一種生物質(zhì)材料油脂的提取方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種生物質(zhì)材料油脂的提取方法及其應(yīng)用。本發(fā)明生物質(zhì)材料油脂的提取方法采取高滲透性的DMSO-甲醇強(qiáng)極性溶劑在溫和條件下破壞細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞壁，再用弱極性的正己烷/乙醚溶劑系統(tǒng)對(duì)胞內(nèi)脂肪體中的甘油酯等中性油脂進(jìn)行提取。本發(fā)明生物質(zhì)材料油脂的提取方法可用于分析生物質(zhì)材料總脂含量和脂肪酸組成。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單快速，條件溫和，環(huán)境壓力小，提取率高，其中細(xì)胞破壁率、油脂萃取率均可達(dá)99%以上，提取油脂過程無酸敗、脂質(zhì)氧化發(fā)生，提取獲得的總脂能較好地維持其在生物材料中原始組分和結(jié)構(gòu)，可為后續(xù)的脂肪組學(xué)及脂肪酸組分的解析提供高品質(zhì)油脂材料。該方法對(duì)總脂含量和脂肪酸組分分析的重現(xiàn)性好，可靠性高。
【專利說明】一種生物質(zhì)材料油脂的提取方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物質(zhì)材料油脂的提取方法及該方法在生物質(zhì)材料總脂含量和 脂肪酸組成分析中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著全球經(jīng)濟(jì)發(fā)展和人口增長(zhǎng)，油脂與人類的關(guān)系越來越密切，無論是作為生物 柴油的原料還是加工成為保健食品，油脂都具有至關(guān)重要的作用。目前，油脂的主要生物 材料來源仍然是植物如油菜、棕櫚樹、橄欖、芝麻科、豆科、棉科、花生科等，以及動(dòng)物脂肪， 但是這種傳統(tǒng)的油脂來源已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人類食用、工業(yè)使用等需求因此尋求成本低、 來源廣以及成分好的油脂原料是目前油脂科學(xué)相關(guān)研究的重要領(lǐng)域之一(孫珊，鄭立，韓笑 天.微藻油脂含量和組分及影響因子的研究[J].海洋科學(xué)，2009，33 (12): 15-16)。
[0003]近年來，微藻、真菌等單細(xì)胞生物，能在通過光合自養(yǎng)或者光合異養(yǎng)在細(xì)胞內(nèi)大量 合成油脂并以脂肪體和油滴的形式儲(chǔ)存于細(xì)胞內(nèi)。通常合成儲(chǔ)存于細(xì)胞內(nèi)的油脂含量為細(xì) 胞干重的 20%-70% (Li, Y.Zhao, Z.Bai, F.Enzyme Microb.Technol.2007，41:312-317)，其 中，有些生物體如隱甲藻、裂殖壺菌、高山被孢霉菌、菱形藻等生物體合成油脂50%以上由 人體必需多不飽和脂肪酸如DHA (二十二碳六烯酸)、EPA (二十碳五烯酸)、AA (二十碳四烯 酸)等組成。因此，篩選和選育高產(chǎn)油或高產(chǎn)高值活性產(chǎn)物油脂的單細(xì)胞生物種源在近年來 受到及其廣泛的關(guān)注。尤其是近年來隨著微藻生物能源的快速發(fā)展，選育獲得優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)油 微藻及其它產(chǎn)油微生物已經(jīng)是亟待攻克的科學(xué)和技術(shù)難題。
[0004]由于微藻、真菌如酵母、裂殖壺菌等單細(xì)胞生物在油脂積累后常形成堅(jiān)硬的細(xì)胞 壁，傳統(tǒng)用于魚類等動(dòng)物組織樣品總脂提取和分析的方法，因無法有效破碎細(xì)胞壁，很難有 效直接應(yīng)用于厚壁單細(xì)胞產(chǎn)油生物體的油脂提取。
