分子標(biāo)記物在甲狀旁腺腫瘤診斷中的用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及分子標(biāo)記物在甲狀旁腺腫瘤診斷中的用途。進(jìn)一步地，本發(fā)明涉及一種或多種選擇性結(jié)合至分子標(biāo)記物的結(jié)合部分在制備用于鑒定甲狀旁腺腫瘤的試劑中的用途，其中所述分子標(biāo)記物選自CD24、HMOX1、VCAM1或KCNA3。
【專利說明】分子標(biāo)記物在甲狀旁腺腫瘤診斷中的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及甲狀旁腺腫瘤標(biāo)記物的領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及選自⑶24、HM0X1、VCAM1或KCNA3的分子標(biāo)記物在甲狀旁腺腫瘤診斷中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]⑶24是一種表達(dá)于大部分B淋巴細(xì)胞表面和成神經(jīng)纖維細(xì)胞的一種糖化蛋白，CD24可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖能力，并增加腫瘤細(xì)胞的伸展運(yùn)動(dòng)。CD24是P選擇素配體之一，CD24被發(fā)現(xiàn)在非黑色素瘤中高表達(dá)，基底細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌中敏感度分別為81%和 100%,特異度分別為 67% 和 71%,參見，Miller E, Shapira S, Gur E, Naumov I, KazanovD, Leshem D,Barnea Y,Meshiach Y,Gat A,Sion D et al:1ncreased expressionof CD24in nonmelanoma skin cancer.The International journal of biologicalmarkers2012, 27(4):e331_336.。也有報(bào)道顯示CD24的高表達(dá)和惡性腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期及血管侵犯等相關(guān)，參見 Takahashi M, Nakajima M, Ogata H, Domeki Y, OhtsukaK, Ihara K, Kurayama E, Yamaguchi S, Sasaki K, Miyachi K et al:CD24Expression isAssociated with Progression of Gastric Cancer.Hepatogastroenterology2012, 60(124)。
[0003]VCAM1是一種細(xì)胞表面糖蛋白，介導(dǎo)白細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞粘連和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，VCAM1血管細(xì)胞粘附分子_1 (vascular cell adhesion moleculel, VCAM-1)是免疫球蛋白超家族成員之一，是一種重要的細(xì)胞粘附分子，廣泛表達(dá)在活化內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSC)、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等表面，其生物學(xué)作用十分廣泛。VCAM-1可在IL-l，TNF-a等細(xì)胞因子作用后表達(dá).內(nèi)皮細(xì)胞表面的VCAM-1可因細(xì)胞因子的誘導(dǎo)而高水平的表達(dá)。高表達(dá)在結(jié)腸癌、肺癌等癌中發(fā)現(xiàn)。
[0004]HM0X1屬于血紅素氧化酶家族，位于染色體22的長臂，是一種編碼血紅素酶1的人類基因，是血紅素分解代謝的關(guān)鍵基因，分解血紅素為膽綠素，HM0X1的高表達(dá)和膀胱癌的預(yù)后相關(guān)。
[0005]KCNA3編碼電壓門控Kvl.3通道，在T和B淋巴細(xì)胞表達(dá)，有助于凋亡的機(jī)制，和細(xì)胞增殖相關(guān)。
