一種測(cè)定肉的新鮮度的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種測(cè)定肉的新鮮度的方法，包括以下步驟：1）將肉與水勻漿處理，得到勻漿液，再將勻漿液離心處理，將得到的上清液作為中空纖維支撐液膜萃取的樣品液；2）將中空纖維管管壁的微孔中充滿有機(jī)液膜液形成支撐液膜，所述有機(jī)液膜液為溶有三正辛基氧化膦的正己醚，將NaOH溶液作為接收液，萃取步驟1）制得的樣品液中的短鏈脂肪酸，通過(guò)氣相色譜對(duì)萃取液中的短鏈脂肪酸含量進(jìn)行測(cè)定。利用本發(fā)明公開的方法測(cè)定肉的新鮮度，檢出限低，重復(fù)性好，精確度高，為監(jiān)管肉類市場(chǎng)秩序提供了一種科學(xué)準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便快速的檢測(cè)方法。
【專利說(shuō)明】一種測(cè)定肉的新鮮度的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種測(cè)定肉的新鮮度的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來(lái)，人們對(duì)肉類質(zhì)量越來(lái)越看重，主要因肉類是人類重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，如與人類健康息息相關(guān)的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)和脂肪、礦物質(zhì)等。眾所周知，肉類質(zhì)量中新鮮度是一個(gè)重要指標(biāo)，也是消費(fèi)者評(píng)價(jià)肉類可接受性程度的重要指標(biāo)。肉類暴露在空氣中易腐敗，是其新鮮度下降的重要原因。影響肉類新鮮度的因素很多，比如屠宰前情況、宰后成熟時(shí)間、宰后肉品放置時(shí)間、儲(chǔ)存環(huán)境等。肉類中蛋白質(zhì)腐敗現(xiàn)象和脂肪酸敗現(xiàn)象是細(xì)菌生長(zhǎng)、酶促降解和脂肪氧化造成的。當(dāng)新鮮肉類儲(chǔ)藏在室溫環(huán)境時(shí)，酶促降解產(chǎn)生多胺、氨基酸等，其被細(xì)菌作為營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，隨著腐敗進(jìn)行細(xì)菌逐漸增多。肉類腐敗時(shí)肉的硬度、流變性、粘稠度、介電性能、氣味、pH、揮發(fā)性鹽基氮含量(TVB-N)等發(fā)生改變。
[0003]基于肉品以上性質(zhì)變化，有多種測(cè)定方法，如氣體傳感器、電位計(jì)、伏安法、酶感應(yīng)器、電子鼻、電子舌、測(cè)定生物胺、以及最常用的揮發(fā)性鹽基氮TVB-N滴定法等多種測(cè)定方法。這些測(cè)定肉新鮮度的方法，要么測(cè)定時(shí)誤差大，要么需要較多化學(xué)試劑。比如:電子舌等在進(jìn)行測(cè)定時(shí)需要調(diào)節(jié)緩沖溶液，這就又存在著緩沖液以及樣品表面的情況不同而造成應(yīng)用時(shí)有可能出現(xiàn)較大差錯(cuò)；利用揮發(fā)性鹽基氮測(cè)定時(shí)，儀器消耗大量化學(xué)試劑，人為操作容易導(dǎo)致較大誤差并耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)。因此，開發(fā)一種簡(jiǎn)捷而準(zhǔn)確的測(cè)定肉新鮮度的方法很有必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種測(cè)定肉的新鮮度的方法，該方法科學(xué)準(zhǔn)確，并且簡(jiǎn)便快速。
[0005]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
[0006]本發(fā)明的測(cè)定肉的新鮮度的方法，包括以下步驟:
[0007]I)將肉與水勻漿處理，得到勻漿液，再將勻漿液離心處理，將得到的上清液作為中空纖維支撐液膜萃取的樣品液；
[0008]2)將中空纖維管管壁的微孔中充滿有機(jī)液膜液形成支撐液膜，所述有機(jī)液膜液為溶有三正辛基氧化膦的正己醚，將NaOH溶液作為接收液，萃取步驟I)制得的樣品液中的短鏈脂肪酸，通過(guò)氣相色譜對(duì)萃取液中的短鏈脂肪酸含量進(jìn)行測(cè)定。
[0009]進(jìn)一步，所述步驟I)的具體參數(shù)為:將肉與水在均漿器中勻漿處理I?2min，轉(zhuǎn)速為10000?12000r/min，得到勻漿液，再將勻漿液置于離心管中在3000?5000r/min下離心15?20min，將離心制取的上清液用2?4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH到2±0.2，作為中空纖維支撐液膜萃取的樣品液。
[0010]進(jìn)一步，所述步驟I)中，肉與水的比例為Ig:60mL。
[0011]進(jìn)一步，所述步驟2)的具體參數(shù)為:將中空纖維管剪成16?18cm，用微孔注射針將接收液注滿中空纖維管內(nèi)腔，將充裝接收液的纖維管浸沒(méi)于有機(jī)液膜液中浸潤(rùn)I?2s，使中空纖維管管壁的微孔中充滿有機(jī)液膜液形成支撐液膜，再次用微孔注射針將接收液灌流中空纖維管內(nèi)腔，以進(jìn)一步充填并排除腔內(nèi)可能存在的有機(jī)液膜液，所述有機(jī)液膜液為質(zhì)量濃度為100g/L的溶有三正辛基氧化膦的正己醚，所述接收液為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的NaOH溶液；然后將中空纖維管兩端對(duì)齊并折疊后利用鋁箔片緊裹密封，將封好口的中空纖維管置入去離子水中漂洗除去表面多余的有機(jī)液膜液，隨后將制備好的中空纖維支撐液膜裝置完全浸入到裝有1.5?2.0mL的樣品液的帶蓋小瓶中，保證中空纖維支撐液膜裝置舒展并完全浸入到樣品液中，振湯卒取16?18h ;在卒取完成之后，用懾子將中空纖維支撐液膜裝置取出，然后用剪刀將一端剪斷，將充滿空氣的微孔注射針插入端口內(nèi)，再將另一端剪斷后置于錐形瓶?jī)?nèi)，推動(dòng)注射器活塞，將中空纖維管內(nèi)的接收液吹入錐形瓶?jī)?nèi)，取其中6 y L于另一錐形瓶中，并加入10?20y Llmol/L鹽酸，直接進(jìn)行氣相色譜分析。
[0012]進(jìn)一步，所述步驟2)中，氣相色譜的條件為:色譜柱=DB-FFAP熔融石英毛細(xì)柱，30mX0.53mm, 0.25iim ;升溫程序:100°C保持 0.5min，以 8°C /min 升至 180°C，保持 lmin,之后以20°C /min升至200°C，保持5min ;載氣流速為14.4mL/min，氦氣、空氣、尾氣的流速分別為30mL/min、300mL/min、20mL/min，進(jìn)樣量I y L ;檢測(cè)器溫度和進(jìn)樣口溫度分別為240°C和 200。。。
[0013]本發(fā)明的有益效果在于:
[0014]本發(fā)明首先利用中空纖維支撐液膜萃取肉中的短鏈脂肪酸，而后通過(guò)氣相色譜進(jìn)行含量測(cè)定，肉中短鏈脂肪酸含量可以與肉的存放時(shí)間建立預(yù)測(cè)方程，從而可以對(duì)已知脂肪酸含量的樣品進(jìn)行存放時(shí)間的估計(jì)。
[0015]由于肉中揮發(fā)性脂肪酸的含量非常低，只能通過(guò)靈敏度高的分析方法進(jìn)行測(cè)定，而通過(guò)中空纖維支撐液膜萃取，能夠有效的萃取出短鏈脂肪酸并將萃取和富集結(jié)合于一步，萃取后的目標(biāo)物完全可以直接氣相色譜分析而不需要質(zhì)譜，因此極大的降低測(cè)定條件要求。同時(shí)，中空纖維支撐液膜萃取設(shè)備還具備了手動(dòng)制作的特點(diǎn)，制作時(shí)間只要幾分鐘，價(jià)格便宜，使用方便，基本不使用化學(xué)試劑而具有環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，利用本發(fā)明公開的方法測(cè)定肉的新鮮度，檢出限低，重復(fù)性好，精確度高，為監(jiān)管肉類市場(chǎng)秩序提供了 一種科學(xué)準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便快速的檢測(cè)方法。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖進(jìn)行說(shuō)明:
[0017]圖1為肉的前處理過(guò)程中料液比對(duì)萃取液體積的影響；
[0018]圖2為萃取的混標(biāo)色譜圖(a)、豬肉浸出液色譜圖(b)、萃取的豬肉樣品色譜圖
(C)；
[0019]圖3為肉中脂肪酸含量與肉的存放時(shí)間相關(guān)關(guān)系圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面將結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。
[0021]本發(fā)明實(shí)施例中使用的豬肉是從重慶市北碚區(qū)永輝超市中購(gòu)買；聚丙烯中空纖維管購(gòu)于Membrana GmbH公司；微孔注射針購(gòu)于德國(guó)消費(fèi)者健康中心；均漿器購(gòu)于寧波新芝公司；離心機(jī)上購(gòu)于海安亭公司；振蕩器購(gòu)于江蘇新康公司；其他試劑購(gòu)自成都科龍化工試劑廠。
[0022]本發(fā)明實(shí)施例測(cè)定肉的新鮮度的方法為:
[0023]I)肉的前處理:
[0024]將肉與水在均漿器中勻漿處理lmin，轉(zhuǎn)速為10000r/min，得到勻漿液，再將勻漿液置于離心管中在3000r/min下離心15min,將離心制取的上清液用2mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH到2，作為中空纖維支撐液膜萃取的樣品液。
[0025]2)肉中脂肪酸的萃取與測(cè)定:
[0026]將中空纖維管剪成16cm，用微孔注射針將接收液注滿中空纖維管內(nèi)腔，將充裝接收液的纖維管浸沒(méi)于有機(jī)液膜液中浸潤(rùn)I?2s，使中空纖維管管壁的微孔中充滿有機(jī)液膜液形成支撐液膜，再次用微孔注射針將接收液灌流中空纖維管內(nèi)腔，以進(jìn)一步充填并排除腔內(nèi)可能存在的有機(jī)液膜液，所述有機(jī)液膜液為質(zhì)量濃度為100g/L的溶有三正辛基氧化膦的正己醚，所述接收液為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的NaOH溶液；然后將中空纖維管兩端對(duì)齊并折疊后利用鋁箔片緊裹密封，將封好口的中空纖維管置入去離子水中漂洗除去表面多余的有機(jī)液膜液，隨后將制備好的中空纖維支撐液膜裝置完全浸入到裝有1.5mL的樣品液的帶蓋小瓶中，保證中空纖維支撐液膜裝置舒展并完全浸入到樣品液中，振蕩萃取16h ;在萃取完成之后，用鑷子將中空纖維支撐液膜裝置取出，然后用剪刀將一端剪斷，將充滿空氣的微孔注射針插入端口內(nèi)，再將另一端剪斷后置于錐形瓶?jī)?nèi)，推動(dòng)注射器活塞，將中空纖維管內(nèi)的接收液吹入錐形瓶?jī)?nèi)，取其中6 ii L于另一錐形瓶中，并加入10 u Llmol/L鹽酸，直接進(jìn)行氣相色譜分析。
[0027]氣相色譜的條件為:色譜柱:DB-FFAP熔融石英毛細(xì)柱，30mX0.53mm，0.25iim ;升溫程序:100°c保持0.5min，以8 °C /min升至180°C，保持lmin，之后以20°C /min升至200°C,保持5min ;載氣流速為14.4mL/min,氦氣、空氣、尾氣的流速分別為30mL/min、300mL/min、20mL/min，進(jìn)樣量I y L ;檢測(cè)器溫度和進(jìn)樣口溫度分別為240°C和200°C。
[0028]實(shí)施例1