[0005]目前對(duì)厚壁單細(xì)胞產(chǎn)油生物體油脂的提取方法主要包括機(jī)械破壁處理后 (Matthews R F, Braddock R J.Food Technology, 1987, 41:57-61)米用超臨界萃取 法(CN1015500078A)、或者直接借鑒傳統(tǒng)用于魚類組織樣品總脂提取的高毒有機(jī)溶劑 萃 取 法(Bligh E G, Dyer W J.A rapid method of total lipid extraction and purification [J].Can J Biochem Physiol, 1959，37:911-917)。上述依賴于機(jī)械破壁后的 溶劑提取方法首先因機(jī)械破壁效率不高(通常小于70%)而導(dǎo)致后續(xù)總脂提取不完全，進(jìn)而 大大低估了總脂的含量；其次，不同微藻和菌體細(xì)胞壁的生物質(zhì)組成差異較大，堅(jiān)固程度也 不一，很難通過一個(gè)固定的操作模式達(dá)到對(duì)成千上萬種生物細(xì)胞的普適性；再次機(jī)械破壁 往往伴隨著超聲、高壓、高溫等極端操作條件，提取油脂過程易導(dǎo)致脂質(zhì)氧化、酸敗等，這對(duì) 后續(xù)以總脂含量、脂肪組學(xué)(脂質(zhì)的組成)、高值產(chǎn)物(多不飽和脂肪酸含量)為主導(dǎo)的篩選 參數(shù)會(huì)造成嚴(yán)重影響。此外，直接采用氯仿甲醇等高毒有機(jī)溶劑的直接提取方法因無法有 效破碎細(xì)胞壁，而對(duì)微藻和真菌細(xì)胞油脂提取效率極低。最后，索氏抽提法提取溫度較高， 容易引起不飽和脂肪酸的氧化、酸敗問題，影響后續(xù)篩選。氯仿等高毒有機(jī)溶劑在操作過程 中對(duì)操作人員和環(huán)境也將構(gòu)成安全隱患。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種生物質(zhì)材料油脂的提取方法。
[0007]本發(fā)明的目的還在于提供上述生物質(zhì)材料油脂的提取方法在生物質(zhì)材料總脂含量和脂肪酸組成分析中的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明采用低毒性的雙溶劑系統(tǒng)在溫和條件下進(jìn)行總脂的破壁提取，減小環(huán)境危害，優(yōu)化工藝過程，避免提取過程油脂酸敗、氧化的發(fā)生，提高提取效率，再結(jié)合氣相檢測(cè)技術(shù)，精確解析脂肪酸的組成。
[0009]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0010]一種生物質(zhì)材料油脂的提取方法，包含如下步驟:將生物質(zhì)材料加入到甲醇和DMSO的混合溶劑中水浴加熱破壁，離心收集上層油相；往離心的沉淀中加入親脂性的有機(jī)溶劑水浴加熱萃取油脂，離心收集上層油相，油脂在上層油相中。
[0011]所述的生物質(zhì)材料不限于產(chǎn)油單細(xì)胞生物，還包括產(chǎn)油動(dòng)植物細(xì)胞、組織和器官。其中產(chǎn)油單細(xì)胞生物包括但不限于:酵母、霉菌、細(xì)菌和微藻等；例如:真菌中常見的產(chǎn)油微生物有:淺白色隱球酵母(Cryptococus albidus)、彎隱球酵母(Cryptococus albidum)、斯達(dá)氏油脂酵母(Lipomyces starkeyi)、類酵母紅冬抱(Rhodosporidium torulqides)等；常見的產(chǎn)油霉菌有:土霉菌(Asoergullus terreus)、紫癜麥角菌(Claviceps purpurea)、高梁裙抱黑粉菌(Tolyposporium ehrenbergii)、高山被抱霉(Mortierella alpina)、深黃被抱霉(Mortierella isabellina)等。產(chǎn)油細(xì)菌有:棒狀桿菌(Corynebacterium)、諾卡氏菌(Nocardia)、分枝桿菌(Mycobacterium)等。產(chǎn)油微藻有:小球藻(Chlorella sp.)、球等邊金藻(Isochrysis galbana)、球等鞭三角褐指藻(Phaeodactylumtric ornutum)、裂殖壺菌(Schizochytrium Iimacinum)、隱甲藻(Crypthecodinium cohnii)等。產(chǎn)油動(dòng)植物細(xì)胞、組織和器官包括高等植物種子和其它組織，水生植物的種子和其它組織，動(dòng)物細(xì)胞、組織和器官。
