一種免疫檢測試劑條的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種免疫檢測試劑條，其特征在于，該試劑條包括：支持流體流動的載體，該載體包括：干的標(biāo)記物質(zhì)和檢測區(qū)域，其中，在干的標(biāo)記物質(zhì)的上游包括減緩液體樣本流動的試劑；其中，減緩液體流動的試劑讓滴加在標(biāo)記物質(zhì)的上游的液體樣本可以短暫相對的停留一段時間或者讓液體樣本緩慢釋逐漸釋放，這樣可以讓液體樣本與干的標(biāo)記物質(zhì)充分均勻的接觸，減緩干的標(biāo)記物質(zhì)的釋放，這樣可以讓標(biāo)記物質(zhì)緩慢釋放到液體中去。采用本發(fā)明的方案可以減少檢測條的背景干擾，提供檢測試劑條的質(zhì)量。
【專利說明】一種免疫檢測試劑條

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明直接屬于一種檢測被分析物質(zhì)的試劑條，特別地，屬于一種檢測被分析物 質(zhì)的橫向流動試劑條。

【背景技術(shù)】
[0002] 分析可以被執(zhí)行來同時或分別檢測一個或多個樣品中被分析物。分析可以是定量 檢測來提供一個被分析物質(zhì)存在樣品中的數(shù)量?；蛘?，分析可以是定性檢測來提供被分析 物是否存在樣品中。
[0003] 典型的橫向流動分析試劑條包括多孔的樣品接受墊，與接受墊處于液體流通的標(biāo) 記物質(zhì)墊和與標(biāo)記物質(zhì)墊液體流通的測試試劑條。有時候，標(biāo)記物質(zhì)墊包括干的標(biāo)記物質(zhì)， 它包括被顆粒標(biāo)記的抗體。測試試劑條具有檢測區(qū)域，它包括以固定形式存在的結(jié)合被分 析物質(zhì)或被分析物質(zhì)的擬態(tài)物質(zhì)的物質(zhì)。使用檢測裝置的時候，液體樣品被施加在樣品接 受墊上。樣品移動到包含有干的標(biāo)記物質(zhì)的標(biāo)記物質(zhì)墊上。樣品和可移動的標(biāo)記物質(zhì)一起 移動到試劑條上的檢測區(qū)域上，這樣液體樣品中的被分析物質(zhì)是否存在就可以被檢測。例 如美國專利號 5, 451，504, 5, 707, 818, 6, 121，008, 6, 699, 722,和 7, 393, 697。
[0004] 在這樣的檢測系統(tǒng)中，一旦被檢測的流體樣本(液體）被滴加到樣本墊上，液體在 層析作用力下(毛細(xì)作用）自動沿著橫向試劑條向下游流動，帶動干的標(biāo)記物質(zhì)(例如金標(biāo) 記抗體或抗原）向下移動，在檢測區(qū)域上與固定在檢測區(qū)域上的物質(zhì)，例如抗體或抗原進(jìn)行 反應(yīng)，最終在檢測區(qū)域上顯示出檢測結(jié)果。由于流體在流動的同時需要完成反應(yīng)，同時需要 獲得檢測結(jié)果。這就需要對傳統(tǒng)的試劑條進(jìn)行改進(jìn)，提檢測的各個方面的性能。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 在傳統(tǒng)的試劑條上，常常需要對添加的樣本的量進(jìn)行設(shè)計，例如最大體積和最小 體積樣本的規(guī)定，這為該技術(shù)的發(fā)展帶來了局限。當(dāng)非專業(yè)人士進(jìn)行操作的時候，如果不 需要對樣本的體積做嚴(yán)格的要求，可以大大提高免疫檢測試劑條的家庭或非專業(yè)人士的使 用。
[0006] 本發(fā)明為了解決傳統(tǒng)試劑條上的一些缺陷，提供一種全新的試劑條，可以對樣本 的量或體積不進(jìn)行嚴(yán)格的控制，就能獲得理想的檢測結(jié)果。
