一種檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器及其制備方法和檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，其特征在于：免疫傳感器是在玻碳電極的表面覆蓋有氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜，在所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜的表面通過(guò)1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺處理后固定有人白介素6抗體。本發(fā)明通過(guò)電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器實(shí)現(xiàn)了對(duì)人白介素6的檢測(cè)，方法簡(jiǎn)單、靈敏度高，易于操作。
【專利說(shuō)明】一種檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器及其制備方法和檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器及其制備方法和檢測(cè)方法，更具體地說(shuō)是涉及一種基于氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)(GO/PANI/CdSe)復(fù)合物的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器。
【背景技術(shù)】
[0002]自英國(guó)科學(xué)家在2004年發(fā)現(xiàn)石墨烯以來(lái)，石墨烯作為一種密集堆積的單層碳原子二維材料已經(jīng)迅速成為了碳材料研究中的熱點(diǎn)。氧化石墨烯表面存在大量含氧基團(tuán)，表現(xiàn)出優(yōu)異的電、熱以及機(jī)械性能，在微電子器件、液晶器件以及太陽(yáng)能電池等領(lǐng)域中有潛在的應(yīng)用價(jià)值[參見(jiàn):(a) X.S.Li, Y.ff.Zhu, ff.ff.Cai, M.Borysiak, B.Y.Han, D.Chen, R.D.Piner, L.Colombo, R.S.Ruoff, Nano Letters, 2009, 9, 4359.]。利用聚合物對(duì)氧化石墨烯進(jìn)行功能化修飾，可以大大提高了石墨烯的水溶性和導(dǎo)電性能。在眾多功能化石墨烯中，聚苯胺功能化的氧化石墨烯除具備大的比表面積外，還具有良好的生物相容性和導(dǎo)電性[參見(jiàn):(b)Y.X.Liu, X.C.Dong, P.Chen, Chem.Soc.Rev.，2012，41，2283.]。
[0003]電致化學(xué)發(fā)光是電極反應(yīng)產(chǎn)物之間或者電極產(chǎn)物與體系中某組分進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的一種光輻射，具有成本低，分析范圍廣和高靈敏度等很多優(yōu)點(diǎn)。自2002年，Bard等在2002年發(fā)現(xiàn)了量子點(diǎn)的電致化學(xué)發(fā)光(ECL)現(xiàn)象以來(lái)，ECL免疫傳感器已經(jīng)引起了人們極大的興趣[參見(jiàn):(c) Z.F.Ding, B.M.Quinn, S.K.Haram, L.E.Pell, B.A.KorgeI, A.J.Bard, Science, 2002, 296，1293.]。然而與傳統(tǒng)的ECL發(fā)光試劑相比，發(fā)光效率低和生物相容性差等問(wèn)題限制了它們?cè)谏治鲋械膽?yīng)用。因此，尋找新型高效、價(jià)廉、生物相容性好的發(fā)光材料仍是構(gòu)建ECL免疫傳感器的重要研究目標(biāo)。
[0004]人白介素6是一種多效性細(xì)胞因子，其在炎癥反應(yīng)中具有關(guān)鍵作用，與一些炎癥性疾病，如牛皮癬、炎癥性關(guān)節(jié)炎、心血管疾病、發(fā)炎性腸道疾病等疾病的發(fā)病機(jī)制具有密切聯(lián)系。傳統(tǒng)的檢測(cè)人白介素6的方法是酶聯(lián)免疫法。該方法雖然準(zhǔn)確，但是它的檢測(cè)步驟繁瑣，分析時(shí)間長(zhǎng)，樣品消耗量大，需要專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，且需要昂貴的儀器和專門(mén)的底物顯色劑，不利于進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。因此，急需發(fā)展一種簡(jiǎn)單、快速和高靈敏度的分析方法實(shí)現(xiàn)人白介素6的快速檢測(cè)。
[0005]將氧化石墨烯納米片、聚苯胺納米線陣列和硒化鎘量子點(diǎn)的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來(lái)制備氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物，可以充分發(fā)揮三者的優(yōu)點(diǎn)，能提高電致化學(xué)發(fā)光性能，良好的生物相容性，較大的比表面積和極好的穩(wěn)定性，是用于研究ECL免疫傳感器的良好的納米材料，在免疫生物學(xué)和臨床診斷等領(lǐng)域?qū)?huì)有廣闊的應(yīng)用前景。目前，基于氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器還尚無(wú)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明為解決上述現(xiàn)有技術(shù)所存在的不足之處，提供一種基于氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物的檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器及其制備方法和檢測(cè)方法，以期可以以高電致化學(xué)發(fā)光、高生物相容性的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器實(shí)現(xiàn)對(duì)人白介素6的簡(jiǎn)單、快速的檢測(cè)。