[0029]考察步驟I)中的料液比，即肉與水的比例分別為Ig:20mL、lg:40mL、lg:60mL、lg:80mL、lg:IOOmL,以支撐液膜萃取后，比較萃取液體積。結(jié)果如圖1所示，由圖1可知，當(dāng)肉與水的比例較低時(shí)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較大，說(shuō)明萃取的穩(wěn)定性不夠，主要是由于肉勻漿液的粘稠度較大，導(dǎo)致中空纖維萃取的不穩(wěn)定性；隨著料液比例增大，萃取量逐漸穩(wěn)定，當(dāng)料液比例大于Ig:60mL時(shí)，萃取量穩(wěn)定性下降，這是由于勻漿液中含有的揮發(fā)性脂肪酸含量下降所導(dǎo)致，而使目標(biāo)物質(zhì)濃度下降，萃取的濃度下降，從而影響實(shí)驗(yàn)的精密度。因此，最佳的料液比，即肉與水的比例為Ig:60mL。
[0030]實(shí)施例2
[0031]脂肪酸的測(cè)定結(jié)果如圖2所示，圖2為萃取的混標(biāo)色譜圖(a)、豬肉浸出液色譜圖(b)、萃取的豬肉樣品色譜圖(c)(峰序號(hào)分別代表:1.乙酸；2.丙酸；3.異丁酸；4.丁酸；
5.異戊酸；6.2_乙基丁酸)。
[0032]使用檢出限(LOD)和定量限(LOQ)確定各酸的最低可檢測(cè)水平，使用經(jīng)典的3 o空白方法，即檢出限計(jì)算方法為通過(guò)分析空白標(biāo)準(zhǔn)偏差測(cè)定法。通過(guò)回收率和重復(fù)性驗(yàn)證評(píng)價(jià)方法的有效性。回收率實(shí)驗(yàn)中，配置3份不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)混酸溶液加入到豬肉勻漿液中，樣品處理后氣相色譜分析。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，測(cè)定日內(nèi)精密度和日間精密度。日內(nèi)精密度測(cè)定方法為Id內(nèi)分析測(cè)定一份勻漿液處理所得的10份上清液；日間精密度測(cè)定是在不同天內(nèi)測(cè)定分析一份勻漿液處理所得樣品直到15次，用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)表示精密度結(jié)果。在測(cè)定間隙，所有樣品放置于_20°C保存。
[0033]測(cè)定結(jié)果如表1所示，各個(gè)短鏈脂肪酸的檢出限如下:乙酸為0.0046mg/kg,丙酸為 0.0022mg/kg,異丁酸為 0.0065mg/kg, 丁酸為 0.015mg/kg,異戍酸為 0.0067mg/kg。乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸和異戍酸的定量限分別為0.014mg/kg、0.0067mg/kg、0.019mg/kg、0.046mg/kg、0.020mg/kg。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明較低的檢出限保證實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚓_測(cè)定肉中的揮發(fā)性脂肪酸。測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)范圍為0.9261-0.9997。加樣回收率為85.2%-118.4%，考慮到測(cè)定的揮發(fā)性脂肪酸含量較低，此回收率可以接受。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，日內(nèi)精密度范圍在7.82%-10.28%，日間精密度范圍在10.01%-15.96%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，對(duì)于較低濃度的揮發(fā)性脂肪酸含量測(cè)定，中空纖維支撐液膜萃取重復(fù)性良好，同時(shí)實(shí)驗(yàn)表明檢測(cè)越及時(shí)越有利于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
[0034]表1
[0035]
【權(quán)利要求】
