巨噬細(xì)胞抑制因子-1在大腸癌診斷中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及巨噬細(xì)胞抑制因子-1在大腸癌診斷中的應(yīng)用。具體而言，本發(fā)明涉及腫瘤標(biāo)志物在制備診斷和/或監(jiān)測(cè)受試者中大腸癌的試劑或試劑盒中的用途，其中所述腫瘤標(biāo)志物包括巨噬細(xì)胞抑制因子1和TPS二者。本發(fā)明還涉及診斷和/或監(jiān)測(cè)受試者中大腸癌的試劑或試劑盒，其包括本發(fā)明所述檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的試劑。本發(fā)明的腫瘤標(biāo)志物組合有很好的互補(bǔ)性，能夠大幅提高大腸癌的檢出效率，具有良好的應(yīng)用前景。
【專利說(shuō)明】巨噬細(xì)胞抑制因子-1在大腸癌診斷中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及大腸癌診斷監(jiān)測(cè)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及巨噬細(xì)胞抑制因子I在大腸癌診斷和監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用，尤其涉及巨噬細(xì)胞抑制因子I聯(lián)合其它腫瘤標(biāo)志物如MIC-1、CEA、TPS在大腸癌特別是早期大腸癌診斷中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]大腸癌包括結(jié)腸癌和直腸癌，死亡率在我國(guó)城市居第四位，在農(nóng)村居第五位。在早期大腸癌患者中大多沒(méi)有明顯臨床癥狀和體征，一旦發(fā)現(xiàn)即為中晚期，在我國(guó)，大腸癌的發(fā)病率有明顯的上升趨勢(shì)，是人類健康的一大威脅。大腸癌的早期發(fā)現(xiàn)能夠有效的降低腸癌的死亡率，因而大腸癌的早期診斷研究成為腸癌研究中的焦點(diǎn)。
[0003]目前尚無(wú)理想的診斷大腸癌的腫瘤標(biāo)志物，臨床檢測(cè)以癌胚抗原(CEA)和糖鏈抗原(CA)為主。CEA是最早發(fā)現(xiàn)的大腸癌血清腫瘤標(biāo)志物，分子量約為ISOkD的糖蛋白，編碼基因位于19號(hào)染色體，CEA在大多數(shù)惡性腫瘤血清中均有不同程度升高，在臨床上常被作為消化道惡性腫瘤的輔助診斷指標(biāo)，但其檢測(cè)的敏感性和特異性都不能滿足臨床檢測(cè)的需求，術(shù)前CEA的陽(yáng)性率大約在30 % -40 %之間。CA系列主要表達(dá)與癌變的細(xì)胞膜上并可釋放到細(xì)胞間質(zhì)質(zhì)中，從而可用于腫瘤的診斷和治療監(jiān)測(cè)，目前常用于大腸癌診斷的有CA199、CA125、CA242和CA724，研究發(fā)現(xiàn)CA系列抗原與腫瘤的大小、Bormann分型、淋巴浸潤(rùn)和病理類型存在相關(guān)性，在大腸癌的診斷和治療中具有重要價(jià)值，但是也同樣存在敏感性和特異性較差的問(wèn)題，單一 CA標(biāo)志物的診斷靈敏度不足30%。一項(xiàng)大樣本臨床研究結(jié)果顯示，腸癌患者術(shù)前CEA陽(yáng)性率為32.6%, CA 199陽(yáng)性率為25.0%。CEA與CA199聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為44.2%，說(shuō)明聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率雖較單項(xiàng)測(cè)定高，但對(duì)直腸癌的診斷價(jià)值不大。
[0004]組織多肽特異性抗原(TissuePolypeptide Specific antigen,TPS)是腫瘤細(xì)胞分泌的一種多肽抗原，是近年來(lái)報(bào)道較多的一個(gè)用于消化道惡性腫瘤診斷的腫瘤標(biāo)志物。TPS濃度增加與腫瘤上皮細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化活性有關(guān)，是反映腫瘤細(xì)胞分裂和增殖活性的特異指標(biāo)，屬腫瘤活性依賴型標(biāo)記物。有研究表明，TPS在FOL-FIRI方案治療結(jié)直腸癌中可有效的監(jiān)測(cè)療效，治療有效者TPS水平顯著下降，病情進(jìn)展者顯著升高，并且其敏感度高，變化的時(shí)間早，比CEA、CA能更快地反應(yīng)病情變化。對(duì)于晚期結(jié)直腸癌，診斷已明確，其更有利于對(duì)治療的監(jiān)測(cè)，動(dòng)態(tài)觀察血清TPS水平的變化可以作為評(píng)價(jià)結(jié)直腸癌治療效果的一項(xiàng)指標(biāo)。