[0006]原發(fā)性甲狀旁腺功能允進(jìn)癥(primary hyperparathyroidism, PHPT),是由病變的甲狀旁腺自主合成和分泌過多的甲狀旁腺激素(parathyroid hormone, PTH),從而弓|起隹丐、磷和骨代謝紊亂的一種全身性疾病。由甲狀旁腺腺瘤引起的PHPT約占80%?85%，15%?20%由甲狀旁腺增生引起，由甲狀旁腺癌引起的不到1%,參見Marx SJ:Hyperparathyroidand hypoparathyroid disorders.N Engl J Med2000, 343(25):1863-1875。
[0007]然而，甲狀旁腺腫瘤是異質(zhì)性的腫瘤，組織學(xué)分類復(fù)雜多樣，因此臨床上經(jīng)常不易區(qū)別甲狀旁腺腫瘤，包括腺瘤和增生等，尤其是區(qū)別甲狀旁腺癌和不典型腺瘤時(shí)更加困難，Haven CJ, Howell VM, Eilers PH, Dunne R, Takahashi M, van Pui jenbroekM, Furge K, Kievit J, Tan MH, Fleuren GJ et al:Gene expression of parathyroidtumors: molecular subclassification and identification of the potentialmalignant phenotype.Cancer research2004, 64(20):7405-7411。甲狀旁腺癌不易診斷，除了依靠組織病理組織學(xué)手段外，經(jīng)常需結(jié)合手術(shù)中的探查情況確定診斷。更重要的是，甲狀旁腺癌治療效果不佳，術(shù)后很容易復(fù)發(fā)，術(shù)后包括放療和化療的輔助治療的效果也有限，參見，Givi B, Shah JP: Parathyro id carcinoma.Clin Oncol (R CollRadiol) 2010, 22(6): 498-507。因此及時(shí)診斷鑒別甲狀旁腺的良惡性腫瘤顯得尤為關(guān)鍵。
[0008]目前，關(guān)于甲狀旁腺腫瘤發(fā)生和發(fā)展機(jī)制方面的研究報(bào)道較少。我們前期已進(jìn)行了有關(guān)甲狀旁腺的基因表達(dá)譜研究，尋找鑒別出了一些相關(guān)的差異基因，包括CD24、HM0X1、VCAM1或KCNA3基因。本發(fā)明人應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和實(shí)時(shí)PCR的方法檢測了甲狀旁腺腺癌和甲狀旁腺腺瘤組織中CD24、HM0X1、VCAM1或KCNA3的表達(dá)，驚奇地發(fā)現(xiàn)甲狀旁腺腺癌組的CD24、HM0X1、VCAM1或KCNA3表達(dá)陽性率明顯高于甲狀旁腺腺瘤和正常甲狀旁腺組表達(dá)的陽性率，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和實(shí)時(shí)PCR的方法檢測了甲狀旁腺腺癌和甲狀旁腺腺瘤組織中CD24、HM0X1、VCAM1或KCNA3的表達(dá)，驚奇地發(fā)現(xiàn)甲狀旁腺腺癌組的CD24、HM0X1、VCAM1或KCNA3表達(dá)陽性率明顯高于甲狀旁腺腺瘤和正常甲狀旁腺組表達(dá)的陽性率。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)CD24、HM0X1，VCAM1和KCNA3可能作為鑒別甲狀旁腺癌的新的基因。因此，可能對于鑒別診斷甲狀旁腺良惡性腫瘤提供新的方向，并可能為甲狀旁腺腫瘤的治療提供新的靶點(diǎn)，同時(shí)聯(lián)合患者的臨床生化指標(biāo)有望提高甲狀旁腺癌的診斷率。
[0010]一方面，本發(fā)明提供了一種或多種選擇性結(jié)合至分子標(biāo)記物的結(jié)合部分在制備用于鑒定甲狀旁腺腫瘤的試劑中的用途，其中所述分子標(biāo)記物選自⑶24、HM0X1、VCAM1或KCNA3。
[0011]“結(jié)合部分”意思是能夠結(jié)合至分子標(biāo)記物蛋白的分子或?qū)嶓w。
[0012]優(yōu)選地，所述結(jié)合部分包含多肽或由多肽組成。
[0013]我們定義“選擇性結(jié)合”包括相對于另外的多肽或核酸更強(qiáng)地結(jié)合至CD24的結(jié)合部分；優(yōu)選所述結(jié)合為強(qiáng)至少10倍，優(yōu)選強(qiáng)至少50倍和甚至更優(yōu)選強(qiáng)至少100倍。優(yōu)選結(jié)合部分只結(jié)合至⑶24多肽或核酸。
[0014]本文使用的術(shù)語“多肽”意思是多種氨基酸通過肽鍵連接在一起。術(shù)語“肽”可以與術(shù)語“多肽”交換使用，但是肽可以由兩種或兩種以上的多肽組成。
