硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)。本發(fā)明的硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用系統(tǒng)，包括硼酸親和整體柱固相微萃取單元、高壓液相色譜泵、高壓六通切換閥、高壓六通進(jìn)樣閥、定量環(huán)、進(jìn)樣針、廢液瓶、色譜柱和熒光檢測(cè)器等，通過硼酸親和整體柱固相微萃取單元和高效液相色譜聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜樣品中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)萃取、凈化、解吸和分析檢測(cè)的全過程在線。本發(fā)明結(jié)合了硼酸親和材料對(duì)順式二羥基化合物的高選擇性、高富集能力，硼酸親和整體柱的高穩(wěn)定性、良好通透性和高效液相色譜的高效分離能力，提高了分析的靈敏度、自動(dòng)化程度并縮短了分析時(shí)間，可有效用于生物樣品中痕量單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的分析檢測(cè)。
【專利說明】硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分析化學(xué)樣品前處理領(lǐng)域，具體涉及一種硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用系統(tǒng)、聯(lián)用方法及其應(yīng)用，適用于復(fù)雜樣品中痕量單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的在線預(yù)處理、萃取、解吸、分離和檢測(cè)。
【背景技術(shù)】
[0002]單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物在人體的神經(jīng)、心血管和內(nèi)分泌等組織系統(tǒng)中起著廣泛的調(diào)節(jié)作用，對(duì)情緒、情感、應(yīng)激行為和睡眠覺醒等生理活動(dòng)具有重要影響。MNTs含量的變化與人類多種疾病密切相關(guān)，是診斷嗜鉻細(xì)胞瘤、阿爾茨海默氏癥、唐氏綜合征、抑郁癥和帕金森等疾病的重要依據(jù)，其含量的準(zhǔn)確測(cè)定對(duì)于疾病診斷與控制、藥物開發(fā)與研究和神經(jīng)學(xué)基礎(chǔ)研究等具有重要意義。
[0003]生物樣品中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量低，且單胺類神經(jīng)遞質(zhì)本身熒光響應(yīng)和質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)不強(qiáng)，而生物樣本基體復(fù)雜，內(nèi)源干擾物質(zhì)多，因此其分析檢測(cè)存在極大的困難。選擇快速高效的樣品前處理方法，是建立高靈敏單胺類神經(jīng)遞質(zhì)分析方法的關(guān)鍵，也是當(dāng)前的瓶頸所在。目前單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的樣品前處理方法通常以離線的方式進(jìn)行，具體操作繁瑣冗長，人為誤差大，影響了分析檢測(cè)的靈敏度和重現(xiàn)性。在線樣品前處理技術(shù)不僅可以有效解決離線技術(shù)操作耗時(shí)的缺點(diǎn)，還可實(shí)現(xiàn)大體積進(jìn)樣，極大地提高分析檢測(cè)的靈敏度，同時(shí)自動(dòng)化操作可減少人為誤差，提高分析方法的準(zhǔn)確度和精密度。
[0004]硼酸親和材料是利用硼酸基團(tuán)的特異性反應(yīng)對(duì)順式二羥基化合物進(jìn)行分離、富集和純化的新型材料。由于單胺類神經(jīng)遞質(zhì)中去甲腎上腺素、腎上腺素和多巴胺均含有順式二羥基結(jié)構(gòu)，因此硼酸親和材料可以實(shí)現(xiàn)對(duì)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的選擇性萃取。