[0007]本發(fā)明解決技術(shù)問(wèn)題采用如下技術(shù)方案:
[0008]本發(fā)明檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)在于:所述免疫傳感器是在玻碳電極的表面覆蓋有氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜，在所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜的表面通過(guò)1-乙基-3- (3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺處理后固定有人白介素6抗體。
[0009]本發(fā)明檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)也在于:所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜是以苯胺和氧化石墨烯為原材料，通過(guò)原位反應(yīng)得到氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物，再和硒化鎘量子點(diǎn)混合后獲得。
[0010]本發(fā)明檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的制備方法，其特點(diǎn)在于按如下步驟進(jìn)行:
[0011]步驟一、將50ul的苯胺溶于20ml濃度為lmol/L的濃硫酸溶液中，超聲處理0.5h后獲得苯胺的硫酸溶液；向20ml濃度為0.5mg/ml的氧化石墨烯溶液中滴加所述苯胺的硫酸溶液，室溫下攪拌30min后，再加入0.1512g過(guò)硫酸銨，持續(xù)攪拌12h，然后用去離子水離心洗滌至pH為6?7，65°C下真空干燥，獲得墨綠色產(chǎn)物，即為氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物，以去離子水為溶劑，將氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物配制成濃度為0.5mg/ml的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物溶液；
[0012]步驟二、將步驟一所制得的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物溶液與以去離子水為溶劑、濃度為8.2 X 10_5mol/L硒化鎘量子點(diǎn)溶液按體積比1:3混合，獲得氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物溶液；
[0013]步驟三、將玻碳電極依次用中位粒徑為1.0 ii m、0.3 ii m和0.05 ii m的三氧化二鋁
拋光粉拋光至鏡面，然后超聲清洗，并用氮?dú)獯蹈桑脗溆貌Ｌ茧姌O；
[0014]步驟四、在步驟三制得的備用玻碳電極上滴加IOiU步驟二所制得的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物溶液，室溫晾干后在備用玻碳電極上形成氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜，再滴加IOiil由20-30mg/mll-乙基-3- (3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和10_20mg/ml N-羥基琥珀酰亞胺組成的混合溶液于所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜的表面，靜置20-30min，得中間樣；
[0015]步驟五、將步驟四所制得的中間樣浸入以濃度為lOmmol/ml的pH7.4磷酸鹽緩沖液為溶劑、濃度為0.lmg/ml的人白介素6抗體的溶液中反應(yīng)12-20小時(shí),取出后用濃度為10mmol/ml的pH7.4磷酸鹽緩沖液清洗，再浸入質(zhì)量濃度為2_3%的牛血清蛋白中封閉1_2小時(shí)，取出清洗即得檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器。
[0016]利用本發(fā)明檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的檢測(cè)方法，其特點(diǎn)是按如下步驟獲得待測(cè)人白介素6樣品濃度:[0017]步驟a、將所述檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器浸入IOul待測(cè)人白介素6樣品中，并在37°C下溫育50分鐘后取出清洗，得待測(cè)免疫傳感器；
[0018]步驟b、將步驟a所得的待測(cè)免疫傳感器在含有0.lmol/L K2S2O8和0.lmol/L KCl的0.lmol/L的pH7.4磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行電致化學(xué)發(fā)光的測(cè)試，獲得發(fā)光強(qiáng)度，利用發(fā)光強(qiáng)度與待測(cè)人白介素6樣品濃度的標(biāo)準(zhǔn)關(guān)系曲線，判斷待測(cè)人白介素6樣品的濃度。
