基于枝狀金修飾BDD電極上構(gòu)筑17β-雌二醇適配體傳感器的電化學(xué)分析方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種基于枝狀金修飾摻硼金剛石膜(BDD)電極上構(gòu)筑17β-雌二醇適配體傳感器的電化學(xué)分析方法，涉及一種基于電化學(xué)手段的特殊形貌納米枝狀金/BDD電極的制備方法，以及利用該修飾電極的表面特性，進(jìn)一步進(jìn)行核酸適配體負(fù)載組裝，構(gòu)筑出17β-雌二醇適配體傳感器，并用于對(duì)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物17β-雌二醇的高靈敏、高選擇性的電化學(xué)分析方法。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用一種簡便新穎的雙模板法在BDD基底電極上構(gòu)筑具有多級(jí)活性位點(diǎn)的枝狀金結(jié)構(gòu)，同時(shí)采用能特異結(jié)合靶物質(zhì)的核酸適配體，有效地降低了分析過程中的噪音，大大提高了傳感器的檢測(cè)靈敏度和選擇性，檢測(cè)限達(dá)到5×10-15mol/L，傳感器具有良好的重現(xiàn)性。
【專利說明】基于枝狀金修飾BDD電極上構(gòu)筑17 P -雌二醇適配體傳感器的電化學(xué)分析方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及屬于納米材料、電化學(xué)分析和環(huán)境檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種基于枝狀金修飾摻硼金剛石膜(BDD)電極上構(gòu)筑170-雌二醇適配體傳感器的電化學(xué)分析方法。
【背景技術(shù)】
[0002]內(nèi)分泌干擾物(EDCs)是一類人工制得或自然存在的外源雌激素，與內(nèi)源雌激素有相似的功能。他們能干擾生物的正常行為以及體內(nèi)正常激素的合成、貯存、分泌、體內(nèi)輸送、結(jié)合及清除等過程，導(dǎo)致生物體出現(xiàn)各種各樣的機(jī)能障礙。如造成生物生殖功能損害，種群數(shù)量下降，人類男女出生比率失調(diào)，誘發(fā)各種癌癥等。因此，對(duì)內(nèi)分泌干擾物進(jìn)行有效檢測(cè)，對(duì)保護(hù)生態(tài)環(huán)境、保護(hù)人和動(dòng)物健康不受損害等具有十分重要的意義。人類留體雌激素主要有三種:17 0-雌二醇(17 0-68廿&乜0142)、雌三醇、雌酮.其中17 0-雌二醇是雌效應(yīng)最強(qiáng)的天然留體雌激素，在極低的濃度時(shí)(0.1 ng/L)就能表現(xiàn)出極強(qiáng)的生物效應(yīng)。因此，對(duì)17 P -雌二醇的檢測(cè)具有重要的環(huán)境意義。
[0003]目前對(duì)于17 3-雌二醇的檢測(cè)方法主要有光譜法，色譜法，液相色譜-質(zhì)譜連用等方法。但這些方法盡管有一定的靈敏度，但所用儀器較為昂貴，操作復(fù)雜，樣品需要嚴(yán)格的前期處理等，都限制了對(duì)17 P -雌二醇的快速、靈敏檢測(cè)。因此，建立一種成本低廉，操作簡單，靈敏度高，適于實(shí)時(shí)檢測(cè)的17 P -雌二醇的分析手段具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
[0004]電化學(xué)分析與色譜分析法相比，樣品預(yù)處理簡單，不需要大型儀器，速度快；與光譜分析方法相比，不需要引入光學(xué)信號(hào)標(biāo)記物質(zhì)；與質(zhì)量分析法相比，適用領(lǐng)域更廣，更適用于小分子或者質(zhì)量變化不甚明顯的作用體系。然而，17 0-雌二醇的電活性較弱，直接采用電化學(xué)手段檢測(cè)，不能獲得理想的檢測(cè)效果。
[0005]核酸適配體(aptamer)是一種在核苷酸序列庫中利用體外篩選技術(shù)一指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(SELEX)篩選得到的，功能類似于單克隆抗體，能與靶物質(zhì)高特異性、高親和力結(jié)合的寡核苷酸DNA或RNA片段，具有特異性高、穩(wěn)定性高、易修飾、合成速度快、與祀物質(zhì)作用明顯等優(yōu)點(diǎn)。而17 0 -雌二醇的適配體早已被篩選出來(Biosensors andBioelectronics 22 (2007) 2525 - 2531)，因此開發(fā)一種針對(duì)17 P -雌二醇的電化學(xué)適配體傳感器有望獲得良好的檢測(cè)靈敏度和選擇性。
[0006]摻硼金剛石膜(BDD)電極具有電勢(shì)窗口寬，析氧電位高，背景電流低，化學(xué)、電化學(xué)穩(wěn)定性高，耐腐蝕，表面自凈能力強(qiáng)，電極表面終端基團(tuán)可控等優(yōu)異特性，同時(shí)具有大大高于其他常規(guī)電極的信噪比(S/B)，對(duì)分析檢測(cè)的干擾小，可以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度和精度。
