一種歐綿馬藥材的質(zhì)量檢測方法及其專用薄層板的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種歐綿馬藥材的質(zhì)量檢測方法，1）利用上述的薄層板，采用薄層色譜法對歐綿馬藥材進行定性分析；2）對歐綿馬藥材進行水分測定；3）對歐綿馬藥材進行灰分測定；4）對歐綿馬藥材進行浸出物測定；5）對歐綿馬藥材中的總間苯三酚的含量進行測定。本發(fā)明通過提供一種歐綿馬藥材的水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物檢查方法來控制藥材的質(zhì)量，檢測方法穩(wěn)定性強，精密度高，重復(fù)性強。具有較強的專屬性和良好的重現(xiàn)性，真正體現(xiàn)了藥品的安全有效性和質(zhì)量可控性。
【專利說明】一種歐綿馬藥材的質(zhì)量檢測方法及其專用薄層板
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥材的質(zhì)量檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]歐洲鱗毛厳Dryopteris filix_mas(L.)Schott.屬于鱗毛厳科 Dryopteridaceae鱗毛蕨屬Dryopteris Adanson多年生草本植物,又名歐綿馬[《中華本草》、《維吾爾藥志》、《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》(維吾爾藥分冊)]，異名“克爾可斯、克里達如”，維文名
音譯為“賽爾海斯”(《中華本草》、《維吾爾藥志》)。
[0003]歐綿馬藥材以歐洲鱗毛蕨干燥根莖及葉柄殘基入藥，主要有驅(qū)蟲、抗菌、抗病毒、抗炎、止血止痛及抗腫瘤等作用。據(jù)1999年出版的《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》(維吾爾藥分冊)、《中華本草》、《維吾爾藥志》'記載及有關(guān)文獻資料報導(dǎo):“味甘而苦辛，具有驅(qū)除腸蟲，開通阻滯，祛寒止痛，消炎愈傷，散風(fēng)除疫，止痢止血的功效，主治濕寒性或黏液質(zhì)偏盛，吞酸胃弱，尿頻腸阻，腸寄生蟲等癥，如腸道生蟲，髖關(guān)節(jié)痛，關(guān)節(jié)疼痛，尿路瘡瘍，流行性感冒，痢疾腹瀉，子宮出血等癥”。
[0004]維藥材歐綿馬是維吾爾醫(yī)藥的傳統(tǒng)藥材，植物資源在新疆北部地區(qū)分布很廣，所含間苯三酚類化合物具有多種生物活性，現(xiàn)有質(zhì)量標準僅有粗略的化學(xué)鑒別，無定量控制，也未見質(zhì)量研究的相關(guān) 文獻，因此需要對其質(zhì)量控制方法進行規(guī)范，以控制歐綿馬藥材的質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有的缺陷，提供了一種可提高歐綿馬藥品質(zhì)量標準及安全有效性和質(zhì)量可控性的歐綿馬質(zhì)量檢測方法，
本發(fā)明的另一目的在于提供上述方法專用薄層板。
[0006]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案具體實現(xiàn):
一種用于歐綿馬藥材薄層色譜分析的薄層板，其原料組分為:硅膠61(^，？!1為7.0的枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液10ml，維生素C 60mg、羧甲基纖維素鈉溶液20ml。
[0007]上述的用于歐綿馬藥材薄層色譜分析的薄層板的制備方法，取硅膠GlOg，pH為
7.0的枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液10mL，維生素C 60mg、羧甲基纖維素鈉溶液20ml，調(diào)均、鋪板，室溫避光晾干，10-70°C活化2小時，即可。
[0008]一種歐綿馬藥材的質(zhì)量檢測方法，具體步驟如下:
1)利用上述的薄層板，采用薄層色譜法對歐綿馬藥材進行定性分析；
2)對歐綿馬藥材進行水分測定；
3)對歐綿馬藥材進行灰分測定；
4)對歐綿馬藥材進行浸出物測定；
5)對歐綿馬藥材中的總間苯三酚的含量進行測定。
[0009]進一步的，所述步驟I)的具體步驟如下:a)制備對照品溶液:取歐綿馬對照藥材粉末0.5g，加環(huán)己烷l(TlOOml，超聲處理30分鐘，濾過，取濾液IOml,濃縮至5ml,即得；
b)制備供試品溶液:取歐綿藥材粉末0.5g，加環(huán)己烷l(Tl00ml，超聲處理30分鐘，濾過，取濾液IOml,濃縮至5ml,即得；
c)吸取上述兩種溶液各2~4μ1，分別點于權(quán)利要求1所述的薄層板上，用展開劑為展開劑，以0.1-1%堅牢藍BB鹽的20-70%稀乙醇溶液為顯色劑，在3(T60°C放置0.5小時至斑點顯色清晰。
