一種注射用七葉皂苷鈉的分析檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種注射用七葉皂苷鈉的分析檢測方法，通過建立注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，全面綜合反映和控制注射用七葉皂苷鈉的整體質(zhì)量狀況。其包括以下步驟：（1）注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制備；（2）待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜的制備；（3）待測注射用七葉皂苷鈉質(zhì)量分析。其中，步驟（1）和步驟（2）中指紋圖譜制備的色譜條件為：色譜柱填充料為C18烷基硅烷鍵合硅膠，柱溫30℃，流動相由體積比為60：40～70：30的磷酸溶液—乙腈溶液組成，流動相pH值為1.5～2.5，進(jìn)樣量為20μl，紫外檢測波長為200nm～220nm。
【專利說明】一種注射用七葉皂苷鈉的分析檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種注射用七葉皂苷鈉的分析檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]七葉皂苷鈉是從娑羅子中提取所得的總皂苷，主要成分為七葉皂苷鈉A、B、C和D，還含有少量的七葉皂苷鈉E、F。目前，七葉皂苷鈉的檢測方法主要有三氯化鐵比色法和酸堿滴定法，其是對七葉皂苷鈉的總皂苷含量進(jìn)行測定，無法全面反映總皂苷中各成分的種類、數(shù)量和比例關(guān)系，產(chǎn)品質(zhì)量控制不夠全面。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]針對上述問題，本發(fā)明提供了一種注射用七葉皂苷鈉的分析檢測方法，通過建立注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，全面綜合反映和控制注射用七葉皂苷鈉的整體質(zhì)量狀況。
[0004]一種注射用七葉皂苷鈉的分析檢測方法，其特征在于:包括以下步驟:
(1)注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制備；
(2)待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜的制備；
(3)待測注射用七葉皂苷鈉質(zhì)量分析。
[0005]步驟(1)和步驟(2)中指紋圖譜制備的色譜條件為:色譜柱填充料為C18烷基硅烷鍵合硅膠，柱溫30°C，流動相由體積比為60:40~70:30的磷酸溶液一乙腈溶液組成，流動相pH值為1.5~2.5，進(jìn)樣量為20 μl，紫外檢測波長為200nm~220nm。
[0006]其進(jìn)一步特征在于:
步驟(1)中注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制備具體操作為:根據(jù)上述色譜條件，對若干批不同批次的注射用七葉皂苷鈉進(jìn)行檢測，對檢測所得指紋圖譜進(jìn)行分析比較，確定共有峰個數(shù)、出峰次序、相對保留時間和相對峰面積比值，共有峰共有6個，依次為E峰、F峰、A峰、B峰、C峰、D峰，在共有峰中，以B峰作為參照峰，各共有峰相對保留時間范圍為:A峰:0.830~0.850、B 峰:1、C 峰:1.288~1.316、D 峰:1.451 ~1.500,E 峰:0.530~0.577、F 峰:
0.610~0.652，各相對峰面積比值范圍為A峰:1.454~1.713、B峰:1、C峰:0.973~1.419、D峰:0.488~0.561、E 峰:0.047~0.088、F 峰:0.039~0.084。
[0007]所述步驟(3)中待測注射用七葉皂苷鈉質(zhì)量分析具體包括:①待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜所得共有峰個數(shù)、出峰次序與注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中的共有峰個數(shù)、出峰次序一致，②待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜所得相對保留時間、相對峰面積比值包含在注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相對保留時間、相對峰面積比值的范圍之內(nèi)，③待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜檢測結(jié)果顯示，理論板數(shù)按七葉皂苷鈉A計(jì)應(yīng)不低于5000，七葉皂苷鈉A、B分離度應(yīng)≥1.5。[0008]其更進(jìn)一步特征在于:
所述步驟(1)中用于制備注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對照品以及步驟(2)中用于制備待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜供試品的濃度為I~5mg/ml、溶劑為甲醇；
