一種海洋生物及其制品的指紋鑒定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種海洋生物及其制品指紋鑒定方法，包括以下步驟：將收集到的海洋生物及其制品以及餌料的樣品盛放于無穩(wěn)定同位素干擾的器具中冷凍干燥后，用無穩(wěn)定同位素干擾的器具研磨成粉末狀；進行同位素檢測：結(jié)果計算：通過所得結(jié)果建立不同海域不同種類海洋生物及制品穩(wěn)定同位素指紋庫。本發(fā)明通過結(jié)果建立穩(wěn)定同位素指紋庫，可以用來直接比對不同海域海洋生物及制品穩(wěn)定同位素組成，進而判別生物種類。利用穩(wěn)定同位素技術(shù)分析特定海域海洋生物及制品與其它海域之間的差異性，通過比較同一物種在不同區(qū)域的δ13C和δ15N的值，建立不同海域海洋生物及制品穩(wěn)定同位素指紋庫。本發(fā)明有助于檢測不同海域海珍品及制品的差異性。
【專利說明】一種海洋生物及其制品的指紋鑒定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種海洋生物及其制品的鑒定方法，特別是一種海洋生物及其制品的指紋鑒定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來，由于盲目引進以及對引進品種的背景不清楚等原因，導(dǎo)致大連海珍品當(dāng)?shù)胤N孵化率和成活率降低、生長速度減慢、抗逆性變差等種質(zhì)退化現(xiàn)象不斷發(fā)生；再有許多商家利用海珍品形狀、顏色等外觀相似的特點，用其它劣質(zhì)的品種來冒充大連海珍品進行謀取利益，這極大地?fù)p害了大連特色生物及制品的形象。目前對海洋生物的分類主要是針對蛋白質(zhì)(酶)和DNA的多態(tài)性而進行的，利用DNA序列和遺傳信息來判別海洋生物種類，尤其是近年來分子生物技術(shù)突飛猛進的發(fā)展，一系列分子遺傳標(biāo)記相繼涌現(xiàn)，使人們在DNA水平得到更豐富的遺傳信息，但無論是蛋白質(zhì)標(biāo)記還是分子標(biāo)記，這種方法過程比較復(fù)雜，而且周期較長，花費也較高。
[0003]不同生物體由于食物來源的差異以及同位素分餾效應(yīng)的影響而具有不同的同位素比值，可以用來判定不同區(qū)域生物體內(nèi)某一組織器官的同位素組成，進而分析不同生物體之間穩(wěn)定同位素組成的差異。穩(wěn)定同位素技術(shù)以穩(wěn)定、周期短且花費較少等優(yōu)點，在海洋生物及制品的鑒定方面能夠發(fā)揮重要作用，所以建立海洋生物及制品的穩(wěn)定同位素指紋庫勢在必行。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明要設(shè)計一種檢測過程簡單、檢測周期短、檢測費用低的海洋生物及其制品指紋鑒定方法。
[0005]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:一種海洋生物及其制品指紋鑒定方法，包括以下步驟:
[0006]A、前處理:將收集到的海洋生物及其制品以及餌料的樣品盛放于無穩(wěn)定同位素干擾的器具中冷凍干燥后，用無穩(wěn)定同位素干擾的器具研磨成粉末狀；
[0007]所述無穩(wěn)定同位素干擾的器具為由玻璃材料制的器具；所述冷凍干燥溫度為-60?_50°C,冷凍干燥時間以樣品完全干燥為止；所述粉末的目數(shù)為過80目的孔徑篩；
[0008]B、同位素檢測:取出樣品，用錫杯包好后經(jīng)過自動采樣器送到元素分析儀中，將樣品中碳元素和氮元素轉(zhuǎn)化為純凈的CO2氣體和N2氣體后，再經(jīng)過稀釋儀稀釋凈化，最后進入Delta V Advantage質(zhì)譜儀進行檢測,得到碳穩(wěn)定同位素S13C和氮穩(wěn)定同位素δ 15N的值，并建立海洋生物及制品穩(wěn)定同位素指紋庫和應(yīng)用系統(tǒng)；
[0009]所述穩(wěn)定同位素為碳和氮穩(wěn)定同位素；碳和氮穩(wěn)定同位素組成用于海洋生物及制品穩(wěn)定同位素指紋庫和應(yīng)用系統(tǒng)的建立；所述的指紋庫為不同海域海洋生物及制品的碳穩(wěn)定同位素和氮穩(wěn)定同位素指紋；
[0010]C、結(jié)果計算:[0011]國際公認(rèn)的穩(wěn)定碳和氮同位素的自然豐度表示為:
[0012]δ X= ([R樣品/R標(biāo)準(zhǔn)]-1) XlO3
[0013]其中X代表13C或15N ;R代表13CZ12C或15Ν/14Ν ； δ 13C值是相對于PDB標(biāo)準(zhǔn)的自然豐度，δ 15N值是相對空氣中氮氣的豐度；分析精度δ 13C < 0.10%。，δ 15N < 0.20%。;穩(wěn)定同位素豐度即為穩(wěn)定同位素值；
[0014]D、測定結(jié)果:
[0015]按照步驟C的計算公式，由電腦對質(zhì)譜儀的譜圖結(jié)果按照既定程序進行計算，所得為碳、氮同位素組成的測定結(jié)果，通過所得結(jié)果建立不同海域不同種類海洋生物及制品穩(wěn)定同位素指紋庫。
[0016]本發(fā)明步驟B中各儀器的工作參數(shù)如下:
[0017]元素分析儀:氧化爐溫度為950°C，還原爐溫度為650°C，進樣器氦氣吹掃流量為300ml/min,氧氣流量為180ml/min,參考?xì)饬髁繛?50ml/min ；
[0018]ConFloIV型的稀釋儀:氦氣壓力為0.6bar ；
[0019]Delta V Advantage 質(zhì)譜儀:分析柱溫度為 45°C ;用 USGS24 即 δ 13CPDB=-16.00%標(biāo)定CO2鋼瓶，用IAEANl即δ 15Nto=0.4%。標(biāo)定N2鋼瓶；用標(biāo)定的鋼瓶作為標(biāo)準(zhǔn)。
[0020]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:
[0021 ] 1、本發(fā)明通過海洋生物樣品烘干、研磨成粉,直接進行穩(wěn)定同位素組成分析,樣品烘干時間為24h，每個樣品穩(wěn)定同位素檢測為lOmin，每個樣品檢測消耗約RMB 5?10。通過結(jié)果建立穩(wěn)定同位素指紋庫，可以用來直接比對不同海域海洋生物及制品穩(wěn)定同位素組成，進而判別生物種類，不同生物體由于食物來源的差異以及同位素分餾效應(yīng)的影響而具有不同的同位素比值，可以用來判定不同區(qū)域生物體內(nèi)某一組織器官的同位素組成，進而分析不同生物體之間穩(wěn)定同位素組成的差異。利用穩(wěn)定同位素技術(shù)分析特定海域海洋生物及制品與其它海域之間的差異性，通過比較同一物種在不同區(qū)域的S 13C和δ 15N的值，建立不同海域海洋生物及制品穩(wěn)定同位素指紋庫。
[0022]2、本發(fā)明選用無穩(wěn)定同位素干擾的玻璃研缽或刀，對海洋生物樣品進行切割和磨碎，并以冷凍干燥代替60°C烘干的方法，以減少空氣中穩(wěn)定同位素與樣品中相同穩(wěn)定同位素的交換。本發(fā)明具有穩(wěn)定、周期短且花費較少等優(yōu)勢，保證了監(jiān)測信息的準(zhǔn)確性和豐富程度，有助于檢測不同海域海珍品及制品的差異性。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]本發(fā)明僅有附圖1張，其中:
[0024]圖1是本發(fā)明的流程圖。
【具體實施方式】
[0025]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例。
[0026]將2011年7月于渤海營口海域和黃海黑石礁海域采集到的文蛤樣品(分別為參考樣品I和參考樣品2)帶回實驗室，超純水清洗干凈，用玻璃刀片取所述樣品肌肉組織，盛放于玻璃器皿后置于冷凍干燥機在_50°C下干燥，干燥完成后，將所述參考樣品I和參考樣品2放入玻璃研缽磨碎，使粉末過80目孔徑篩，完成所述參考樣品I和參考2的穩(wěn)定同位素檢測時的前處理操作。
[0027]將上述處理完畢的參考樣品I和參考樣品2，按照下述方法測定其中碳、氮穩(wěn)定同位素組成。
[0028]1、測定程序:[0029]取2mg樣品，錫杯包好后經(jīng)過自動采樣器送到元素分析儀(Flash EA1112型)中，在此樣品中碳元素和氮元素轉(zhuǎn)化為純凈的C02氣體和N2氣體后，再經(jīng)過型號為ConFloIV型的稀釋儀，最后進入Delta V Advantage質(zhì)譜儀進行檢測。
[0030]具體工作參數(shù)如下:
[0031]元素分析儀:氧化爐溫度為950°C，還原爐溫度為650°C，進樣器氦氣吹掃流量為300ml/min,氧氣流量為180ml/min,參考?xì)饬髁繛?50ml/min。
[0032]ConFloIV型的稀釋儀:氦氣壓力為0.6bar。