[0007]納米金具有良好的導(dǎo)電性和生物催化性，同時(shí)可以通過Au-S鍵與適配體分子牢固結(jié)合，廣泛用于生物傳感器的構(gòu)筑中。通過許多科研工作者的努力，許多具有大量活性位點(diǎn)的不同結(jié)構(gòu)納米金被合成。本發(fā)明中在BDD表面構(gòu)筑的特殊形貌的納米枝狀金，就具有多級(jí)活性位點(diǎn)，大幅度地提高了 BDD基底電極的導(dǎo)電性能，并能大量結(jié)合適配體分子，有力地提高了檢測(cè)效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的就是針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)17 0 -雌二醇技術(shù)的靈敏度不高、操作復(fù)雜等不足而提供一種基于納米枝狀金修飾BDD電極的17 0 -雌二醇適配體傳感器的電化學(xué)分析方法，通過于基底電極修飾特殊結(jié)構(gòu)的納米枝狀金，提高了電極導(dǎo)電性和負(fù)載適配體能力，實(shí)現(xiàn)了對(duì)17 P -雌二醇的高靈敏、高選擇性檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度達(dá)到5X 10_15 mol/L，具有制備方法簡單，操作簡便，耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)。
[0009]本發(fā)明提出的一種基于枝狀金修飾BDD電極上構(gòu)筑17 P -雌二醇適配體傳感器的電化學(xué)分析方法，采用雙模板法于摻硼金剛石膜表面修飾枝狀金，并以其為基礎(chǔ)構(gòu)筑適配體傳感器，實(shí)現(xiàn)對(duì)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物17 3 -雌二醇的高靈敏、高選擇性檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度達(dá)到5X10_15 mol/L ;具體步驟如下:
(1)以王水浸泡預(yù)處理后的BDD電極為工作電極，鉬絲電極為輔助電極，飽和甘汞電極為參比電極，廣2 mol/L的H2SO4溶液為電解液，采用1-t方法，施加3.2~4.5 V電壓于電極體系，保持3(T45min，之后將BDD電極用去離子水淋洗干凈，空氣中干燥，即得到表面干凈的BDD電極；之后在0.5 mol/L ZnCl2U~3 mol/L KCl和0.5 mol/L H3BO3的混合液中，控制混合液的PH值為4.0~5.5，恒電流沉積25~35 s,電流密度0.12~0.14 A/cm2 ;沉積結(jié)束后，將所得電極用去離子水小心沖洗后，迅速插入2.5~3 mmol/L HAuCl4溶液中，置換6 h后，得到納米枝狀金修飾的BDD電極；
(2)將17P -雌二醇適配體離心后配制成2 u mol/L水溶液，經(jīng)2 mmol/L三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽溶液(TCEP)打開二硫鍵后，直接滴涂于干燥的步驟(1)所得的納米枝狀金修飾的BDD電極上，于37 1:生化培養(yǎng)箱中過夜組裝；得到17 P -雌二醇適配體傳感器；` (3)配制一系列不同濃度的待測(cè)物質(zhì)170-雌二醇的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并依次分別結(jié)合步驟
(2)所得17 0-雌二醇適配體傳感器，常溫培養(yǎng)15 min后，采用電化學(xué)交流阻抗法進(jìn)行電化學(xué)檢測(cè)，通過得到的阻抗值的變化率與待測(cè)物質(zhì)17 P -雌二醇的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的線性關(guān)系繪制工作曲線，考察傳感器的靈敏度。然后用含干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，于同樣條件下培養(yǎng)傳感器，采用電化學(xué)交流阻抗法測(cè)定含干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的阻抗值，以不含干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液引起的阻抗變化率作為比較標(biāo)準(zhǔn)，考察含有干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液引起的阻抗值變化情況，繪制柱狀圖，考察傳感器的選擇性能；每次測(cè)定后，將電極用50 mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉溶液淋洗2-3次，實(shí)現(xiàn)電極表面的再生。