所述紫外檢測波長為210nm或215nm ；
所述流動相PH2.1~2.2，磷酸溶液一乙腈溶液體積比為67:33。
[0009]注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立能夠全面反映注射用七葉皂苷鈉總皂苷的各成分，通過待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜相關(guān)數(shù)據(jù)(即:共有峰數(shù)量、出峰次序、相對保留時間、相對峰面積比值)與注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相關(guān)參數(shù)進(jìn)行對比，從而快速、全面地對注射用七葉皂苷鈉中七葉皂苷鈉的各成分進(jìn)行質(zhì)量分析，確保注射用七葉皂苷鈉的產(chǎn)品質(zhì)量控制更加全面、穩(wěn)定。 【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
[0011]圖2為注射用七葉皂苷鈉(批號:120404)指紋圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0012]實(shí)施例中所用儀器、試劑、藥品:
高效液相色譜儀:Agilent 1200。
[0013]色譜柱:HypersilODS，250*4.6nm, 5 μ m。
[0014]乙臆:SpectrumChemical MFG Corp.,批號 3AL0038,色譜純。
[0015]甲醇:SpectrumChemical MFG Corp.,批號 ZY0542 ,色譜純。
[0016]磷酸:國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號T20110713，純度:分析純。
[0017]注射用七葉皂苷鈉:下述實(shí)施例所涉及的注射用七葉皂苷鈉均為自制的不同批號無菌凍干粉針。
[0018]注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜制備
流動相為乙腈-磷酸溶液(33:67)，pH為2.1，磷酸溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.42%，流速lml/min，檢測波長為220nm，色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，柱溫:30°C，進(jìn)樣量為2.5mg/ml, 20 μ I。
[0019]0.42%質(zhì)量分?jǐn)?shù)的磷酸溶液的配制:取85%磷酸5.5ml，用水稀釋至1000ml。
[0020]供試品溶液制備:取注射用七葉皂苷鈉適量，加甲醇溶解并稀釋制成每Iml含
2.5mg的溶液。
[0021]取20 μ I供試品溶液注入液相色譜儀,記錄色譜圖。
[0022]注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜如圖1，共有峰共有6個，其峰形、出峰次序如圖1所示，依次為E峰、F峰、A峰、B峰、C峰、D峰。
[0023]在共有峰中，以B峰作為參照峰，各共有峰相對保留時間范圍為:A峰:
0.830~0.850、B 峰:1、C 峰:1.288~1.316、D 峰:1.451 ~1.500、E 峰:0.530~0.577、F 峰:
0.610~0.652，各相對峰面積比值范圍為A峰:1.454~1.713、B峰:1、C峰:0.973~1.419、D峰:0.488~0.561、E 峰:0.047~0.088、F 峰:0.039~0.084。
[0024]理論板數(shù)按七葉皂苷鈉A計(jì)應(yīng)不低于5000，七葉皂苷鈉A、B分離度應(yīng)≥1.5。[0025]實(shí)施例1
色譜條件:流動相為乙腈-磷酸溶液(33:67)，pH為2.1，磷酸溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.42%，流速lml/min，檢測波長為220nm，色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，柱溫:30°C，進(jìn)樣量為 2.5mg/ml, 20 μ I。
[0026]供試品溶液制備:取注射用七葉皂苷鈉(批號:120404)適量，加甲醇溶解并稀釋制成每Iml含2.5mg的溶液。
[0027]取20 μ I供試品溶液注入液相色譜儀,記錄色譜圖。
[0028]待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜(圖2)和注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜(圖1)進(jìn)行比較，共有峰數(shù)量相同，共有6個共有峰，出峰次序相同，相對保留時間:Α峰:0.849、B峰:1、C 峰:1.288、D 峰:1.451、E 峰:0.576、F 峰:0.649，相對峰面積比值:A 峰:1.454、B峰:1、C峰:0.987、D峰:0.546、E峰:0.079、F峰:0.084，其相對保留時間、相對峰面積比值包含在注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相對保留時間、相對峰面積比值的范圍之內(nèi)，且理論板數(shù)按七葉皂苷鈉A計(jì)不低于5000，七葉皂苷鈉A、B分離度> 1.5，因此，待測注射用七葉皂苷鈉的各項(xiàng)有效成分的種類、數(shù)量和比例關(guān)系符合質(zhì)量要求。