[0007] -方面，本發(fā)明提供一種免疫檢測試劑條，其特征在于，該試劑條包括支持流體流 動的載體，該載體包括：干的標(biāo)記物質(zhì)和檢測區(qū)域，其中，在干的標(biāo)記物質(zhì)的上游包括減緩 液體樣本流動的試劑。減緩液體流動的試劑讓滴加在標(biāo)記物質(zhì)的上游的液體樣本可以短暫 相對的停留一段時間或者讓液體樣本緩慢釋逐漸釋放，這樣可以讓液體樣本與干的標(biāo)記物 質(zhì)充分均勻的接觸，減緩干的標(biāo)記物質(zhì)的釋放，這樣可以讓標(biāo)記物質(zhì)緩慢釋放到液體中去。 特別的，當(dāng)標(biāo)記物質(zhì)的量很多的時候，這樣效果更加明顯。
[0008] 在一些優(yōu)選的方式中，減緩液體樣本流動的試劑是一些表面活性活性試劑。優(yōu)選 的，在干的標(biāo)記物質(zhì)的上游包括樣本接收區(qū)域，樣本接受區(qū)域位于載體上，所述的疏水性 試劑或表面活性試劑被包括在樣本接收區(qū)域上。在一些優(yōu)選的方式中，在樣本墊上處理 一些讓標(biāo)記墊的載體變?yōu)橄鄬κ杷脑噭Ｋ龅脑噭楸砻婊钚栽噭?。這里指的"相 對"的含義是指沒有處理試劑和處理有試劑的相對比較而言。例如，沒有處理試劑的時候， 樣本接收墊表現(xiàn)為100%的親水，而處理有表面活性試劑的疏水性試劑或讓表面活性試劑 的濃度降低，讓100%的親水的樣本接收墊變得相對疏水些?；蛘?，在一些方式中，樣本接 收區(qū)域的材料本身是100%疏水性的材料或?qū)嵸|(zhì)上位疏水性材料，在這個方式中，可以通 過處理親水性試劑，讓1疏水性的材料成為親水性材料。在一些優(yōu)選的方式中，處理的親 水性表面活性試劑為S-7 ;S-17 ;Tween20JritonX-IOO;S-13,其中他們的濃度為小于或 等于0. 1% ;小于或等于0. 09% ;小于或等于0. 05%。優(yōu)選的為0. 009%，優(yōu)選的為0. 004%， 0. 003%, 0. 009%, 0. 005%。
[0009] 在一些優(yōu)選的方式中，標(biāo)記物質(zhì)的OD值大于150,優(yōu)選的，大于200,可以是 200, 230, 220, 250, 280, 300。優(yōu)選的，標(biāo)記物質(zhì)被處理再兩個標(biāo)記墊上，標(biāo)記物質(zhì)可以被處 理再多個標(biāo)記墊，標(biāo)記墊可以是兩個，三個或三個以上。當(dāng)標(biāo)記物質(zhì)被處理再多個標(biāo)記墊上 的時候，多個標(biāo)記墊可以重疊放置在載體上，也可以是兩個標(biāo)記墊的邊緣相互重疊放置。因 為當(dāng)標(biāo)記物質(zhì)的很多的時候，如果處理在一個標(biāo)記墊上，該標(biāo)記點不能承載所有的標(biāo)記物 質(zhì)，就算能夠承載，需要經(jīng)過復(fù)雜的處理程序，這樣才能讓單個標(biāo)記墊吸收所有的標(biāo)記物質(zhì) 并且能夠在短暫的時間對標(biāo)記物質(zhì)進(jìn)行充分的釋放。為了更好的讓標(biāo)記墊承載大量的標(biāo)記 物質(zhì)和充分釋放，我們把標(biāo)記物質(zhì)處理在多個標(biāo)記墊上，這樣可以滿足用一個樣本，可以一 次性檢測多個被分析物質(zhì)的目的；例如在檢測區(qū)域上包括多個檢測區(qū)域，每一個檢測區(qū)域 對應(yīng)不同的被分析物質(zhì)。
[0010] 在另一些優(yōu)選的方式中，在對疏水性的聚酯膜上處理低濃度的表面活性試劑 的時候，把表面活性試劑溶解在揮發(fā)性的有機溶液(例如酒精、甲醛、乙醇）中，然后再處 理再聚酯膜上。如果表面活性劑的濃度過低，也可以則需要借助物理強迫力（如超聲波 等）才能將溶液順利處理到疏水性的聚酯膜上，例如用超聲波的時候，把聚酯膜放置在處 理的溶液中，然后對溶液和聚酯膜進(jìn)行超聲。這里所說的低濃度的表面活性試劑一般是 指那些濃度小于〇. 5%，0. 45%，0. 35%，0. 1%的試劑，優(yōu)選的是小于0. 1%的表面活性試劑， 濃度可以是小于或等于〇. 09% ;小于或等于0. 05%。優(yōu)選的為0. 009%，優(yōu)選的為0. 004%， 0? 003%, 0? 009%, 0? 005%。表面活性試劑的種類可以是S-7 ;S-17 ;Tween20JritonX-IOO; S-13。