[0005]整體柱是通過反應(yīng)試劑原位聚合而得到的棒狀整體，具有高容量、良好滲透性和低傳質(zhì)阻力的特點(diǎn)，是在線樣品前處理技術(shù)中的重要萃取材料之一。硼酸親和整體柱兼具硼酸親和材料與整體柱的優(yōu)點(diǎn)，具有快速、高效和高選擇性的特點(diǎn)，可以很好地滿足生物樣品前處理的要求。目前，尚無以硼酸整體柱為萃取單元，與高效液相色譜聯(lián)用，在線同時(shí)分析四種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明旨在針對(duì)生物樣品中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量低，且單胺類神經(jīng)遞質(zhì)本身熒光響應(yīng)和質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)不強(qiáng)，而生物樣本基體復(fù)雜，內(nèi)源干擾物質(zhì)多，導(dǎo)致其分析檢測(cè)存在極大的困難的問題，設(shè)計(jì)一種硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用系統(tǒng)，結(jié)合硼酸親和整體柱的高選擇性、高富集能力，以及高效液相色譜的高分離能力，達(dá)到去除生物樣品中的雜質(zhì)，選擇性富集痕量單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，最終實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確定量的目的。
[0007]本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線分析生物樣品中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的方法。
[0008]本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用系統(tǒng)在檢測(cè)生物樣品中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)方面的應(yīng)用。
[0009]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0010]一種硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)，其特征在于，包括固相微萃取單元、第一高壓液相泵、第二高壓液相泵、高壓六通進(jìn)樣閥、高壓六通切換閥、定量環(huán)、進(jìn)樣針、廢液瓶、色譜柱和熒光檢測(cè)器，所述固相微萃取單元是硼酸親和整體柱，所述硼酸親和整體柱的一端與高壓六通進(jìn)樣閥連接，另一端與高壓六通切換閥連接；第一高壓液相泵的輸出端與高壓六通進(jìn)樣閥連接，定量環(huán)的兩端連接于高壓六通進(jìn)樣閥上；所述廢液瓶與高壓六通切換閥連接，第二高壓液相泵的輸出端與高壓六通切換閥連接，色譜柱的一端與高壓六通切換閥連接，另一端連接于熒光檢測(cè)器；所述的高壓六通進(jìn)樣閥和所述高壓六通切換閥都包括兩個(gè)狀態(tài)，分別是載樣檔和進(jìn)樣檔，當(dāng)所述高壓六通進(jìn)樣閥位于進(jìn)樣檔狀態(tài)時(shí)，所述第一高壓液相泵、定量環(huán)與所述硼酸親和整體柱相連通；當(dāng)所述高壓六通進(jìn)樣閥位于載樣檔狀態(tài)時(shí)，所述定量環(huán)與所述硼酸親和整體柱相隔離，所述第一高壓液相泵與所述硼酸親和整體柱相連通；當(dāng)所述高壓六通切換閥位于進(jìn)樣檔狀態(tài)時(shí)，所述硼酸親和整體柱與所述的色譜柱相連通；當(dāng)所述高壓六通切換閥位于載樣檔狀態(tài)時(shí)，所述硼酸親和整體柱與所述的色譜柱相隔離，所述第二高壓液相泵與所述色譜柱相連通。
[0011]進(jìn)一步地，所述硼酸親和整體柱由以下步驟的制備方法得到:第一，將不銹鋼毛細(xì)柱浸泡于鹽酸溶液中I小時(shí)后，用超純水清洗，干燥備用；第二，將正丙醇和1，4-丁二醇混合作為溶劑和致孔劑，然后加入4-乙烯基苯硼酸、甲叉雙丙烯酰胺和偶氮二異丁腈，超聲脫氣，通氮?dú)獬酰詈髮⒒旌先芤鹤⑷虢?jīng)第一步處理后的不銹鋼毛細(xì)管柱，用硅橡膠堵住毛細(xì)管柱兩端后進(jìn)行熱引發(fā)聚合反應(yīng)；第三，將第二步合成的硼酸親和整體柱連接到一個(gè)高壓液相泵上，用甲醇沖洗整體柱，除去致孔劑和未反應(yīng)溶劑。
[0012]進(jìn)一步地，所述的硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)，其特征在于:還包括裝有攜帶液的攜帶液試劑瓶和裝有液相色譜流動(dòng)相的流動(dòng)相試劑瓶，所述攜帶液試劑瓶與第一高壓液相泵的輸入端連接，所述流動(dòng)相試劑瓶與第二高壓液相泵的輸入端連接。
[0013]進(jìn)一步地，所述流動(dòng)相試劑瓶有兩個(gè)，分別用于容納液相色譜流動(dòng)相溶質(zhì)和液相色譜流動(dòng)相溶劑。
