一種包合后人工牛黃中膽紅素的含量測定方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種包合后人工牛黃中膽紅素的含量測定方法。該方法使用二甲基亞砜為溶劑，對包合人工牛黃樣品進行超聲提取一定時間后能夠溶解樣品中的全部膽紅素，再以膽紅素對照品為對照，用高效液相色譜法對其進行含量測定。本發(fā)明操作簡單，測定結(jié)果準(zhǔn)確，本發(fā)明可用于對包合人工牛黃及含有包合人工牛黃的制劑中的膽紅素進行含量測定。
【專利說明】一種包合后人工牛黃中膽紅素的含量測定方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種包合后人工牛黃中膽紅素的含量測定方法，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。【背景技術(shù)】
[0002]牛黃,是指?？苿游稂S?；蛩５哪懩医Y(jié)石。牛黃(Calculus bovis),別名丑寶。本品為牛科動物牛(Bos taurus domesticus Gmelin)干燥的膽結(jié)石。但由于牛黃產(chǎn)量較少，市場用量較大，現(xiàn)在除特殊規(guī)定外，多以人工牛黃代替天然牛黃進行藥物的生產(chǎn)。人工牛黃中主要成分為膽酸及膽紅素，性質(zhì)不穩(wěn)定。通過包合技術(shù)，能使人工牛黃穩(wěn)定性明顯增加，掩蓋其特有的腥臭味，同時也可使人工牛黃的水溶性得到改善。[0003]對于人工牛黃的含量測定，現(xiàn)有技術(shù)有很多，包括紫外分光光度法、高效液相色譜法等。如2010年版《中國藥典》一部，使用紫外分光光度法，使用60%的冰醋酸對膽酸進行測定，使用三氯甲烷對膽紅素測定，供試品的前處理方法為定量的三氯甲烷超聲處理。近幾年，常常以高效液相色譜法測定其中的膽紅素含量來對人工牛黃進行含量標(biāo)定，將膽紅素的含量標(biāo)定為人工牛黃的含量。對于樣品的前處理，現(xiàn)有技術(shù)中主要有三氯甲烷超聲提取和二氯甲烷超聲提取兩種。如《HPLC法測定磺啶冰黃片中膽紅素的含量》(湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2007年27卷5期)，供試品的前處理方法為使用定量三氯甲烷超聲提取。文獻《一種安宮牛黃栓的質(zhì)量控制方法》(申請?zhí)?CN201210490729.2)還提供了另外一種前處理方法，即樣品與乙二胺四醋酸二鈉溶液進行混合，加熱完全溶解后，放冷混勻后加入水飽和的二氯甲烷，超聲處理后冰水浴處理，然后搖勻后離心，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得膽紅素。
[0004]上述文獻方法適用于未包合狀態(tài)的人工牛黃，對于包合后的人工牛黃，由于包合物的阻礙，通過上述常規(guī)的方法和技術(shù)無法準(zhǔn)確檢測出其含量。經(jīng)過檢索，現(xiàn)有技術(shù)中也未發(fā)現(xiàn)能對包合狀態(tài)的人工牛黃進行前處理及進行含量測定的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種包合后人工牛黃中膽紅素的含量測定方法。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0007]—種包合后人工牛黃中膽紅素的含量測定方法，步驟如下:
[0008]a)色譜條件與系統(tǒng)適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積分數(shù)比80:10:10的甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸溶液為流動相；檢測波長為450nm ;理論板數(shù)按膽紅素峰計算應(yīng)不低于2000 ；
[0009]b)對照品溶液的制備:精密稱取膽紅素對照品，加二氯甲烷制成每ImL含10 μ g的溶液，即得；
[0010]c)供試品溶液的制備:取包合人工牛黃粉末0.02_3g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入二甲基亞砜10-25mL，密塞，稱定重量，超聲2-10min，放冷，用二甲基亞砜補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0011]d)測定法:分別精密吸取對照品溶液與上述制備好的供試品溶液各10μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0012]優(yōu)選的，一種包合后人工牛黃中膽紅素的含量測定方法，步驟如下:
[0013]a)色譜條件與系統(tǒng)適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積分數(shù)比80:10:10的甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸溶液為流動相；檢測波長為450nm，理論板數(shù)按膽紅素峰計算應(yīng)不低于2000 ；
[0014]b)對照品溶液的制備:精密稱取膽紅素對照品，加二氯甲烷制成每ImL含IOyg的溶液，即得；
[0015]c)供試品溶液的制備:取包合人工牛黃粉末0.3g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入二甲基亞砜20mL，密塞，稱定重量，超聲5min，放冷，用二甲基亞砜補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0016]d)測定法:分別精密吸取對照品溶液與上述制備好的供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0017]本發(fā)明所述的包合人工牛黃為采用β_環(huán)糊精或聚乙二醇類包合的人工牛黃，所述的全部膽紅素包括游離膽紅素和包合后膽紅素。其中超聲條件為分析試驗常用超聲頻率40kHz ο
[0018]本發(fā)明中所述的重量份與體積份的單位對應(yīng)關(guān)系為g/mL或kg/L。