[0012]所述的甲醇和DMSO的混合溶劑中甲醇與DMSO的體積比優(yōu)選為5?10:1。
[0013]所述的親脂性的有機(jī)溶劑優(yōu)選為正己烷與乙醚按體積比0.5?2:1組成的混合溶劑。
[0014]所述的水浴加熱破壁和水浴加熱萃取油脂的條件均優(yōu)選為45?60°C水浴加熱10?40分鐘。為了提高破壁效率，可在水浴加熱的過程中增加不斷連續(xù)攪拌的操作。
[0015]上述生物質(zhì)材料油脂的提取方法在生物質(zhì)材料總脂含量和脂肪酸組成分析中的應(yīng)用。
[0016]一種生物質(zhì)材料總脂含量的分析方法，包括如下步驟:
[0017](I)對(duì)待測(cè)定生物質(zhì)材料進(jìn)行冷凍干燥處理；準(zhǔn)確稱取一定量生物質(zhì)材料；
[0018](2)加甲醇和DMSO的混合溶劑水浴加熱破壁，離心，收集上層油相；
[0019](3)收集離心的沉淀，加入親脂性的有機(jī)溶劑水浴加熱萃取油脂，離心收集上層油相；
[0020](4)合并上述收集的油相，水洗，離心，收集上層油相；
[0021](5)下層水相用有機(jī)溶劑萃取，離心，收集上層油相；[0022](6)合并油相并進(jìn)行濃縮處理，獲得總脂，計(jì)算總脂含量。
[0023]步驟(5)中所述的有機(jī)溶劑優(yōu)選為正己烷或石油醚。
[0024]步驟(6)中所述的濃縮處理的方法優(yōu)選為用氮?dú)獯蹈?、真空離心干燥或其它小體 積濃縮方法，并冷凍干燥除去油脂中的痕量水。
[0025]優(yōu)選的，所述的生物質(zhì)材料總脂含量的分析方法，包括如下步驟:
[0026]( I)對(duì)待測(cè)定生物質(zhì)材料進(jìn)行冷凍干燥處理；準(zhǔn)確稱取冷凍干燥后的生物質(zhì)材料 100?200mg (總脂含量在20% (w/w)以上的，為使總脂含量在60?120mg，需要適當(dāng)增加 或減少待測(cè)物質(zhì)的用量);
[0027](2)加2?IOmL甲醇與DMSO以體積比5?10:1組成的混合溶劑45?60°C水浴 加熱10?40分鐘破壁，離心，收集上層油相；
[0028](3)重復(fù)步驟(2)，將離心的沉淀用甲醇與DMSO的混合溶劑水浴加熱破壁I?5 次，收集上層油相；
[0029](4)收集離心的沉淀，加入2?IOmL正己烷與乙醚以體積比0.5?2:1組成的混 合溶劑45?60°C水浴加熱10?40分鐘萃取油脂，離心收集上層油相；
[0030](5)重復(fù)步驟(4)，將離心的沉淀用正己烷與乙醚的混合溶劑水浴加熱萃取油脂 I?5次，收集上層油相；
[0031](6)合并上述收集的油相，水洗，離心，收集上層油相；
[0032](7)下層水相用正己烷或石油醚萃取，離心，收集上層油相；
[0033](8)重復(fù)步驟(7) I?3次，收集上層油相；
[0034](9)合并油相，用氮?dú)獯蹈伞⒄婵针x心干燥或其它小體積濃縮方法進(jìn)行油脂濃縮處 理，再用冷凍干燥的方法除去油脂中的痕量水，獲得總脂，計(jì)算總脂含量。
[0035]一種生物質(zhì)材料總脂脂肪酸組成的分析方法，包含如下步驟:
[0036](I)使用上述方法獲得總脂后，用有機(jī)溶劑配制一定濃度的總脂溶液；
[0037](2)將總脂溶液用氮?dú)獯蹈珊筮M(jìn)行甲酯化，萃取甲酯化生成的脂肪酸甲酯；
[0038](3)氣相檢測(cè)分析脂肪酸甲酯組成及含量。
[0039]步驟(I)中所述的有機(jī)溶劑優(yōu)選為正己烷或石油醚，所述的總脂溶液的濃度優(yōu)選 為 10 ?30mg/mL。