1.一種測(cè)定肉的新鮮度的方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)將肉與水勻漿處理，得到勻漿液，再將勻漿液離心處理，將得到的上清液作為中空纖維支撐液膜萃取的樣品液； 2)將中空纖維管管壁的微孔中充滿有機(jī)液膜液形成支撐液膜，所述有機(jī)液膜液為溶有三正辛基氧化膦的正己醚，將NaOH溶液作為接收液，萃取步驟I)制得的樣品液中的短鏈脂肪酸，通過(guò)氣相色譜對(duì)萃取液中的短鏈脂肪酸含量進(jìn)行測(cè)定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定肉的新鮮度的方法，其特征在于:所述步驟I)的具體參數(shù)為:將肉與水在均漿器中勻漿處理I?2min，轉(zhuǎn)速為10000?12000r/min，得到勻漿液，再將勻漿液置于離心管中在3000?5000r/min下離心15?20min，將離心制取的上清液用2?4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH到2±0.2，作為中空纖維支撐液膜萃取的樣品液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定肉的新鮮度的方法，其特征在于:所述步驟I)中，肉與水的比例為Ig:60mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定肉的新鮮度的方法，其特征在于:所述步驟2)的具體參數(shù)為:將中空纖維管剪成16?18cm，用微孔注射針將接收液注滿中空纖維管內(nèi)腔，將充裝接收液的纖維管浸沒(méi)于有機(jī)液膜液中浸潤(rùn)I?2s,使中空纖維管管壁的微孔中充滿有機(jī)液膜液形成支撐液膜，再次用微孔注射針將接收液灌流中空纖維管內(nèi)腔，以進(jìn)一步充填并排除腔內(nèi)可能存在的有機(jī)液膜液，所述有機(jī)液膜液為質(zhì)量濃度為100g/L的溶有三正辛基氧化膦的正己醚，所述接收液為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的NaOH溶液；然后將中空纖維管兩端對(duì)齊并折疊后利用鋁箔片緊裹密封，將封好口的中空纖維管置入去離子水中漂洗除去表面多余的有機(jī)液膜液，隨后將制備好的中空纖維支撐液膜裝置完全浸入到裝有1.5?2.0mL的樣品液的帶蓋小瓶中，保證中空纖維支撐液膜裝置舒展并完全浸入到樣品液中，振蕩萃取16?18h ;在萃取完成之后，用鑷子將中空纖維支撐液膜裝置取出，然后用剪刀將一端剪斷，將充滿空氣的微孔注射針插入端口內(nèi)，再將另一端剪斷后置于錐形瓶?jī)?nèi)，推動(dòng)注射器活塞，將中空纖維管內(nèi)的接收液吹入錐形瓶?jī)?nèi)，取其中6 ii L于另一錐形瓶中，并加入10?20 ii Llmol/L鹽酸，直接進(jìn)行氣相色譜分析。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定肉的新鮮度的方法，其特征在于:所述步驟2)中，氣相色譜的條件為:色譜柱=DB-FFAP熔融石英毛細(xì)柱，30mX0.53mm, 0.25iim ;升溫程序:100°C保持 0.5min，以 8°C /min 升至 180°C，保持 lmin，之后以 20°C /min 升至 200°C，保持 5min ；載氣流速為14.4mL/min,氦氣、空氣、尾氣的流速分別為30mL/min、300mL/min、20mL/min,進(jìn)樣量I U L ;檢測(cè)器溫度和進(jìn)樣口溫度分別為240°C和200°C。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103616451SQ201310642178
【公開日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2013年12月3日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月3日
【發(fā)明者】趙國(guó)華, 劉嘉 申請(qǐng)人:西南大學(xué)