乳酸測(cè)定試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種乳酸測(cè)定試劑盒，包括依次使用的R1和R2兩種獨(dú)立液態(tài)試劑，R1試劑各成分濃度為：PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷（Tris）緩沖液5.95～6.6g/L，過氧化氫酶120～150mg/L，乳酸氧化酶90～110mg/L，其余為純化水；R2試劑各成分含量為：4-氨基安替比林0.075～0.085g/L，3-羥基-2、4、6-三溴苯甲酸（TBHBA）0.09～0.11g/L，其余為純化水。本發(fā)明能夠使用全自動(dòng)生化分析儀直接測(cè)定乳酸容量，適合臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)血液或脊髓液中乳酸含量測(cè)定的需要。
【專利說明】乳酸測(cè)定試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測(cè)試劑【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其與一種用于體外血液或脊髓液中乳酸含量測(cè)定的試劑盒有關(guān)。
【背景技術(shù)】
[0002]血液中的乳酸含量是一個(gè)重要的生理和病理指標(biāo)，乳酸水平是血液循環(huán)健全與否的常規(guī)指標(biāo)，也是循環(huán)惡化程度的最好的生物學(xué)指標(biāo)，血液中乳酸濃度與骨骼肌、腦、皮膚、骨髓質(zhì)和紅細(xì)胞等組織產(chǎn)生乳酸的速率以及肝臟對(duì)乳酸的代謝速度有關(guān)，如果乳酸濃度超過5nmol/L以及PH值小于7.25時(shí)就會(huì)有明顯的乳酸中毒表現(xiàn)。乳酸中毒主要在下列情況下發(fā)生，常見的是與組織氧合作用降低有關(guān)，如低血容量、休克和左心室衰竭，另外的是與糖尿病、腫瘤、肝病等疾病或先天代謝紊亂有關(guān)，測(cè)定乳酸含量對(duì)于休克等疾病的早期診斷和嚴(yán)重程度的估計(jì)具有重要意義，所以目前臨床實(shí)驗(yàn)室普遍開展對(duì)乳酸含量的測(cè)定工作。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的就是要適應(yīng)臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)血液或脊髓液中乳酸含量測(cè)定的需要，提供一種用于乳酸測(cè)定的試劑盒。
[0004]為此，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:乳酸測(cè)定試劑盒，包括依次使用的Rl和R2兩種獨(dú)立液態(tài)試劑，其特征是:所述的Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液5.95~6.6g/L,過氧化氫酶120~150mg/L,乳酸氧化酶90~110mg/L,其余為純化水；所述的R2試劑各成分含量為:4_氨基安替比林0.075~0.085g/L，3-羥基-2、
4、6_三溴苯甲酸(TBHBA) 0.09~0.11 g/L，其余為純化水。
[0005]優(yōu)選的，所述的Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液6.05g/L,過氧化氫酶135mg/L,乳酸氧化酶100mg/L,其余為純化水；所述的R2試劑各成分含量為:4-氨基安替比林0.0818/1，3-羥基-2、4、6-三溴苯甲酸(了8^4)0.101 g/L,其余為純化水。
[0006]本發(fā)明是一種液體雙試劑，適用于乳酸氧化酶法測(cè)定乳酸含量，測(cè)定時(shí)可直接使用，在作為測(cè)定標(biāo)本的血漿加入EDTA抗凝劑，選用兩根試管分別作為校準(zhǔn)管和樣品管，校準(zhǔn)管中加入3微升已知乳酸含量的標(biāo)準(zhǔn)液，樣品管中加入3微升待測(cè)標(biāo)本，然后在校準(zhǔn)管和樣品管中各加入本發(fā)明所述的Rl試劑240微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，使用全自動(dòng)生化分析儀在主波長500nm時(shí)測(cè)定各管的吸光度A1，然后再在校準(zhǔn)管和樣品管中各加入本發(fā)明所述的R2試劑60微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，使用全自動(dòng)生化分析儀在主波長500nm時(shí)測(cè)定各管的吸光度A2，可以計(jì)算出使用Rl和R2測(cè)得的吸光度差值Λ A=A2-A1,乳酸含量就可以通過下述公式計(jì)算而得:乳酸(LAC)濃度=(Λ A測(cè)定標(biāo)本/ Λ A標(biāo)準(zhǔn)液)X標(biāo)準(zhǔn)液LAC濃度(nmol/L)。