[0011] 有益效果
[0012] 在外銷唾液產(chǎn)品的開發(fā)過程中，我們發(fā)現(xiàn)：在臨床試驗中出現(xiàn)較高比例的"花板" (如圖1)，尤其是那些金標(biāo)使用量很高的多合一試紙條產(chǎn)品，如THC/0PI/AMP，像這樣的產(chǎn)品 經(jīng)常加噴多次金標(biāo)到標(biāo)記墊上，總金標(biāo)OD能夠達(dá)到200以上，如果再結(jié)合不合適的樣本添 加量(通常是過量的情況下)，很容易對金標(biāo)的釋放會造成不小的影響(金標(biāo)的釋放落在樣 本層析前鋒的后面，或者簡單理解成金標(biāo)"來不及"釋放)，輕則出現(xiàn)C/T線上下位置"泛白"， 重則出現(xiàn)如圖這樣的"花板"。針對這一問題，我們通過優(yōu)化樣本墊，使樣本在接觸樣本墊時 不會第一時間就被吸收，而是有一個短暫的停留過程，從而使樣本的第一波層析速度不至 于過快，使金標(biāo)墊有充分的時間釋放，降低不正常釋放的比例。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013] 圖1為傳統(tǒng)免疫測試條出現(xiàn)花板的結(jié)果示意圖；
[0014] 圖2為本發(fā)明【具體實施方式】中試劑條的立體結(jié)構(gòu)示意圖。圖2A所示，這些試劑條 101 -般包括標(biāo)記區(qū)域121和檢測區(qū)域131，其中標(biāo)記區(qū)域的上游可以包括樣本接受區(qū)域 111。在檢測區(qū)域131上包括顯示檢測結(jié)果的區(qū)域和位于檢測區(qū)域下游的檢測結(jié)果對照區(qū) 域。通常，這些試劑條的樣本接受區(qū)域包括樣本接受片111，標(biāo)記區(qū)域包括標(biāo)記片121，在樣 本接收區(qū)域上包括完成反應(yīng)所必須的試劑，檢測區(qū)域包括檢測片131，在檢測片131上包括 顯示測試結(jié)果的一個或多個區(qū)域206、205、207和位于該區(qū)域132下游的檢測結(jié)果控制對照 區(qū)域208
[0015] 詳細(xì)說明
[0016] 載體
[0017] 載體可以為多孔滲水或非滲水表面。多孔滲水表面可以為薄膜，例如檢測試劑流 動的吸水性材料。紙或紙漿產(chǎn)品，玻璃纖維，聚合物，例如硝酸纖維，尼龍都可以被用來作為 本裝置的吸水材料。在一個方式中，被吸水的材料也可以被用做載體。非吸水性材料可以 用于在兩個表面之間產(chǎn)生毛細(xì)作用讓流體沿著檢測裝置流動。
[0018] 載體可以提供檢測裝置上多個區(qū)域之間的流體交換。這些區(qū)域可以是標(biāo)記區(qū)域或 檢測區(qū)域。這些區(qū)域可以被設(shè)置在檢測裝置的一些面板上，也可以被設(shè)置在檢測裝置的一 邊之上或/和下面的位置。例如，標(biāo)記區(qū)域可以位于檢測區(qū)域之上。任何三維結(jié)構(gòu)安排這 些區(qū)域都可以被運用到本發(fā)明描述的裝置中來。在載體上還可以設(shè)置液體樣本接收區(qū)域， 液體樣本接收區(qū)域上可以處理一些物質(zhì)，例如緩沖試劑、過濾試劑以及其試劑來減少液體 樣本中的干擾物質(zhì)的試劑。當(dāng)液體樣本區(qū)域為親水性的時候，可以處理一些疏水性試劑，讓 樣本區(qū)域變得比較疏水。
[0019] 親水或疏水試劑