[0014]所述的硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)的聯(lián)用方法，其特征在于包括以下步驟:
[0015]第一步，使所述高壓六通進(jìn)樣閥位于載樣檔狀態(tài)，且所述高壓六通切換閥位于載樣檔狀態(tài)，且用進(jìn)樣針將樣品溶液打入定量環(huán)中，開啟第一高壓液相泵和第二高壓液相泵，所述第一高壓液相泵驅(qū)動(dòng)攜帶液平衡硼酸親和整體柱，第二高壓液相泵驅(qū)動(dòng)液相色譜流動(dòng)相平衡色譜柱；
[0016]第二步，使所述高壓六通進(jìn)樣閥位于進(jìn)樣檔狀態(tài)，且所述高壓六通切換閥仍位于載樣檔狀態(tài)，攜帶液將定量環(huán)中的樣品溶液輸送至硼酸親和整體柱進(jìn)行固相微萃?。?br> [0017]第三步，使所述高壓六通進(jìn)樣閥位于載樣檔狀態(tài)，且所述高壓六通切換閥仍位于載樣檔狀態(tài)，攜帶液將硼酸親和整體柱中多余的樣品溶液除去送入廢液瓶，凈化整體柱，同時(shí)用進(jìn)樣針向定量環(huán)中注入洗脫溶劑；
[0018]第四步，暫停所述第二高壓液相泵，且使所述高壓六通進(jìn)樣閥位于進(jìn)樣檔狀態(tài)，所述高壓六通切換閥切換為進(jìn)樣檔狀態(tài)，攜帶液將洗脫溶劑從定量環(huán)輸送至硼酸親和整體柱，將目標(biāo)分析物從整體柱中解吸下來進(jìn)入色譜柱柱頭；
[0019]第五步，使所述高壓六通切換閥切換為載樣檔狀態(tài)，并開啟所述第二高壓液相泵，運(yùn)行梯度洗脫程序，進(jìn)行梯度分析檢測(cè)。
[0020]所述的硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)可應(yīng)用于檢測(cè)生物樣品中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)。
[0021]借由上述技術(shù)方案，本發(fā)明硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)、聯(lián)用方法，及其在分析生物樣品中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)方面的應(yīng)用，優(yōu)勢(shì)在于:
[0022](I)硼酸親和整體柱可對(duì)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行選擇性萃取，有效除去其他內(nèi)源性物質(zhì)的對(duì)檢測(cè)的干擾；
[0023](2)在線操作，可實(shí)現(xiàn)大體積進(jìn)樣，將全部解吸液注入色譜中，極大地提高了檢測(cè)靈敏；
[0024](3)集萃取、凈化、解吸和分離于一體，減少了手工操作，簡(jiǎn)化了樣品前處理過程，提高了分析的準(zhǔn)確度和精密度；
[0025](4)系統(tǒng)簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)，只需在高效液相色譜儀器的基礎(chǔ)上添加高壓六通閥(高壓六通進(jìn)樣閥和高壓六通切換閥)，定量環(huán)和固相微萃取單元。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0026]圖1為本發(fā)明提供的硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用系統(tǒng)裝置圖，其中:1:第一高壓液相泵；2:攜帶液試劑瓶；3:定量環(huán)；4:高壓六通進(jìn)樣閥；5:硼酸親和整體柱；6:高壓六通切換閥；7:廢液瓶；8:進(jìn)樣針；9:第二高壓液相泵；10:流動(dòng)相試劑瓶；11:色譜柱；12:熒光檢測(cè)器。
[0027]圖2為硼酸親和整體柱對(duì)四種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)富集量的比較。