[0007]使用本發(fā)明可以達(dá)到以下有益效果:能夠使用全自動(dòng)生化分析儀直接測(cè)定乳酸容量，適合臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)血液或脊髓液中乳酸含量測(cè)定的需要。
【具體實(shí)施方式】
[0008]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)行詳細(xì)描述。
[0009]實(shí)施例一:
本發(fā)明試劑盒包括依次使用的Rl和R2兩種獨(dú)立液態(tài)試劑，Rl和R2試劑按下述成分和含量配置:Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液
5.95g/L，過氧化氫酶150mg/L，乳酸氧化酶110mg/L，其余為純化水；R2試劑各成分含量為:4_氨基安替比林0.085g/L，3-羥基-2、4、6-三溴苯甲酸(TBHBA)0.11 g/L，其余為純化水。
[0010]使用日立7060全自動(dòng)生化分析儀，測(cè)定方法采用兩點(diǎn)終點(diǎn)法，測(cè)定條件設(shè)定為:主波長500nm，輔助波長700 nm反應(yīng)方向正向上升；在作為測(cè)定標(biāo)本的血漿加入EDTA抗凝齊U，選用兩根試管分別作為校準(zhǔn)管和樣品管，校準(zhǔn)管中加入3微升已知乳酸含量的標(biāo)準(zhǔn)液，樣品管中加入3微升待測(cè)標(biāo)本，然后在校準(zhǔn)管和樣品管中各加入Rl試劑240微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測(cè)定各管的吸光度A1，然后再在校準(zhǔn)管和樣品管中各加入本發(fā)明所述的R2試劑60微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測(cè)定各管的吸光度A2,生化分析儀計(jì)算出使用Rl和R2測(cè)得的吸光度差值Λ A=A2-A1,并通過下述公式自動(dòng)計(jì)算出乳酸含量:乳酸(LAC)濃度=(Λ A測(cè)定標(biāo)本/ Λ A標(biāo)準(zhǔn)液)X標(biāo)準(zhǔn)液LAC濃度(nmol/L)。重復(fù)測(cè)10次取平均值，實(shí)測(cè)結(jié)果如下:平均值為0.86 nmol/L，標(biāo)準(zhǔn)差0.0301 ;根據(jù)精密度公式:精密度=標(biāo)準(zhǔn)差/平均值X 100%，精密度為3.5%，小于5%，符合要求。
[0011]實(shí)施例二:
本發(fā)明試劑盒包括依次使用的Rl和R2兩種獨(dú)立液態(tài)試劑，Rl和R2試劑按下述成分和含量配置:Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液6.6g/L,過氧化氫酶120mg/L，乳酸氧化酶90mg/L，其余為純化水；R2試劑各成分含量為:4_氨基安替比林0.075g/L, 3-羥基-2、4、6-三溴苯甲酸(TBHBA) 0.09 g/L，其余為純化水。
[0012]使用日立7060全自動(dòng)生化分析儀，測(cè)定方法采用兩點(diǎn)終點(diǎn)法，測(cè)定條件設(shè)定為:主波長500nm，輔助波長700 nm反應(yīng)方向正向上升；在作為測(cè)定標(biāo)本的血漿加入EDTA抗凝齊U，選用兩根試管分別作為校準(zhǔn)管和樣品管，校準(zhǔn)管中加入3微升已知乳酸含量的標(biāo)準(zhǔn)液，樣品管中加入3微升待測(cè)標(biāo)本，然后在校準(zhǔn)管和樣品管中各加入Rl試劑240微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測(cè)定各管的吸光度A1，然后再在校準(zhǔn)管和樣品管中各加入本發(fā)明所述的R2試劑60微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測(cè)定各管的吸光度A2,生化分析儀計(jì)算出使用Rl和R2測(cè)得的吸光度差值Λ A=A2-A1,并通過下述公式自動(dòng)計(jì)算出乳酸含量:乳酸(LAC)濃度=(Λ A測(cè)定標(biāo)本/ Λ A標(biāo)準(zhǔn)液)X標(biāo)準(zhǔn)液LAC濃度(nmol/L)。