[0040]步驟(2)優(yōu)選為:取50?100 ii L濃度為10?30mg/mL總脂溶液，氮?dú)獯蹈珊?，力?br> 0.5?2mL濃度為0.1?Imol/mL的KOH-甲醇溶液，40?70°C水浴反應(yīng)10?40min ;待冷 卻到室溫，加0.5?2mL濃度為14%的BF3-甲醇溶液，45?65°C水浴反應(yīng)5?20min ;待冷 卻到室溫，加0.5?2mL飽和食鹽水和0.5?2mL正己燒或石油醚萃取脂肪酸甲酯。
[0041]步驟(3)中所述的氣相檢測(cè)的方法優(yōu)選為:色譜柱:毛細(xì)管柱HP-88 (60mX250umX0.2um)或類似固定相的毛細(xì)管氣相色譜柱；載氣:高純度N2 ;柱流速:
1.5mL/min ;尾吹流速:25mL/min ；H2 流速:30mL/min ;空氣流速:400mL/min ;分流比:20:1 ； 汽化室溫度:240°C ；，檢測(cè)器溫度:240°C ;色譜柱梯度升溫:初始溫度為100°C，保持5min， 以 4°C /min 升至 240°C,保持 IOmin0
[0042]本發(fā)明基于“相似相溶”原理，細(xì)胞體與雙溶劑充分混合接觸時(shí)，極性溶劑甲醇、 DMSO會(huì)溶解藻細(xì)胞的極性脂如磷脂、糖脂、脂蛋白、脂多糖等成分，從而破壞極性脂質(zhì)與蛋 白質(zhì)分子間的氫鍵和靜電作用，使非極性溶劑正己烷進(jìn)入細(xì)胞并溶解胞內(nèi)疏水性的脂肪體以及組成脂肪體或脂滴的中性脂成分，并且由于使用的試劑溫和，不會(huì)使提取出的脂類物質(zhì)成分改變，符合多不飽和脂肪酸和脂肪組學(xué)樣品制備提取要求。充分萃取后，在體系中加入水，極性溶劑即溶于水而與含油脂的非極性溶劑分層，后又用非極性溶劑正己烷洗滌油脂層I?3次，使油脂萃取更加完全，并減少油脂中的非油膠質(zhì)等雜質(zhì)，從而提高了總脂和脂肪酸測(cè)定的準(zhǔn)確度。
[0043]本發(fā)明在用有機(jī)溶劑破壁提取的過程中，加入加熱攪拌的步驟，增大破壁剪切力，提高破壁率和提取率。其中水浴溫度不得高于有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)，本發(fā)明水浴溫度45?60。。。加熱攪拌時(shí)間10?40分鐘。
[0044]本發(fā)明在油脂甲酯化步驟中，先在KOH-甲醇溶液中發(fā)生皂化反應(yīng)，再用BF3催化脂肪酸甲酯化，整個(gè)反應(yīng)過程均在45?65°C水浴中進(jìn)行，以使反應(yīng)完全。
[0045]本發(fā)明在油脂檢測(cè)過程中，使用操作簡(jiǎn)單，環(huán)境危害小，檢測(cè)限高的氣相色譜準(zhǔn)確測(cè)定油脂的組成及含量。
[0046]本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點(diǎn)和效果:
[0047]本發(fā)明基于對(duì)微藻和菌體等生物體細(xì)胞壁的深入研究，認(rèn)識(shí)細(xì)胞壁生物質(zhì)組成的基礎(chǔ)上，創(chuàng)造性的提出了以高滲透性的DMSO-甲醇強(qiáng)極性溶劑在溫和條件下先行破壞細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞壁，在細(xì)胞壁和細(xì)胞膜上溶解或者部分溶解細(xì)胞膜上的極性磷脂和糖脂層，大大改善和提高了細(xì)胞膜和細(xì)胞壁的通透性。然后改用弱極性的正己烷/乙醚溶劑系統(tǒng)對(duì)胞內(nèi)脂肪體中的甘油酯等中性油脂進(jìn)行提取。相比機(jī)械破壁，該雙溶劑提取系統(tǒng)可大大提高細(xì)胞壁的破碎效率。另外，正己烷/乙醚及甲醇等溶劑和具有神經(jīng)系統(tǒng)劇毒性的氯仿相比，大大改善了提取方法的安全性和可操作性。提取油脂過程無酸敗、脂質(zhì)氧化發(fā)生，提取獲得的總脂能較好地維持其在生物材料中原始組分和結(jié)構(gòu)，可為后續(xù)的脂肪組學(xué)及脂肪酸組分的解析提供高品質(zhì)油脂材料。
