一種肝素鈉中過氧化氫殘留檢測的新方法
【專利摘要】本發(fā)明公布了一種肝素鈉原料藥中過氧化氫殘留檢測的新方法。目的在于提高檢測限的靈敏度，結(jié)果的準確性，消除外界環(huán)境的干擾。開發(fā)出如下檢測新方法：肝素鈉樣品溶液過陰離子交換柱后，消除肝素鈉對過氧化氫檢測的干擾，通過對過氧化氫進行衍生化反應(yīng)，避免了實驗過程中環(huán)境溫度和光照對過氧化氫含量的影響。過氧化氫和過量的三苯基膦溶液反應(yīng)生成穩(wěn)定的氧化三苯基膦，然后進高效液相色譜儀，經(jīng)色譜柱分離后，經(jīng)紫外檢測器檢測，用外標法準確定量過氧化氫含量。本發(fā)明分離度好，準確度高，流程合理，操作簡單。
【專利說明】一種肝素鈉中過氧化氫殘留檢測的新方法
一、【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種肝素鈉中過氧化氫殘留含量檢測的方法。
二、【背景技術(shù)】:
[0002]肝素鈉原料藥是肝素制劑的有效成分和低分子肝素制劑的起始原料，而在生產(chǎn)的過程中需要加入過氧化氫進行氧化脫色，不可避免地產(chǎn)生過氧化氫殘留。因此測定肝素鈉中過氧化氫的殘留是非常有必要的?，F(xiàn)有的對水中過氧化氫的測定主要是化學(xué)滴定法，用高錳酸鉀溶液滴定來測定?；瘜W(xué)滴定法檢測限較高，樣品用量大，IOg左右；而且誤差較高，操作繁瑣，滴定終點不易把握。而對于痕量殘留來說滴定法終點不易掌握，檢出限為100PPM，《中華人民共和國國家標準》食品中殘留過氧化氫的測定方法，采用了滴定法。還有一種是高效液相法直接測定，但對于過氧化氫來說紫外吸收較弱，對痕量殘留來說也不易測定，一種測定溶液中過氧化氫含量的方法，專利號CN02158703.5采用的此方法，該方法是紫外檢測器直接檢測，但過氧化氫易分解，溫度和光照都對其有影響，造成檢測結(jié)果不準確，檢出限較高。采用衍生化法，過氧化氫和三苯基膦反應(yīng)生成氧化三苯基膦，氧化三苯基膦紫外吸收好，而且避免了過氧化氫的分解問題。Stefan等人以過氧化氫氧化三苯基磷(TPP)為三苯基磷的氧化物(TPPO)為原理，通過液相色譜測定TPP和TPPO之間的變化來測定過氧化氫，并測定洗滌劑中的過氧化氫。本方法也是采用衍生化法，樣品溶液過陰離子交換柱后消除肝素鈉對過氧化氫檢測的影響后，再采用三苯基膦衍生化的方法，有效地測定了過氧化氫的殘留。
[0003]本發(fā)明的關(guān)鍵在于:肝素鈉是一種不同分子量粘多糖硫酸酯類的混合物，對過氧化氫的分析產(chǎn)生巨大的干擾。用現(xiàn)有的檢測方法，體現(xiàn)在干擾氧化三苯基膦的檢測，肝素鈉混合物的峰與氧化三苯基膦達不到良好的分離效果(見附圖1)。我們采用了過陰離子交換柱的前處理方法，很大程度上消除了肝素鈉對檢測的影響，達到了很好的基線分離(見附圖2)。因此與現(xiàn)有檢測方法相比本發(fā)明的檢測效果更優(yōu)。
三、
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種檢測限低，干擾小，操作簡單，靈敏度好，準確度高，誤差小，特別是針對肝素鈉中過氧化氫殘留的檢測方法。肝素鈉糖鏈上的還原端可以和過氧化氫反應(yīng)。本發(fā)明的目的通過這樣實現(xiàn)的:肝素鈉樣品用純化水溶解后，用注射器吸取樣品溶液過陰離子交換柱后，消除肝素的影響，再加入三苯基膦溶液衍生化，避光反應(yīng)30min后進高效液相色譜檢測。