[0010]優(yōu)選的，上述步驟c)中，以正己烷:三氯甲烷:甲醇的體積比為10~50: 10^30: I的混合物為展開劑，以0.5%堅牢藍BB鹽的50%稀乙醇溶液為顯色劑。
[0011]進一步的，所述步驟2)的水分測定方法為:取作為供試品的歐綿馬藥材粉末3g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱重瓶中，厚度不超過5_，精密稱定，打開瓶蓋在100°C~105°C干燥5小時，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中冷卻30分鐘，精密稱定，再在上述溫度下干燥I小時，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止，根據(jù)減失的重量，計算供試品中含水量。
[0012]進一步的，所述步驟3)的灰分測定方法為:取為供試品的歐綿馬藥材粉末3g，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全碳化時，漸漸升高溫度至5000C _600°C，使完全灰化并至恒重，根據(jù)殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量。
[0013]進一步的，所述步驟4)的浸出物的測定方法為:取歐綿馬藥材粉末4g，精密稱定，置250 ml錐形瓶中，精密加稀乙醇100 ml，密塞，稱定重量，靜置I小時后，連接回流冷凝管，加熱到沸騰并保持微沸I小時，放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器過濾 ，精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105°C干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定，計算浸出物含量。
[0014]進一步的，所述步驟5)的總間苯本三酚的含量測定方法，步驟如下:
a)制備對照品溶液:在綿馬貫眾素ABBA對照品中加入95%乙醇，制成每Iml含綿馬貫眾素0.8mg的溶液，即得；
b)標準曲線:分別將0.0,0.2,0.4,0.6,0.8、1.0、1.2、1.4ml的對照品溶液用95%乙醇定容至10ml，即得濃度為16~112Pg/ml的標準使用液，制作標準曲線，回歸方程；
c)制備供試品溶液:取藥材粉末1.0g，加人50~95%乙醇1(T500 ml，稱重，回流提取lh，冷卻至室溫，稱重、補重，混勻，過濾，取續(xù)濾液I ml于100 ml量瓶中，用50-95%乙醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即得；
d)測定樣品溶液吸光度值:精密量取對照品溶液或供試品溶液2ml，置于10 ml磨口具塞刻度試管中，加人0.1~1%堅牢藍BB鹽溶液5 ml，混勻，室溫放置10-40分鐘，在400~600nm波長處測定吸光度值；
e)計算樣品溶液中總間苯三酚含量，總間苯三酚含量(%)=測定濃度X稀釋倍數(shù)X取樣量'
[0015]優(yōu)選的，
上述步驟c)中，所述藥材粉末為采用水分低于15.0%、總灰分低于12.0%、酸不溶性灰分低于6.0%、浸出物不低于20.0%的歐綿馬藥材經(jīng)粉碎，過60目篩而得，所述乙醇的濃度均采用95%，其中，回流時所加入的乙醇的量為500ml ；上述步驟d)中，堅牢藍BB鹽的濃度為0.5%，室溫放置40min，在600nm波長處測定吸
光度值。[0016]本發(fā)明中歐綿馬藥材薄層色譜的薄層板:考察了不同的薄層板，如國產(chǎn)的預(yù)制板(青島海洋化工廠分廠，煙臺市化學(xué)工業(yè)研究所)、進口預(yù)制板(Merk板)，效果均不理想，因此采用自制板，制法為:取硅膠GlOg、枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(pH7.0) 10ml、維生素C60mg、羧甲基纖維素鈉溶液20ml，調(diào)勻，鋪板，室溫避光晾干，10_70°C活化2小時后備用。
[0017]本發(fā)明中歐綿馬藥材薄層色譜的展開系統(tǒng):是在嘗試了各種展開溶劑，包括石油醚、氯仿(三氯甲烷)、乙酸乙酯、甲醇、丙酮等溶劑，進行深入研究，不斷組合篩選，而后確定了較理想的展開體系即正己烷-三氯甲烷-甲醇，通過調(diào)整三者間的相互比例，最終研究確定了最為合理的展開系統(tǒng):正己烷-三氯甲烷-甲醇(10-50: 10-30: 1)，預(yù)飽和0.5-2小時，展開，展距15cm以上取出，斑點的分離度，比移值均較好。
[0018]本發(fā)明中歐綿馬藥材薄層色譜的顯色:由于歐綿馬藥材含有間苯三酚類成分,噴以0.1-1%堅牢藍BB鹽的20-70%稀乙醇溶液，在40°C放置0.5小時，在自然光下觀察，顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置處顯相同顏色的斑點。