[0028]圖3為含有四種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和尿樣的液相色譜圖。其中:1:去甲腎上腺素；2:腎上腺素；3:多巴胺；4:5-羥色胺；a:2mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(上述四種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的濃度均為2mg/L)直接進(jìn)樣所得色譜圖；b:尿液樣品直接進(jìn)樣所得色譜圖；c:尿液樣品經(jīng)硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用系統(tǒng)所得色譜圖；d:加標(biāo)濃度為10 μ g/L的尿液樣品經(jīng)硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用系統(tǒng)所得色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0029]為更進(jìn)一步闡述本發(fā)明以達(dá)成預(yù)定發(fā)明目的所采取的技術(shù)手段及功效，以下結(jié)合實(shí)施例和附圖，對(duì)本發(fā)明硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線分析生物樣品中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的特征及其【具體實(shí)施方式】，詳細(xì)說明如下。
[0030]如圖1所示，為本發(fā)明提供的硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用系統(tǒng)裝置圖。將高壓六通進(jìn)樣閥4和高壓六通切換閥6按實(shí)線的連通狀態(tài)記為載樣檔(Load)，按虛線的連通狀態(tài)記為進(jìn)樣檔(Inject)。
[0031]在第一高壓液相泵I的驅(qū)動(dòng)下，位于攜帶液試劑瓶2內(nèi)的攜帶液經(jīng)高壓六通進(jìn)樣閥4上的定量環(huán)3，將環(huán)中溶液(樣品溶液、洗脫溶劑或凈化溶液)輸送到硼酸親和整體柱5中，進(jìn)行萃取、洗脫或凈化的操作。在第二高壓液相泵9的驅(qū)動(dòng)下，位于流動(dòng)相試劑瓶10內(nèi)的液相色譜流動(dòng)相經(jīng)高壓六通切換閥6，進(jìn)入色譜柱11和檢測(cè)器12進(jìn)行分析檢測(cè)。
[0032]應(yīng)用實(shí)例:采用硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用系統(tǒng)在線分析尿樣中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)
[0033]主要儀器與試劑:LC_20A高效液相色譜儀，RF-10AXL熒光檢測(cè)器，WatersAllanLisli T3色譜柱(150mmX4.60mm 1.D., 5 μ m);四種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)(去甲腎上腺素、腎上腺素、多巴胺、5-羥色胺)標(biāo)準(zhǔn)溶液；初始流動(dòng)相為5%乙腈，進(jìn)樣后保持lmin，然后在14min內(nèi)提高至30%,最后30%保持5min。流速1.0mL/min。
[0034]硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用系統(tǒng)如圖1所示，操作步驟及相應(yīng)閥的位置如表1所示，每步具體操作如下:I )6mL待測(cè)液通過進(jìn)樣針8注入高壓六通進(jìn)樣閥4的定量環(huán)3，開啟第一高壓液相泵I和第二高壓液相泵9，攜帶液(超純水)平衡硼酸親和整體柱，5%乙腈平衡色譜柱11 ;2)在第一高壓液相泵I的驅(qū)動(dòng)下，攜帶液以1.0mL/min的流速將樣品從定量環(huán)3中推入硼酸親和整體柱5進(jìn)行萃取，萃取后溶液經(jīng)高壓六通切換閥6進(jìn)入廢液瓶7中；3)第一高壓液相泵I將攜帶液泵入硼酸親和整體柱5凈化，同時(shí)洗脫溶劑(0.5%甲酸水溶液)通過進(jìn)樣針8注入高壓六通進(jìn)樣閥4的定量環(huán)3 ;4)暫停第二高壓液相泵9，在第一高壓液相泵I的驅(qū)動(dòng)下，攜帶液以1.0mL/min的流速將洗脫溶劑從定量環(huán)3中推入硼酸親和整體柱5進(jìn)行解吸，洗脫溶劑全部進(jìn)入色譜柱11的柱頭；5)開啟第二高壓液相泵9，運(yùn)行液相色譜梯度洗脫程序，進(jìn)行梯度分離檢測(cè)。
[0035]表1硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用系統(tǒng)的分析步驟及相應(yīng)閥的狀態(tài)
【權(quán)利要求】
