腦損傷早期診斷s100膠體金免疫測(cè)試盒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及腦損傷早期診斷檢測(cè)試劑板，屬于早期診斷腦損傷的【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明利用S100蛋白作為腦損傷早期診斷的生化指標(biāo)，在一步法檢測(cè)條或檢測(cè)板上固定膠體金標(biāo)記的針對(duì)抗原的抗體以及固定化的未標(biāo)記的抗體，以達(dá)到一次性檢測(cè)腦損傷指標(biāo)的目的。本發(fā)明提供的試劑板簡(jiǎn)便、快捷，不需要儀器設(shè)備，僅用肉眼即可判讀結(jié)果，適合在任何場(chǎng)所檢測(cè)，且每份試劑均為單獨(dú)包裝，可存放于室溫下，便于保存。本發(fā)明檢測(cè)靈敏性高，特異性強(qiáng)，能夠在腦損傷發(fā)病早期即開始檢測(cè)，適合腦損傷早期篩選和診斷。
【專利說明】腦損傷早期診斷Si OO膠體金免疫測(cè)試盒及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及SlOO蛋白的抗體對(duì)的制備，膠體金標(biāo)記顯色的免疫層析反應(yīng)技術(shù)和利用SlOO的抗體來早期診斷腦損傷的【技術(shù)領(lǐng)域】。尤其涉及一種腦損傷早期診斷檢測(cè)試劑板。
技術(shù)背景
[0002]本發(fā)明的主要技術(shù)背景包括SlOO的特異性、膠體金的快速簡(jiǎn)便、三明治雙抗體技術(shù)的敏感準(zhǔn)確。
[0003]SlOO蛋白是一種低分子量的酸性鈣結(jié)合蛋白，分子量在10?12kD，其氨基酸序列在脊椎動(dòng)物中高度保守，中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要由星形膠質(zhì)細(xì)胞合成與分泌。SlOO蛋白由A、B兩種亞基組成，形成S100AA，S10AB, S100BB3種組合形式。S100AB和S100BB常被統(tǒng)稱為S100B，腦內(nèi)主要以此種形式存在。腦內(nèi)生理量的S100B主要由星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，作用于神經(jīng)元及其周圍生長(zhǎng)環(huán)境。S100B的功能包括調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、能量代謝和參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，它能幫助一些特殊神經(jīng)元的生長(zhǎng)并增加發(fā)育中和損傷后的神經(jīng)元存活率。
[0004]SlOO蛋白家族作用的靶蛋白、功能和相關(guān)疾病:S100蛋白家族的不同分子具有廣泛的生物學(xué)活性，通過鈣離子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、影響激素分泌和抑制微管蛋白的組裝及抑制蛋白激酶C介導(dǎo)的磷酸化等途徑，在細(xì)胞增殖、分化、肌肉收縮、基因表達(dá)、分泌、及細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用，其功能異常亦可導(dǎo)致不同的疾病。
[0005]腦組織缺血、缺氧，繼而導(dǎo)致腦損傷。在正常情況下，腦內(nèi)SlOO蛋白少量表達(dá)，但不能通過血腦屏障，中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損時(shí)發(fā)生SlOO蛋白水平上調(diào)(30min后開始增加)，是星形膠質(zhì)細(xì)胞常見的特征性反應(yīng)之一。SlOO蛋白水平上調(diào)表明星形膠質(zhì)細(xì)胞被激活。因此，SlOO蛋白被公認(rèn)為星形膠質(zhì)細(xì)胞的分子標(biāo)記物之一，也被作為腦損傷的一種標(biāo)記物。SlOO蛋白可視為星形膠質(zhì)細(xì)胞合成并分泌的一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，在神經(jīng)元發(fā)育和損傷時(shí)維持其活力，對(duì)腦組織損傷起保護(hù)性作用。因此，S10蛋白具有一系列重要的生物學(xué)功能。它不僅可以作為腦損傷的生化標(biāo)志物，而且用于腦組織損傷、腦缺血及腦中風(fēng)的診斷和治療。