[0033]Delta V Advantage 質(zhì)譜儀:分析柱溫度為 45°C ;用 USGS24 ( δ 13CPDB=-16.00%)標(biāo)定CO2鋼瓶，用IAEANl ( δ 15Nto=0.4%。)標(biāo)定N2鋼瓶。用標(biāo)定的鋼瓶作為標(biāo)準(zhǔn)。
[0034]2、結(jié)果計算:
[0035]國際公認(rèn)的穩(wěn)定碳、氮同位素的自然豐度表示為:
[0036]δ X= ( [R樣品/R標(biāo)準(zhǔn)]_1) XlO
[0037]其中X代表13C或15N。R代表13C/12C或15Ν/14Ν。δ 13C值是相對于PDB標(biāo)準(zhǔn)的自然豐度，S 15N值是相對空氣中氮氣的豐度。分析精度S13C <0.10%。，δ 15N <0.20%。。
[0038]3、測定結(jié)果:
[0039]按照步驟2的計算公式，由電腦對質(zhì)譜儀的譜圖結(jié)果按照既定程序進行計算，所得碳、氮同位素組成的測定結(jié)果如表1所示。
[0040]表1、參考樣碳、氮穩(wěn)定同位素組成測定結(jié)果
[0041]
【權(quán)利要求】
1.一種海洋生物及其制品指紋鑒定方法，其特征在于:包括以下步驟: A、前處理:將收集到的海洋生物及其制品以及餌料的樣品盛放于無穩(wěn)定同位素干擾的器具中冷凍干燥后，用無穩(wěn)定同位素干擾的器具研磨成粉末狀； 所述無穩(wěn)定同位素干擾的器具為由玻璃材料制的器具；所述冷凍干燥溫度為-60?_50°C,冷凍干燥時間以樣品完全干燥為止；所述粉末的目數(shù)為過80目的孔徑篩； B、同位素檢測:取出樣品，用錫杯包好后經(jīng)過自動采樣器送到元素分析儀中，將樣品中碳元素和氮元素轉(zhuǎn)化為純凈的CO2氣體和N2氣體后，再經(jīng)過稀釋儀稀釋凈化，最后進入Delta V Advantage質(zhì)譜儀進行檢測,得到碳穩(wěn)定同位素S13C和氮穩(wěn)定同位素δ 15N的值，并建立海洋生物及制品穩(wěn)定同位素指紋庫和應(yīng)用系統(tǒng)； 所述穩(wěn)定同位素為碳和氮穩(wěn)定同位素；碳和氮穩(wěn)定同位素組成用于海洋生物及制品穩(wěn)定同位素指紋庫和應(yīng)用系統(tǒng)的建立；所述的指紋庫為不同海域海洋生物及制品的碳穩(wěn)定同位素和氮穩(wěn)定同位素指紋； C、結(jié)果計算: 國際公認(rèn)的穩(wěn)定碳和氮同位素的自然豐度表示為: δ X= ([R樣品/R標(biāo)準(zhǔn)]-1) XlO3 其中X代表13C或15N ；R代表13C/12C或1W14N ； δ 13C值是相對于PDB標(biāo)準(zhǔn)的自然豐度，δ 15N值是相對空氣中氮氣的豐度；分析精度δ 13C < 0.10%。，δ 15N < 0.20%。；穩(wěn)定同位素豐度即為穩(wěn)定同位素值； D、測定結(jié)果: 按照步驟C的計算公式，由電腦對質(zhì)譜儀的譜圖結(jié)果按照既定程序進行計算，所得為碳、氮同位素組成的測定結(jié)果，通過所得結(jié)果建立不同海域不同種類海洋生物及制品穩(wěn)定同位素指紋庫。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海洋生物及其制品指紋鑒定方法，其特征在于:步驟B中各儀器的工作參數(shù)如下: 元素分析儀:氧化爐溫度為950°C，還原爐溫度為650°C，進樣器氦氣吹掃流量為300ml/min,氧氣流量為180ml/min,參考?xì)饬髁繛?50ml/min ； ConFloIV型的稀釋儀:氦氣壓力為0.6bar ； Delta V Advantage 質(zhì)譜儀:分析柱溫度為 45°C ;用 USGS24 即 δ 13CPDB=-16.00%。標(biāo)定CO2鋼瓶，用IAEANl即δ 15Nto=0.4%。標(biāo)定N2鋼瓶；用標(biāo)定的鋼瓶作為標(biāo)準(zhǔn)。
【文檔編號】G01N27/62GK103472124SQ201310388947
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年8月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月30日
【發(fā)明者】劉瑀, 劉保占, 李穎 申請人:大連海事大學(xué)