[0019]本發(fā)明通過提供一種歐綿馬藥材的水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物質(zhì)量檢查方法來控制藥材的質(zhì)量。
[0020]本發(fā)明通過采集新疆伊犁地區(qū)和昌吉7-9月份野生的歐綿馬共10份樣品，每份平行試驗:
參照上述薄層色譜分析方法，所采集的10份樣品作為供試品與對照品的色譜圖參見圖1，其中，1-10為所采集的供試品藥材，S為對照藥材。
[0021]確定總灰分的性質(zhì)，對10批樣品各抽檢1份分進行總灰份和酸不溶性灰分的檢測:
以測定浸出物含量為考察指標依據(jù)，分別用水、乙醇、乙醚為溶劑進行測定。(參照中國藥典2010年版一部附錄X A浸出物測定法)。
[0022]水溶性冷浸法:取供試品粉末(過20目篩)約4g，精密稱定，置250 ml的錐形瓶中，加水100ml,密塞,冷浸,前6個小時內(nèi)時時振搖(每30分鐘一次),靜置18小時,干燥濾器迅速過濾，精密量取濾液20mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，105°C干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定，計算浸出物含量。結(jié)果見表1。
[0023]醇溶性冷浸法:取供試品粉末(過20目篩)約4g，精密稱定，置250ml的錐形瓶中，加稀乙醇100ml,密塞,冷浸,前6個小時內(nèi)時時振搖海30分鐘一次),靜置18小時,干燥濾器迅速過濾，精密量取濾液20mlml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，105°C干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定，供試品粉末需扣除甲苯法測定的水分含量，計算浸出物含量。結(jié)果見表1。
[0024]醇溶性熱浸法:取供試品粉末(過20目篩)約4g，精密稱定，置250 ml錐形瓶中，精密加稀乙醇100 ml，密塞，稱定重量，靜置I小時后，連接回流冷凝管，加熱到沸騰并保持微沸I小時，放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器過濾，精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105°C干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定，供試品粉末需扣除甲苯法測定的水分含量，計算浸出物含量。結(jié)果見表1。[0025]表1:浸出物測定結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種用于歐綿馬藥材薄層色譜分析的薄層板，其特征在于:其原料組分為:硅膠GlOg, pH為7.0的枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液10ml，維生素C 60mg、羧甲基纖維素鈉溶液20ml ο
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于歐綿馬藥材薄層色譜分析的薄層板的制備方法，其特征在于:取硅膠G10g，pH為7.0的枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液10ml，維生素C 60mg、羧甲基纖維素鈉溶液20ml，調(diào)均、鋪板，室溫避光晾干，10-70°C活化2小時，即可。
3.—種歐綿馬藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:具體步驟如下: 1)利用權(quán)利要求1所述的薄層板，采用薄層色譜法對歐綿馬藥材進行定性分析； 2)對歐綿馬藥材進行水分測定； 3)對歐綿馬藥材進行灰分測定； 4)對歐綿馬藥材進行浸出物測定； 5)對歐綿馬藥材中的總間苯三酚的含量進行測定。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的歐綿馬藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述步驟I)的具體步驟如下: a)制備對照品溶液:取歐綿馬對照藥材粉末0.5g，加環(huán)己烷l(Tl00ml，超聲處理30分鐘，濾過，取濾液IOml,濃縮至5ml,即得； b)制備供試品溶液:取歐綿藥材粉末0.5g，加環(huán)己烷l(Tl00ml，超聲處理30分鐘，濾過，取濾液IOml,濃縮至5ml,即 得； c)吸取上述兩種溶液各2~4μ1，分別點于權(quán)利要求1所述的薄層板上，用展開劑為展開劑，以0.1-1%堅牢藍BB鹽的20-70%稀乙醇溶液為顯色劑，在3(T60°C放置0.5小時至斑點顯色清晰。