[0010]本發(fā)明中，所述的含干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液是將I X 10_13 mol/L待測(cè)物質(zhì)17 ^ -雌二醇分別與100倍濃度于17 P -雌二醇的干擾物質(zhì)混合，用得到的混合液結(jié)合傳感器，實(shí)現(xiàn)傳感器的選擇性能考察。
[0011]本發(fā)明中，所述干擾物質(zhì)為雌三醇、雙酚A、阿特拉津、壬基酚、間苯二酚或鄰苯二甲酸二乙酯中任一種。
[0012]本發(fā)明中，所述的17 0-雌二醇適配體的核苷酸序列為:
5’ -SHGCTTCCAGCTTATTGAATTACACGCAGAGGGTAGCGGCTCTGCGCATTCAATTGCTGCGCGCTGAAGCGCGAAGC-3，。
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn): (I)選用BDD電極作為基底電極，通過電沉積和置換反應(yīng)，得到了具有特殊形貌的納米枝狀金/BDD電極，大大改善了電極的電化學(xué)性能和結(jié)合適配體分子的能力，適配體的結(jié)合量達(dá)到1.99 X IO13個(gè)/cm2，電極制備方法簡單，性能優(yōu)異。
[0014](2)通過電化學(xué)阻抗法得到檢測(cè)信號(hào)，信號(hào)變化靈敏、直觀，同時(shí)基底BDD電極具有背景電流低，良好的自凈功能等優(yōu)異性能，降低了檢測(cè)過程中的噪音，傳感器對(duì)17 P -雌二醇的檢測(cè)靈敏度達(dá)到5X10-15 mol/L，線性范圍從5 X IO-15Hi0VmxiO-10 mol/L。
[0015](3)檢測(cè)后，電極可采用50 mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉溶液進(jìn)行再生，使得電極可以多次重復(fù)使用，電極性能穩(wěn)定，靈敏度高。
[0016](4)本發(fā)明的適配體傳感器電化學(xué)分析方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)170-雌二醇的高靈敏檢測(cè)，每次檢測(cè)只需將電極置于待測(cè)溶液中常溫培養(yǎng)15 min，方法簡單易行，靈敏度高，同時(shí)具有良好的選擇性，即使待測(cè)液中同時(shí)含有六種100倍濃度于待測(cè)物的干擾物質(zhì)，對(duì)信號(hào)的干擾也在15%以內(nèi)，適用于環(huán)境監(jiān)測(cè)中的在場分析。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1為實(shí)施例1制備的枝狀金/ BDD電極的掃描電鏡照片。
【具體實(shí)施方式】
[0018]下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0019]實(shí)施例1
(I)一種以特殊形貌枝狀金納米結(jié)構(gòu)修飾摻硼金剛石膜(BDD)基底電極的17 0-雌二醇適配體傳感器的電化學(xué)分析方法，其工作電極通過以下步驟得到:
以王水浸泡預(yù)處理后的BDD電極為工作電極，鉬絲電極為輔助電極，飽和甘汞電極為參比電極，I mol/L的H2SO4溶液為電解液，采用1-t方法，施加3.2V電壓于電極體系，保持30 min，之后將BDD電極用去離子水淋洗干凈，空氣中干燥，即得到表面干凈的BDD電極；之后在 0.5 mol/L ZnCl2、3 mol/L KCl 和 0.5 mol/L H3BO3 的混合液(pH=4.5)中，恒電流沉積30 S，電流密度0.13 A/cm2 ;沉積結(jié)束后，將所得電極用去離子水小心沖洗后，迅速插入2.5 mmol/L HAuCl4溶液中，置換6 h后，得到納米枝狀金修飾的BDD電極。
[0020]納米枝狀金修飾的BDD電極的形貌通過場發(fā)射掃描電子顯微鏡(SEM)進(jìn)行表征，見圖1，從圖中可以看出，BDD表面成功修飾了形貌清晰的枝狀金納米結(jié)構(gòu)，主干平均長度約20 u m,最長約35 u m。
[0021]納米枝狀金修飾的BDD電極的電化學(xué)性質(zhì)使用CHI660c電化學(xué)工作站，進(jìn)行電化學(xué)表征。以制備得到的枝狀金/BDD電極為工作電極，鉬電極為對(duì)電極，飽和甘汞電極為參比電極，在5 mmol/L的[Fe (CN) J4Vt Fe (CN)6]3_(含0.1 mol/L KCl)混合液中進(jìn)行循環(huán)伏安和電化學(xué)阻抗測(cè)量。對(duì)比結(jié)果顯示，枝狀金/BDD電極的可逆性和導(dǎo)電性都得到了較大的改善。
[0022](2)組裝適配體后的傳感器通過以下步驟得到:將商業(yè)購買的17 0 -雌二醇適配體離心后配制成2 u mol/L水溶液，經(jīng)2 mmol/L三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)溶液打開二硫鍵后，直接滴涂于干燥的制得的納米枝狀金/BDD電極上，于37 1:生化培養(yǎng)箱中過夜組裝，得到結(jié)合了適配體的17 0-雌二醇的傳感器。[0023]該傳感器選用的17 0 -雌二醇適配體序列為:
5’ -SHGCTTCCAGCTTATTGAATTACACGCAGAGGGTAGCGGCTCTGCGCATTCAATTGCTGCGCGCTGAAGCGCGAAGC-3，
(3)采用組裝好的適配體傳感器進(jìn)行17 P -雌二醇的檢測(cè)。
[0024]將17 P -雌二醇溶于pH=8.0的100 mmol/L Tris-HCl緩沖液中，配成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。Tris-Hcl 緩沖液的成為為 200 mmol/L NaCl, 25 mmol/L KCl, 10 mmol /L MgCl2以及5%乙醇。分別將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液加入5 mmol/L的[Fe(CN)6]47[ Fe(CN)6]3_(含
0.1 mol/L KCl)的電解液中，與傳感器常溫培養(yǎng)15 min，然后以鉬絲電極為對(duì)電極，飽和甘汞電極為參比電極，在CHI660C電化學(xué)工作站上，進(jìn)行電化學(xué)阻抗檢測(cè)。根據(jù)得到的阻抗值的變化率與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的線性關(guān)系繪制工作曲線，得到對(duì)17 P -雌二醇的線性檢測(cè)效果。檢測(cè)結(jié)果表明傳感器對(duì)17 ^ -雌二醇的檢測(cè)具有高度靈敏度，檢測(cè)限達(dá)到5X 10_15 mol/L,線性范圍從 5 X 1(T15 mol/L~I X 10, mol/L。
[0025](4)采用組裝好的適配體傳感器進(jìn)行選擇性能檢測(cè)。
[0026]將I X 1(T13 mol/L 17 P -雌二醇分別與100倍濃度于17 ^雌二醇的干擾物質(zhì)的混合液分別加入5 mmol/L的[Fe (CN) J4Vt Fe (CN) 6] 3_ (含0.1 mol/L KCl)的電解液中，與傳感器常溫培養(yǎng)15 min，然后以鉬絲電極為對(duì)電極，飽和甘汞電極為參比電極，在CHI660C電化學(xué)工作站上，進(jìn)行電化學(xué)阻抗檢測(cè)，通過含干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液引起的傳感器的阻抗變化率與不含干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液引起的阻抗變化率的比較，得到傳感器的選擇性能。干擾物質(zhì)包括雌三醇，雙酚A ，阿特拉津，壬基酚，間苯二酚和鄰苯二甲酸二乙酯。結(jié)果顯示，100倍濃度于17 P -雌二醇的干擾物質(zhì)對(duì)17 P -雌二醇的阻抗變化造成的影響均小于10%，即使當(dāng)選取的雌三醇，雙酚A，阿特拉津，壬基酚，間苯二酚和鄰苯二甲酸二乙酯六種干擾物質(zhì)一起與17 0-雌二醇混合，干擾物質(zhì)濃度均為170-雌二醇濃度的100倍，所引起的阻抗變化仍小于15%。體現(xiàn)了該納米枝狀金/BDD核酸適配體傳感器的良好的選擇性能。
[0027]實(shí)施例2
采用制備好的核酸適配體傳感器進(jìn)行實(shí)際水樣中17 P -雌二醇的含量分析。
[0028]實(shí)際水樣取自于中國上海市楊浦區(qū)四平路的一處生活小區(qū)內(nèi)。水樣經(jīng)0.22 Um濾膜過濾后進(jìn)行檢測(cè)。水樣采用Tris-HCl緩沖液稀釋25倍后，加入含有5 mmol/L的[Fe (CN)6] 4V [ Fe(CN)6]3-(含0.1 mol/L KCl)的電解液中，與傳感器常溫培養(yǎng)15 min，然后以鉬絲電極為對(duì)電極，飽和甘汞電極為參比電極，在CHI660C電化學(xué)工作站上，進(jìn)行電化學(xué)阻抗檢測(cè)，得到水樣所引起的傳感器的阻抗的變化率。通過實(shí)施例1中得到的傳感器靈敏度曲線可以反算出水樣中所含17 0-雌二醇的含量。實(shí)驗(yàn)中得出水樣中17 0-雌二醇的含量為 3.02 X 1(T14 mol/L。
[0029]上述的對(duì)實(shí)施例的描述是為了便于該【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員能理解和應(yīng)用本發(fā)明。熟悉本領(lǐng)域技術(shù)的人員顯然可以容易地對(duì)這些實(shí)施例做出各種修改，并把在此說明的一般原理應(yīng)用到其他實(shí)施例中而不必經(jīng)過創(chuàng)造性的勞動(dòng)。