[0020] 在載體上處理一些合適的親水或疏水試劑，讓載體相對變得更疏水，讓液體樣本 停留一端時間或者延緩液體樣本流動。這些試劑是常用的表面活性試劑。表面活性劑 (surfactant)，是指具有固定的親水親油基團(tuán)，在溶液的表面能定向排列，并能使表面張力 顯著下降的物質(zhì)。表面活性劑的分子結(jié)構(gòu)具有兩親性：一端為親水基團(tuán)，另一端為憎水基 團(tuán)；親水基團(tuán)常為極性的基團(tuán)，如羧酸、磺酸、硫酸、氨基或胺基及其鹽，也可是羥基、酰胺 基、醚鍵等；而憎水基團(tuán)常為非極性烴鏈，如8個碳原子以上烴鏈。表面活性劑分為離子 型表面活性劑和非離子型表面活性劑等。當(dāng)載體為親水性的時候，可以處理疏水性表面活 性試劑，讓載體變得更疏水些，如果載體為疏水性的時候，可以稍微處理親水試劑。在一些 優(yōu)選的方式中，當(dāng)載體為疏水的時候，處理很低濃度的親水試劑，讓疏水載體變得稍微親 水，例如處理的表面活性試劑的濃度為0. 01-0. 005% ;0. 004%，0. 005%或0. 05%。處理親水 表面活性試劑的種類可以為任何親水性表面活性試劑，例如可以為S-7 ;S-17 ;Tween20 ; TritonX-100 ;S-13,其中他們的濃度為小于或等于0. 04%。優(yōu)選的為小于或等于0. 009%，優(yōu) 選的為小于或等于〇. 004%，小于或等于0. 003%，小于或等于0. 009%，小于或等于0. 005%。
[0021] 檢測區(qū)域
[0022] 標(biāo)記區(qū)域上的標(biāo)記物質(zhì)可以結(jié)合(直接地或者間接地）目標(biāo)被分析物，從而在樣品 流過基質(zhì)時，被分析物質(zhì)就被標(biāo)記上了可以檢測地標(biāo)記物質(zhì)。檢測區(qū)域還包含可以結(jié)合被 分析物相關(guān)位點的試劑。這種位點物質(zhì)可能是被分析物自身的或者結(jié)合被分析物的一種試 齊IJ(例如，一種試劑可以在被分析物通過試劑區(qū)時與被分析物結(jié)合）的一種免疫學(xué)上的抗原 決定基。在各種具體方案中，和被分析物結(jié)合的試劑可以是一種抗體，一種抗體的片斷或者 部分，一種和結(jié)合到檢測區(qū)域的抗體不同種類的抗體的衍生物(或者其中的片斷)，或者特 異性結(jié)合對的另一個成分，例如，抗生物素蛋白，鏈霉菌抗生物素蛋白，或者可以和結(jié)合被 分析物的半體相結(jié)合的生物素。
[0023] 在另一個具體方案中，檢測區(qū)域是一沿著試驗條縱軸的緯度方向分布的條狀物， 其中包含一種被分析物的特異性結(jié)合分子，或者是結(jié)合被分析物的分子復(fù)合物。在一些具 體方案中，標(biāo)記是一種有色顆粒，可能是右旋糖苷顆粒，金溶膠或者其它被標(biāo)記的顆粒，這 些標(biāo)記可以是提供可檢測的信號的任何合適的標(biāo)記。
[0024] 標(biāo)記區(qū)域
[0025] 被分析物的特異性結(jié)合分子攜帶有試劑區(qū)的標(biāo)記。當(dāng)特異性的結(jié)合分子捕獲被分 析物而且被標(biāo)記了的被分析物在檢測區(qū)域被結(jié)合的時候，由于標(biāo)記物在這里積聚這個區(qū)就 可以觀察到。"特異性的結(jié)合分子"是指和被分析物相結(jié)合并且不能和樣品中的其它任何分 子牢固結(jié)合的結(jié)合分子。被分析物的特異性的結(jié)合分子也可以和表明樣品中被分析物的存 在或者與被分析物的存在相關(guān)聯(lián)的分子相結(jié)合。牢固結(jié)合是指結(jié)合達(dá)到改變試驗結(jié)果或者 使試驗結(jié)果不明顯的程度。在一些具體方案中，特異性的結(jié)合分子可能是一種抗體或者一 種抗體片段(例如，一種抗體的Fab區(qū))，一種抗原，一種結(jié)合配體的受體或者受體的片段，或 者生物素一鏈霉菌抗生物素蛋白結(jié)合對的一個成分或者其它類型的結(jié)合對.