[0029]實(shí)施例2
色譜條件:流動相為乙腈-磷酸溶液(30:70)，pH為2.5，:磷酸溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.42%，流速lml/min，檢測波長為200nm，色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，柱溫:30°C，進(jìn)樣量為 lmg/ml, 20 μ I。
[0030]供試品溶液制備:取注射用七葉皂苷鈉(批號:110102)適量，加甲醇溶解并稀釋制成每Iml含Img的溶液。
[0031]取20 μ I供試品溶液注入液相色譜儀,記錄色譜圖。
[0032]待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜和注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜(圖1)進(jìn)行比較，共有峰數(shù)量相同，共有6個峰，出峰次序也相同，相對保留時間:Α峰:0.843、B峰:1、C峰:1.289、D 峰:1.450、E 峰:0.575、F 峰:0.648，相對峰面積比值:A 峰:1.454、B 峰:1、C峰:0.986、D峰:0.547、E峰:0.086、F峰:0.065，其相對保留時間、相對峰面積比值包含在注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相對保留時間、相對峰面積比值的范圍之內(nèi)，并且理論板數(shù)按七葉皂苷鈉A計(jì)不低于5000，七葉皂苷鈉A、B分離度> 1.5，因此，待測注射用七葉皂苷鈉的各項(xiàng)有效成分的種類、數(shù)量和比例關(guān)系符合質(zhì)量要求。
[0033]實(shí)施例3
色譜條件:流動相為乙腈-磷酸溶液(40:60)，pH為1.5，磷酸溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.42%，流速lml/min，檢測波長為220nm，色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，柱溫:30°C，進(jìn)樣量為 5mg/ml, 20 μ I。
[0034]供試品溶液制備:取注射用七葉皂苷鈉(批號:120406)適量，加甲醇溶解并稀釋制成每Iml含5mg的溶液。
[0035]取20 μ I供試品溶液注入液相色譜儀,記錄色譜圖。
[0036]待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜和注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜(圖1)進(jìn)行比較，共有峰數(shù)量相同，共有6個峰，出峰次序亦相同，相對保留時間:Α峰:0.838、B峰:1、C峰:1.304、D 峰:1.456、E 峰:0.574、F 峰:0.630，相對峰面積比值:A 峰:1.521、B 峰:1、C峰:1.003,D峰:0.522,E峰:0.048、F峰:0.076，其相對保留時間、相對峰面積比值包含在注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相對保留時間、相對峰面積比值的范圍之內(nèi)，且理論板數(shù)按七葉皂苷鈉A計(jì)不低于5000，七葉皂苷鈉A、B分離度> 1.5，因此，待測注射用七葉皂苷鈉的各項(xiàng)有效成分的種類、數(shù)量和比例關(guān)系符合質(zhì)量要求。
[0037]實(shí)施例4
色譜條件:流動相為乙腈-磷酸溶液(25:50)，pH為2.2，磷酸溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.42%，流速lml/min，檢測波長為215nm，色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，柱溫:30°C，進(jìn)樣量為 2.5mg/ml, 20 μ I。
[0038]供試品溶液制備:取注射用七葉皂苷鈉(批號:120108)適量，加甲醇溶解并稀釋制成每Iml含2.5mg的溶液。
[0039]取20 μ I供試品溶液注入液相色譜儀,記錄色譜圖。
[0040]待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜和注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜(圖1)進(jìn)行比較，共有峰數(shù)量相同，共有6個峰，而且出峰次序也相同，相對保留時間:Α峰:0.843、B峰:1、C 峰:1.308、D 峰:1.457、E 峰:0.574、F 峰:0.637，相對峰面積比值:A 峰:1.518、B 峰:1、C峰:0.996、D峰:0.533、E峰:0.052、F峰:0.073，其相對保留時間、相對峰面積比值包含在注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相對保留時間、相對峰面積比值的范圍之內(nèi)，理論板數(shù)按七葉皂苷鈉A計(jì)不低于5000，七葉皂苷鈉A、B分離度> 1.5，因此，待測注射用七葉皂苷鈉的各項(xiàng)有效成分的種類、數(shù)量和比例關(guān)系符合質(zhì)量要求。