[0019]本發(fā)明的檢測(cè)方法，其特點(diǎn)也在于:所述標(biāo)準(zhǔn)關(guān)系曲線是通過(guò)對(duì)以濃度分別為0.0005ng/ml、0.0lng/ml、0.lng/ml、lng/ml 和 lOng/ml 的人白介素 6 樣品所制備的待測(cè)免疫傳感器進(jìn)行電致化學(xué)發(fā)光的測(cè)試，獲得各濃度人白介素6樣品所對(duì)應(yīng)的發(fā)光強(qiáng)度，如圖1所示，各線條所對(duì)應(yīng)濃度分別為:a為0ng/ml、b為0.0005ng/ml、c為0.0lng/ml、d為
0.lng/ml、e為lng/ml和f為10ng/ml ;然后以人白介素6樣品的濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)、以發(fā)光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)進(jìn)行擬合，如圖1的插圖所示。檢測(cè)表明當(dāng)人白介素6樣品濃度在
0.0005到10ng/ml范圍內(nèi)，發(fā)光強(qiáng)度隨著濃度的增大而降低，與濃度成線性關(guān)系，檢測(cè)限達(dá)到 0.17pg/ml。
[0020]所述電致化學(xué)發(fā)光測(cè)試是以所述免疫傳感器為工作電極、以Pt電極為對(duì)電極、以飽和氯化銀電極為參比電極的三電極體系，用MP1-A型電致化學(xué)發(fā)光儀，在0到-1.5V進(jìn)行循環(huán)伏安掃描，光電倍增管高壓設(shè)為700V。
[0021 ] 與已有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在:
[0022]1、本發(fā)明通過(guò)電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器實(shí)現(xiàn)了對(duì)人白介素6的檢測(cè)，方法簡(jiǎn)單、靈敏度高，易于操作；
[0023]2、本發(fā)明對(duì)人白介素6的檢測(cè)方法所需樣品量少，檢測(cè)成本低；
[0024]3、本發(fā)明通過(guò)氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜制備電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，電致化學(xué)發(fā)光性能高，生物相容性好，且具有極好的穩(wěn)定性。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0025]圖1 為本發(fā)明對(duì)濃度分別為 0.0005ng/ml、0.01ng/ml、0.lng/ml、lng/ml 和 IOng/ml的人白介素6樣品進(jìn)行電致化學(xué)發(fā)光的測(cè)試結(jié)果，插圖為標(biāo)準(zhǔn)關(guān)系曲線；
[0026]圖2為本發(fā)明中氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物的掃描電子顯微鏡(SEM)表征結(jié)果；
[0027]圖3為本發(fā)明中氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物的掃描電子顯微鏡(SEM)表征結(jié)果；
【具體實(shí)施方式】
[0028]實(shí)施例1
[0029]本實(shí)施例檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器按如下步驟進(jìn)行制備:
[0030]步驟一、將50 U I的苯胺溶于20ml濃度為lmol/L的濃硫酸溶液中，超聲處理0.5h后獲得苯胺的硫酸溶液；向20ml濃度為0.5mg/ml的氧化石墨烯溶液中滴加所述苯胺的硫酸溶液，室溫下攪拌30min后，再加入0.1512g過(guò)硫酸銨，持續(xù)攪拌12h，然后用去離子水離心洗滌至pH為6?7，65°C下真空干燥，獲得墨綠色產(chǎn)物，即為氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物，以去離子水為溶劑，將氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物配制成濃度為0.5mg/ml氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物溶液；氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物的掃描電子顯微鏡(SEM)表征結(jié)果如圖2所示；
[0031]步驟二、將步驟一所制得的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物溶液與硒化鎘量子點(diǎn)溶液(濃度為8.2mol/L，溶劑為水)按體積比1:3均勻混合，獲得氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物溶液；氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物的掃描電子顯微鏡(SEM)表征結(jié)果如圖3所示；
[0032]步驟三、將直徑4mm玻碳電極依次用中位粒徑為1.0 y m、0.3 u m 0.05 u m的三氧化二鋁拋光粉拋光至鏡面，然后超聲清洗，并用氮?dú)獯蹈?，得備用玻碳電極；
[0033]步驟四、在步驟三制得的備用玻碳電極上滴加IOiU步驟二所制得的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物溶液，室溫晾干后在備用玻碳電極上形成氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜，再滴加10 Ul由20mg/mil-乙基-3- (3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和10mg/ml (NHS)N-羥基琥珀酰亞胺組成的混合溶液于氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜的表面，靜置20min,得中間樣；