[0026] 這樣試劑區(qū)就可以提供標(biāo)記，當(dāng)樣品流過試劑區(qū)的時候，被分析物結(jié)合了可以產(chǎn) 生可檢測信號的標(biāo)記。"標(biāo)記區(qū)塊"是指基質(zhì)上含有標(biāo)記樣品中可能存在的被分析物的物質(zhì) 的部位。因此一個試劑區(qū)就是一個標(biāo)記區(qū)塊。"標(biāo)記"可以是產(chǎn)生可檢測信號的任何合適 的標(biāo)記。例如，標(biāo)記可以是可溶性顆粒，突光顆粒，化學(xué)發(fā)光顆粒，金屬或者合金(例如，膠體 金)，或者囊，特別是包含可見染料的脂質(zhì)體。疏水溶膠也是有用的，疏水的有機染料或者色 素在水中不可溶或者只有很有限的一小部分可溶。標(biāo)記還可以是聚合體顆粒，例如有色的 聚苯乙烯顆粒(例如，球狀的)。其它有用的顆粒狀的標(biāo)記包括鐵蛋白，藻紅蛋白，藻膽素一 蛋白，沉淀的或者可溶性的金屬或者合金，真菌，海藻，或者細(xì)菌的色素或衍生物，例如細(xì)菌 的葉綠素或者其它的植物原料。在某些具體方案中，標(biāo)記是有色顆粒，例如右旋糖苷顆粒。 在其它的具體方案中，用作陽性對照的標(biāo)記和染料選擇相同的顏色，以加強兩種信號在基 質(zhì)上或者基質(zhì)內(nèi)產(chǎn)生單一的明顯的符號時的相互作用
[0027] 在其它的具體方案中，標(biāo)記可能是被分析物的一種被標(biāo)記了的特異性結(jié)合分子 (例如，一種抗體)。例如，在一個具體方案中，目標(biāo)被分析物是人絨毛膜促性腺激素（hCG)， 結(jié)合hCG的標(biāo)記是金溶膠標(biāo)記的抗hCG抗體。當(dāng)樣品到標(biāo)記區(qū)塊時，樣品中的hCG被金溶膠 標(biāo)記的抗hCG抗體結(jié)合。標(biāo)記抗體并不干擾檢測區(qū)域的捕獲分子和標(biāo)記的hCG相結(jié)合。例 如，標(biāo)記可以結(jié)合被分析物的一個部分，而捕獲分子可以結(jié)合被分析物的另一個部分或者 結(jié)合標(biāo)記。hCG-抗-hCG抗體-金復(fù)合物移動到基質(zhì)的下游。當(dāng)復(fù)合物到達(dá)檢測區(qū)域時和 捕獲分子相結(jié)合形成金-抗-hCG抗-hCG-抗-hCG抗體。捕獲分子可能是hCG的另一種特 異性結(jié)合分子，或者是結(jié)合hCG被分析物的半體的特異性結(jié)合分子。當(dāng)金-抗-hCG特異性 結(jié)合分子-hCG-抗-hCG特異性結(jié)合分子復(fù)合物結(jié)合到檢測區(qū)域時，檢測區(qū)域被復(fù)合物上的 金標(biāo)記著色并且在檢測區(qū)域金標(biāo)記變得肉眼可見。在一個具體方案中，特異性的結(jié)合分子 是抗體或者抗體片段。標(biāo)記和捕獲結(jié)合分子能夠結(jié)合被分析物上不同的抗原決定部位，在 一個具體方案中，標(biāo)記的特異性結(jié)合分子結(jié)合了 0-hCG，而捕獲結(jié)合分子結(jié)合了a-hCG。
[0028] "抗體"是指免疫球蛋白，無論是天然的還是部分或者全部合成的。這個術(shù)語還包 括其中保持結(jié)合能力的抗體的衍生物，也包括任何含有與免疫球蛋白的結(jié)合域同源的或者 很大程度上同源的結(jié)合域的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)可能是源自天然物質(zhì)，也可能是部分或者 全部合成的。一種抗體可能是單克隆的或者是多克隆的。一種抗體可能是任何免疫球蛋白 類型中的一員，包括任何人類的免疫球蛋白類型：IgG，IgM，IgA，IgD，IgG和IgE。"抗體片 段"是抗體的衍生物或者抗體的小于全長的一個部分?？贵w片段能夠保留至少一個全長抗 體的結(jié)合能力的顯著位點?？贵w片斷的例子包括Fab,Fab'，F(xiàn)(ab'）2,scFv,Fv,dsFv二聚體， 和Fd碎片，但是不僅僅包括以上這些。
