂紅，以5ml去離子水溶解，稀釋。離心機1000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心I分鐘，待用。
[0073](2)取出HCV質(zhì)控物(規(guī)格:0.5ml/支或Iml/支)，室溫平衡30分鐘。
[0074](3)吸取Iul已溶解的胭脂紅染料加入1.0ml HCV質(zhì)控物中，蓋上蓋子，來回顛倒混勻I分鐘，可見質(zhì)控物很快均勻染色。
[0075](4)質(zhì)控物的保存:保存于_20°C條件下。
[0076](5)使用之前放于4°C冰箱內(nèi)解凍一天后再放于室溫下平衡半小時備用。[0077]將此顯色丙肝質(zhì)控物應用于ELISA實驗，其實驗步驟如下:
[0078](I)取平衡好的HCV酶聯(lián)免疫試劑，每孔加入IOOul稀釋液，第一條試劑內(nèi)加上陰性對照2孔(Al、BI)、陽性對照2孔(Cl、Dl)質(zhì)控物I孔(E1)，每孔各10ul，第二條及第三條微板內(nèi)(A2-H2，A3-H3，)共16孔加入未添加染色劑的質(zhì)控物每孔各10ul，第7條、8條及9條的(A、B、C、D、E、F、G、H即Α7_Η7、Α8_Η8、A9-H9)孔內(nèi)共24孔加入經(jīng)胭脂紅染色的質(zhì)控物每孔各10ul。其顯色結果參照圖4 (A4-H4、A5-H5、A6-H6孔內(nèi)為僅加入稀釋液)。
[0079](2)微板置于37°C孵育箱孵育I小時。
[0080](3)配置好的洗液洗板5次，扣干。
[0081](4)每孔加酶lOOul，繼續(xù)于37°C孵育箱孵育I小時。
[0082](5)配置好的洗液洗板5次，加入底物(A、B液各50ul)。
[0083](6)37°C孵育箱孵育30分鐘。
[0084](7)每孔加入終止液50ul，微板顯色，用酶標儀檢測OD值。
[0085](8)將原質(zhì)控物檢測到的OD值與顯色丙肝質(zhì)控物測到的OD值進行t檢驗比較，P=0.196 > 0.05，兩組數(shù)據(jù)無明顯統(tǒng)計學差異，說明該染色方法處理后的質(zhì)控物可以很好的保持了質(zhì)控物的生物化學性狀，可以穩(wěn)定的應用于酶聯(lián)免疫實驗。為證實改進后的質(zhì)控物對采供血機構日常工作不產(chǎn)生任何影響，在采供血機構檢測丙肝病毒的微板所預留的空白孔內(nèi)加入改進后的質(zhì)控物10ul，隨微板進入全自動FAME后處理儀器中實驗一個月，共做微板數(shù)為178板，將改進后的質(zhì)控物所得數(shù)值與原質(zhì)控物數(shù)值比較，(P=0.177>0.05，差別不具有統(tǒng)計學意義)。將改進后的質(zhì)控物與檢測標本一起隨機加入到微板內(nèi)任何一孔，共做微板20塊，將改進后質(zhì)控物所得的值與原質(zhì)控物OD值比較，(P=0.135>0.05，差別不具有統(tǒng)計學意義)。
[0086]最后所應說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的精神和范圍，其均應涵蓋在本發(fā)明的權利要求范圍當中。
【權利要求】
1.一種顯色質(zhì)控物，其特征在于，所述顯色質(zhì)控物是在普通質(zhì)控物中加濃度為0.001g/ml?lg/ml的染色劑得到的。
2.根據(jù)權利要求1所述的顯色質(zhì)控物，其特征在于，所述顯色質(zhì)控物中普通質(zhì)控物的原有生物化學性狀不會發(fā)生改變。
3.根據(jù)權利要求1所述的顯色質(zhì)控物，其特征在于，所述染色劑為化學合成色素或天然色素。
4.根據(jù)權利要求3所述的顯色質(zhì)控物，其特征在于，所述化學合成色素為胭脂紅、檸檬黃或日落黃。
5.根據(jù)權利要求3所述的顯色質(zhì)控物，其特征在于，所述天然色素為甜菜紅。
6.根據(jù)權利要求1所述的顯色質(zhì)控物，其特征在于，所述普通質(zhì)控物為艾滋病毒質(zhì)控物、丙肝質(zhì)控物、梅毒質(zhì)控物或者乙肝質(zhì)控物。
7.根據(jù)權利要求6所述的顯色質(zhì)控物，其特征在于，所述普通質(zhì)控物為艾滋病毒質(zhì)控物、梅毒質(zhì)控物或者乙肝質(zhì)控物時，加入染色劑的濃度為0.lg/ml ο
8.根據(jù)權利要求6所述的顯色質(zhì)控物，其特征在于，所述普通質(zhì)控物為丙肝質(zhì)控物時，加入染色劑的濃度為0.2g/ml。
9.根據(jù)權利要求1至8任一項所述的顯色質(zhì)控物的應用，其特征在于，所述顯色質(zhì)控物可以用于酶聯(lián)免疫吸附實驗。
10.根據(jù)權利要求9所述的顯色質(zhì)控物的應用，其特征在于，所述顯色質(zhì)控物可以保證酶聯(lián)免疫吸附實驗的穩(wěn)定性。
【文檔編號】G01N33/53GK103439484SQ201310351031
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月13日 優(yōu)先權日:2013年8月13日
【發(fā)明者】余謹, 楊茹, 付榮, 畢昊 申請人:武漢血液中心