一種檢測雌酚的電化學免疫檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種能檢測雌酚，包括三種人工合成的具有類似雌性激素作用的化合物，即己烯雌酚、己烷雌酚和雙酚A的電化學免疫檢測方法。所述的檢測方法為：首先制備納米金沉積并采用石墨烯/雌酚/殼聚糖復合物修飾的電化學傳感器，然后以K3[Fe(CN)6]為探針，基于己烯雌酚抗體對己烯雌酚、己烷雌酚和雙酚A的交叉免疫反應，實現(xiàn)對這三種雌酚的檢測。本發(fā)明提供的方法檢測己烯雌酚的檢測限為0.1ng/mL，線性范圍為1~2500ng/mL；檢測己烷雌酚的檢測限為0.3ng/mL，線性范圍為1~3000ng/mL；檢測雙酚A的檢測限為0.2ng/mL，線性范圍為1~3000ng/mL。
【專利說明】一種檢測雌酚的電化學免疫檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于食品安全檢測和分析化學【技術領域】，涉及一種能檢測三種人工合成的具有類似雌性激素作用的化合物，即己烯雌酚、己烷雌酚和雙酚A (以下簡稱雌酚)的檢測方法，具體的說是一種基于抗體交叉反應的電化學免疫檢測方法。
【背景技術】 [0002]己烯雌酌.(diethylstiIbestroI, DES)和己燒雌酌.(hexestrol, HEX)(結構見式I)屬于1，2-二苯乙烯類藥物，它們是人工合成的雌激素類物質(zhì)。二苯乙烯類激素具有促進動物生長、提高飼料轉(zhuǎn)化率和減少脂肪合成等作用，20世紀60年代曾為各國官方批準使用的促生長劑，用于畜牧業(yè)生產(chǎn)。但是濫用1，2-二苯乙烯類藥物會導致動物生理系統(tǒng)功能失調(diào)，甚至不可逆的病變，并通過食物鏈最終危害人類健康，長期攝入會干擾人體正常的激素平衡，導致機體代謝紊亂、發(fā)育異常腫瘤、女性乳腺癌和子宮內(nèi)膜異位、胎兒畸形等嚴重的問題，在我國和歐美等國家都禁止在動物養(yǎng)殖過程中使用。
[0003]雙酚A (bisphenol A，BPA)(結構見式I)在工業(yè)上被用來合成聚碳酸酯(PC)和環(huán)氧樹脂等材料。60年代以來就被用于制造塑料(奶)瓶、幼兒用的吸口杯、食品和飲料(奶粉)罐內(nèi)側(cè)涂層。BPA無處不在，從礦泉水瓶、醫(yī)療器械到食品包裝的內(nèi)里，都有它的身影。每年，全世界生產(chǎn)2700萬噸含有BPA的塑料。BPA能導致內(nèi)分泌失調(diào)，威脅著胎兒和兒童的健康。癌癥和新陳代謝紊亂導致的肥胖也被認為與此有關。歐盟認為含雙酚A的奶瓶會誘發(fā)性早熟，從2011年3月2日起，禁止生產(chǎn)含雙酚A的嬰兒奶瓶。
【權利要求】
1.一種檢測雌酚的電化學免疫檢測方法，包括以下步驟: 1)電化學免疫傳感器的制備:首先在經(jīng)過打磨、拋光和清洗的玻碳電極表面沉積金納米粒子；然后將石墨烯/雌酚/殼聚糖混合液滴涂于納米金沉積的玻碳電極表面，制得所述的電化學免疫傳感器； 2)標準溶液的配制:配制一組包括空白標樣在內(nèi)的含有不同已知濃度的待測雌酚、pH為7.4的磷酸緩沖溶液為標準溶液，且其中含有相同濃度的己烯雌酚抗體； 3)工作曲線的建立:將所述免疫傳感器分別浸入雌酚標準溶液中孵育，孵育后用磷酸緩沖溶液沖洗免疫傳感器，在K3 [Fe (CN)6]溶液中進行差分脈沖伏安(DPV)掃描，記錄響應電流；空白標樣的響應電流為Itl,含有待測雌酚的標樣的響應電流為Ix，響應電流的增加值Λ I等于Ix與Itl的差值；將所述Λ I與標準溶液中雌酚的濃度C繪制成Λ 1-C工作曲線，采用線性回歸法得到△ ι-c線性回歸方程； 4)雌酚的測定:將待測樣品配制為含有與步驟2)相同濃度的己烯雌酚抗體的磷酸緩沖溶液，按照與步驟3)相同的方法對所述免疫傳感器進行孵育和差分脈沖伏安掃描，記錄響應電流；根據(jù)響應電流的增加值△ I和△ 1-C線性回歸方程，得到雌酚的含量。
2.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的雌酚為己烯雌酚、己烷雌酚和雙酚Α。
3.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的方法中，步驟4)采用標準加入法測定。.
【文檔編號】G01N33/53GK103472118SQ201310444291
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月26日 優(yōu)先權日:2013年9月26日
【發(fā)明者】邵科峰, 王傳現(xiàn), 趙波, 張芹, 吳珺 申請人:南京師范大學