[0029] 抗體片段可以由任何方式生成。例如，抗體片段可以通過酶解或者化學(xué)裂解一個 完整的抗體來生成，或者也可以通過從編碼部分抗體序列的基因重組。換句話說，抗體片段 可以部分地或者全部地重組產(chǎn)生。抗體片段可以是任意的單鏈抗體片段。換句話說，抗體 片段可以包含多條相互聯(lián)結(jié)的肽鏈，例如，通過二硫鍵相聯(lián)結(jié)?？贵w片段也可以是任意的一 種多分子復(fù)合物。一個有功能的抗體片段通常包含至少大約50個氨基酸，而更多的抗體片 段通常包含至少大約200個氨基酸。
[0030] 單鏈Fvs(scFvs)是重組的抗體片段，它僅由可變輕鏈（VJ和可變重鏈（Vh)相互 以多肽鏈共價結(jié)合。'和Vh中一方具有胺基端區(qū)域。多肽鏈長度和組成是可變的，其長度 可以使兩個可變域相互橋聯(lián)并且對原子的排列沒有嚴(yán)重影響。多肽鏈通常主要由甘氨酸 和絲氨酸殘基延伸構(gòu)成，其中有一些谷氨酸和賴氨酸殘基散在分布以增加其溶解度。"二聚 體"是指單鏈Fvs的二聚物。二聚體的單體包含的肽鏈通常比大多數(shù)單鏈Fvs的短，并且它 們顯示出形成二聚物的傾向。
[0031] "Fv"片段由一個Vh和一個八域以非共價相互連接組成。術(shù)語"dsFv"在這里是 指包含一個穩(wěn)定Vh-'對的分子間二硫鍵的Fv。"F(ab'）2"片段是抗體的一個片段，本質(zhì)上 和用胃蛋白酶在PH4. 0-4. 5時消化免疫球蛋白（通常是IgG)得到的片段相同。這個片段也 可以重組合成。"Fab' "片段是一種抗體片段，本質(zhì)上和通過減少？(&13'）2片段上的兩條重 鏈相互連接的雙硫鍵得到的片段相同。Fab'片段也可以重組合成。"Fab"片段是一種本質(zhì) 上和用木瓜蛋白酶消化免疫球蛋白（通常IgG)得到的片段相同的抗體片段。Fab片段也可 以重組合成。Fab片段上的重鏈片段是Fd碎片。
[0032] 被分析物的類型
[0033] 能夠用本發(fā)明穩(wěn)定檢測的被分析物的例子包括(但是不僅僅包括）人絨毛膜促性 腺激素（hCG)，黃體生成素（LH)，卵巢刺激素（FSH)，丙肝病毒（HCV)，乙肝病毒（HBV)，乙肝 表面抗原，艾滋病病毒和任何濫用的藥物。被分析物能夠在任何的液體或者液化樣品中檢 測到，例如尿液，唾液，口水，血液，血漿，或者血清。其它的被分析物的例子還有肌氨酐酸， 膽紅素，亞硝酸鹽，蛋白質(zhì)(非特異性的)，血液，白細(xì)胞，血糖，重金屬和毒素，細(xì)菌成分(例 如，特定類型的細(xì)菌的特殊的蛋白質(zhì)和糖分，例如大腸桿菌〇157:H7,金黃色葡萄球菌，沙門 氏菌，產(chǎn)氣莢膜梭菌，彎曲桿菌，單核增生李斯特菌，腸炎弧菌，或者臘狀芽孢桿菌)。任何其 它的適合側(cè)流試驗形式的被分析物都可以用本裝置檢測。
[0034]樣本的類型
[0035] 任何類型的樣品都能夠用本發(fā)明的裝置進(jìn)行試驗，包括體液(例如，尿液和其它體 液，以及臨床樣品)。液體樣品可能源自固體的或者半固體的樣品，包括糞，生物組織和食物 樣品。這些固體的和半固體的樣品可以通過任何適合的方法轉(zhuǎn)變成液體樣品，例如在一種 適當(dāng)?shù)囊后w中混合，跺碎，浸軟，孵育，溶解或者酶解固體樣品（例如，水，磷酸鹽緩沖液或 者其它緩沖液）。"生物樣品"包括源自活的動物、植物和食物的樣品，也包括尿液、唾液、血 液和血液成分、腦脊液、陰道拭子，精液、糞便、汗液、分泌物、組織、器官、腫瘤、組織和器官 的培養(yǎng)物，細(xì)胞培養(yǎng)物和那里的條件介質(zhì)，不管是人的還是動物的。食物樣品包括加工過的 食物成分和最后的產(chǎn)品，肉，奶酪，酒，牛奶和飲用水。植物樣品包括源自任何植物、植物組 織、植物細(xì)胞培養(yǎng)物和那里的條件介質(zhì)的樣品。"環(huán)境樣品"是那些源自環(huán)境的樣品(例如， 湖水樣品或者其它水體的樣品，污水樣品，土壤樣品，地下水樣品，海水樣品，廢物廢水的樣 品）。污水和相關(guān)的廢物也可以包含在環(huán)境樣品中。