[0015]更優(yōu)選地，所述結(jié)合部分包含抗體或其抗原結(jié)合片段或變體，或由抗體或其抗原結(jié)合片段或變體組成。
[0016]我們定義“抗體”包括基本上完整的抗體分子以及嵌合抗體、人源化抗體、人抗體(其中至少一個(gè)氨基酸相對于天然存在的人抗體是突變的)、單鏈抗體、雙特異性抗體、抗體重鏈、抗體輕鏈、抗體重鏈和/或輕鏈的同二聚體和異二聚體，以及其抗原結(jié)合片段和衍生物。
[0017]“抗原結(jié)合片段”意思是能夠結(jié)合至分子標(biāo)記物蛋白的抗體的功能性片段，其中所述分子標(biāo)記物選自CD24、HM0X1、VCAM1或KCNA3。
[0018]優(yōu)選地，抗原結(jié)合片段選自Fv片段(例如單鏈Fv和二硫鍵合的Fv)、Fab樣片段(例如Fab片段、Fab’片段和F (ab) 2片段)、單可變結(jié)構(gòu)域(例如VH和VL結(jié)構(gòu)域)和結(jié)構(gòu)域抗體(dAb，包括單和雙的格式[即dAb-連接子-dAb])。
[0019]使用抗體片段而不是整個(gè)抗體有多個(gè)優(yōu)點(diǎn)。片段的較小尺寸可以引起改善的藥理學(xué)性質(zhì)，如對固體組織更好的穿透性。另外，抗原結(jié)合片段如Fab、Fv、ScFv和dAb抗體片段可以在大腸桿菌(E.coli)中表達(dá)并從大腸桿菌中分泌，因此允許促進(jìn)大量所述片段的產(chǎn)生。
[0020]進(jìn)一步地，根據(jù)本發(fā)明的上述用途，其中，所述用途包括步驟:
[0021]a)提供來自個(gè)體的甲狀旁腺腫瘤組織和正常對照組織的樣品；和
[0022]b)確定樣品中分子標(biāo)記物的量；
[0023]其中，甲狀旁腺腫瘤組織中分子標(biāo)記物的過度表達(dá)是甲狀旁腺癌的指征。
[0024]特別地，在所述步驟b)中的優(yōu)選方法包括Western印跡、North-Western印跡、免疫吸附測定法(ELISA)、抗體微陣列、組織微陣列(TMA)、免疫沉淀、原位雜交和其他免疫組織化學(xué)技術(shù)、放射免疫測定法(RIA)、免疫放射測定法(IRMA)和免疫酶測定法(IEMA)，包括使用單克隆和/或多克隆抗體的三明治測定法。載玻片上的細(xì)胞抗體染色可以用于細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷測試中熟知的方法中，如本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。
[0025]通常，ELISA包括使用產(chǎn)生有色反應(yīng)產(chǎn)物的酶(通常在固相測定法中)。酶如辣根過氧化物酶和磷酸酶已經(jīng)被廣泛應(yīng)用。放大磷酸酶反應(yīng)的方法是使用作為底物的NADP從而產(chǎn)生現(xiàn)在作為第二酶系統(tǒng)的輔酶的NAD。來自大腸桿菌(Escherichia coli)的焦磷酸酶提供良好的偶聯(lián)，因?yàn)樗雒覆辉诮M織中存在，是穩(wěn)定的，且產(chǎn)生好的反應(yīng)顏色。也可以使用基于酶的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)，如熒光素酶。
[0026]經(jīng)常使用與維生素生物素的偶聯(lián)，因?yàn)槠淇梢匀菀椎赝ㄟ^其與酶連接的卵白素或抗生物素蛋白鏈菌素(其以高特異性和親和力結(jié)合卵白素或抗生物素蛋白鏈菌素)的反應(yīng)得以檢測。
[0027]另一方面，本發(fā)明提供了一種或多種特異地檢測編碼分子標(biāo)記物的mRNA的表達(dá)水平的引物和/或探針，在制備用于鑒定甲狀旁腺腫瘤的試劑中的用途，其中所述分子標(biāo)記物選自 CD2、HM0X1、VCAM1 或 KCNA3。
[0028]進(jìn)一步地，根據(jù)本發(fā)明的上述用途，其包括步驟:
[0029]a)提供來自個(gè)體的甲狀旁腺腫瘤組織和正常對照組織的樣品；和
[0030]b)確定樣品中分子標(biāo)記物的mRNA的量；
[0031]其中，甲狀旁腺腫瘤組織中分子標(biāo)記物的mRNA的過度表達(dá)是甲狀旁腺癌的指征。
[0032]特別地，在所述步驟(b)使用選自宏陣列篩選、微陣列篩選、納米陣列篩選、逆轉(zhuǎn)錄PCR、實(shí)時(shí)PCR或原位PCR的方法進(jìn)行。