[0006]國(guó)內(nèi)到現(xiàn)在為止還未出現(xiàn)SlOO蛋白用于腦損傷診斷的，并且到目前只有一個(gè)產(chǎn)品:angelplan-ELSlOOO型電阻抗乳腺診斷儀。國(guó)外只有Roche Diagnostics GmbH生產(chǎn)廠家生產(chǎn)SlOO檢測(cè)試劑盒(電化學(xué)發(fā)光法)，其他是SlOO定標(biāo)液等。
[0007]電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定(Electrochemiluminescence immunoassay, ECLI)應(yīng)用電致化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與電化學(xué)手段相結(jié)合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的免疫分析。ECLI是繼放射免疫、酶免疫、突光免疫、化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定以后的新一代標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。電化學(xué)發(fā)光法源于電化學(xué)法和化學(xué)發(fā)光法，而ECLI是電化學(xué)發(fā)光ECL和免疫測(cè)定相結(jié)合的產(chǎn)物，是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，包括了電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光二個(gè)過程。
[0008]ECLI的缺點(diǎn)在于:不適于檢測(cè)大量標(biāo)本、檢測(cè)費(fèi)用高、儀器維護(hù)需要專業(yè)人員:檢驗(yàn)科醫(yī)生經(jīng)培訓(xùn)應(yīng)能對(duì)儀器進(jìn)行操作和簡(jiǎn)單維護(hù)，但由于儀器故障造成的試劑、標(biāo)本浪費(fèi)、報(bào)告延遲也會(huì)發(fā)生。操作復(fù)雜，試劑成本高，儀器維護(hù)費(fèi)用較高，這一點(diǎn)上，簡(jiǎn)便快捷的金標(biāo)法應(yīng)具有很大優(yōu)勢(shì)。
[0009]用膠體金顆粒標(biāo)記抗體或抗原，以檢測(cè)未知抗原或抗體的方法稱免疫膠體金技術(shù)。氯金酸(HAuCl4)在還原劑的作用下,可聚合成特定大小的金顆粒,形成帶負(fù)電的疏水膠溶液。該溶液因靜電作用而呈穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。在堿性條件下，膠體金顆粒表面的負(fù)電荷與蛋白質(zhì)的正電荷基團(tuán)靠靜電引力結(jié)合。
[0010]由于膠體金的電子密度高，顆粒聚集后呈紅色，因此可用于標(biāo)記多種大分子，如白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、激素、脂蛋白、植物血凝素、卵白素等。除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外，它還可以與許多其它生物大分子結(jié)合，如SPA、PHA, ConA等。根掘膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性，因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。