【具體實施方式】
[0036] 實驗為了更加詳細(xì)的闡述本發(fā)明的檢測裝置，現(xiàn)給以實驗說明。
[0037] 實駘1 :用檢測裝置檢測唾液中是否存在一定濃度的冰毒，k粉和嗎啡。
[0038]第一部分：本發(fā)明的試劑備和檢測裝置的纟目裝和部件制作
[0039] 如圖2所示的試劑條101用來說明本實驗所用本發(fā)明的試劑條的部件和制作方 法。例如圖2A所示，這些試劑條101 -般包括標(biāo)記區(qū)域121和檢測區(qū)域131，其中標(biāo)記區(qū)域 的上游可以包括樣本接受區(qū)域111。在檢測區(qū)域131上包括顯示檢測結(jié)果的區(qū)域和位于檢 測區(qū)域下游的檢測結(jié)果對照區(qū)域。通常，這些試劑條的樣本接受區(qū)域包括樣本接受片111， 標(biāo)記區(qū)域包括標(biāo)記片121，在樣本接收區(qū)域上包括完成反應(yīng)所必須的試劑，檢測區(qū)域包括檢 測片131，在檢測片131上包括顯示測試結(jié)果的一個或多個區(qū)域206、205、207和位于該區(qū)域 132下游的檢測結(jié)果控制對照區(qū)域208, 一般檢測結(jié)果區(qū)域為線條狀，在檢測結(jié)果區(qū)域上顯 示顏色變化來表示樣本中被分析物質(zhì)是否存在；吸水區(qū)域包括吸水片141，這些部件111， 121，131，141首尾相連讓液體可以從試劑條的一端沿著箭頭所指的方向流向另一端完成測 試。一般常用的試劑條為硝酸纖維素膜試劑條，即檢測區(qū)域131包括硝酸纖維素膜，在硝酸 纖維素膜上固定特異結(jié)合分子來顯示檢測的結(jié)果（207, 206的區(qū)域上）；還可以是醋酸纖維 素膜或尼龍膜等等。
[0040] 硝酸纖維素膜的處理。檢測片131為硝酸纖維素膜（NC)，在硝酸纖維素膜上有四 條線條，一個是檢測線205、206和207,位于檢測線下游的檢測結(jié)果控制線208。在其中一 條檢測線上固定連接有BSA的大麻分子；一條檢測線上固定連接有BSA的嗎啡分子；一條 檢測線上固定連接有BSA的安非他明分子；在檢測結(jié)果控制線上固定羊抗兔IgG。固定的 方法可以用自動噴膜處理機器來自動處理，其中在處理檢測線條的濃度為〇. 3毫克/毫升， 稀釋緩沖液體為磷酸緩沖液（PBS);在檢測結(jié)果控制線上固定羊抗兔IgG抗體；濃度為0.3 毫克/毫升，稀釋緩沖液體為磷酸緩沖液（PBS)。把處理好的硝酸纖維素膜放在37°C烘箱 里烘干即可。
[0041] 標(biāo)記片121的處理。標(biāo)記片為聚脂膜，被膠體金顆粒標(biāo)記好的兔IgG、抗大麻抗體、 抗嗎啡抗體和抗安非他明抗體被處理在聚脂膜上。在標(biāo)記墊上進(jìn)行兩次噴量，處理的標(biāo)記 溶液的OD值超過200,稀釋溶液為1倍PBS緩沖溶液，其中還含有1%的BSA。在標(biāo)記片上 還處理有膠體金標(biāo)記的兔IgG抗體。把處理好的標(biāo)記片放在37°C烘箱里烘干即可。