[0033]另一方面，本發(fā)明涉及一種用于鑒定甲狀旁腺腫瘤的試劑盒，其包括一種或多種選擇性結(jié)合至分子標(biāo)記物蛋白的結(jié)合部分，其中所述分子標(biāo)記物選自CD24蛋白、HM0X1蛋白、VCAM1蛋白或KCNA3蛋白。
[0034]另一方面，本發(fā)明涉及一種用于鑒定甲狀旁腺腫瘤的試劑盒，其包括一種或多種特異地檢測編碼分子標(biāo)記物的mRNA的表達(dá)水平的引物和/或探針，其中所述分子標(biāo)記物選自 CD24、HMOXU VCAM1 或 KCNA3。
[0035]另一方面，本發(fā)明涉及一種或多種分子標(biāo)記物用于鑒定甲狀旁腺腫瘤中的用途，其中所述分子標(biāo)記物選自CD24、HM0X1、VCAM1或KCNA3。
[0036]通過納入本文的附圖以及隨后與附圖一起用于說明本發(fā)明的某些原理的【具體實(shí)施方式】，本發(fā)明的方法和裝置所具有的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將變得清楚或更為具體地得以闡明。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0037]圖1表示不同甲狀旁腺組織中⑶24的表達(dá)(X 400)。
[0038]A和B分別為正常甲狀旁腺組織⑶24陰性和陽性表達(dá)的圖片。
[0039]C和D代表甲狀旁腺腺瘤組織中⑶24陰性和陽性表達(dá)的圖片。
[0040]E代表甲狀旁腺腺癌組織中⑶24陽性表達(dá)的圖片。
[0041]圖2表示甲狀旁腺腺瘤和甲狀旁腺腺癌中CD24、HM0X1、VCAM1和KCNA3的表達(dá)水平(X400)。
[0042]A表示甲狀旁腺腺瘤⑶24表達(dá)，B表示甲狀旁腺腺癌⑶24表達(dá)；
[0043]C表示甲狀旁腺腺瘤HM0X1表達(dá)，D表示甲狀旁腺腺癌HM0X1表達(dá)；
[0044]E表示甲狀旁腺腺瘤VCAM1表達(dá)，F(xiàn)表示甲狀旁腺腺癌VCAM1表達(dá)；
[0045]G表示甲狀旁腺腺瘤KCNA3表達(dá)，Η表示甲狀旁腺腺癌KCNA3表達(dá)。
[0046]圖3在正常組織、甲狀旁腺腺瘤、甲狀旁腺腺癌中CD24、ΗΜ0Χ1、VCAM1和KCNA3的實(shí)時(shí)PCR的結(jié)果。
[0047]應(yīng)當(dāng)了解，所附附圖并非按比例地顯示了本發(fā)明的基本原理的圖示性的各種特征的略微簡化的畫法。本文所公開的本發(fā)明的具體設(shè)計(jì)特征包括例如具體尺寸、方向、位置和外形將部分地由具體所要應(yīng)用和使用的環(huán)境來確定。
【具體實(shí)施方式】
[0048]本發(fā)明人前期通過全基因組芯片實(shí)驗(yàn)操作方法，進(jìn)行了有關(guān)甲狀旁腺的基因表達(dá)譜研究，尋找鑒別出了一些相關(guān)的差異基因，包括CD24等基因。進(jìn)一步地，本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法以及實(shí)時(shí)PCR的方法檢測了甲狀旁腺腺癌、甲狀旁腺腺瘤組織、以及正常甲狀旁腺組織中分子標(biāo)記物CD24、ΗΜ0Χ1、VCAM1或KCNA3的蛋白質(zhì)水平和mRNA水平上的表達(dá)，并對其臨床意義以及它們之間的相互關(guān)系進(jìn)行了初步探討。
[0049]一、全轉(zhuǎn)錄組芯片實(shí)驗(yàn)操作方法
[0050]1、研究對象
[0051]選取北京協(xié)和醫(yī)院原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)患者的甲狀旁腺組織標(biāo)本和正常甲狀旁腺組織標(biāo)本共23例，包括5例正常甲狀旁腺組織和18例原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)組織標(biāo)本。其中原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)患者的甲狀旁腺組織標(biāo)本由5例散發(fā)型甲狀旁腺增生組織、5例散發(fā)型甲狀旁腺腺瘤組織和3例甲狀旁腺癌組織標(biāo)本組成。分為正常甲狀旁腺組、散發(fā)甲狀旁腺增生組、散發(fā)甲狀旁腺腺瘤組、不典型腺瘤組和甲狀旁腺癌組共5組。其中女性19例，男性4例；年齡24?62歲。所有標(biāo)本均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)，其中甲狀旁腺癌的診斷同時(shí)結(jié)合病理診斷和術(shù)中所見，排除繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥和多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤綜合癥病例。提取RNA，純的達(dá)到1.81-2.09之間。基因表達(dá)譜被上海其明公司執(zhí)行。