[0048]快捷高效的提取方法可實(shí)現(xiàn)對(duì)總脂含量的快速測(cè)定，結(jié)合氣相色譜法對(duì)甲酯化的總脂進(jìn)行測(cè)定，可達(dá)到快速篩選單細(xì)胞生物體中總脂含量和脂肪酸組成信息的目的。
[0049]綜上所述，采用本發(fā)明的提取方法分析生物質(zhì)材料總脂含量和脂肪酸組成，相比于已有傳統(tǒng)的方法，細(xì)胞的破壁率和浸提率更高(可達(dá)99%以上)，提取條件更簡(jiǎn)單溫和，使用溶劑毒性低、對(duì)環(huán)境更友好，是目前成本較低，提取效率較高并最為準(zhǔn)確的方法。采用本發(fā)明的總脂和脂肪酸的檢測(cè)方法，操作更簡(jiǎn)單高效，可實(shí)現(xiàn)對(duì)單細(xì)胞厚壁微藻或微生物總脂和高值多不飽和脂肪酸的快速篩選。該方法對(duì)總脂和脂肪酸組分分析的重現(xiàn)性好，可靠性高。
【具體實(shí)施方式】
[0050]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0051]實(shí)施例1裂殖弧菌菌粉總脂與脂肪酸組成分析
[0052](I)油脂提取
[0053]I)準(zhǔn)確稱量冷凍干燥后的裂殖弧菌菌粉(總脂含量為77.01%) 150.0mg,加3mL混合溶劑甲醇/DMSO (V:V=9:1)，5(TC水浴加熱30分鐘破壁，5000r/min離心5分鐘，取上層油相，重復(fù)操作3次，收集上層油相。
[0054]2)向下層菌渣中加3mL混合溶劑正己烷/乙醚(v: V=1:1)，60°C水浴加熱30分鐘，萃取油脂，5000r/min離心5分鐘，取上層油相，重復(fù)操作3次，收集上層油相。
[0055]3)合并兩次收集的油相，加入3mL純化水，水洗，2000r/min離心5分鐘，收集上層油相。
[0056]4)向下層水相中加3mL正己烷萃取，2000r/min離心5分鐘，取上層油相，重復(fù)操作3次，收集上層油相。
[0057]5)將上述油相收集合并于離心管中，采用氮?dú)獯蹈傻姆椒ㄈコ袡C(jī)溶劑，并冷凍干燥20h除去油脂中的痕量水和有機(jī)溶劑殘留，稱量并代入公式:
【權(quán)利要求】
1.一種生物質(zhì)材料油脂的提取方法及其應(yīng)用，其特征在于包含如下步驟:將生物質(zhì)材料加入到甲醇和DMSO的混合溶劑中水浴加熱破壁，離心收集上層油相；往離心的沉淀中加入親脂性的有機(jī)溶劑水浴加熱萃取油脂，離心收集上層油相。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物質(zhì)材料油脂的提取方法，其特征在于:所述的生物質(zhì)材料包括產(chǎn)油單細(xì)胞生物、產(chǎn)油動(dòng)植物細(xì)胞、組織和器官。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物質(zhì)材料油脂的提取方法，其特征在于:所述的甲醇和DMSO的混合溶劑中甲醇與DMSO的體積比為5~10:1 ;所述的親脂性的有機(jī)溶劑為正己烷與乙醚按體積比0.5~2:1組成的混合溶劑；所述的水浴加熱破壁的條件為45~60°C水浴加熱攪拌10~40分鐘；所述的水浴加熱萃取油脂的條件為45~60°C水浴加熱10~40分鐘。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的生物質(zhì)材料油脂的提取方法在生物質(zhì)材料總脂含量和脂肪酸組成分析中的應(yīng)用。