[0042] 樣本接受片111的處理。樣本接受片為疏水性的聚酯膜，在該膜上處理的溶液為： Borax(0? 07M/L) ;Tween20(0. 005%) ;CholicAcid(1%) ;Tris(0? 1M)。把處理好的樣本接受 片放在37°C烘箱里烘干即可。其中作為多個平行試驗，在相同的聚酯膜上，處理吐溫20的 濃度為〇. 75% (不需要有機溶劑)，0. 04% (溶解在70%的酒精中）和0. 005% (溶解在70%的 酒精中）。
[0043] 一般，在對疏水性的聚酯膜上處理低濃度的表面活性試劑的時候，把表面活性試 劑溶解在揮發(fā)性的有機溶液(例如酒精、甲醛、乙醇）中，然后再處理再聚酯膜上。如果表面 活性劑的濃度過低，也可以則需要借助物理強迫力（如超聲波等）才能將溶液順利處理到疏 水性的聚酯膜上，例如用超聲波的時候，把聚酯膜放置在處理的溶液中，然后對溶液和聚酯 膜進(jìn)行超聲。
[0044] 試劑條的組裝。把處理好的各個部件按照圖2所示的樣子組裝，讓樣本接受片位 于標(biāo)記片的上游，標(biāo)記片位于檢測片和樣本接受片之間，在檢測片的下游放置吸水的濾紙。 這些部件都放置在一個非吸水性的支撐片上。
[0045] 通過臨床試驗，獲得的結(jié)果如下：
[0046]

【權(quán)利要求】
1. 一種免疫檢測試劑條，其特征在于，該試劑條包括：支持流體流動的載體，該載體包 括：干的標(biāo)記物質(zhì)和檢測區(qū)域，其中，在干的標(biāo)記物質(zhì)的上游包括減緩液體樣本流動的試 劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑條，其中，減緩液體流動的試劑讓滴加在標(biāo)記物質(zhì)的上 游的液體樣本可以短暫相對的停留一段時間或者讓液體樣本緩慢釋逐漸釋放，這樣可以讓 液體樣本與干的標(biāo)記物質(zhì)充分均勻的接觸，減緩干的標(biāo)記物質(zhì)的釋放，這樣可以讓標(biāo)記物 質(zhì)緩慢釋放到液體中去。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑條，其中，所述的干的標(biāo)記物質(zhì)的0D值大于或等于150。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑條，其中，所述的干的標(biāo)記物質(zhì)的OD值大于或等于200。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑條，其中，所述的減緩液體樣本流動的試劑是表面活性 活性試劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑條，其中，所述的表面活性試劑為S-7 ;S-17 ;Tween20 ; TritonX-100 ;S-13。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6之一所述的試劑條，其中，位于干的標(biāo)記物質(zhì)的上游的區(qū)域的載 體為疏水性的載體。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑條，其中，表面活性試劑的質(zhì)量百分比濃度為小于或等 于 0? 1%。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑條，其中，表面活性試劑的質(zhì)量百分比濃度小于或等于 0? 05%。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的試劑條，所述的表面活性試劑是溶解在有機溶劑中的。
【文檔編號】G01N33/558GK104515848SQ201310445821
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月26日
【發(fā)明者】趙福銓, 伍欣 申請人:艾博生物醫(yī)藥(杭州)有限公司