[0005]大量研究表明即使聯(lián)合CEA、TPA和CA系列，其診斷大腸癌的靈敏度仍不足60%，臨床意義有限，尤為不足的是，三者聯(lián)合診斷早期(I+II期)大腸癌的靈敏度不足30%。提高腸癌患者的早期發(fā)現(xiàn)與治療是降低腸癌死亡率的最有效辦法，為此，探索發(fā)現(xiàn)能夠用于早期診斷腸癌的腫瘤標(biāo)志物成為一項(xiàng)重要的任務(wù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的數(shù)據(jù)證明MIC-1血清試劑盒在大腸癌診斷研究中顯示了良好的應(yīng)用前景。本發(fā)明的數(shù)據(jù)證明MIC-1在早期腸癌診斷中優(yōu)于CEA，在腸癌患者組和正常對(duì)照組血清MIC-1水平有顯著性差異(P < 0.001)。在早期腸癌患者中，MIC-1的診斷敏感性(I期:22.7% ;11期:34.7% )均高于CEA、CA199、TPS各腫瘤標(biāo)志物的敏感性。
[0007]目前腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合診斷也越來(lái)越廣泛的應(yīng)用于臨床。然而，為節(jié)約成本，縮短檢測(cè)時(shí)間，降低實(shí)驗(yàn)誤差等多方面的考慮，聯(lián)合診斷中尤其需要考慮聯(lián)合最少的標(biāo)志物獲得足夠高的敏感性和特異性。由于各種腫瘤標(biāo)志物之間的兼容性，已有標(biāo)志物的簡(jiǎn)單組合難以獲得令人滿意的效果，而如何從已知眾多的腫瘤標(biāo)志物中獲得能夠顯著提高敏感性和特異性的2-3種標(biāo)志物實(shí)現(xiàn)有效診斷非常難以預(yù)期，已經(jīng)成為本領(lǐng)域進(jìn)行深入研究的課題。發(fā)明人令人吃驚地發(fā)現(xiàn)MIC-1與CEA、TPS有良好的不兼容性，在患者當(dāng)中，MIC-1與TPS同時(shí)呈現(xiàn)陽(yáng)性的結(jié)果只有很小一部分，MIC-1+TPS的陽(yáng)性率可以達(dá)到57.8%，而MIC-1+CEA+TPS組合在大腸癌檢測(cè)中的陽(yáng)性率更是能夠提高到72.5%。更令人吃驚的是，在早期(I期+11期)腸癌中MIC-1、CEA、TPS三者聯(lián)合診斷的敏感性能夠達(dá)到61.3%，與加上CA199后四者聯(lián)合診斷的敏感性不相上下，在III期+IV期的腸癌患者血清中也有類似的結(jié)果。此外，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)使用CA系列的其他標(biāo)志物(CA125，CA242，CA724)替換CA199，結(jié)果類似，均未能提高診斷的靈敏度。因此，本發(fā)明的結(jié)果表明僅聯(lián)合MIC-1+TPS 二者即能夠顯著提高診斷的陽(yáng)性率，聯(lián)合MIC-1、CEA、TPS三者能夠獲得令人滿意的效果，而進(jìn)一步聯(lián)合CA199或其他CA標(biāo)志物則不能顯著提高陽(yáng)性率。
[0008]因此，本發(fā)明一方面涉及腫瘤標(biāo)志物在制備診斷和/或監(jiān)測(cè)受試者中大腸癌的試劑或試劑盒中的用途，其中所述腫瘤標(biāo)志物包括巨噬細(xì)胞抑制因子I和TPS 二者。
[0009]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述腫瘤標(biāo)志物不包括CA標(biāo)志物如CA199、CA125、CA242 和 CA724。
[0010]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述腫瘤標(biāo)志物包括巨噬細(xì)胞抑制因子1、TPS和CEA。
[0011 ] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述腫瘤標(biāo)志物由巨噬細(xì)胞抑制因子I和TPS組成。已經(jīng)證明MIC-1與TPS同時(shí)呈現(xiàn)陽(yáng)性的結(jié)果只有很小一部分，使用MIC-1+TPS 二者聯(lián)合的陽(yáng)性率可以高達(dá)57.8%，而已知組合如CEA與CA199的檢測(cè)陽(yáng)性率僅為44.2%。
[0012]在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述腫瘤標(biāo)志物由巨噬細(xì)胞抑制因子1、TPS和CEA組成。已經(jīng)證明MIC-1與CEA、TPS有良好的不兼容性，MIC-1+CEA+TPS組合在大腸癌檢測(cè)中的陽(yáng)性率高達(dá)72.5%。發(fā)明人令人吃驚地發(fā)現(xiàn)MIC-1+CEA+TPS三者尤其適合用于聯(lián)合診斷早期(I+II期)大腸癌，敏感性能夠達(dá)到61.3%，而現(xiàn)有報(bào)道的標(biāo)志聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度不足30%。更令人吃驚的是，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)除了 MIC-1+CEA+TPS組合之外，進(jìn)一步使用CA系列的標(biāo)志物如CA199，CA125，CA242，CA724未能顯著提高診斷的靈敏度。因此，僅聯(lián)合MIC-1、CEA、TPS三者即可能夠獲得令人滿意的效果，尤其是用于診斷早期大腸癌時(shí)，這是非常令人吃驚的。因此，在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所使用的腫瘤標(biāo)志物不包括CA標(biāo)志物如 CA199、CA125、CA242 和 CA724 等。