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的以歐綿馬藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述步驟c)中，以正己烷:三氯甲烷:甲醇的體積比為10-50: 10-30: I的混合物為展開劑，以0.5%堅牢藍BB鹽的50%稀乙醇溶液為顯色劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的歐綿馬藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述步驟2)的水分測定方法為:取作為供試品的歐綿馬藥材粉末3g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱重瓶中，厚度不超過5_，精密稱定，打開瓶蓋在100°C~105°C干燥5小時，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中冷卻30分鐘，精密稱定，再在上述溫度下干燥I小時，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止，根據(jù)減失的重 量，計算供試品中含水量。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的歐綿馬藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述步驟3)的灰分測定方法為:取為供試品的歐綿馬藥材粉末3g，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全碳化時，漸漸升高溫度至50(TC -60(TC，使完全灰化并至恒重，根據(jù)殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的歐綿馬藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述步驟4)的浸出物的測定方法為:取歐綿馬藥材粉末4g，精密稱定，置250ml錐形瓶中，精密加50%乙醇100 ml，密塞，稱定重量，靜置I小時后，連接回流冷凝管，加熱到沸騰并保持微沸I小時，放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器過濾，精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105°C干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定，計算浸出物含量。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的歐綿馬藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述步驟5)的總間苯三酚的含量測定方法，步驟如下: a)制備對照品溶液:在綿馬貫眾素ABBA對照品中加入95%乙醇，制成每Iml含綿馬貫眾素0.8mg的溶液，即得； b)標準曲線:分別將0.0,0.2,0.4,0.6,0.8、1.0、1.2、1.4ml的對照品溶液用95%乙醇定容至10ml，即得濃度為16~112Pg/ml的標準使用液，制作標準曲線； c)制備供試品溶液:取藥材粉末1.0g，加人50~95%乙醇l(T500ml，稱重，回流提取lh，冷卻至室溫,稱重、補重,混勻，過濾,取續(xù)濾液I ml于100 ml量瓶中，用50-95%乙醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即得； d)測定樣品溶液吸光度值:精密量取對照品溶液或供試品溶液2ml，置于10 ml磨口具塞刻度試管中，加人0.1~1%堅牢藍BB鹽溶液5 ml，混勻，室溫放置10-40分鐘，在400~600nm波長處測定吸光度值； e)計算樣品溶液中總間苯三酚含量，總間苯三酚含量(%)=測定濃度X稀釋倍數(shù)X取樣量'
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的歐綿馬藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述步驟C)中，所述藥材粉末為米用水分低于15.0%、總灰分低于12.0%、酸不溶性灰分低于6.0%、浸出物不低于20.0%的歐綿馬藥材經(jīng)粉碎，過60目篩而得，所述乙醇的濃度均采用95%，其中，回流時所加入的乙醇的量為500ml ;所述步驟d)中，堅牢藍BB鹽的濃度為0.5%，室溫放置40min，在600nm波長處測`定吸光度值。
【文檔編號】G01N5/04GK103698465SQ201310707760
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月20日
【發(fā)明者】田莉, 王東東, 暢靜, 田樹革 申請人:新疆醫(yī)科大學(xué)