[0011]膠體金免疫層析技術(shù)與以往常規(guī)診斷方法相比具有以下突出優(yōu)點(diǎn):
[0012]①快速:全部檢測(cè)過程僅需1-3分鐘。
[0013]②簡(jiǎn)便:不需其它任何儀器設(shè)備，操作也極其簡(jiǎn)單，可隨時(shí)隨地進(jìn)行。
[0014]③可單份檢測(cè):對(duì)標(biāo)本既能成批檢測(cè)，又可單份檢測(cè)，患者可立刻拿到結(jié)果，不必等待。
[0015]④穩(wěn)定性好:金標(biāo)試劑穩(wěn)定，可長(zhǎng)期保存。
[0016]⑤檢測(cè)標(biāo)本種類多:既可用于查血，又可用于檢尿或唾液，因而適合各種人群的檢查。
[0017]⑥可向基層醫(yī)療單位推廣:由于具有以上幾個(gè)特點(diǎn)，使得本方法既可在大型醫(yī)院使用，又可向基層醫(yī)療單位如:鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院、連隊(duì)衛(wèi)生所、醫(yī)師診所、甚至家庭推廣使用。
[0018]⑦患者可自檢，方法家庭化:如果給試劑盒里配置適當(dāng)?shù)挠闷?，患者可以在家里自檢。
[0019]⑧系統(tǒng)化:該方法易于形成系列化產(chǎn)品，如肝炎系列、性病系列、胃病系列、腫瘤系列等。
[0020]膠體金免疫滲透試驗(yàn)法是一種借助膠體金標(biāo)記顯色的免疫層析反應(yīng)。膠體金標(biāo)記抗原(或抗體)檢測(cè)相應(yīng)抗體(或抗原)的免疫學(xué)新方法，為研制特異、敏感、快速和便捷的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)和臨床診斷方法奠定了基礎(chǔ)。金標(biāo)檢測(cè)法在特制的金標(biāo)板上加入5 μ L全血、血清或血漿放在檢測(cè)儀上2?3分鐘即可得到全定量的結(jié)果。
[0021]三明治雙抗體技術(shù)是建立在單克隆抗體技術(shù)之上的生物【技術(shù)領(lǐng)域】較新的后抗體技術(shù)。雙抗體夾心法應(yīng)用抗體對(duì)識(shí)別抗原的兩個(gè)位點(diǎn)來捕捉抗原，避免了抗體與抗原的同一位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，減少了抗原決定簇的空間位阻現(xiàn)象，所以較一般的抗原捕捉法更敏感，特異性更強(qiáng)，重復(fù)性更好，尤其適用于抗原含量很少的標(biāo)本的檢測(cè)。本發(fā)明結(jié)合此技術(shù)開發(fā)針對(duì)SlOO的抗體對(duì)，對(duì)早期檢測(cè)腦損傷病人血液中指標(biāo)更突顯其重要意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0022]本發(fā)明的目的是提供一種利用SlOO的單克隆抗體對(duì)作為腦損傷早期珍斷的生化指標(biāo)，建立一種能在現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的試劑板，本方法不需要任何的輔助儀器，檢測(cè)時(shí)間僅5-15分鐘，通過測(cè)定人血液中的SlOO的濃度來診斷腦損傷，提高了腦損傷珍斷的敏感性和特異性。
[0023]本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的:一種腦損傷檢測(cè)試劑板，包括膠體金標(biāo)記的SlOO抗體及相應(yīng)的未標(biāo)記抗體，羊抗鼠IgG抗體，聚乙烯板、聚氯乙烯襯膜、濾膜、玻璃纖維紙、聚酯膜、免疫層析膜和吸水紙組成。所述SlOO的抗體是單克隆抗體對(duì)。
[0024]所述SlOO的單克隆抗體用純化的抗原免疫BALB / c小鼠，得到抗原刺激的脾臟細(xì)胞，融合該脾臟細(xì)胞核小鼠的骨髓瘤細(xì)胞系，利用HAT選擇性培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞，用ELISA方法鑒定抗SlOO的細(xì)胞株，進(jìn)行三次克隆化得到分泌高特異性單克隆抗體的細(xì)胞株,通過小鼠腹水生產(chǎn)抗SlOO的單克隆抗體。