重復(fù)測(cè)10次取平均值，實(shí)測(cè)結(jié)果如下:平均值為0.79 nmol/L，標(biāo)準(zhǔn)差0.0311 ;根據(jù)精密度公式:精密度=標(biāo)準(zhǔn)差/平均值X 100%，精密度為3.9%，小于5%，符合要求。
[0013]實(shí)施例三:
本發(fā)明試劑盒包括依次使用的Rl和R2兩種獨(dú)立液態(tài)試劑，Rl和R2試劑按下述成分和含量配置:Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液
6.05g/L，過氧化氫酶135mg/L，乳酸氧化酶100mg/L，其余為純化水；R2試劑各成分含量為:4-氨基安替比林0.0818/1，3-羥基-2、4、6-三溴苯甲酸(了8^4)0.101 g/L，其余為純化水。
[0014]使用日立7060全自動(dòng)生化分析儀，測(cè)定方法采用兩點(diǎn)終點(diǎn)法，測(cè)定條件設(shè)定為:主波長500nm，輔助波長700 nm反應(yīng)方向正向上升；在作為測(cè)定標(biāo)本的血漿加入EDTA抗凝劑，選用兩根試管分別作為校準(zhǔn)管和樣品管，校準(zhǔn)管中加入3微升已知乳酸含量的標(biāo)準(zhǔn)液，樣品管中加入3微升待測(cè)標(biāo)本，然后在校準(zhǔn)管和樣品管中各加入Rl試劑240微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測(cè)定各管的吸光度A1，然后再在校準(zhǔn)管和樣品管中各加入本發(fā)明所述的R2試劑60微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測(cè)定各管的吸光度A2,生化分析儀計(jì)算出使用Rl和R2測(cè)得的吸光度差值Λ A=A2-A1,并通過下述公式自動(dòng)計(jì)算出乳酸含量:乳酸(LAC)濃度=(Λ A測(cè)定標(biāo)本/ Λ A標(biāo)準(zhǔn)液)X標(biāo)準(zhǔn)液LAC濃度(nmol/L)。重復(fù)測(cè)10次取平均值，實(shí)測(cè)結(jié)果如下:平均值為0.83 nmol/L，標(biāo)準(zhǔn)差0.0204 ;根據(jù)精密度公式:精密度=標(biāo)準(zhǔn)差/平均值X 100 %`，精密度為2.5 %，小于5 %，符合要求。
【權(quán)利要求】
1.乳酸測(cè)定試劑盒，包括依次使用的Rl和R2兩種獨(dú)立液態(tài)試劑，其特征在于:所述的Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液5.95?6.6g/L，過氧化氫酶120?150mg/L，乳酸氧化酶90?110mg/L，其余為純化水；所述的R2試劑各成分含量為:4_氨基安替比林0.075?0.085g/L，3-羥基_2、4、6_三溴苯甲酸(TBHBA)0.09?0.11 g/L，其余為純化水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳酸測(cè)定試劑盒，其特征在于:所述的Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液6.05g/L，過氧化氫酶135mg/L，乳酸氧化酶100mg/L，其余為純化水；所述的R2試劑各成分含量為:4_氨基安替比林0.081g/L,3-羥基-2、4、6-三溴苯甲酸(TBHBA) 0.101 g/L，其余為純化水。
【文檔編號(hào)】G01N21/77GK103529020SQ201310454102
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月29日
【發(fā)明者】石麗萍, 夏春偉 申請(qǐng)人:紹興圣康生物科技有限公司