[0034]步驟五、將步驟四所制得的中間樣浸入以濃度為10mmol/ml的pH7.4磷酸鹽緩沖液為溶劑、濃度為0.lmg/ml的人白介素6抗體的溶液中在4°C下反應(yīng)12小時(shí),取出后用濃度為lOmmol/ml的pH7.4磷酸鹽緩沖液清洗，再浸入質(zhì)量濃度為2%的牛血清蛋白中封閉I小時(shí)，取出清洗即得檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器。
[0035]利用本實(shí)施例電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的檢測(cè)人白介素6的檢測(cè)方法是按如下步驟進(jìn)行:
[0036]步驟a、將檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器浸入IOul待測(cè)人白介素6樣品中，并在37°C下溫育50分鐘后取出清洗，得待測(cè)免疫傳感器；
[0037]步驟b、將待測(cè)免疫傳感器在含有0.lmol/L K2S2OjP0.lmol/L KCl的0.lmol/L的PH7.4磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行電致化學(xué)發(fā)光的測(cè)試，獲得待測(cè)免疫傳感器的發(fā)光強(qiáng)度，利用發(fā)光強(qiáng)度與待測(cè)人白介素6樣品濃度的標(biāo)準(zhǔn)關(guān)系曲線，判斷待測(cè)人白介素6樣品的濃度。
[0038]實(shí)施例2
[0039]本實(shí)施例是以濃度為30mg/ml的EDC按與實(shí)施例1相同的方法制備免疫傳感器，所得免疫傳感器與實(shí)施例1所得免疫傳感器的形貌與性質(zhì)類似，通過(guò)對(duì)相同待測(cè)人白介素6樣品的檢測(cè)，得到相同的免疫檢測(cè)結(jié)果。
[0040]實(shí)施例3
[0041]本實(shí)施例是以濃度為20mg/ml NHS按與實(shí)施例1相同的方法制備免疫傳感器，所得免疫傳感器與實(shí)施例1所得免疫傳感器的形貌與性質(zhì)類似，通過(guò)對(duì)相同待測(cè)人白介素6樣品的檢測(cè)，得到相同的免疫檢測(cè)結(jié)果。
[0042]實(shí)施例4
[0043]本實(shí)施例將實(shí)施例1中的步驟四“滴加10 ill由20mg/mll-乙基_3_ (3_ 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和10mg/ml (NHS) N-羥基琥珀酰亞胺組成的混合溶液于氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜的表面，靜置20min”改為靜置30min，其余條件步驟與實(shí)施例1相同，所得免疫傳感器與實(shí)施例1所得免疫傳感器的形貌與性質(zhì)類似，通過(guò)對(duì)相同待測(cè)人白介素6樣品的檢測(cè)，得到相同的免疫檢測(cè)結(jié)果。[0044]實(shí)施例5
[0045]本實(shí)施例將實(shí)施例1中的步驟四“滴加10 ill由20mg/mll-乙基_3_ (3_ 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和10mg/ml (NHS) N-羥基琥珀酰亞胺組成的混合溶液于氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜的表面，靜置20min”改為“滴加IOiU由30mg/mll-乙基-3- (3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和20mg/ml (NHS) N-羥基琥珀酰亞胺組成的混合溶液于氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜的表面，靜置30min”，其余條件步驟與實(shí)施例1相同，所得免疫傳感器與實(shí)施例1所得免疫傳感器的形貌與性質(zhì)類似，通過(guò)對(duì)相同待測(cè)人白介素6樣品的檢測(cè)，得到相同的免疫檢測(cè)結(jié)果。
[0046]實(shí)施例6
[0047]本實(shí)施例將將實(shí)施例1中的步驟五“將步驟四所制得的中間樣浸入以濃度為I Ommo I/ml的pH7.4磷酸鹽緩沖液為溶劑、濃度為0.lmg/ml的人白介素6抗體的溶液中在4°C下反應(yīng)12小時(shí)”改為反應(yīng)20小時(shí)，其余條件步驟與實(shí)施例1相同，所得免疫傳感器與實(shí)施例I所得免疫傳感器的形貌與性質(zhì)類似，通過(guò)對(duì)相同待測(cè)人白介素6樣品的檢測(cè)，得到相同的免疫檢測(cè)結(jié)果。
[0048]實(shí)施例1
[0049]本實(shí)施例將將實(shí)施例1中的步驟五所用的質(zhì)量濃度為2%的牛血清蛋白改為質(zhì)量濃度為3%的牛血清蛋白，其余條件步驟與實(shí)施例1相同，所得免疫傳感器與實(shí)施例1所得免疫傳感器的形貌與性質(zhì)類似，通過(guò)對(duì)相同待測(cè)人白介素6樣品的檢測(cè)，得到相同的免疫檢測(cè)結(jié)果。
[0050]實(shí)施例8
[0051]本實(shí)施例將將實(shí)施例1中的步驟五“再浸入質(zhì)量濃度為2%的牛血清蛋白中封閉I小時(shí)”改為封閉2小時(shí)，其余條件步驟與實(shí)施例1相同，所得免疫傳感器與實(shí)施例1所得免疫傳感器的形貌與性質(zhì)類似，通過(guò)對(duì)相同待測(cè)人白介素6樣品的檢測(cè)，得到相同的免疫檢測(cè)結(jié)果。