1.一種硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)，其特征在于，包括固相微萃取單元、第一高壓液相泵、第二高壓液相泵、高壓六通進(jìn)樣閥、高壓六通切換閥、定量環(huán)、進(jìn)樣針、廢液瓶、色譜柱和熒光檢測(cè)器，所述固相微萃取單元是硼酸親和整體柱，所述硼酸親和整體柱的一端與高壓六通進(jìn)樣閥連接，另一端與高壓六通切換閥連接；第一高壓液相泵的輸出端與高壓六通進(jìn)樣閥連接，定量環(huán)的兩端連接于高壓六通進(jìn)樣閥上；所述廢液瓶與高壓六通切換閥連接，第二高壓液相泵的輸出端與高壓六通切換閥連接，色譜柱的一端與高壓六通切換閥連接，另一端連接于熒光檢測(cè)器；所述的高壓六通進(jìn)樣閥和所述高壓六通切換閥都包括兩個(gè)狀態(tài)，分別是載樣檔和進(jìn)樣檔，當(dāng)所述高壓六通進(jìn)樣閥位于進(jìn)樣檔狀態(tài)時(shí)，所述第一高壓液相泵、定量環(huán)、所硼酸親和整體柱相連通；當(dāng)所述高壓六通進(jìn)樣閥位于載樣檔狀態(tài)時(shí)，所述定量環(huán)與所述硼酸親和整體柱相隔離，所述第一高壓液相泵與所述硼酸親和整體柱相連通；當(dāng)所述高壓六通切換閥位于進(jìn)樣檔狀態(tài)時(shí)，所述硼酸親和整體柱與所述的色譜柱相連通；當(dāng)所述高壓六通切換閥位于載樣檔狀態(tài)時(shí)，所述硼酸親和整體柱與所述的色譜柱相隔離，所述第二高壓液相泵與所述色譜柱相連通。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)，其特征在于，所述硼酸親和整體柱由以下步驟的制備方法得到:第一，將不銹鋼毛細(xì)柱浸泡于鹽酸溶液中I小時(shí)后，用超純水清洗，干燥備用；第二，將正丙醇和1，4-丁二醇混合作為溶劑和致孔劑，然后加入4-乙烯基苯硼酸、甲叉雙丙烯酰胺和偶氮二異丁腈，超聲脫氣，通氮?dú)獬?，最后將混合溶液注入?jīng)第一步處理后的不銹鋼毛細(xì)管柱，用硅橡膠堵住毛細(xì)管柱兩端后進(jìn)行熱引發(fā)聚合反應(yīng)；第三，將第二步合成的硼酸親和整體柱連接到一個(gè)高壓液相泵上，用甲醇沖洗整體柱，除去致孔劑和未反應(yīng)溶劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)，其特征在于:還包括裝有攜帶液的攜帶液試劑瓶和裝有液相色譜流動(dòng)相的流動(dòng)相試劑瓶，所述攜帶液試劑瓶與第一高壓液相泵的輸入端連接，所述流動(dòng)相試劑瓶與第二高壓液相泵的輸入端連接。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)，其特征在于，所述流動(dòng)相試劑瓶 有兩個(gè)，分別用于容納液相色譜流動(dòng)相溶質(zhì)和液相色譜流動(dòng)相溶劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)的聯(lián)用方法，其特征在于包括以下步驟: 第一步，使所述高壓六通進(jìn)樣閥位于載樣檔狀態(tài)，且所述高壓六通切換閥位于載樣檔狀態(tài)，且用進(jìn)樣針將樣品溶液打入定量環(huán)中，開啟第一高壓液相泵和第二高壓液相泵，所述第一高壓液相泵驅(qū)動(dòng)攜帶液平衡硼酸親和整體柱，第二高壓液相泵驅(qū)動(dòng)液相色譜流動(dòng)相平衡色譜柱； 第二步，使所述高壓六通進(jìn)樣閥位于進(jìn)樣檔狀態(tài)，且所述高壓六通切換閥仍位于載樣檔狀態(tài)，攜帶液將定量環(huán)中的樣品溶液輸送至硼酸親和整體柱進(jìn)行固相微萃??； 第三步，使所述高壓六通進(jìn)樣閥位于載樣檔狀態(tài)，且所述高壓六通切換閥仍位于載樣檔狀態(tài)，攜帶液將硼酸親和整體柱中多余的樣品溶液除去送入廢液瓶，凈化整體柱，同時(shí)用進(jìn)樣針向定量環(huán)中注入洗脫溶劑； 第四步，暫停所述第二高壓液相泵，且使所述高壓六通進(jìn)樣閥位于進(jìn)樣檔狀態(tài)，所述高壓六通切換閥切換為進(jìn)樣檔狀態(tài)，攜帶液將洗脫溶劑從定量環(huán)輸送至硼酸親和整體柱，將目標(biāo)分析物從整體柱中解吸下來進(jìn)入色譜柱柱頭； 第五步，使所述高壓六通切換閥切換為載樣檔狀態(tài)，并開啟所述第二高壓液相泵，運(yùn)行梯度洗脫程序，進(jìn)行梯度分析檢測(cè)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硼酸親和整體柱固相微萃取-高效液相色譜在線聯(lián)用系統(tǒng)在檢測(cè)生物樣品中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N30/08GK103558320SQ201310582720
【公開日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月19日
【發(fā)明者】李攻科, 楊曉婷, 胡玉斐 申請(qǐng)人:中山大學(xué)