[0041]實(shí)施例5 本發(fā)明指紋圖譜檢測方法的方法學(xué)驗(yàn)證
1、重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批次的注射用七葉皂苷鈉(批號:110119)，按實(shí)施例1中的操作，平行制備5份供試品，采用實(shí)施例1中的色譜條件，分別進(jìn)樣，進(jìn)行分析。
[0042]以B峰的保留時間和峰面積作為參照，計(jì)算其他5個共有峰的相對保留時間(RRT)和相對峰面積(RA)，其結(jié)果見表1。
[0043]表1重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種注射用七葉皂苷鈉的分析檢測方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制備； (2)待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜的制備； (3)待測注射用七葉皂苷鈉質(zhì)量分析； 步驟(1)和步驟(2)中指紋圖譜制備的色譜條件為:色譜柱填充料為C18烷基硅烷鍵合硅膠，柱溫30°C，流動相由體積比為60:40~70:30的磷酸溶液一乙腈溶液組成，流動相pH值為1.5~2.5，進(jìn)樣量為20 μ 1，紫外檢測波長為200nm~220nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種注射用七葉皂苷鈉的分析檢測方法，其特征在于:步驟(O中注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制備具體操作為:根據(jù)上述色譜條件，對若干批不同批次的注射用七葉皂苷鈉進(jìn)行檢測，對檢測所得指紋圖譜進(jìn)行分析比較，確定共有峰個數(shù)、出峰次序、相對保留時間和相對峰面積比值，共有峰共有6個，依次為E峰、F峰、A峰、B峰、C峰、D峰，在共有峰中，以B峰作為參照峰，各共有峰相對保留時間范圍為:A峰:0.830~0.850、B 峰:1、C 峰:1.288~1.316、D 峰:1.451 ~1.500、E 峰:0.530~0.577、F 峰:0.610~0.652，各相對峰面積比值范圍為A峰:1.454~1.713、B峰:1、C峰:0.973~1.419、D峰:0.488~0.561、E 峰:0.047~0.088、F 峰:0.039~0.084。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種注射用七葉皂苷鈉的分析檢測方法，其特征在于:所述步驟(3)中待測注射用七葉皂苷鈉質(zhì)量分析具體包括:①待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜所得共有峰個數(shù)、出峰次序與注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中的共有峰個數(shù)、出峰次序一致；②待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜所得相對保留時間、相對峰面積比值包含在注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相對保留時間、相對峰面積比值的范圍之內(nèi)待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜檢測結(jié)果顯示理論板數(shù)按七葉皂苷鈉A計(jì)應(yīng)不低于5000，七葉皂苷鈉A、B分離度應(yīng)≥1.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一所述的一種注射用七葉皂苷鈉的分析檢測方法，其特征在于:所述步驟(1)中用于制備注射用七葉皂苷鈉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對照品以及步驟(2)中用于制備待測注射用七葉皂苷鈉指紋圖譜供試品的濃度為I~5mg/ml、溶劑為甲醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種注射用七葉皂苷鈉的分析檢測方法，其特征在于:所述紫外檢測波長為210nm或215nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求5任一所述的一種注射用七葉皂苷鈉的分析檢測方法，其特征在于:所述流動相PH2.1~2.2，磷酸溶液一乙腈溶液體積比為67:33。
【文檔編號】G01N30/02GK103616444SQ201310540009
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月5日
【發(fā)明者】劉騫 申請人:無錫凱夫制藥有限公司