【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，其特征在于:所述免疫傳感器是在玻碳電極的表面覆蓋有氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜，在所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜的表面通過(guò)1-乙基-3- (3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺處理后固定有人白介素6抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，其特征在于:所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜是以苯胺和氧化石墨烯為原材料，通過(guò)原位反應(yīng)得到氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物，再和硒化鎘量子點(diǎn)混合后獲得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的制備方法，其特征在于按如下步驟進(jìn)行: 步驟一、將50ul的苯胺溶于20ml濃度為lmol/L的濃硫酸溶液中，超聲處理0.5h后獲得苯胺的硫酸溶液；向20ml濃度為0.5mg/ml的氧化石墨烯溶液中滴加所述苯胺的硫酸溶液，室溫下攪拌30min后，再加入0.1512g過(guò)硫酸銨，持續(xù)攪拌12h，然后用去離子水離心洗滌至pH為6~7，65°C下真空干燥，獲得墨綠色產(chǎn)物，即為氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物，以去離子水為溶劑，將氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物配制成濃度為0.5mg/ml的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物溶液； 步驟二、將步驟一所制得的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復(fù)合物溶液與以去離子水為溶劑、濃度為8.2X 10_5mol/L硒化鎘量子點(diǎn)溶液按體積比1:3混合，獲得氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物溶液； 步驟三、將玻碳電極依次用中位粒徑為1.0 ii m、0.3 ii m和0.05 ii m的三氧化二鋁拋光粉拋光至鏡面，然后超聲清洗，并用氮?dú)獯蹈桑脗溆貌Ｌ茧姌O； 步驟四、在步驟三制得的備用 玻碳電極上滴加IOiU步驟二所制得的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子 點(diǎn)復(fù)合物溶液，室溫晾干后在備用玻碳電極上形成氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜，再滴加10 Ul由20-30mg/mil-乙基-3- (3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和10-20mg/ml N-羥基琥珀酰亞胺組成的混合溶液于所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點(diǎn)復(fù)合物膜的表面，靜置20-30min，得中間樣； 步驟五、將步驟四所制得的中間樣浸入以濃度為lOmmol/ml的pH7.4磷酸鹽緩沖液為溶劑、濃度為0.lmg/ml的人白介素6抗體的溶液中反應(yīng)12-20小時(shí),取出后用濃度為lOmmol/ml的pH7.4磷酸鹽緩沖液清洗，再浸入質(zhì)量濃度為2_3%的牛血清蛋白中封閉1_2小時(shí)，取出清洗即得檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器。
4.一種利用權(quán)利要求3所述檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的檢測(cè)方法，其特征是按如下步驟獲得待測(cè)人白介素6樣品濃度: 步驟a、將所述檢測(cè)人白介素6的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器浸入IOul待測(cè)人白介素6樣品中，并在37°C下溫育50分鐘后取出清洗，得待測(cè)免疫傳感器； 步驟b、將步驟a所得的待測(cè)免疫傳感器在含有0.lmol/L K2S2O8和0.lmol/L KCl的0.lmol/L的pH7.4磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行電致化學(xué)發(fā)光的測(cè)試，獲得發(fā)光強(qiáng)度，利用發(fā)光強(qiáng)度與待測(cè)人白介素6樣品濃度的標(biāo)準(zhǔn)關(guān)系曲線，判斷待測(cè)人白介素6樣品的濃度。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)方法，其特征是:所述標(biāo)準(zhǔn)關(guān)系曲線是通過(guò)對(duì)以濃度分別為0.0005ng/ml、0.01ng/ml、0.lng/ml、lng/ml和lOng/ml的人白介素6樣品所制備的待測(cè)免疫傳感器進(jìn)行電致化學(xué)發(fā)光的測(cè)試，獲得各濃度人白介素6樣品所對(duì)應(yīng)的發(fā)光強(qiáng)度，然后以人白介素6樣品的濃度的對(duì)數(shù)值為`橫坐標(biāo)、以發(fā)光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)進(jìn)行擬合。
【文檔編號(hào)】G01N33/531GK103487573SQ201310450342
【公開(kāi)日】2014年1月1日 申請(qǐng)日期:2013年9月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月27日
【發(fā)明者】毛昌杰, 胡曉煒, 石陽(yáng)陽(yáng), 王程, 殷暢, 劉蘋(píng)貞, 張勝義, 牛和林, 宋吉明 申請(qǐng)人:安徽大學(xué)