5.一種生物質(zhì)材料總脂含量的分析方法，其特征在于包括如下步驟:(1)對(duì)待測(cè)定生物質(zhì)材料進(jìn)行冷凍干燥處理；準(zhǔn)確稱取一定量生物質(zhì)材料；(2)加甲醇和DMSO的混合溶劑水浴加熱破壁，離心，收集上層油相；(3)收集離心的沉淀，加入親脂性的有機(jī)溶劑水浴加熱萃取油脂，離心收集上層油相；(4)合并上述收集的油相，水洗，離心，收集上層油相；(5)下層水相用有機(jī)溶劑萃取，離心，收集上層油相；(6)合并油相并進(jìn)行濃縮處理，獲得總脂，計(jì)算總脂含量。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生物質(zhì)材料總脂含量的分析方法，其特征在于:步驟(5)中所述的有機(jī)溶劑為正己烷或石油醚；步驟(6)中所述的濃縮處理的方法為用氮?dú)獯蹈?、真空離心干燥或其它小體積濃縮方法，并冷凍干燥除去油脂中的痕量水。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生物質(zhì)材料總脂含量的分析方法，其特征在于包括如下步驟:(1)對(duì)待測(cè)定生物質(zhì)材料進(jìn)行冷凍干燥處理；準(zhǔn)確稱取冷凍干燥后的生物質(zhì)材料 100 ~200mg ；(2)加2~IOmL甲醇與DMSO以體積比5~10:1組成的混合溶劑45~60°C水浴加熱 10~40分鐘破壁，離心，收集上層油相；(3)重復(fù)步驟(2)，將離心的沉淀用甲醇與DMSO的混合溶劑水浴加熱破壁I~5次，收集上層油相；(4)收集離心的沉淀，加入2~IOmL正己烷與乙醚以體積比0.5~2:1組成的混合溶劑45~60°C水浴加熱10~40分鐘萃取油脂，離心收集上層油相；(5)重復(fù)步驟(4)，將離心的沉淀用正己烷與乙醚的混合溶劑水浴加熱萃取油脂I~5 次，收集上層油相；(6)合并上述收集的油相，水洗，離心，收集上層油相；(7)下層水相用正己烷或石油醚萃取，離心，收集上層油相；(8)重復(fù)步驟(7)1~3次，收集上層油相；(9)合并油相，用氮?dú)獯蹈?、真空離心干燥或其它小體積濃縮方法進(jìn)行油脂濃縮處理，再用冷凍干燥的方法除去油脂中的痕量水，獲得總脂，計(jì)算總脂含量。
8.—種生物質(zhì)材料總脂脂肪酸組成的分析方法，其特征在于包含如下步驟: (1)使用權(quán)利要求5-7任一項(xiàng)所述的方法獲得總脂后，用有機(jī)溶劑配制一定濃度的總脂溶液； (2)將總脂溶液用氮?dú)獯蹈珊筮M(jìn)行甲酯化，萃取甲酯化生成的脂肪酸甲酯； (3)氣相檢測(cè)分析脂肪酸甲酯組成及含量。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的生物質(zhì)材料總脂脂肪酸組成的分析方法，其特征在于: 步驟(1)中所述的有機(jī)溶劑為正己烷或石油醚，所述的總脂溶液的濃度為10~30mg/mL ； 步驟(2)為:取50~IOOii L濃度為10~30mg/mL總脂溶液，氮?dú)獯蹈珊螅?.5~2mL濃度為0.1~Imol/mL的KOH-甲醇溶液，40~70°C水浴反應(yīng)10~40min ;待冷卻到室溫，加0.5~2mL濃度為14%的BF3-甲醇溶液，45~65°C水浴反應(yīng)5~20min ;待冷卻到室溫，加0.5~2mL飽和食鹽水和0.5~2mL正己燒或石油醚萃取脂肪酸甲酯。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的生物質(zhì)材料總脂脂肪酸組成的分析方法，其特征在于: 步驟(3)中所述的氣相檢測(cè)的方法為:色譜柱:毛細(xì)管柱HP-88或類似固定相的毛細(xì)管氣相色譜柱；載氣:高純度N2 ;柱流速:1.5mL/min ;尾吹流速:25mL/min ；H2流速:30mL/min ;空氣流速:400mL/min ;分流比:20:1 ;汽化室溫度:240°C ；，檢測(cè)器溫度:240°C ;色譜柱梯度升溫:初始溫度為100°C，保持5min，以4°C /min升至240°C，保持lOmin。
【文檔編號(hào)】G01N1/28GK103604891SQ201310638357
【公開日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2013年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月27日
【發(fā)明者】陳偉, 曹騰騰, 李康, 劉永梅, 李西清, 王志臻, 潘倩倩 申請(qǐng)人:青島旭能生物工程有限責(zé)任公司