[0025]抗SlOO單克隆抗體對(duì)的篩選，主要采用抑制法篩選高親和力的亞克隆，進(jìn)而在克隆化和ELISA相加實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)抑制表位分析和親和力的測(cè)定，得到不同表位的單抗細(xì)胞株，進(jìn)一步腹水生產(chǎn)并純化得到多量抗體，進(jìn)行單株標(biāo)記，采用ELISA直接法進(jìn)行標(biāo)記抗體的工作濃度滴定，然后采用ELISA競(jìng)爭(zhēng)抑制法進(jìn)行單標(biāo)抗體表位測(cè)定，從而篩選出高效親和力的三明治抗體對(duì)。
[0026]將膠體金標(biāo)記的抗SlOO的單克隆抗體均勻噴灑于單位面積的聚酯膜上；將抗SlOO的單克隆抗體的另一和羊抗鼠IgG抗體固定在單位面積的免疫層析膜上。
[0027]金標(biāo)抗SlOO的單克隆抗體是制備方法為分別取半徑為40nm的膠體金及相應(yīng)的抗SlOO的單克隆抗體，在pH8.2的條件下通過磁力攪拌振蕩使其結(jié)合，加3% BSA作為穩(wěn)定齊U，采用高速離心法除去未結(jié)合的單克隆抗體和未穩(wěn)定的膠體顆粒及其凝聚物，在離心管底部的深紅色沉淀即為膠體金-單克隆抗體復(fù)合物。
[0028]該檢測(cè)板水平面自下而上依次包括:樣品吸收區(qū)，可溶解的金標(biāo)抗SlOO的單克隆抗體，固定化抗SlOO的單克隆抗體，一條固相化羊抗鼠IgG抗體和吸水區(qū)。
[0029]本發(fā)明所提供的腦損傷檢測(cè)試劑板，是以SlOO作為生化指標(biāo)來診斷腦損傷。這包括制備上述S10的單克隆抗體對(duì)的方法，以及利用膠體金標(biāo)記抗體和免疫層析方法測(cè)定血液或血清中的S10的濃度，以診斷腦損傷。
[0030]本方法利用金標(biāo)記抗SlOO單抗作為第一抗體，用來捕捉抗原；精確呈橫條狀分布于免疫層析膜上的抗SlOO單克隆抗體對(duì)的另一抗體用來識(shí)別抗原，通過顯示免疫層析膜上的條紋，來判定檢測(cè)樣品中的SlOO的含量，從而篩選和珍斷腦損傷。
[0031]本檢測(cè)試劑板由聚乙烯板、聚氯乙烯襯膜、濾膜、玻璃纖維紙、聚酯膜、免疫層析膜、膠體金標(biāo)記的抗SlOO單抗、未標(biāo)記抗SlOO單抗、羊抗鼠IgG抗體和吸水紙組成。
[0032]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明有突出的優(yōu)點(diǎn)和實(shí)用性:
[0033]1、檢測(cè)敏感性高、特異性強(qiáng)
[0034]2、可向基層醫(yī)療單位推廣:由于具有以上幾個(gè)特點(diǎn)，使得本方法既可在大型醫(yī)院使用，又可向基層醫(yī)療單位如:鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院、連隊(duì)衛(wèi)生所、醫(yī)師診所、甚至家庭推廣使用。
[0035]3、檢測(cè)快速
[0036]4、攜帶方便、操作簡(jiǎn)便:本發(fā)明改變了對(duì)腦損傷篩選和診斷必須由專業(yè)人員或?qū)Ｓ脙x器才能進(jìn)行檢測(cè)的局限性。樣品可為全血、血清或血漿，即可直接用指血檢測(cè)，操作簡(jiǎn)單快速。
[0037]5、本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單，成本低；檢測(cè)試劑板在常溫下即可保存，無需特殊設(shè)備和儀器。保存期可達(dá)兩年。
[0038]6、

【專利附圖】

【附圖說明】
[0039]圖1:腦損傷診斷檢測(cè)試劑板平面結(jié)構(gòu)區(qū)域圖。

【具體實(shí)施方式】
:
[0040]實(shí)施例一
[0041]腦損傷診斷檢測(cè)試劑板的生產(chǎn)方法:
[0042]US100的單克隆抗體對(duì)的制備