因此，本發(fā)明不限于這里的實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的揭示，對(duì)于本發(fā)明做出的改進(jìn)和修改都應(yīng)該在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種基于枝狀金修飾BDD電極上構(gòu)筑17 0 -雌二醇適配體傳感器的電化學(xué)分析方法，其特征在于，采用雙模板法于摻硼金剛石膜BDD表面修飾枝狀金，并以其為基礎(chǔ)構(gòu)筑適配體傳感器，實(shí)現(xiàn)對(duì)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物17 3 -雌二醇的高靈敏、高選擇性檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度達(dá)到5X10_15 mol/L ;具體步驟如下: (1)以王水浸泡預(yù)處理后的BDD電極為工作電極，鉬絲電極為輔助電極，飽和甘汞電極為參比電極，廣2 mol/L的H2SO4溶液為電解液，采用1-t方法，施加3.2~4.5 V電壓于電極體系，保持3(T45min，之后將BDD電極用去離子水淋洗干凈，空氣中干燥，即得到表面干凈的BDD電極；之后在0.5 mol/L ZnCl2U~3 mol/L KCl和0.5 mol/L H3BO3的混合液中，控制混合液的PH值為4.0~5.5，恒電流沉積25~35 s,電流密度0.12~0.14 A/cm2 ;沉積結(jié)束后，將所得電極用去離子水小心沖洗后，迅速插入2.5~3 mmol/L HAuCl4溶液中，置換6 h后，得到納米枝狀金修飾的BDD電極； (2)將17P -雌二醇適配體離心后配制成2 u mol/L水溶液，經(jīng)2 mmol/L三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽溶液打開二硫鍵后，直接滴涂于干燥的步驟(1)所得的納米枝狀金修飾的BDD電極上，于37 1:生化培養(yǎng)箱中過夜組裝；得到17 P -雌二醇適配體傳感器； (3)配制一系列不同濃度的待測(cè)物質(zhì)170-雌二醇的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并依次分別結(jié)合步驟(2)所得17 0-雌二醇適配體傳感器，常溫培養(yǎng)15 min后，采用電化學(xué)交流阻抗法進(jìn)行電化學(xué)檢測(cè)，通過得到的阻抗值的變化率與待測(cè)物質(zhì)17 P -雌二醇的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的線性關(guān)系繪制工作曲線，考察傳感器的靈敏度；然后用含干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，于同樣條件下培養(yǎng)傳感器，采用電化學(xué)交流阻抗法測(cè)定含干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的阻抗值，以不含干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液引起的阻抗變化率作為比較標(biāo)準(zhǔn)，考察含有干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液引起的阻抗值變化情況，繪制柱狀圖，考察傳感器的選擇性能；每次測(cè)定后，將電極用50 mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉溶液淋洗2-3次，實(shí)現(xiàn)電極表面的再生。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于枝狀金修飾BDD電極上構(gòu)筑17P -雌二醇適配體傳感器的電化學(xué)分析方法，其特征在于，所述的含干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液是將I X10—13 mol/L待測(cè)物質(zhì)17 0-雌二醇分別與100`倍濃度于17 0-雌二醇的干擾物質(zhì)混合，用得到的混合液結(jié)合傳感器，實(shí)現(xiàn)傳感器的選擇性能考察。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于枝狀金修飾BDD電極上構(gòu)筑17P -雌二醇適配體傳感器的電化學(xué)分析方法，其特征在于，所述干擾物質(zhì)為雌三醇、雙酚A、阿特拉津、壬基酚、間苯二酚或鄰苯二甲酸二乙酯中任一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于枝狀金修飾BDD電極上構(gòu)筑17P -雌二醇適配體傳感器的電化學(xué)分析方法，其特征在于，所述的17 0-雌二醇適配體的核苷酸序列為:
5’ -SHGCTTCCAGCTTATTGAATTACACGCAGAGGGTAGCGGCTCTGCGCATTCAATTGCTGCGCGCTGAAGCGCGAAGC-3，。
【文檔編號(hào)】G01N27/30GK103487483SQ201310413341
【公開日】2014年1月1日 申請(qǐng)日期:2013年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月12日
【發(fā)明者】劉梅川, 柯紅陽, 趙國華, 莊璐 申請(qǐng)人:同濟(jì)大學(xué)