[0052]2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果[0053]首先將正常甲狀旁腺組、散發(fā)甲狀旁腺增生組、散發(fā)甲狀旁腺腺瘤組、不典型腺瘤組和甲狀旁腺癌組進(jìn)行比較，將各組之間的差異基因進(jìn)行合并，進(jìn)行聚類圖分析。
[0054]其次將正常甲狀旁腺組與散發(fā)甲狀旁腺增生組、散發(fā)甲狀旁腺腺瘤組、不典型腺瘤組和甲狀旁腺癌組進(jìn)行比較，在正常甲狀旁腺組和散發(fā)甲狀旁腺增生組之間共篩選出差異基因個(gè)，其中差異倍數(shù)大于2倍的基因共個(gè)，包括個(gè)上調(diào)基因和個(gè)下調(diào)基因；在正常甲狀旁腺組和散發(fā)甲狀旁腺增生組之間共篩選出差異基因1506個(gè)，其中差異倍數(shù)大于2倍的基因共70個(gè)，包括個(gè)上調(diào)基因11個(gè)和個(gè)下調(diào)基因59個(gè)；在正常甲狀旁腺組和散發(fā)甲狀旁腺腺瘤組之間共篩選出差異基因1820個(gè)，其中差異倍數(shù)大于2倍的基因共153個(gè)，包括個(gè)上調(diào)基因23個(gè)和個(gè)下調(diào)基因130個(gè)；在正常甲狀旁腺組和不典型腺瘤組之間共篩選出差異基因840個(gè)，其中差異倍數(shù)大于2倍的基因共100個(gè)，包括個(gè)上調(diào)基因49個(gè)和下調(diào)基因51個(gè)；在正常甲狀旁腺組和甲狀旁腺癌組之間共篩選出差異基因1982個(gè)，其中差異倍數(shù)大于
2倍的基因共281個(gè)，包括65個(gè)上調(diào)基因和216個(gè)下調(diào)基因。
[0055]再將甲狀旁腺癌組與散發(fā)甲狀旁腺增生組、散發(fā)甲狀旁腺腺瘤組和不典型腺瘤組進(jìn)行比較，在甲狀旁腺癌和散發(fā)甲狀旁腺增生組之間共篩選出差異基因1142個(gè)，其中差異倍數(shù)大于2倍的基因共114個(gè)，包括44個(gè)上調(diào)基因和70個(gè)下調(diào)基因；在甲狀旁腺癌和腺瘤組之間共篩選出差異基因2292個(gè)，其中差異倍數(shù)大于2倍的基因共310個(gè)，包括269個(gè)上調(diào)基因和41個(gè)下調(diào)基因；在甲狀旁腺癌和不典型腺瘤組之間共篩選出差異基因798個(gè)，其中差異倍數(shù)大于2倍的基因共71個(gè)，包括14個(gè)上調(diào)基因和57個(gè)下調(diào)基因。
[0056]二、Go analysis 分析結(jié)果
[0057]GO Analysis方法將散發(fā)腺瘤組和癌組兩組之間的差異基因基于G0數(shù)據(jù)庫進(jìn)行基因功能注釋，得到基因參與的所有功能，而后利用Fisher精確檢驗(yàn)和多重比較檢驗(yàn)計(jì)算每個(gè)功能的顯著性水平(P-value)和誤判率(FDR)。從而篩選出差異基因所體現(xiàn)的顯著性功能，顯著性篩選的標(biāo)準(zhǔn):P value<0.05o將差異基因的進(jìn)行功能顯著性分析，分別按照基因的上調(diào)和下調(diào)的不同功能和顯著性進(jìn)行分類。從結(jié)果表格可以發(fā)現(xiàn)，上調(diào)差異基因的顯著性功能分析結(jié)果包括有Toll樣受體信號(hào)途徑的陽性上調(diào)和對刺激的反應(yīng)等；下調(diào)差異基因的顯著性功能分析結(jié)果包括有舒張和排泄的陽性上調(diào)等。根據(jù)分析結(jié)果中上調(diào)的差異基因顯著性功能和下調(diào)的差異基因顯著性功能中所含的基因數(shù)目及其在數(shù)據(jù)庫中的富集程度，可以按照富集排序?qū)︼@著性的功能制作靶向圖。富集越大的顯著性差異基因功能其排序越靠前代表在P值相同時(shí)，該功能受到實(shí)驗(yàn)的影響越大，且對應(yīng)的差異基因功能在Gene Ontology數(shù)據(jù)庫結(jié)構(gòu)中的分層越低，功能也越具體。根據(jù)分析結(jié)果中上、下調(diào)顯著性的差異基因功能中每一差異基因功能的顯著性水平(P值)可以據(jù)此構(gòu)建顯著性差異基因功能的分布圖。