[0043]用純化的SlOO作為抗原分別免疫BALB / c小鼠，間隔21天免疫第二次，以后每間隔10天免疫一次，共免疫3-4次，然后取出免疫小鼠的脾臟細(xì)胞，用PEG將該脾臟細(xì)胞與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞系F / O進(jìn)行融合，利用HAT選擇性培養(yǎng)基在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上篩選雜交瘤細(xì)胞，用ELISA方法鑒定抗SlOO的細(xì)胞株，進(jìn)行三次克隆化后得到穩(wěn)定分泌高特異性單克隆抗體的細(xì)胞株，在相同抗原包被板上采用ELISA抑制法，即參照組中加入細(xì)胞培養(yǎng)上清，在抑制組加入細(xì)胞培養(yǎng)上清和抗原混合物，比較兩組OD值差異從而篩選出高親和力的亞克隆。然后在間接ELISA實(shí)驗(yàn)上進(jìn)行相加法表位分析，即參照組中分別加入兩個(gè)單株細(xì)胞培養(yǎng)上清，測(cè)定組中同時(shí)加入兩株細(xì)胞培養(yǎng)上清，比較兩組OD值(Ap A2和A1+2)，通過下面公式計(jì)算:AI=[2A1+2 / (A^A2)-1] X 100%
[0044]在比較計(jì)算結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)行表位分析和親和力的測(cè)定，Al值小于50%為相加陰性，即兩細(xì)胞株分泌的抗體識(shí)別抗原的表位相同，Al值大于50%為相加陽性，表示兩細(xì)胞株之間無競(jìng)爭(zhēng)，即兩細(xì)胞株分泌的抗體識(shí)別抗原的兩個(gè)不同的表位，從而初步得到針對(duì)抗原不同表位的單抗細(xì)胞株。進(jìn)一步將得到的單抗細(xì)胞株分別注射入小鼠腹腔進(jìn)行腹水生產(chǎn)，利用ProteinA-Sepharose親和層析柱純化腹水得到多量單克隆抗體,用HRP酶對(duì)純化的抗體進(jìn)行單株標(biāo)記，用ELISA直接法進(jìn)行標(biāo)記抗體的工作濃度滴定，然后用ELISA競(jìng)爭(zhēng)抑制法在參照組中加入酶標(biāo)抗體，在測(cè)定組中加入酶標(biāo)抗體和未標(biāo)記待測(cè)抗體混合物，比較兩組OD值，參照組OD值大于測(cè)定值OD值的表示存在競(jìng)爭(zhēng)抑制，視為兩抗體識(shí)別抗原的表位相同。反之，兩抗體不存在競(jìng)爭(zhēng)抑制時(shí)視為兩抗體識(shí)別抗原的表位不同，從而最終篩選得到高效親和力的三明治抗體對(duì)。
[0045]2、膠體金標(biāo)記抗SlOO單克隆抗體的方法
[0046]分別取半徑為40nm的膠體金及相應(yīng)的抗SlOO的單克隆抗體，在pH8.2的條件下通過磁力攪拌振蕩使其結(jié)合,加3% BSA作為穩(wěn)定劑，BSA為牛血清白蛋白。采用高速離心法除去未結(jié)合的單克隆抗體和未穩(wěn)定的膠體金顆粒及其凝集物，在離心管底部的深紅色沉淀即為膠體金-單克隆抗體復(fù)合物。
[0047]3.將金標(biāo)復(fù)合物噴涂于聚酯膜上
[0048]用聚乙二醇洗滌膠體金-單克隆抗體復(fù)合物，離心出去上青葉，得到深紅色沉淀，純化后的沉淀用緩沖液溶解，用噴涂設(shè)備涂于聚酯膜上，烘干。
[0049]4、免疫層析膜的包被
[0050]用純化的抗SlOO單克隆抗體對(duì)中的另一單抗溶液和羊抗鼠IgG抗體溶液用噴涂設(shè)備于硝酸素纖維膜上劃線，線的長(zhǎng)度為3mm，每條線在3mm寬的硝酸素纖維膜上的滴加量為5-7ng。兩種抗體由下至上分別為SlOO和羊抗鼠IgG抗體,每條線間隔3mm。包被好的免疫層析膜用3% BSA溶液進(jìn)行封閉。
[0051]5、試劑板裝備
[0052]塑料聚乙烯板作為支撐載體，上面粘有一層聚氧乙烯片材作為襯膜，由下至上由一層濾膜和一層玻璃纖維組成的樣品吸收區(qū)，其次是三層吸附了膠體金-單抗復(fù)合物的聚酯膜。然后是硝酸纖維膜，最上一層是吸水層，由一層濾紙組成，外面用特制膠帶包封。
[0053]實(shí)驗(yàn)例一
[0054]腦損傷珍斷檢測(cè)試劑板的使用方法:
[0055]1、對(duì)全血的檢測(cè)
[0056]用滴管取指血100 μ I滴入檢測(cè)板的孔中，5-15分鐘觀察結(jié)果。出現(xiàn)兩條帶時(shí)為陽性。只有一條帶時(shí)為陰性。一條帶都無時(shí)表示檢測(cè)板失效。
[0057]2、對(duì)血清、血漿的檢測(cè)
[0058]用滴管取離心好的血清、血漿100 μ I垂直滴入檢測(cè)板的孔中，5-15分鐘觀察結(jié)果。出現(xiàn)兩條時(shí)為陽性。只有一條帶時(shí)為陰性。一條帶都無時(shí)表示檢測(cè)板失效。
[0059]雖然已經(jīng)根據(jù)上述特定的實(shí)施方案敘述了本發(fā)明，但應(yīng)該承認(rèn)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可能對(duì)本發(fā)明做出各種修飾和轉(zhuǎn)變，而這些修飾和轉(zhuǎn)變同樣屬于所附權(quán)利要求書所定義的本發(fā)明的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種腦損傷早期診斷檢測(cè)試劑板，包括膠體金標(biāo)記的S10抗體及相應(yīng)的單克隆抗體，羊抗鼠IgG抗體，聚乙烯板、聚氯乙烯襯膜、濾膜、玻璃纖維紙、聚酯膜、免疫層析膜和吸水紙組成。
2.如權(quán)利要求1所述的腦損傷早期診斷檢測(cè)試劑板，其特征在于:所述抗SlOO的抗體為單克隆抗體對(duì)。
3.如權(quán)利要求1所述的腦損傷早期診斷檢測(cè)試劑板，其特征在于:所述抗SlOO單克隆抗體分別用純化的抗原免疫BALB / c小鼠，得到抗原刺激的脾臟細(xì)胞，用ELISA方法鑒定分別抗SlOO的細(xì)胞株，進(jìn)行三次克隆化后得到分泌高特異性的單克隆抗體的細(xì)胞株，通過小鼠腹水生產(chǎn)抗SlOO的單克隆抗體。
4.如權(quán)利要求3所述的腦損傷早期診斷檢測(cè)試劑板，其特征在于:抗SlOO單克隆抗體對(duì)的篩選，主要采用抑制法篩選高親和力的亞克隆，進(jìn)而在多次克隆化和ELISA相加實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)抑制表位分析和親和力的測(cè)定，得到不同表位的單抗細(xì)胞株，進(jìn)一步腹水生產(chǎn)并純化得到多量抗體，進(jìn)行單株標(biāo)記，采用ELISA直接法進(jìn)行標(biāo)記抗體的工作濃度滴定，然后采用ELISA競(jìng)爭(zhēng)抑制法進(jìn)行單標(biāo)抗體表位測(cè)定，從而篩選出高效親和力的抗體對(duì)。
5.如權(quán)利要求1所述的腦損傷早期診斷檢測(cè)試劑板，其特征在于:將膠體金標(biāo)記的抗SlOO的單克隆抗體均勻噴灑于單位面積的聚酯膜上；將抗SlOO的單克隆抗體對(duì)的另一抗體和羊抗鼠IgG抗體固定在單位面積的免疫層析膜上。
6.如權(quán)利要求5所述的腦損傷早期診斷檢測(cè)試劑板，其特征在于:金標(biāo)抗SlOO的單克隆抗體的制備方法為分別取半徑為40nm的膠體金及相應(yīng)的抗SlOO的單克隆抗體，在pH8.2的條件下通過磁力攪拌振蕩使其結(jié)合，加3% BSA作為穩(wěn)定劑，采用高速離心法除去未結(jié)合的單克隆抗體和未穩(wěn)定的膠體金顆粒及其凝集物，在離心管底部的深紅色沉淀即為膠體金-單克隆抗體復(fù)合物。
7.如權(quán)利要求1所述的腦損傷早期診斷檢測(cè)試劑板，其特征在于:該檢測(cè)板水平面自下而上依次包括:樣品吸收區(qū)，可溶解的金標(biāo)抗SlOO的單克隆抗體，固相化抗SlOO的單克隆抗體，一條固相化羊抗鼠IgG抗體和吸水區(qū)。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK104459134SQ201310426342
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月18日
【發(fā)明者】劉宏飛 申請(qǐng)人:劉宏飛