[0019]本發(fā)明使用二甲基亞砜為溶劑對包合后人工牛黃進行處理，能夠?qū)Π先斯づ｜S的全部膽紅素進行提取而不破壞，進而測定其含量，本發(fā)明操作簡單，測定結(jié)果準(zhǔn)確，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差1.543%，重復(fù)性較好，在3.979 μ g/mL?15.918 μ g/mL范圍內(nèi)膽紅素的峰面積(A)與濃度(C)線性關(guān)系良好。本發(fā)明可用于對包合人工牛黃及含有包合人工牛黃的制劑中的膽紅素進行含量測定。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1是供試品處理方式折線圖；
[0021]圖2是供試品溶劑選擇折線圖；
[0022]圖3是膽紅素對照品溶液高效液相色譜圖；
[0023]圖4是膽紅素線性關(guān)系圖；
[0024]圖5是二甲基亞砜處理人工牛黃供試品溶液高效液相色譜圖。
[0025]具體實施方法
[0026]下述實驗例用于進一步說明但不限于本發(fā)明，所用的包合人工牛黃為山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司自制。
[0027]實驗例1:對包合人工牛黃中膽紅素進行含量測定的條件選擇
[0028]I)儀器、試藥和供試樣品
[0029]儀器:高效液相色譜儀:日立L-7110泵，日立-7420檢測器；島津AUW220D，電子天平，昆山舒美KQ-300B超聲儀(300W, 40KHz )
[0030]對照品:膽紅素對照品(批號:100077-200805)
[0031]樣品:包合后人工牛黃(山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司)批號:20130501((6-環(huán)糊精包合)、20130502 (聚乙二醇6000包合)、20130503 (聚乙二醇4000包合)。
[0032]2)流動相選擇
[0033]研究發(fā)現(xiàn)人工牛黃成分復(fù)雜，膽紅素存在同分異構(gòu)體，單純使用甲醇-水、乙醇-水體系均無法達到很好的色譜分離，使用體積分數(shù)比80:10:10的甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸溶液為流動相配合供試品的制備，能滿足膽紅素檢查的需要。
[0034]3)對照品制備
[0035]膽紅素對照品儲備液:精密稱取膽紅素對照品適量，加二氯甲烷制成每ImL含19.897 Ug的溶液，即得。
[0036]膽紅素對照品溶液:精密量取膽紅素對照品儲備液，加二氯甲烷制成每ImL含
9.949 Ug的溶液，即得。
[0037]4)供試品制備
[0038]以理論提取率為考核指標(biāo)，以二甲基亞砜為試劑，選擇了多種處理方式對包合人工牛黃進行了處理，結(jié)果表明:使用浸泡的方式很難達到良好的提取過程，使用回流提取的方法對人工牛黃造成破壞，使用超聲處理較為合適，見附圖1。
[0039]以理論提取率為考核指標(biāo)，選擇多種溶劑在超聲2-10分鐘情況下，對供試品進行處理，結(jié)果表明:一般溶劑，如:氯仿、甲醇、乙醇等，很難達到提取完全的效果，理論提取率低于30%，而二甲基亞砜的提取率較為理想，試驗結(jié)果如下表。
[0040]表1供試品溶劑選擇(提取率)
【權(quán)利要求】
1.一種包合后人工牛黃中膽紅素的含量測定方法，其特征是，包括如下步驟: a)色譜條件與系統(tǒng)適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積分數(shù)比80:10:10的甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸溶液為流動相；檢測波長為450nm ;理論板數(shù)按膽紅素峰計算應(yīng)不低于2000 ； b)對照品溶液的制備:精密稱取膽紅素對照品，加二氯甲烷制成每ImL含10μ g的溶液，即得； c)供試品溶液的制備:取包合人工牛黃粉末0.02-3g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入二甲基亞砜10-25mL，密塞，稱定重量，超聲2-10min，放冷，用二甲基亞砜補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； d)測定法:分別精密吸取對照品溶液與上述制備好的供試品溶液各10μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，包括如下步驟: a)色譜條件與系統(tǒng)適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積分數(shù)比80:10:10的甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸溶液為流動相；檢測波長為450nm ;理論板數(shù)按膽紅素峰計算應(yīng)不低于2000 ； b)對照品溶液的制備:精密稱取膽紅素對照品，加二氯甲烷制成每ImL含10μ g的溶液，即得； c)供試品溶液的制備:取包合人工牛黃粉末0.3g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入二甲基亞砜20mL，密塞，稱定重量，超聲5min，放冷，用二甲基亞砜補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； d)測定法:分別精密吸取對照品溶液與上述制備好的供試品溶液各10μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是，所述的包合人工牛黃為采用β-環(huán)糊精或聚乙二醇類包合的人工牛黃。
【文檔編號】G01N30/06GK103529141SQ201310493118
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月18日
【發(fā)明者】王振, 任松鵬, 孫緒丁, 趙延霞, 王海蘋 申請人:山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司