[0058]通過上述篩選方法，我們得到了在甲狀旁腺腫瘤和甲狀旁腺正常組織中表達(dá)具有顯著差異的CD24、HM0X1、VCAM1或KCNA3基因，并進(jìn)一步通過以下的免疫組織化學(xué)方法以及實(shí)時(shí)PCR的方法確認(rèn)了其表達(dá)的差異。
[0059]三、免疫組化
[0060]1、研究對象
[0061]北京協(xié)和醫(yī)院2012年1月至2012年11月的甲狀旁腺腫瘤組織共18例，包括，甲狀旁腺正常組織5例，甲狀旁腺腺瘤10例，甲狀旁腺腺癌3例。其中男性13例，女性22例；年齡31~71歲，平均年齡51.6歲。收集患者臨床指標(biāo)包括血鈣、PTH、AKP和腫瘤大小等指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(見表一)。所有標(biāo)本均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)，其中甲狀旁腺癌的診斷同時(shí)結(jié)合手術(shù)中所見，排除繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥和多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤綜合癥病例。
[0062]表1甲狀旁腺腫瘤病例的臨床生化資料
【權(quán)利要求】
1.一種或多種選擇性結(jié)合至分子標(biāo)記物的結(jié)合部分在制備用于鑒定甲狀旁腺腫瘤的試劑中的用途，其中所述分子標(biāo)記物選自CD24、HM0X1、VCAM1或KCNA3。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的結(jié)合部分選自選擇性結(jié)合至分子標(biāo)記物的抗體或其抗原結(jié)合片段或變體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其中，所述用途包括步驟:a)提供來自個(gè)體的甲狀旁腺腫瘤組織和正常對照組織的樣品；和b)確定樣品中分子標(biāo)記物的量；其中，甲狀旁腺腫瘤組織中分子標(biāo)記物的過度表達(dá)是甲狀旁腺癌的指征。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中步驟b)的方法選自Western印跡、North-Western印跡、免疫吸附測定法、抗體微陣列、組織微陣列、免疫沉淀、原位雜交和其他免疫組織化學(xué)技術(shù)、放射免疫測定法、免疫放射測定法和免疫酶測定法。
5.一種或多種特異地檢測編碼分子標(biāo)記物的mRNA的表達(dá)水平的引物和/或探針，在制備用于鑒定甲狀旁腺腫瘤的試劑中的用途，其中所述分子標(biāo)記物選自CD2、HM0X1、VCAM1或KCNA3。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中，所述用途包括步驟:a)提供來自個(gè)體的甲狀旁腺腫瘤組織和正常對照組織的樣品；和b)確定樣品中分子標(biāo)記物的mRNA的量；其中，甲狀旁腺腫瘤組織中分子標(biāo)記物的mRNA的過度表達(dá)是甲狀旁腺癌的指征。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其中步驟b)的方法選自宏陣列篩選、微陣列篩選、納米陣列篩選、逆轉(zhuǎn)錄PCR、實(shí)時(shí)PCR或原位PCR。
8.一種用于鑒定甲狀旁腺腫瘤的試劑盒，其包括一種或多種選擇性結(jié)合至分子標(biāo)記物蛋白的結(jié)合部分，其中所述分子標(biāo)記物選自CD24、HM0X1、VCAM1或KCNA3。
9.一種用于鑒定甲狀旁腺腫瘤的試劑盒，其包括一種或多種特異地檢測編碼分子標(biāo)記物的mRNA的表達(dá)水平的引物和/或探針，其中所述分子標(biāo)記物選自CD24、HM0X1、VCAM1或KCNA3。
10.一種或多種分子標(biāo)記物用于鑒定甲狀旁腺腫瘤中的用途，其中所述分子標(biāo)記物選自 CD24、HM0X1、VCAM1 或 KCNA3。
【文檔編號(hào)】G01N33/574GK103713129SQ201310698855
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月18日
【發(fā)明者】趙玉沛, 趙建國, 廖泉, 胡亞, 牛哲禹, 邢小平, 夏維波 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院