[0013]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述大腸癌為早期大腸癌。
[0014]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述大腸癌為I期和/或II期大腸癌。
[0015]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑或試劑盒用于T分期和/或M分期。
[0016]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑或試劑盒可用于組織原位檢測(cè)和/或監(jiān)測(cè)所述腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)(例如mRNA水平)，或者用于檢測(cè)和/或監(jiān)測(cè)所述腫瘤標(biāo)志物的血清水平。
[0017]本發(fā)明另一方方面涉及診斷和/或監(jiān)測(cè)受試者中大腸癌的試劑或試劑盒，其中包括上文描述的試劑或試劑盒。在本發(fā)明發(fā)現(xiàn)腫瘤標(biāo)志物的組合可用于大腸癌的檢測(cè)或監(jiān)測(cè)后，這樣的試劑和/或試劑盒可通過(guò)本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)容易地制備。例如所述試劑和/或試劑盒可以包括檢測(cè)所述腫瘤標(biāo)志物的抗體，優(yōu)選單克隆抗體，或者用于檢測(cè)所述腫瘤標(biāo)志物表達(dá)的引物和/或探針等。所述試劑或試劑盒還可以包括常規(guī)的進(jìn)行PCR反應(yīng)的緩沖液、聚合酶、dNTPs混合物等。本發(fā)明的試劑盒還可以包括使用說(shuō)明書(shū)等。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0018]圖1:檢測(cè)所收集血清樣本的MIC-1、CA199、CEAjP TPS水平，并以該樣本與正常對(duì)照組的MIC-1、CA 199和CEA的濃度繪制的ROC曲線(因未得到與對(duì)照相應(yīng)的TPS數(shù)值，故此ROC曲線不包含TPS)。
【具體實(shí)施方式】
[0019]I材料和方法
[0020]1.1病歷資料
[0021]所有病例均來(lái)自2009年10月至2011年I月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院門(mén)診及住院患者(見(jiàn)表1)病例組429例，平均年齡58.6歲，中位年齡59.0歲，正常對(duì)照129例，平均年齡43.3歲，男性75例，女性54例，年齡20-80歲，平均年齡43.3歲，中位年齡44.0歲，正常對(duì)照來(lái)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院健康體檢人群，均無(wú)消化系統(tǒng)疾患，肝腎功能正常。
[0022]表1:患者臨床病理特征
[0023]
【權(quán)利要求】
1.腫瘤標(biāo)志物在制備診斷和/或監(jiān)測(cè)受試者中大腸癌的試劑或試劑盒中的用途，其中所述腫瘤標(biāo)志物包括巨噬細(xì)胞抑制因子I和TPS 二者。
2.權(quán)利要求1所述的用途,其中所述腫瘤標(biāo)志物不包括CA標(biāo)志物如CA199、CA125、CA242 和 CA724。
3.權(quán)利要求1所述的用途，其中所述腫瘤標(biāo)志物包括巨噬細(xì)胞抑制因子1、TPS和CEA。
4.權(quán)利要求1或2所述的用途，其中所述腫瘤標(biāo)志物由巨噬細(xì)胞抑制因子I和TPS組成。
5.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述腫瘤標(biāo)志物由巨噬細(xì)胞抑制因子1、TPS和CEA組成。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述大腸癌為早期大腸癌。
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述大腸癌為I期和/或II期大腸癌。
8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述試劑或試劑盒用于T分期和/或M分期。
9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述試劑或試劑盒用于檢測(cè)和/或監(jiān)測(cè)巨噬細(xì)胞抑制因子I的血清水平。
10.診斷和/或監(jiān)測(cè)受試者中大腸癌的試劑或試劑盒，其中所述試劑或試劑盒包括權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)中定義的試劑或試劑盒。
【文檔編號(hào)】G01N33/574GK103645319SQ201310705853
【公開(kāi)日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月20日
【發(fā)明者】張偉, 王小兵, 田海梅, 李艷芬, 李茉 申請(qǐng)人:張偉