[0005]本發(fā)明的測定方法如下步驟所示:
[0006](I)過氧化氫標準品的標定
[0007]將過氧化氫標準商品試劑按照國家標準GB9984— 89進行標定。
[0008](2)樣品溶液的配制
[0009]取肝素鈉原料藥Ig溶于IOml水中，定容，搖勻備用。[0010](3)衍生化試劑的配制
[0011]稱取三苯基膦52.46mg，用乙腈溶解，定容至IOOOmL,濃度為0.0002mol / L，現(xiàn)用現(xiàn)配。
[0012](4)色譜條件
[0013]儀器:waters e2695高效液相色譜儀,檢測器為waters2489紫外檢測器
[0014]色譜柱:C18色譜柱，4.6mmX 250mm, 5 μ m ;
[0015]流動相:將乙腈和水按體積比為乙腈:水=70:30進行混合，脫氣。
[0016]流速:1.0mL / min ；
[0017]檢測波長:225nm;
[0018]進樣量:10μ L。
[0019](5)衍生化反應(yīng)
[0020]用注射器分別吸取樣品溶液和標準工作液過陰離子交換柱后，消除肝素的影響。再分別移取過柱后的過氧化氫標準工作液和樣品溶液各ImL于IOmL棕色瓶中，加入2mL三苯基膦乙腈溶液，振搖，置于暗處室溫反應(yīng)30min。
[0021]衍生化反應(yīng)結(jié)束后，立即開始色譜分析，吸取10 μ L樣品溶液注入高效液相色譜儀。在上述色譜條件下測定其峰面積，利用外標法計算樣品溶液中過氧化氫的濃度。
四、【專利附圖】

【附圖說明】
圖1是樣品未經(jīng)過陰離子交換柱處理的譜圖；圖2是樣品經(jīng)過陰離子交換柱處理的譜圖。
【權(quán)利要求】
1.一種測定肝素鈉原料藥中過氧化氫殘留的檢測方法，本發(fā)明的測定方法如下步驟所示: (1)過氧化氫標準品的標定 將過氧化氧標準商品試劑按照國家標準GB9984—89進行標定。 (2)樣品溶液的配制 取肝素鈉原料藥Ig溶于IOml水中，定容,搖勻備用。 (3)衍生化試劑的配制 稱取三苯基膦52.46mg,用乙腈溶解，定容至1000mL,濃度為0.0002mol / L，現(xiàn)用現(xiàn)配。 (4)色譜條件 儀器:waters e2695高效液相色譜儀,檢測器為waters2489紫外檢測器 色譜柱:C18 色譜柱，4.6mmX 250mm, 5 μ m ； 流動相:將乙腈和水按體積比為乙腈冰=70:30進行混合，脫氣。
流速:1.0mL / min ； 檢測波長:225nm ； 進樣量:10yL。 (5)衍生化反應(yīng) 用注射器分別吸取樣品溶液和標準工作液過陰離子交換柱后，消除肝素的影響。再分別移取過柱后的過氧化氫標準工作液和樣品溶液各ImL于IOmL棕色瓶中，加入2mL三苯基膦乙腈溶液，振搖，置于暗處室溫反應(yīng)30min。 衍生化反應(yīng)結(jié)束后，立即開始色譜分析，吸取10 μ L樣品溶液注入高效液相色譜儀。在上述色譜條件下測定其峰面積，利用外標法計算樣品溶液中過氧化氫的濃度。
【文檔編號】G01N30/02GK103913521SQ201310684303
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2013年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月5日
【發(fā)明者】王 鋒, 孫麗寧, 祁靜, 呂慧忠, 由守誼 申請人:煙臺東誠生化股份有限公司